IDENTIFICACIN DE NEMTODOS FITOPARASITOS ASOCIADOS AL CULTIVO DE AME ESPINO (Dioscrea rotundata) EN EL CORREGIMIENTO DE MATEO PREZ SAMPUES, MUNICIPIO DEL

L DEPARTAMENTO DE SUCRE.

RAL EDUARDO ANAYA ORTEGA INGRIS JOHANA LOMBO VILLADIEGO

UNIVERSIDAD DE SUCRE FACULTAD DE EDUCACIN Y CIENCIAS DEPARTAMENTO DE BIOLOGA SINCELEJO SUCRE 2008 -1-

IDENTIFICACIN DE NEMTODOS FITOPARASITOS ASOCIADOS AL CULTIVO DE AME ESPINO (Dioscrea rotundata) EN EL CORREGIMIENTO DE MATEO PREZ - SAMPUES, MUNICIPIO DEL DEPARTAMENTO DE SUCRE.

RAL EDUARDO ANAYA ORTEGA INGRIS JOHANA LOMBO VILLADIEGO

Proyecto presentado como requisito parcial para obtener el ttulo de bilogo con nfasis en biotecnologa

DIRECTOR(A): MARCELA MARTNEZ Bacteriloga. Msc. Docente universidad de sucre CODIRECTOR: JAIME MERCADO Bilogo-Investigador.

UNIVERSIDAD DE SUCRE FACULTAD DE EDUCACIN Y CIENCIAS DEPARTAMENTO DE BIOLOGA SINCELEJO SUCRE 2008

nicamente los autores son responsables de las ideas expuestas en el presente trabajo articulo 12 resolucin 02 de 2003

1.1. Nota de aceptacin

Firma del presidente del jurado

Firma del jurado

Firma del jurado

DEDICATORIA.

Primeramente a Dios, que me ilumina y ayuda a ser perseverante en todo momento, fortaleza en m andar, por amarme y por darme nuevas fuerzas cada da para salir adelante, Toda la honra y gloria para ti mi seor

JESUCRISTO.
A mis hermanos Toms, Cesar, Jaime, Yulis y en especial a Isaac y Yaris, que siempre estuvieron all cuando los necesite, a mis padres TOMAS ANAYA Y ELVIRA ORTEGA. Gracias infinitas por apoyarme siempre y confiar en m en todo momento, por ensearme el trabajo duro, responsabilidad, honestidad, amor y humildad. A mi esposa KELIS GARAY, quien me anim y apoy siempre. Al doctor y amigo JOS GAMARRA, que con su ayuda me nimo para seguir adelante. A la pastora ELIZABETH ZUCCARDY, por ese apoyo incondicional, y en fin gracias a todos los que de una u otra forma me tendieron la mano para lograr este proyecto, esta meta.
RAL EDUARDO ANAYA ORTEGA

DEDICATORIA.

Principalmente a DIOS ser todopoderoso quien me gui en todo momento de mi vida y me dio la fortaleza para ser posible la realizacin de este trabajo de grado.

A mis padres HECTOR LOMBO Y CARMEN VILLADIEGO, quienes le debo mi educacin personal y profesional por apoyarme en todo momento y guiarme hacia un camino de dicha.

A mi esposo HAROLD DE LA ESPRIELLA quien me brind en todo momento, amor y apoyo incondicional.

A mi hija LISSY DE LA ESPRIELLA LOMBO quien me llena de amor y me brinda el anhelo de seguir adelante.

A todos mis hermanos FABIAN, YAIR y NEIR por su atencin y a toda a mi familia quienes de una u otra forma me brindaron su colaboracin y cario.

INGRIS.

AGRADECIMIENTOS

Los autores expresan sus agradecimientos a:

La Universidad de Sucre, por su confianza y apoyo en la realizacin del presente trabajo. A nuestro codirector, Jaime Mercado, por su apoyo y colaboracin incondicional en todo momento. Al docente, Santiago Ruiz, por su apoyo incondicional a lo largo de todo el trabajo de investigacin. Marcela Martnez, por el apoyo, confianza y colaboracin. Laboratorio De Biotecnologa Vegetal, por su apoyo y colaboracin.

A los agricultores y en especial al seor Manuel vila, quien facilito la entrada al sitio de muestreo. A la Doctora Zaida Lozano, Docente de la Universidad de Crdoba, por su corroboracin de los gneros de nematodos identificados. A los diferentes participantes del proyecto: ESTUDIO DE NEMTODOS FITOPATGENOS ASOCIADOS AL CULTIVO DE AME DIOSCOREA SP. EN TRES MUNICIPIOS DEL DEPARTAMENTO DE SUCRE.

A todos que de una u otra forma contribuyeron a la realizacin de este trabajo de investigacin.

TABLA DE CONTENIDO

Pginas 1. INTRODUCCIN ....16 2. OBJETIVOS.18 3. ESTADO DEL ARTE .... 19 3.1 Impacto de los nemtodos fitopatoparsitos en ame.. 19 3.2 Generalidades de los nemtodos fitoparsitos.. 22 3.2.1 Morfologa y anatoma ..22 3.2.2 Ciclo de vida y reproduccin...23 3.2.3 Alimentacin de nemtodos y relacin husped parsito ..23 3.3 Nemtodos ectoparsitos.......24 3.4 Nematodos endoparsitos...25 3.4.1 Endoparsitos migratorios...25 3.4.2 Nemtodos endoparsitos semiendoparsitos sedentarios .....25 3.5. Factores que afectan la distribucin de los nemtodos ....27 3.5.1. Tipo de sue lo.27 3.5.2. Vegetacin27 3.5.3. pH...27 3.5.4. Temperatura.28 3.5.5. Indicadores fsicos de la calidad del suelo ..28

3.5.6. Estructura del suelo 29 3.5.7. Temperatura del suelo ...30 3.5.8. Humedad del suelo ..30 3.5.9. Aireacin del suelo ..31 3.6 Diagnstico de nemtodos.31 3.6.1 Sntomas debajo del terreno ...32 3.7 Etiologa....33 3.8. Biodiversidad..34 3.8.1. Definiciones de Biodiversidad34 3.8.2. Medidas de Biodiversidad .34 3.8.3. Medicin de la riqueza especifica 35 3.8.4. ndices Basados en la Abundancia Relativa de Especies .35 4. DISEO METODOLOGICO.36 4.1. Localizacin y extensin ....36 4.2. Muestreo...37 4.2.1. Mtodo de muestreo....37 4.2.2. Seguimiento estacional ....37 4.2.3. Cantidad de suelo a muestrear .....38 4.3. Anlisis nematolgico .....38 4.4. Anlisis de las muestras 39

4.4.1. Anlisis nematolgico del suelo .39 4.4.2. Extraccin de los nemtodos de las races ...40 4.5. Procesamiento y montaje de nematodos .40 4.5.1. Montaje de placas permanentes .....40 4.5.2. Conteo y separacin e identificacin de morfotipos..41 4.5.3. Anlisis de datos ..41 4.5.3.1. Procesamiento de datos ..41 4.5.3.2. Curva de acumulacin por especie ....42 5. RESULTADO..42 6. ANALISIS DE RESULTADOS .52 7. CONCLUSIONES...55 8. RECOMENDASIONES..57 9. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS ...58

10

INDICE DE FIGURAS

Pg. Figura 1. Frecuencia de individuos por hbito alimentario entre los meses de julio del
2007 hasta enero del 2008..47

Figura 2. Tylenchus.............47 Figura 3. Helicotylenchus.....48 Figura 4. Criconemella.........48 Figura 5. Pratylenchus.....49 Figura 6. Tylenchorhynchus...49 Figura 7. Criconema...50 Figura 8. Rotylenchus....50 Figura 9. Ordenamiento de los gneros segn su abundancia51 Figura 10. Precipitacin y temperatura promedio entre los meses de julio del 2007 hasta enero del 2008....53 Figura 11. Distribucin porcentual de nematodo en poca de lluvia ..54 Figura 12. Distribucin porcentual de nematodo en poca de sequa.55 Figura 13. Diversidad y dominancia..57

Figura 14. Curva acumulatoria por gneros de nematodos y su estimador bootstrap...58

11

LISTA DE TABLAS

Tabla 1. Gneros de Nematodos asociados al ame espino (dioscrea rotundata) .....45 Tabla 2. Clasificacin de los nematodos asociados al cultivo del ame segn

su hbito alimentario y presencia 46

Tabla

3. Frecuencia mensual de los gneros asociados al cultivo del ame segn su presencia o ausencia de nematodos...52

Tabla 4. Convenciones segn la presencia o ausencia de nematodos......52

Tabla 5. Frecuencia de individuos por hbito alimentario entre los meses de julio del 2007 hasta enero de 2008...54

Tabla 6. ndice de shannon y simpson de Nematodos en lluvia y sequa ....56

Tabla 7. Prueba T para la comparacin de valores de diversidad de Shannon Wienner a p>0.05...56 Tabla 8. Nematodos encontrados en la races de Dioscrea rotundata..60

12

LISTA DE ANEXOS

pag. Anexo 1. Anlisis fisicoqumico de la parcela de estudio ...71 Anexo 2. Muestra de suelo para anlisis .....71 Anexo 3. Barreno.........72 Anexo 4. Anexo 5. Anexo 6. Extraccin de nematodos mediante tamices.....72 Vista de nematodos a travs del microscopio 1.73 Vista de nematodos a travs del microscopio 2 .. ...73

Anexo 7. Tabla de resultados de valores observados y estimados..74 Anexo 8. Frecuencia mensual de nematodos por hbito alimenticio.75 Anexo 9. Precipitacin y temperatura....75 Anexo 10. Diversidad y dominancia.....75

13

RESUMEN

Se realiz un estudio para la identificacin de nemtodos fitoparsitos asociados al cultivo de ame espino (Dioscorea rotundata) mediante la utilizacin de claves morfolgicas en el corregimiento de Mateo Prez - Sampus, teniendo en

cuenta la poca de sequa y de lluvia. El estudio de campo se llev a cabo, entre julio de 2007 a enero de 2008, la identificacin se hizo en las instalaciones del laboratorio de Biotecnologa Vegetal y Microbiologa de la Universidad de Sucre. Se identificaron gneros fitoparasitos como Rotylenchus, Tylenchus,

Tylenchorhynchus, Psilenchus, Paratrophurus, Helicotylenchus, Pratylenchus, Nothotylenchus, Criconema, Criconemella, Gracilacus y no fitoparsitos, asociado a este importante cultivo, como: Aphelenchus, Aphelenchoides, Rhabditis, Encephalobus, Discolaymus, Cephalobus, Ironus, Acrobeles, Panagrolaymus, Dorylaiminae, Tripyla,

Actinolamus,

Chronogaster,

Tylocephalus,

Prismatolaymus, Doryllium, Dorilaimoides, Mononchus, Prionchulus, Iotonchus, Mylonchulus, Monhystera, Acromadota, siendo los fitoparsitos mas abundante en este importante estudio.

14

ABSTRACT

A study was conducted for the identification of plant parasitic nematodes associated with the cultivation of hawthorn yams (Dioscorea rotundata) using morphological keys in the district of Mateo Perez - Sampus, taking into account the times of drought and rain. The study was carried out over a year, between July 2007 and January 2008, the identification was made on the premises of the laboratory of Plant Biotechnology and Microbiology at the University of Sucre, were identified as Rotylenchus Fitoparasticos genres, Tylenchus, Tylenchorhynchus, Psilenchus, Paratrophurus, Helicotylenchus, Pratylenchus, Nothotylenchus,

Criconema, Criconemella, Gracilacus Fitoparasticos and not associated with this important crop, such as: Aphelenchus, Aphelenchoides, Rhabditis, Encephalobus, Cephalobus, Acrobeles, Panagrolaymus, Dorylaiminae, Discolaymus, Ironus, Actinolamus, Chronogaster , Tylocephalus, Tripyla, Prismatolaymus, Doryllium, Dorilaimoides, Mononchus, Prionchulus, Iotonchus, Mylonchulus, Mo nhystera, Acromadota, Fitoparasticos being the most abundant in this important study

15

NTRODUCCIN

El ame pertenece al gnero Dioscrea con ms de 650 especies (Tuston, 1999), en Colombia se cultiva en la Region Caribe y los genotipos cultivados son D. alata y D. rotundata. En el departamento de Sucre el ame es un cultivo de pequeos y medianos agricultores que constituye en muchos municipios la principal fuente de ingresos, tanto de empleo rural, como en la oferta de alimento a sus pobladores. En los ltimos aos se ha incrementado la demanda de ame en los mercados internacionales, alcanzado en el ao 2003 un monto de 2.2 millones de dlares en exportaciones.

El cultivo de ame se ve afectado entre otras razones, porque la mayora de los pequeos agricultores no cuentan con semillas de alta calidad para el desarrollo de sus procesos productivos. Por el contrario dependen de sus cultivos para la obtencin de las semillas a usar en los siguientes ciclos, lo que conlleva a un nivel de diseminacin de plagas y enfermedades entre las que se encuentra la accin de nematodos, principalmente Scutellonema sp , Meloidogyne spp y Pratylenchus sp, que afectan directamente al tubrculo ocasionando lesiones en la cscara, agrietamientos y apariencia carbonosa, condicin que lo hace inaceptable para la exportacin (Brunt et, al 1989; Ministerio de Agricultura y Ganadera. San Jos, Costa Rica. 1991).

Todas las especies principales de ame son susceptibles a nemtodos ya que tiene un amplio rango de huspedes alternativos restringiendo la posibilidad de control mediante la rotacin de cultivos (Sharma et al. 1997). Tanto el control qumico como el tratamiento de tubrculos con agua caliente ha sido evaluado (Bridge, 1982), pero su aplicabilidad para cultivadores a pequea escala ha sido limitada. En la actualidad se conoce poco de nemtodos en los cultivos de

ame, por lo que se hizo necesario realizar un estudio con el fin de identificar 16

0Cules eran los gneros de nemtodos asociados al cultivo del ame espino, las muestras para los estudios se tomaron en el corregimiento de Mateo Prez perteneciente al municipio de Sampus Sucre. El estudio se realiz en pocas de sequa y lluvia para comparar sus poblaciones y la dinmica de las mismas.

17

2. OBJETIVOS

1.1 Objetivo general:

Identificar los gneros de nemtodos fitoparsitos asociados al cultivo de ame espino (Dioscrea rotundata.) mediante la utilizacin de claves morfolgicas en el corregimiento de Mateo Prez - Sampus, Municipio del Departamento de S ucre.

1.2 Objetivos especficos:

Realizar muestreos representativos para la cuantificacin de gneros de nematodos fitoparsitos en cultivos de ame espino, a travs de la curva de acumulacin por especies.

Identificar taxonomicamente

los nemtodos fitoparsitos mediante la

utilizacin de claves morfolgicas.

Comparar las poblaciones y la dinmica de los nematodos en pocas de sequa y lluvia.

18

3. ESTADO DEL ARTE

A nivel mundial, se ha estimado que los nemtodos parsitos de plantas causan casi el 18% en prdidas de produccin de ame por ao (Sasser & Freckman, 1987). Segn estudios realizados, los nemtodos ms importantes en ame son Scutellonema sp, Meloidogyne spp., en particular Pratylenchus sp. (Sharma et al. 1997; Brunt et, al 1989). Se ha encontrado que los tubrculos afectados con S. bradys pesan 10% menos que un tubrculo sano y que la cantidad del tejido afectado descartado en el momento del consumo puede ser de ms del 20%. Las prdidas por alimentacin continuada del nemtodo durante el almacenamiento del ame, particularmente cuando estn asociadas con enfermedad fngica, han llegado a un 80-100% (Adesiyan et al., 1975). 3.1 Impacto de los nemtodos fitopatoparasitos en ame. El ame es un tubrculo de gran importancia en la Costa Atlntica colombiana por ser un producto bsico de la canasta familiar, en especial en los departamentos de Bolvar, Crdoba y Sucre, los cuales contribuyeron al 92% de la produccin nacional en el ao 2002. En Bolvar es el tercer cultivo en importancia por su aporte al valor de la produccin agrcola departamental, en Sucre el cuarto y en Crdoba el quinto (lvarez, 2000). Pero la importancia del ame no se limita a su papel en la economa regional, sino que el cultivo reviste una importancia an mayor desde la ptica social y cultural. Cerca de 18.500 familias de pequeos productores de escasos recursos econmicos, que cultivan reas que oscilan en 0.5 y 2 hectreas, derivan de este tubrculo buena parte de sus ingresos. Adems, el ame es una de las principales fuentes alimenticias, en particular de carbohidratos de los habitantes de Crdoba, Bolvar y Sucre, en especial en las zonas rurales. As mismo, algunos municipios celebran festivales gastronmicos basados en numerosas preparaciones, los cuales hacen parte de la tradicin cultural costea. 19

A pesar de su importancia en la seguridad alimentaria del litoral Caribe colombiano, en la agricultura departamental y en la economa de los pequeos productores, han existido limitantes en la produccin tales como prcticas

inadecuadas en el manejo del cultivo y las enfermedades que pueden ser devastadoras y son causadas por virus, hongos y nemtodos (Hughes et al., 1999). Las plagas y enfermedades durante el crecimiento y el almacenamiento del tubrculo poscosecha tienen una influencia importante en la productividad del cultivo de ame. Generalmente se sabe que la mayora de las causas patolgicas de prdidas en almacenamiento puede ser atribuida en la mayora de las ocasiones a nemtodos, hongos y bacterias, moderado por factores fsicos del ambiente de almacenamiento tales como la temperatura y la humedad. Tambin se sabe ampliamente que la mayora de estas prdidas se originan de invasin precosecha o infeccin y/o dao durante la cosecha y el transporte.

Los nemtodos ms importantes del cultivo del ame ( Dioscorea spp.) son Scutellonema bradys, P. coffeae y Meloidogyne spp. El ms patognico es S. bradys, el cual se encuentra distribuido en el oeste de Africa, toda el rea del Caribe, Brasil e India. Este nemtodo causa la enfermedad conocida como

pudricin seca del ame, la cual se caracteriza por lesiones necrticas en las capas superficiales del tubrculo. Luego, estas lesiones, progresan pueden alcanzar hasta 2 cm dentro del tejido el tubrculo y, en la parte externa del mismo, se aprecian hendiduras y grietas. El dao ms grave ocurre durante el almacenamiento ya que el nemtodo, una vez alojado, sigue alimentndose, destruyendo al rgano. La pudricin seca se caracteriza por clorosis y reduccin del peso de la parte area de la planta, acompaada por reduccin del sistema radical y produccin de muones (Crozzoli, R. y Parra, D. 1991) El nemtodo se mueve intracelularmente en los tejidos del tubrculo y, al morir las clulas, se forman cavidades; su accin est limitada al rea subdermal, peridermo y en los tejidos inferiores al peridermo, hasta 2 cm. Cuando las lesiones son ms profundas, generalmente son causadas por organismos secundarios

20

tales como Rhizoctonia solani, Fusarium oxysporum y caros, los cuales gradualmente destruyen todo el tubrculo. La reduccin de rendimiento puede ser muy elevada, oscilando entre 0 y 40%, sin embargo, en almacenamiento, las prdidas pueden llegar al 80-100%. El nemtodo tiene pocos hospederos, exceptuando al gnero Dioscorea con sus especies. Los ms importantes son el meln, frijol y ajonjol. S. bradys permanece en el suelo entre un ciclo y otro de cultivo, sin embargo, los tubrculos utilizados para la propagacin son el principal vehculo de diseminacin; cuando las poblaciones son bajas, no se observan sntomas en el tubrculo, aumentando as el riesgo de diseminacin. Como medidas de control, indudablemente, el uso de material de propagacin sano, es indispensable. Se sugiere rotar el cultivo con hospederos pobres como son man, pimiento, tabaco, algodn, maz y sorgo. No se recomienda rotar con frijol, ajonjol, kenaf, okra, tomate, meln y quinchoncho. El uso de bulbillos areos o porciones de tallo, aseguran material de propagacin libre del nemtodo, as como el uso de semillas sexuales. El uso de materia orgnica y una adecuada fertilizacin con N, P, K, reducen el efecto detrimental del nemtodo en campo. Tambin la inmersin de los

tubrculos en agua a 50-55 C por 40 min reduce el nmero de nemtodos. No hay evidencia de que algunos cultivares de cualquier especie de Dioscorea presenten resistencia a S. bradys. El uso de nematicidas en campo (aldicarb, oxamil, carbofuran y miral) reduce las poblaciones e incrementan el rendimiento, sin embargo, es sealada cierta acumulacin de metabolitos de los qumicos en los tubrculos. Asimismo, el tratamiento qumico de los tubrculos antes de la siembra con DD, carbofuran, oxamil, hipociorito de calcio y formalina, sulfato de amonio y nitrato de calcio, reducen el nmero de nemtodos. (Crozzoli, R. y Vovias, N. 1991).

21

3.2 Generalidades de los nemtodos fitoparsitos. Los nemtodos parsitos de plantas tienen caractersticas biolgicas que los distinguen de otros organismos que afectan el crecimiento de plantas, son relativamente inmviles y todos pasan al menos parte de su ciclo de vida dentro de la matriz del suelo (Wallace, 1969). En el suelo, dependen de todos los eventos que ocurren en y sobre el terreno en el cual viven. La abundancia de los nemtodos es altamente dependiente de la presencia de las plantas huspedes y, en mayor o menor medida, por los componentes biolgicos, qumicos y fsicos del suelo (Jacq, V., Fortuner, R., 1979). 3.2.1 Morfologa y anatoma. Los nemtodos que atacan plantas son en su mayora gusanos microscpicos en tamao, que van desde 0,25 mm a 3,0 mm de longitud. Son generalmente de forma cilndrica, afilndose hacia la cabeza y la cola. Las hembras de unas cuantas especies pierden su cuerpo de g usano cuando maduran, llegando a ser alargados en dimetro (obesas), asumiendo formas variables, tales como pera, limn o rin (Dunt & Crow, 2001).

A pesar de su pequeo tamao, los nemtodos son complejos en su organizacin. Los nemtodos parsitos de plantas poseen todos los sistemas de rganos principales de los animales superiores excepto sistema respiratorio y circulatorio. El cuerpo est cubierto por cutculas de mltiples capas que comparten marcas en la superficie, esta es naturalmente incolora y parcialmente translcida, lo que permite la observacin de su anatoma, el detalle anatmico puede ser visto con ayuda de un microscopio binocular de alto poder de resolucin, generalmente para identificar la mayora de nemtodos hasta gnero, se necesita una magnificacin mucho mayor (900 X o ms) para identificar nemtodos hasta especie (Dunt & Crow, 2001).

22

3.2.2 Ciclo de vida y reproduccin. Los nemtodos parsitos de plantas tienen un ciclo de vida simple de seis etapas hasta adultos. El embrin se desarrolla dentro del huevo para pasar a la primera etapa juvenil. La primera etapa juvenil muda dentro de la cscara de huevo para pasar a una segunda etapa juvenil, que sale del huevo, y en la mayora de las especies debe alimentarse antes de continuar su desarrollo. Los nemtodos mudan tres veces mas para pasar a adulto completamente desarrollado. Los nemtodos machos y hembras ocurren en la mayora de las especies, y ambos deben ser requeridos para la reproduccin. Sin embargo, es comn la reproduccin sin machos, y algunas especies son hermafroditas (las hembras producen tanto esperma como huevos) La produccin de huevos por el individuo completa el ciclo. El nmero de huevos depositados por una hembra vara entre las especies y es afectado por su hbitat. La mayora de las especies producen entre 50 y 500 huevos, pero unas cuantas producen ocasionalmente varios miles de huevos por hembra. La extensin del ciclo de vida vara considerablemente dependiendo de la especie de nemtodo, la planta husped y la temperatura del hbitat (Dunt & Crow, 2001). 3.2.3 Alimentacin de nemtodos y relacin husped parsito. Los nemtodos parsitos de plantas se alimentan de tejidos vivos de la planta. Todos tienen alguna forma de estomato estilete, la cual es usada para penetrar la pared celular del husped. Muchos nemtodos parsitos de planta (probablemente todos) inyectan una enzima a la clula blanco antes de alimentarse. Esta enzima digiere parcialmente los contenidos celulares antes de que sean ingeridos en el estmago. La mayora de los daos que causan los nemtodos a las plantas esta relacionados de alguna manera a los procesos de alimentacin (Dunt & Crow, 2001).

23

Los nemtodos pueden alimentarse en tejidos de la planta, fuera de la planta (ectoparsitos) o dentro de los tejidos (endoparsitos). Si las hembras adultas de mueven libremente a travs del suelo o tejido de la planta, la especie es llamada migratoria. Las especies en las cuales las hembras adultas crecen y permanecen inmviles en un lugar o una raz son llamadas sedentarias (Dunt & Crow, 2001).

La relacin alimentacin/vida que los nemtodos tienen con sus huspedes afectan los mtodos de muestreo y el xito en las prcticas de manejo. Los nemtodos ectoparsitos que nunca entran a las races pueden ser recuperados solo de muestras de suelo. Los nematodos endoparsitos a menudos son detectados ms fcilmente en muestras de tejido en el cual ellos se alimentan y viven (nemtodos escarbadores y lesionadores), pero algunos se presentan ms comnmente como fases migratorias en el suelo (Dunt & Crow, 2001).

Aquellas fases de endoparsitos en las cuales estn dentro de los tejido de la raz pueden estar protegidos de nematicidas que no penetran entre la raz, tal como algunos fumigantes del suelo. Los tejidos de la raz tambin pueden protegerlos de muchos microorganismos que atacan nemtodos en el suelo. Los ectoparsitos estn completamente expuestos a pesticidas y agentes de control natural en el suelo (Dunt & Crow, 2001). 3.3 Nemtodos ectoparsitos. Los nemtodos ectoparsitos son generalmente migratorios. La mayora se alimenta superficialmente en la raz o cerca de la raz o en los pelos radicales, pero unos cuantos tienen estiletes tan largos que les permiten alimentarse a mayor profundidad de la raz (Dunt & Crow, 2001).

24

3.4 Nematodos endoparsitos. 3.4.1 Endoparsitos migratorios. Los endoparsitos migratorios pueden moverse dentro, a travs y fuera de los tejidos del husped en cualquier fase del desarrollo (excepto los huevos). Los endoparsitos migratorios generalmente viven y se alimentan en tejidos tiernos tales como la corteza de la raz. Ellos escarban a travs del tejido, rompiendo muchas clulas despus de alimentarse en ellas. Las clulas que rodean el rea de alimentacin son a menudo destruidas por materiales txicos de las clulas destruidas. Las reas relativamente grandes de clulas muertas, usualmente se torna de color caf, convirtindose en pequeas manchas o lesiones, lo suficientemente grandes para verlas, y a menudo fcilmente colonizadas por hongos. La pudricin de la raz enferma a menudo son asociadas con infestaciones de nemtodos endoparsitos migratorios (Dunt & Crow, 2001).

3.4.2 Nemtodos endoparsitos semiendoparsitos sedentarios Los nemtodos endoparsitos migratorios estn representados por los nemtodos formadores de nudosidades (Meloidogyne spp.), qusticos (Heterodera spp.), reniformes (Rotylenchulus spp.) y ctricos (Tylenchulus semipenetrans). En la mayora de estas especies, la segunda fase juve nil es la fase infectiva, que se mueve a travs del suelo. Estas fases localizan las races del husped y entran en ellas. Luego ellas establecen un sitio adecuado de alimentacin dentro del tejido de la raz. Una vez se ha seleccionado un sitio de alimentacin, el nemtodo inyecta sustancias que regulan el crecimiento dentro de las clulas cerca de su cabeza, causando un alargamiento de las clulas. Estas clulas gigantes empiezan a ser fuentes especializadas de alimento para los nemtodos. Al mismo tiempo, los nemtodos se vuelven inmviles, y el cuerpo se hincha en forma redonda, de limn, de rin u ovoide (Dunt & Crow, 2001).

25

Las hembras maduras de los nemtodos endoparsitos sedentarios generalmente producen grandes cantidades de huevos que permanecen en sus cuerpos o se acumulan en masas unidas a sus cuerpos. Los nemtodos y las clulas gigantes de las cuales ellos se alimentan dependen muchos entre s: si el nemtodo muere, las clulas gigantes mueren o pierden su condicin altamente activa; si las clulas gigantes, los nemtodos mueren de inanicin, debido a que no pueden ir a un nuevo sitio. Los endoparsitos sedentarios daan a su husped por el uso redireccionado de grandes cantidades de energa y nutrientes de actividades normales para el desarrollo de los nemtodos y sus sitios especiales de alimentacin. Los tejidos alterados del sitio de alimentacin tambin destruyen el sistema vascular. Las races severamente afectadas por los nemtodos formadores de nudosidades, usualmente tambin se deterioran ms temprano debido a la pudricin de races. Los tejido afectados son suculentos, poco

protegidos de la invasin y ricos en nutrientes que ayudan a los hongos a crecer rpidamente (Dunt & Crow, 2001).

Los endoparsitos sedentarios son los nemtodos para los cuales la resistencia del husped ha sido ms frecuentemente identificada. Diferencias relativamente pequeas en caractersticas hereditarias dentro de las especies de planta parecen determinar si un nemtodo especfico ser capaz de establecer clulas gigantes en su tejido. Las plantas en las cuales las clulas gigantes no pueden ser establecidas, o en las cuales ellas se degeneran antes de que los nemtodos puedan completar su ciclo de vida, son resistentes a estos nemtodos. La infeccin alcanzada por los nemtodos puede daar la planta, pero el nemtodo puede completar su ciclo de vida en ella (Dunt & Crow, 2001).

26

3.5. Factores que afectan la distribucin de los nemtodos Bajo las condiciones del neotrpico donde la temperatura oscila poco, la humedad del suelo a parte de la fenologa del cultivo, sobresale como factor que ms contribuye a las fluctuaciones de los nemtodos, en la medida que afecta la concentracin de oxigeno, la actividad de las bacterias y hongos en el suelo y la propia actividad de los nemtodos, es decir, su migracin, penetracin, periodo de incubacin de los huevos y la longevidad del suelo (Volcy, 1998). Un drenaje pobre, la sequa o la deficiencia o desbalance de nutrientes pueden tener como resultado la expresin de sntomas en la parte area de la planta. Tales condiciones tambin pueden causar la restriccin del desarrollo de las races y en estas situaciones la presencia de nemtodos puede incrementar la incidencia de volcamiento y exacerbar los sntomas foliares. Los principales factores que afectan las poblaciones de nemtodos son: tipo de suelo, el clima imperante, estatus de la planta husped, estado de crecimiento, competencia con otras especies de nemtodos y otras enfermedades. 3.5.1. Tipo de suelo: Los suelos livianos (arenosos) pueden albergar ms nematodos que suelos pesados lo cual es debido a los poros mas grandes entre las partculas del suelo, que a su vez facilitan el movimiento (Van der Wal, 1994). 3.5.2. Vegetacin: La dominancia de una especie de nemtodos o la reduccin de una de ellas, est altamente relacionada con la comunidad de plantas en un rea determinada (Van der Wal, 1994). 3.5.3. pH: La acidez del suelo influye en el desarrollo de la planta y por ello indirectamente a los nemtodos que se alimentan en ella (Van der Wal, 1994).

27

3.5.4.

Temperatura: La curva de temperatura ptima de varias especies de

nematodos es diferente, por lo cual se puede esperar la ocurrencia de distintas especies en suelos con varios regmenes de temperatura. Segn Volcy (1998), cada nemtodo exige unos niveles propios de humedad para su reproduccin, pero los factores climticos afectan a los nemtodos ms por su efecto indirecto sobre la planta hospedera que por su efecto sobre ellos mismos en virtud de que los nemtodos fitoparsitos se alimentan solo de plantas. De este modo, cuando las condiciones son favorables para el crecimiento de las plantas y emisin de nuevas races, habr suficiente biomasa radical de buena calidad para la nutricin del parsito, incluso an bajo condiciones aparentemente

desfavorables como el exceso o dficit hdricos, el nemtodo sobrevive y a menudo se reproduce si la planta contina produciendo cierta cantidad de biomasa. La distribucin de los nemtodos es un factor importante en el momento de tomar las muestras ya que las distintas especies prefieren diferentes profundidades. La distribucin y profundidad de las races en el suelo es otro factor que influencia la presencia de nemtodos fitoparsitos (Van der Wal, 1994). 3.5.5. Indicadores fsicos de la calidad del suelo El trmino calidad del suelo se empez a acotar al reconocer las funciones del suelo: (1) Promover la productividad del sistema sin perder sus propiedades fsicas, qumicas y biolgicas (productividad biolgica sostenible); (2) atenuar

contaminantes ambientales y patgenos (calidad ambiental); y (3) favorecer la salud de plantas, animales y humanos (Doran y Parkin, 1994). Al desarrollar este concepto, tambin se ha considerado que el suelo es el substrato bsico para las plantas; capta, retiene y emite agua; y es un filtro ambiental efectivo. En consecuencia, este concepto refleja la capacidad del suelo para funcionar dentro

28

de los lmites del ecosistema del cual forma parte y con el que interacta (Parr et al ., 1992). Las caractersticas fsicas del suelo son una parte necesaria en la evaluacin de la calidad de este recurso porque no se pueden mejorar fcilmente (Singer y Ewing, 2000). Las propiedades fsicas que pueden ser utilizadas como indicadores de la calidad del suelo son aquellas que reflejan la manera en que este recurso acepta, retiene y transmite agua a las plantas, as como las limitaciones que se pueden encontrar en el crecimiento de las races, la emergencia de las plntulas, la infiltracin o el movimiento del agua dentro del perfil y que adems estn relacionadas con el arreglo de las partculas y los poros. La estructura, densidad aparente, estabilidad de agregados, infiltracin, profundidad del suelo superficial, capacidad de almacenamiento del agua y conductividad hidrulica saturada son las caractersticas fsicas del suelo que se han propuesto como indicadores de su calidad. 3.5.6. Estructura del suelo: La textura est determinada por el porcentaje de arena, limo y arcilla contenidos en el suelo. Los suelos arenosos no almacenan tanta agua como el arcilloso, pero permiten una mayor circulacin de aire y son ms fciles para labrarlos. Los suelos de textura arcillosa se compactan con facilidad, retienen bastante cantidad de agua, pero con reducidos espacios porosos. Los suelos ricos en limo son los ms difciles en cuanto a estructura. Las partculas se encajan muy bien unas con otras y se compactan con mucha facilidad (Valarezo, 2 001). La textura y la estructura del suelo tienen un efecto importante sobre los nemtodos fitoparsitos y segn Wallace (1958) hay un tamao ptimo de partcula para el movimiento de cada especie de nemtodo. Aparentemente el tamao de poro afecta la facilidad con la que los nemtodos pueden desplazarse a travs del suelo. A diferencia de las races de las plantas, los nemtodos no pueden ejercer suficiente presin para forzar y pasar entre las partculas y 29

agregados del suelo (Stirling, 1991), en este sentido el movimiento de los nemtodos en el suelo est relacionado con el dimetro de los poros, el dimetro del nemtodo y la cantidad de agua en el espacio poroso. Un nemtodo no puede moverse entre las partculas de suelo cuando el dimetro de los poros es menor que el ancho del cuerpo de nemtodo (Nas, 1978). Brodie (1976), encontr mximas densidades poblacionales de tres especies de nemtodos a diferentes profundidades, donde la textura del suelo era tambin diferente, corroborando lo anteriormente descrito. Tambin se ha encontrado que el porcentaje de juveniles de Meloidogyne incognita capaz de migrar y penetrar races de tomate disminuye conforme aumenta el porcentaje de arcilla en un suelo. 3.5.7. Temperatura del suelo: La temperatura del suelo vara con la profundidad y poca del ao. La fluctuacin es mayor en los primeros 15 cm. y disminuye conforme aumenta la profundidad (Brodie, 1976). La temperatura es la variable fsica que tiene un gran significado biolgico y puede afectar diversas actividades de los nemtodos tales como el movimiento, desarrollo y reproduccin. Para la mayora de los nemtodos fitoparsitos tropicales la temperatura ptima oscila entre los 25 y 30 C, por encima o por debajo de este mbito, los nemtodos se inactivan o mueren. La temperatura influye sobre la planta hospedera, cambios en el desarrollo producen cambios en la morfologa y fisiologa de la raz afectando desde luego las poblaciones de nemtodos (Nas, 1978).

3.5.8. Humedad del suelo: Los nemtodos fitoparsitos son organismos que poseen alta tolerancia a la humedad, debido a que requieren de una pelcula de agua entre las partculas de suelo para poder movilizarse, por tanto, el contenido de agua en el suelo es un factor ecolgico muy importante e influye en la sobrevivencia de estos organismos. En suelos secos la sobrevivencia de los 30

nemtodos disminuye, muchos mueren, mientras que otros tienen la capacidad de sobrevivir en ausencia total de agua en estado de anahidrobiosis (Luc et al, 1990). En este sentido, el barbecho limpio puede no ser una medida efectiva de combate de nemtodos. La humedad del suelo vara con la profundidad y la poca del ao, sta es ms baja a los 30 cm. Superiores y ms alta a profundidades mayores. Aunque varia de mes a mes en los primeros centmetros del suelo, generalmente la variacin es mayor en verano que en invierno (Brodie, 1976). 3.5.9. Aireacin del suelo: El desarrollo, movimiento y reproduccin de los

nemtodos depende de la concentracin de oxgeno del suelo, sin embrago, de los trabajos realizados sobre este tema, se desprende que la mayora de las especies de nemtodos, el contenido de oxgeno en los primeros centmetros del suelo no constituyen un factor limitante. Algunos estudios realizados con nemtodos fitoparsitos han determinado la presencia de un metabolismo oxidante que capacita a los nemtodos a sobrevivir sin oxgeno. Este puede inducir a la inactividad y permite la sobrevivencia de los nemtodos (Nas , 1978).VanGundy (1965), encontr que a bajos niveles de oxgeno el metabolismo, movimiento e inefectividad de juveniles de Meloidogyne sp decreci, en tanto que la sobrevivencia aumento 3.6 Diagnstico de nemtodos. Puede ser muy difcil decidir si los nemtodos estn causando o son probablemente la causa de dao significativo en un cultivo. Si una enfermedad es causada por nemtodos y previamente encontrada en el sitio, es probable que an est presente. En una localidad en la cual se desconoce completamente lo que ha ocurrido, por las densidades de la poblacin de los nemtodos fitoparasitos, puede ser determinada por ensayos de laboratorio de muestras de suelo y/o planta (Dunt & Crow, 2001).

31

Otro problema diagnstico comn es determinar el papel de los nemtodos cuando las plantas establecidas estn creciendo insatisfactoriamente. Esta labor es a menudo difcil porque pocos nemtodos causan sntomas diagnsticos caractersticos. Un diagnstico seguro podra estar basado tanto como sea posible en sntomas encima y debajo del suelo, historia del terreno, pruebas nematicidas diagnsticas y ensayos de laboratorio de muestras de suelo y/o planta (Dunt & Crow, 2001).

3.6.1 Sntomas debajo del terreno. Estos sntomas pueden ser ms tiles que los sntomas superiores para diagnosticar muchos problemas por nemtodos. Nudosidades, races reducidas, lesiones necrticas en la corteza radical y pudricin de la raz pueden ayudar al diagnstico de nemtodos (Dunt & Crow, 2001). 3.7 Etiologa.

Los nemtodos ocasionan lesiones en la cscara del tubrculo, agrietamientos y apariencia carbonosa. La lesin causada por el nemtodo P. coffeae constituye una enfermedad tpica del ame en el Caribe y en el Pacfico (Bridge, 1988; Coates-Beckford & Brathwaite, 1977; Jatala & Bridge, 1990). S. bradys causa una enfermedad de pudricin seca en tubrculos de ame. Como es un endoparsito migratorio, el nemtodo penetra los tubrculos jvenes en crecimiento y se alimenta de los tejidos lesionndolos 1-2 cm de la superficie. La alimentacin se da sobre el tubrculo y la prdida producida est directamente relacionada con el dao causado.

32

3.8.

BIODIVERSIDAD

3.8.1. DEFINICIONES DE BIODIVERSIDAD La biodiversidad es la totalidad de los genes, las especies y los ecosistemas de una regin. La riqueza actual de la vida de la Tierra es el producto de cientos de millones de aos de evolucin histrica. A lo largo del tiempo, surgieron culturas humanas que se adaptaron al entorno local, descubriendo, usando y modificando recursos biticos locales. Muchos mbitos que ahora parecen "naturales" llevan la marca de milenios de habitacin humana, cultivo de plantas y recoleccin de recursos. La biodiversidad fue modelada, adems, por la domesticacin e hibridacin de variedades locales de cultivos y animales de cra.

La biodiversidad puede dividirse en tres categoras jerarquizadas--los genes, las especies, y los ecosistemas--que describen muy diferentes aspectos de los sistemas vivientes y que los cientficos miden de diferentes maneras

3.8.2. MEDIDAS DE BIODIVERSIDAD La diversidad se compone de dos elementos, variedad o riqueza y abundancia relativa de especies, su expresin se logra mediante el registro del nmero de especies, la descripcin de la abundancia relativa o mediante el uso de una medida que combine las dos componentes. Se han distinguido tres niveles de diversidad biolgica: La diversidad alfa, que es la diversidad dentro del hbitat o diversidad intracomunitaria; diversidad beta o diversidad entre diferentes hbitat, que se define como el cambio de composicin de especies a lo largo de gradientes ambientales y finalmente la diversidad gama, que es la diversidad de todo el paisaje y que puede considerarse como la combinacin de las dos anteriores (Melo, 2001).

33

3.8.3. MEDICIN DE LA RIQUEZA ESPECIFICA La riqueza especfica (S) es la forma ms sencilla de medir la biodiversidad ya que se basa nicamente en el nmero de especies presentes, sin tomar en cuenta el valor de importancia de las mismas. La forma ideal de medir la riqueza especifica es contar con un inventario completo que nos permita conocer el numero total de especies (S) obtenido por un censo de la comunidad, esto es posible para ciertos taxas bien conocidos y de manera puntual en tiempo y espacio para esto las funciones de acumulacin de especies , son una herramienta potencialmente til en el anlisis de la riqueza especifica de muestras (Soberon y Llorente, 1993). El cual se puede comparar valores observados con estimadores de riqueza como: Bootstrap: Este estimador de las riquezas de especies se basa en p j, la proporciones de unidades de muestreo que contiene a cada especie j (Palmer, 1990; Krebs, 1989). 3.8.4. ndices Basados en la Abundancia Relativa de Especies. Estos ndices buscan conjugar la riqueza y la abundancia relativa. Diversidad de SHANNON. Mide la heterogeneidad de la comunidad, el valor mximo ser indicador de una situacin en la cual todas las especies son igualmente abundantes. Cuando el ndice se calcula para varias muestras, los ndices se distribuyen de manera normal, lo que hace posible comparar el conjunto mediante el anlisis de varianza y se recomienda para comparar hbitats diferentes. Con base en este ndice, Shannon tambin calcula la Homogeneidad, que va de 0 a 1, y se basa en el nmero total de especies. El ndice de SIMPSON . Es una medida de la dominancia que se enfatiza en las especies ms comunes y reflejan ms la riqueza de especies. El ndice de Simpson se refiere a la probabilidad de que dos individuos de una comunidad infinitamente grande, tomados al azar, pertenezcan a la misma especie.

34

4. DISEO METODOLGICO

4.1. Localizacin y extensin El lugar de muestreo se halla ubicada en el corregimiento de Mateo Prez perteneciente al municipio de Sampus sucre, las coordenadas geogrficas de esta zona son 9 12 29,40 de latitud norte y 75 2210,59 de longitud oeste.

0.13kilometros

0.36 Kilmetros

zona
Muestreada

0.34 Kilmetros

0.20 Kilmetros

Figura 1. Localizacin y extensin del sitio de muestreo

35

4.2. Muestreo.

4.2.1. Mtodo de muestreo. Se elabor un croquis en el cultivo del ame de manera que se pudo establecer una zona de estudio. muestreo conforme a las diferentes limitaciones de la zona de

En la zona establecida

se tomaron submuestras al azar, de acuerdo con el

modelo de muestreo que aparece en la figura 2

Figura 2. Modelo de muestreo al azar.

4.2.2. Seguimiento estacional:

se hizo un seguimiento mensual de muestreo

en la respectiva zona de estudio, durante siete (7) meses, entre julio de 2007 a enero de 2008, teniendo en cuenta los factores climticos como la temperatura y la precipitacin. Adems otros factores como la humedad.

36

4.2.3. Cantidad de suelo muestreado. Con el muestreo sobre los primeros 20 cm de profundidad, se tomaron muestreos equivalentes a 0.25 kg, mediante un barreno (anexo 3 ), depositando las muestras en bolsas o cubetas (OIRSA, 1999); luego se mezclaron, obtenindose una muestra de 1Kg. 4.2.4. Manejo de las muestras. Se toman porciones al azar hasta completar un kilogramo, las cuales se mezclan entre si hasta hacerlas homogneas para conformar la muestra compuesta. Para su transporte se colocaron en bolsas de plstico, se cerraron y se guardaron para evitar la prdida de humedad, se rotularon con los datos bsicos como fecha del muestreo, cultivo, lugar de colecta, nmeros de muestras, entre otras (OIRSA, 1999).

Las muestras se trasladaron al laboratorio de biotecnologa

de la Universidad de

Sucre lo ms rpidamente posible para evitar cambios en las densidades de las poblaciones de los nemtodos. 4.3. Anlisis nematolgico. Se realiz de la siguiente manera en el laboratorio de biotecnologa de la Universidad de Sucre.

Se realiz dos tipos de anlisis, el de suelo y otro el de las races del tubrculo (Dioscorea rotundata), el anlisis de suelo se realiz en primera instancia y de las races durante la poca de cosecha.

37

4.4. Anlisis de las muestras. De las muestras, se prepar el suelo en s para la extraccin de nematodos. 4.4.1. Anlisis nematolgico del suelo: La extraccin de los nematodos presentes en el suelo, se logr mediante los siguientes procedimientos. a) Cada una de las muestras se deposit en un balde, agregndole 3 litros de agua, con el propsito de homogeniz , con lo que facilitaba la extraccin de los nematodos.

b)

Despus la suspensin se tamiz en un sistema de tamices de 1mm, 200, 100 y 45 de ojo de malla. Luego se procedi a colectar los nemtodos, a partir de cada uno de los tres ltimos tamices, segn el tamao corporal

c) El tamizado, se centrfug en tubos de 100cc, a 1.250 rpm durante 5 minutos, eliminando el sobrenadante.

d) Al sedimentado de cada tubo se le agreg una solucin de sacarosa (500g/l), agitndolos y luego se sometieron a una nueva centrifugacin (1.250 rpm), durante 3 minutos, y finalmente los nemtodos flotaron, quedando el residuo de suelo en el fondo del tubo.

e) Por ltimo, se tamiz el sobrenadante con los nematodos en el tamiz de 45 . De inmediato se procedi a hacer un lavado eliminando el azcar. Seguidamente se depositaron los nemtodos en una caja de petri o

Siracusa, y finalmente se procedi a realizar el conteo a travs de un estereoscopio.

38

4.4.2. Extraccin de los nemtodos de las races Los fragmentos radiculares se lavaron, para eliminar totalmente los remanentes de suelo, luego se fragmentaron en segmentos de 2 cm, alcanzando un peso de 100g, que se someta al proceso de incubacin de Young (1954), en un lapso de 2 a 3 das. Luego se procedi al conteo e identificacin de los especmenes 4.5. Procesamiento y montaje de nematodos: Los especimenes fueron relajados a calor, sumergiendo el recipiente que los contiene en agua caliente (90C) por 30 segundos, y luego se le agreg un volumen igual a la suspensin de nematodos una solucin de formalina 8% glicerina 2% caliente, dejndose almacenados en esta solucin indefinidamente hasta proceder al montaje de lminas en glicerina por el mtodo de reemplazo de Seinhorst (1959).

4.5.1. Montaje de placas permanentes: luego de realizarse la extraccin se seleccionan los nemtodos en tubos de eppendorf, se procedi a realizar el

montaje de placas permanentes por el mtodo de evaporacin glicerol - etanol de Seinhorts, 1966 (Handoo y Ellintong, 2003).

Se transfirieron los nemtodos del fijador a un bloque de vidrio escavado (cristal Siracusa), conteniendo 0.5 mililitros de la siguiente solucin:

Etanol al 96% --------------------------------20 ml Glicerol ---------------------------------------1 ml

Agua destilada --------------------------------79 ml

Luego el vidrio Siracusa con los nemtodos se colocaron en una caja de petri conteniendo etanol al 96%, con cuidado de que este ltimo no haga contacto con

39

otros especimenes. Se dejaron por 12 horas en un horno a 35 40C. Esto removi el agua contenida en el interior de los nemtodos. Despus de almacenarlos en el horno por 12 horas, los nemtodos se cubren con una solucin de: Etanol al 96% --------------------------------95 ml. Glicerol ---------------------------------------5 ml.

Posterior al montaje, que contiene los nemtodos se colocarn en una caja de Petri parcialmente serrada a un horno a 40C, hasta que todo el alcohol se haya evaporado (Aprox. 3 horas).

Luego los nemtodos se cubrieron con glicerol puro (al 98.7%);

para ser

transferidas a un porta objetos, el cual se coloc la laminilla y por ltimo se sellaron con esmalte de uas transparentes y se rotul la placa con el nmero, fecha y zona de colecta. 4.5.2. Conteo y separacin e identificacin de morfotipos: Con un de 32X y 100X se utiliz

microscopio compuesto (Zeiss Jena), en aumentos

para el conteo de fitonemtodos con la ayuda de una cmara cuenta nemtodos y la separacin de morfotipos. El aumento de 400X se utiliz para la identificacin de los gneros utilizando las claves propuestas por Mai et al y Tarjan et al, 1977. 4.5.3. Anlisis de datos. 4.5.3.1. Procesamiento de datos: Diversidad alfa: con el cual se describirn los procesos matemticos que involucran la diversidad de una comunidad.

40

4.5.3.2. Curva de acumulacin por especies: se estableci el nmero de muestras representativas del nmero de gneros de nematodos de cada parcela de estudio o unidad de paisaje a travs del software EstimateS 6.0 (Collwel, 1997). Esta curva nos representa el nmero de especies acumuladas de cada parcela conforme se va aumentando el esfuerzo de colecta de un sitio, de tal manera que la riqueza aumentar hasta que llegue un momento por el cual por ms que se recolecte el nmero de especies alcanzar un mximo y se estabilizar en una asntota (Espinosa, 2003). Ver figura 1:

Riqueza

30 25 20 15 10 5 0 1 2 3 4 5 6 7 8

Unidad muestral
Fig 1. Curva de acumulacin por especies Fuente: Campos, 2001.

Para estimar el porcentaje de gneros acumulados se aplic una funcin de la curva de acumulacin por especies como lo es el estimador Bootstrap:

Donde: pj= son las proporciones de unidad de muestreos que contiene cada especie j. n= Total de nmero de especies.

41

ndices basados en la abundancia relativa de especies:

Para medir la diversidad de las especies durante las pocas de sequa y de lluvia, se utiliz el ndice de diversidad de Shannon-Weaver (H`):

Donde: pi= Abundancia proporcional de cada especie (ni /N). ni = Abundancia para la I-sima especie. N= No. Total de individuos.

Posteriormente para una comparacin de valores de la diversidad de Shannonweaner (H`) se emple la prueba t`, donde se calcular la varianza de cada comunidad independiente por la siguiente frmula:

Para calcular el valor de t :

Y para los grados de libertad (DF):

42

En las tablas t se observaron las diferencias significativas entre las comunidades de nematodos para los valores de t y grados de libertad resultantes. Entre menor la probabilidad, mayor la diferencia, en trminos de diversidad de abundancia que ocurre en ellas.

Para medir la dominancia de las especies se utiliz el ndice de dominancia de Simpson:

Donde: S=nmero de especies. n= nmero de individuos de la i-sima especie. N=nmero total de individuos.

43

RESULTADOS.
Se identificaron los gneros que aparecen en la tabla 1, los cuales pertenecen a varios niveles troficos como los referenciados en la tabla 2 Tabla 1. Gneros de Nematodos asociados al ame espino ( dioscrea rotundata)
Familia Subfamilia Gnero
Rotylenchus Tylenchus Tylenchorhynchus Ty lenchidae Belonolaimid ae Hoplolaimidae Praty lenchidae Anguinid ae Ty lenchinae Teloty lenchinae Hoplolaiminae Praty lenchinae Nothoty lenchinae Psilenchus Paratrophur us Helicotylenchus Pratylenchus Nothotylenchus Cricone ma Criconematinae Criconematidae Aphelenchid ae Aphelenchoi didae Rhabditidae Paraty lenchinae Aphelenchin ae Aphelenchoi dinae Rhabditinae Cricone mella Gracilacus Aphelenchus Aphelenchoi des Rhab ditis Encephalob us Cephalobina e Acrobelinae Cephalobida e Panagrol aiminae Ceph alobus Acrobeles Panagrol ay mus Dorylai minae Discolay mus Dory laiminae Dory laimidae Actinolaiminae Plectinae Plectidae Tripy lidae Prismatolaimidae Wilsonematinae Ironus Actinola mus Chron ogaster Tylocephalus Tripyla Pris matolay mus Dorylliu m Leptonchidae Mono nchidae Dorilai mo ides Mononchus Prionchulus Iotonchus Mylonchulus Monhy steridae Chromadoridae Monhy sterinae Monhystera Acro mad ora

Referencia
Filipjev , 1936 Bastian, 1865 Cobb, 1913 De Man, 1921 Arias, 1970 Steiner, 1945 Filipjev , 1936 Thorn e, 1941 Hofmanner y Menzel, 1914 De Grisse y Loof, 1965 Raski, 1962 Bastian, 1865 Fischer, 1894 Dujardin, 1845 Steiner, 1936 Bastian, 1865 Linstow, 1877 Fuchs, 1930 Filipjev , 1918 Cobb, 1913 Bastian, 1865 Cobb, 1913 Cobb, 1913 Crossman, 1933 Bastian, 1865 de Man, 1880 Cobb, 1920 Thorn e and Swanger, 1936 Bastian, 1865 (Dujardin, 1845) Wu and Hoeppli, 1929 (Cobb, 1916) Altherr, 1950 (Cobb, 1906) Andrassy , 1958 Bastian, 1865 Cobb, 1913

44

Tabla 2. Clasificacin de los nematodos asociados al cultivo del ame segn su hbito alimentario y presencia
Gnero
Rotylenchus Tylenchus Tylenchorhynchus Psilenchus Paratrophur us Helicotylenchus Pratylenchus Nothotylenchus Cricone ma Cricone mella Gracilacus Aphelenchus Aphelenchoi des Rhab ditis Encephalob us Ceph alobus Acrobeles Panagrol ay mus Dorylai minae Discolay mus Ironus Actinola mus Chron ogaster Tylocephalus Tripyla Pris matolay mus Dorylliu m Dorilai mo ides Mononchus Prionchulus Iotonchus Mylonchulus Monhystera Acro mad ora

Gremio
Fitoparsito Fitoparsito Fitoparsito Fitoparsito Fitoparsito Fitoparsito Fitoparsito Fitoparsito Fitoparsito Fitoparsito Fitoparsito Fungv oro Fungv oro Bacterv oro Bacterv oro Bacterv oro Bacterv oro Bacterv oro Omnv oro Omnv oro Omnv oro Omnv oro Bacterv oro Bacterv oro Predador Predador Omnv oro Omnv oro Predador Predador Predador Predador Predador Bacterv oro

Frecuencia
598 6 7 6 1 1137 14 1 3 40 5 77 8 19 11 6 4 4 191 15 1 10 6 4 8 1 39 3 1 28 1 6 4 2

45

Frecuencia mensual de nematodos por hbito alimentcio. 800 700 600

Fitoparsitos Fungvoros Bactervoros Omnvoros Predadores

Frecuencia

500 400 300 200 100 0

Jul-07 Ago-07 Sep-07 Oct-07 Nov-07 Dic-07 Ene-08

Meses.

Fig. 3: Frecuencia de individuos por hbito alimentario entre los meses de julio del 2007 hasta enero del 2008.

Nematodos Fitoparsitos ms Frecuentes Microfotografa del gnero Descripcion Fig. 4. Tylenchus: Tiene presencia de campos laterales, estilete

pequeo con ndulos bsales, vulva en la mitad del cuerpo en las hembras. Los machos

presentan bursa conspicua y cola filiforme.

46

Fig. 5. Helicotylenchus: El cuerpo es arqueado o en espiral cuando est en reposo. La regin labial es redondeada o anteriormente aplanada o truncada. El estilete es moderadamente largo. En las hembras la vulva est

localizada posterior al punto medio del cuerpo, la cola es redondeada o casi puntiaguda con una proyeccin corta en la cara ventral. Fig. 6. Criconemella: Es un nematodo de cuerpo corto y ancho, las hembras tienen la regin labial angosta, continua con el resto del cuerpo. En las hembras el estilete es desarrollado, cola redondeada o puntiaguda, la vulva se ubica cerca de la parte posterior del cuerpo. En los machos con cutcula gruesa y grandes anillos, generalmente no presentan estilete.

47

Fig. 7. Pratylenchus: La regin labial es anillada y poca

diferenciada del cuerpo. Estilete corto, fuerte con ndulos gruesos cola y casi

redondeados,

redondeada o puntiaguda. La hembra tiene la vulva ubicada en el cuarto

posterior, con un ovario sencillo y el macho

presenta cola con bursa.

Fig. 8. Tylenchorhynchus: La regin labial se presenta como una prolongacin presencia del de

cuerpo,

campos laterales con 2 5 incisuras, el bulbo

posterior desarrollado, la cola ahusada, redondeada y ligeramente estriada; el estilete desarrollado con ndulos conspicuos. bsales

48

Fig. 9. Criconema: cola final atenuada, cuerpo 73-78, 48-51 y la vulva se encuentra en 8-9 anillo del extremo posterior

Fig.

10. Rotylenchus: La regin ceflica est dividida en

seis placas, delimitadas a su vez por seis estras longitudinales. campos laterales Los estn

areolados en su inicio pero pierden esta caracterstica gradualmente

Los gneros Helicotylenchus y

Rotylenchus, con 1137 y 598 individuos

respectivamente (Fig. 11), fueron los de mayor frecuencia (Tabla 2), los cuales aumentaron en mayor frecuencia en los meses de noviembre, diciembre y enero . (Tabla 3)

49

N de Individuos

1000

1200

200

400

600

800

Fig. 11. Ordenamiento de los gneros segn su abundancia

50
G neros

H elicotylenchus C .f. R otylenchus D orylaiminae Aphelenchus C riconemella D oryllium P rionchulus R habditis D is colaymus P ratylenchus E ncephalobus Actinolaminae Aphelenchoides T ripyla T ylenchorhynchus T ylenchus P s ilenchus C ephalobus C hronogas ter Mylonchulus G racilacus Acrobeles P anagrolaymus T ylocephalus Monhys tera C riconema ND 1 D orilaimoides Acromadora P aratrophurus Nothotylenchus Ironus P ris matolaymus Mononchus Iotonchus

Tabla 3. Frecuencia mensual de los gneros asociados al cultivo del ame segn su presencia o ausencia de nematodos.
Gnero/Meses Discolaymus Encephalobus Helicotylenchus Pratylenchus Aphelenchus Cephalobus Actinolaminae Rotylenchus Chronogaster Dorylaimoides Dorylaiminae Ironus ND1 Criconemella Aphelenchoides Rhabdits Monhystera Prionchulus Tylenchus Acromadora Doryllium Tripyla Prismatolamus Mylonchulus Tylenchorhynchus Tylenchus Tylocephalus Psilenchus Panagrolaymus Acrobeles Gracilacus Paratrophurus Mononchus Nothotylenchus Criconema Iotonchus Jul-07 (E) 13 (ME) 7 (E)16 (ME) 2 (ME) 2 (ME) 3 (ME) 4 (ME) 2 (ME) 2 (ME) 3 (E)13 (ME) 1 (ME) 1 (ME) 1 (ME) 4 (ME) 2 (ME) 4 (ME) 2 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 Ago-07 (ME) 1 (ME) 2 (ME) 6 (AU) 0 (ME) 10 (AU) 0 (ME) 1 (ME) 5 (ME) 3 (AU) 0 (E) 18 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (ME) 2 (ME) 1 (ME) 2 (ME) 3 (ME) 2 (ME) 1 (ME) 1 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 Sep-07 (AU) 0 (AU) 0 (E)11 (ME) 2 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (ME) 5 (AU) 0 (AU) 0 (ME) 1 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 Oct-07 (ME) 1 (AU) 0 (E)17 (AU) 0 (ME) 5 (ME) 2 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (A) 32 (AU) 0 (ME) 1 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (E)18 (AU) 0 (AU) 0 (ME) 1 (ME) 2 (ME) 1 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 Nov-07 (AU) 0 (AU) 0 (MA) 318 (ME) 4 (A) 30 (ME) 1 (ME) 1 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (A) 36 (AU) 0 (ME) 1 (E)12 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (ME) 3 (AU) 0 (AU) 0 (E)17 (ME) 1 (AU) 0 (AU) 0 (ME) 3 (AU) 0 (ME) 3 (ME) 2 (ME) 1 (ME) 2 (ME) 3 (ME) 1 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 Dic-07 (AU) 0 (ME) 2 (MA) 723 (ME) 6 (E)19 (AU) 0 (ME) 4 (ME) 1 (ME) 1 (AU) 0 (A) 39 (AU) 0 (AU) 0 (ME) 7 (ME) 1 (AU) 0 (AU) 0 (A) 21 (AU) 0 (AU) 0 (ME) 1 (ME) 1 (AU) 0 (ME) 4 (ME) 2 (AU) 0 (ME) 1 (ME) 4 (ME) 3 (ME) 2 (ME) 2 (AU) 0 (ME) 1 (ME) 1 (AU) 0 (AU) 0 Ene-08 (AU) 0 (AU) 0 (A) 46 (AU) 0 (E)11 (AU) 0 (AU) 0 (MA) 590 (AU) 0 (AU) 0 (A) 48 (AU) 0 (AU) 0 (E)19 (ME) 2 (E)16 (AU) 0 (AU) 0 (ME) 5 (AU) 0 (AU) 0 (ME) 4 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (AU) 0 (ME) 3 (ME) 1

Tabla 4. Convenciones segn la presencia o ausencia de nematodos

Rango
0 1 a 10 11 a 20 21 a 80 81 a ms AU ME E A MA

Categora
Ausente Muy Escaso Escaso Abundant e Muy Abundante

51

Los datos de la precipitacin y temperatura que aparecen en la Fig.12 corresponden a la estacin meteorolgica de El Perico, de los meses en los cuales se realizaron los muestreos; segn estos datos, las mayores precipitaciones se presentan en los meses de Julio, Agosto, Septiembre, Octubre y las bajas

precipitaciones o sequa corresponden a los meses de Noviembre, Diciembre y Enero, en la poca de lluvia o mayor precipitacin, los nematodos Fitoparsitos presentaron bajas frecuencias, identificados, de igual forma el resto de los gneros

en los meses de sequa o baja precipitacin, los fitoparsitos

alcanzaron frecuencias de 343, 746 y 663, a diferencia de los dems grupos de nematodos que presentaron bajas frecuencias (Tabla 5. Fig. 3)

Precipitacin y Temperatura
9 8 28 28,5

Precipitacin en mm.

7 6 5 27 4 3 2 26 1 0 Jul-07 Ago-07 Sep-07 Oct-07 Meses Nov-07 Dic-07 Ene-08 25,5 26,5 27,5

Temperatura en C.

Precipitacion promedio en mm Temperatura promedio en C

Fig. 12. Precipitacin y temperatura promedio entre los meses de julio del 2007 hasta enero del 2008.

52

Tabla 5, se puede apreciar las frecuencias de los nematodos segn su habito alimentario; mientras que en la figura 13 aparecen los porcentajes de cada uno de los anteriores grupos correspondiente a la poca de lluvias. En la figura 14, los porcentajes de dicho grupo en los meses de sequa. Tabla 5: Frecuencia de individuos por hbito alimentario entre los meses de julio del 2007 hasta enero de 2008
Meses Fitoparsitos Fungvoros Bactervoros Omnvoros Predadores Jul-07 21 6 15 34 6 Ago-07 12 10 8 23 5 Sep-07 14 0 0 5 0 Oct-07 20 5 3 51 1 Nov-07 343 31 9 54 4 Dic-07 746 20 9 44 27 Ene-08 663 13 16 48 5

Fig. 13. Distribucin porcentual de nematodo en poca de lluvia .

53

Fig. 14. Distribucin porcentual de nematodo en poca de sequa

Diversidad y Dominancia:

El ndice de diversidad de Shannon-Wienner present una variacin en los meses de lluvia y sequa, oscilando entre 3.51 a 2,01, respectivamente (Tabla 6), de igual manera ocurri con el ndice de Simpson (Fig. 15), el cual en los meses de lluvia fue de 0.143, y en la pocas de sequa fue de 0.376. La prueba T para los ndices de Shannon-Wienner y Simpson, permite rechazar la hiptesis nula (Ho) (Tabla 7), segn la cual las poblaciones no presentaban variaciones en periodos de lluvia y sequa.

54

Tabla 6. ndice de shannon y simpson de Nematodos en lluvia y sequa Shannon-Wiener Nematodo en poca de lluvia Nematodo en poca Sequa 3,51 2,01 Simpson 0,143 0,376

Tabla 7. Prueba T para la comparacin de valores de diversidad de Shannon Wienner a p>0.05 Lluvia y Sequa T-test Shannon Grados de Libertad Ho (Hiptesis Nula) t: tabulada al 0.05 = 2.353 12,445 3,15166 Rechazada

Ho: las poblaciones de nematodos Fitoparsitos no presentan variaciones en poca de lluvia y sequa. (H`sequa = H`lluvia). Ha: las poblaciones si presentan variaciones en dichos periodos, (H`sequa H`lluvia)

55

DIVERSIDAD Y DOMINANCIA ENTRE LLUVIA Y SEQUI A

4,5 4 3,5 3 2,5 2 1,5 1 0,5 0

a b

Shannon-Wiener Simpson

Lluvia Fig. 15. diversidad y dominancia

Sequa

Curva Acumulatoria por gneros:

El seguimiento mensual de los muestreos de campo, analizado segn la curva de acumulacin de especies permiti evidenciar que no se present el

comportamiento correspondiente a la asntota debido a que los datos de campo mostraron un nivel inferior al que determin el estimador de bootstrap, el cual fue de 89,19 % lo que permite afirmar que el muestreo fue bastante representativo (Fig. 16).

56

Fig. 16. Curva acumulatoria por gneros de nematodos y su estimador bootstrap. Paralelo a los anlisis realizados en el presente estudio, se realizo muestreos a nivel radicular, encontrndose la presencia de los gneros que aparecen en la Tabla 8 Tabla 8. Nematodos encontrados en la races de Dioscrea rotundata
Gnero Aphelenchus Helicotylenchus Tylenchorhynchus Tylenchus Rotylenchus Cephalobus Total N de individuos 92 9 1 1 1 1 105 Porcentaje 87,6 8,57 0,95 0,95 0,95 0,95 100

57

ANALISIS DE RESULTADOS

Los

gneros

Rotylenchus,

Helicotylenchus,

Pratylechus,

Aphelenchus

Aphelenchoides, encontrados en Dioscrea rotundata , tambin fueron reportado por Adegbite y sus colaboradores en el ao 2006, quienes hicieron un estudio sobre nematodos fitoparsitos en Dioscrea sp., en tres estados de Nigeria. El gnero Pratylenchus es uno de los ms importantes a nivel econmico en los cultivos de ame (Dioscrea sp), causando una pudricin seca de los tubrculos en el almacenamiento. Los daos causados por los nematodos fitoparsitos reducen la calidad y la produccin del tubrculo en el campo y en el almacenamiento (Ayala y Acosta, 1971; Bridge, 1972; Thompson et al , 1973; Adesyan y Odirhin, 1977; Caveness, 1982; Hahn et al, 1989; Green y Florini.1996; Agbaje et al, 2002 y 2003; Adegbite et al, 2005). Ensayos de laboratorio, invernadero y campo llevaron a estos investigadores a concluir que las especies Pratylenchus coffeae y Scutellonema bradys causan la pudricin seca en los tubrculos (Romn, 1977).

A partir de los resultados obtenidos en la poca considerada como de sequa o baja precipitacin se pudo observar que la mayor abundancia de gneros fitoparsitos correspondieron a Helicotylenchus y Rotylenchus, tal vez, se debi a su adaptacin a un amplio rango de condiciones que les permiten ser ms tolerantes a cambios de temperatura, aireacin, acidez, desecacin y alcalinidad; es decir, una mayor adaptabilidad, por ende, una alta capacidad de incremento poblacional. La textura y estructura del suelo , franco-arenoso, tiene un efecto

importante, tanto que favorece la presencia y el inc remento de la poblacin fitoparsita, puesto que presenta elevado porcentaje de arena con su mayor

macro porosidad, lo que favorece la movilidad del nematodo y con ello una mayor facilidad para la consecucin de los alimentos.

58

Hay que destacar que en la poca considerada como sequa o baja precipitacin, se presentaron lluvias espordicas, lo que favoreci el incremento poblacional, debido a que se forman pelculas de agua, la cual facilita el movimiento entre las partculas de suelo.

La

poca de lluvia o alta precipitacin juega un papel fundamental para los

nematodos, ya que estos dependen de las concentraciones de oxigeno para realizar sus funciones vitales. Segn Stolzy y Van Gundy (1968), la fase liquida contiene los solutos del suelo, y el oxgeno es inversamente proporcional a la fase gaseosa, es decir, entre ms hmedo el suelo, hay menos oxgeno, sin embargo, algunos estudios realizados por Van Gundy (1985), con nematodos fitoparsitos han determinado la presencia de un metabolismo oxidante que capacita los nematodos a sobrevivir sin oxgeno durante periodos variables. Segn Nas (1978), los bajos niveles de oxgeno pueden conducir a la inactividad y permite la sobrevivencia de los nematodos.

Los resultados obtenidos durante el perodo de estudio en campo desde julio del 2007 a enero del 2008, demostr que la poblacin de los nematodos fitoparsitos son ms sensible a la humedad que las poblaciones de los nematodos no Baker y Cook

fitoparsitos; concordando con los resultados encontrados por

(1974), citados por Rodrguez (1999), al igual que muchos patgenos. Los nematodos fitoparsitos forman grupos con resistencias a los cambios de las variables ambientales; con un comportamiento en cuanto a sus selectividad de las poblaciones de hospederos; el aumento de la poblacin de fitoparsitos en su poca segn Agrios (1998), comenzando as stos a atacar los tejidos de las plantas hospedantes en este caso Dioscrea rotundata, acelerando las

condiciones de estrs de estas lo que puedes hacerlas susceptibles al ataque de otros patgenos, conduciendo finalmente a su muerte.

59

En la poca de baja precipitacin se rompe la equidad que hay en las comunidades de nematodos (fungivoro, bacterivoro, predadores, omnvoros y fitoparsitos), como lo demostr la baja diversidad de Shannon-Wiener,

aumentando la dominancia del gremio fitoparsito, como lo demuestra el ndice de Simpson.

Como no se alcanz totalmente la asntota en el seguimiento de campo como aparece en la curva acumulatoria; un 89.19% de los gneros estimados por la ecuacin Bootstrap, se puede considerar que es un inventario fiable. El alto porcentaje del gnero Aphelenchus (87.6%) en las races del tubrculo, aunque es un nematodo fungivoro, tiende a comportarse tambin como fitoparsito, pero en los cultivos de ame (Dioscrea sp.) no se han reportado daos por este nematodo; aunque si hay reportes de graves daos en otros cultivos como en el arroz y avena.

60

CONCLUSIONES

Los gneros de nematodos fitoparsitos asociados al cultivo del ame espino (Dioscorea rotundata), Mateo Perez Sampues son: Rotylenchus, Tylenchus, Tylenchorhynchus, Psilenchus, Paratrophurus, Helicotylenchus, Pratylenchus, Nothotylenchus, Criconema, Criconemella, Gracilacus .

La

poblacin

de

nemtodos

fue

influenciada

por

los

factores

edficoclimaticas, encontrndose la mayor poblacional de nematodos fitoparsitos en la poca considerada como sequa. (baja precipitacin)

Las condiciones edafoclimticas (temperatura, precipitacin, pH y textura del suelo), dadas en el cultivo de ame espino Mateo Prez, fueron favorables para el desarrollo de las pob laciones de nemtodos fitoparsitos y no fitoparsitos.

En la poca de lluvia, la diversidad de Shannon-Wienner fue de 3.51, mientras que en sequa disminuy a 2,01, lo que indica que si hubo diferencias significativas en los cambios de la diversidad entre las dos pocas, realizado por la prueba T de la diversidad de Shannon a una probabilidad de 95% de confianza, caso contrario; a la dominancia de Simpson, que en la poca de lluvia fue de 0.143, aumentando en sequa a 0.376.

61

Los nematodos fitoparsitos de mayor abundancia en el cultivo del ame espino (Dioscorea rotundata) fueron Helicotylenchus con 1137 individuos y Rotylenchus con 598 individuos.

En las pocas de sequa aument el nmero de individuos de los gneros Helicotylenchus y Rotylenchus a diferencia de los dems gneros donde su poblacin cambio considerablemente.

Los resultados obtenidos durante el perodo de estudio en campo desde julio del 2007 a enero del 2008, demostr que la poblacin de los que las

nematodos fitoparsitos son mas sensible a la humedad

poblaciones de los nematodos no fitoparsitos; concordando con los resultados encontrados por Baker y Cook (1974), citados por Rodrguez (1999).

62

8. RECOMENDACIONES

Las futuras investigaciones en este tema deben de estar

dirigidas a

monitorear la dinmica y fluctuacin poblacional de los nematodos fitoparsitos asociados al cultivo de ame as como mtodos de manejo encaminados a disminuir las poblaciones en lotes comerciales.

Los cultivadores de ame deben utilizar semillas de buena calidad y libre de cualquier agente que pueda n ms adelante causar daos y perdidas econmicas, ya que el cultivo de ame se ve afectado entre otras razones, porque la mayora de las semillas son tomadas de los mismos cultivos en los siguientes ciclos, lo que conlleva a un nivel de transmisin de plagas y enfermedades entre las que se encuentran la accin de nemtodos.

La realizacin de Muestreos, para determinar la dominancia y controlar las poblaciones y a si obtener mejores resultados en las cosechas.

Tener en cuenta los nematodos como factores determinantes en los cultivos, ya que algunos cultivadores desconocen de estos agentes.

Continuar con inventarios, monitoreo y evaluacin de la biodiversidad a nivel de gneros de nematodos asociados al culti vo del ame en otras

zonas del Departamento de Sucre, con el objeto de evaluar las cambios ecolgicos.

63

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. ADESIYAN , S.O.; ODIHIRIN, R.A.; ADENJII, M.O. 1977. Economic losses caused by the yam nematode, Scutellonema bradys, in Nigeria. Plant Disease Reporter 59, 477480. 2. AGRIOS, G. 1998. Fitopatologia. Ed. Limusa. Mxico D. F.

3. LVAREZ, A. 2000.

Prcticas agronmicas para el cultivo del ame. En:

AME: Produccin de semillas por biotecnologa. Bogot. 1 edicin. Unibiblos. Universidad Nacional de Colombia. pp. 33-39. 4. ALVIS SANTOS, H., RUIZ BUSTOS, F. Y VERGARA ABAD, H. 1987. En: estudio detallado de suelos de la granja El Perico (Sampues) y de la ciudadela universitaria Puerta roja (Sincele jo) Departamento de Sucre. Tesis de grado del programa de Ingeniera Agrcola de la facultad de Ingenieria de la Universidad de Sucre. Pg. 1- 2.

5. AZMI, M. I., A.SINGH, AND B.D PATIL. 1985. Control of tylenchorhimchus vulgari on caribean stylo (stylosanthes hamata). Indian journal of nematilogy. 14: 2000 2001 6. BAQUERO, M.J. & PREZ, L.M. (2002). Identificacin y caracterizacin de Colletotrichum spp. como agente causal de la antracnosis en Dioscorea spp. Tesis de grado. Facultad de Educacin y Ciencias. Universidad de Sucre . 7. BRIDGE, J. 1973 y 1972 . Nematodes a pest of yams in Nigeria. Mededelingin faculteit Landbouwwetenschalifen Gent 38, pp. 841-852. 64

8. BRIDGE, J. 1988. Nematodes of Yams. In: Yams: Ignames. (Ed. By Mige, J.; Lyonga, S.N.), Clarendon Press, Oxford. pp. 253-264. 9. BRODIE, B.B.1976. Vertical distribution of three nematode species in relation to certain soil properties .Journal of Nematology . 8(3):243-247.

10. BRUNT, A.A; JACKSON, G.V.H AND FRISON, E.A. 1989. FAO/IBPGR technical guidelines for the save movement of yam germoplasm. In collaboration with Research Institute ofor Plant Protection. ISBN-92-9043-1482. P. 18-19. 11. COATES-BECKFORD , P.L.; Brathwaite, C.W.D. (1977). Comparison of various treatments for the control of Pratylenchus coffeae in yam. Nematropica 7, pp. 2026. 12. CROZZOLI, R Y PARRA D. (1991). Deteccin del nematodo Scutellonema bradys, causante de la pudricin seca del ame en Venezuela. Fitopatol. Venez. 4(1):26. 13. DANE. Encuesta nacional agropecuria, resultados 1995, costa atlntica,

1996. p 16. 14. DORAN, J. W. y PARKIN, B.T. 1994 . Defining Soil Quality for a Sustainable Environment. Soil Science Society of America, Inc. Special Publication. Number 35.Madison, Wisconsin, USA. 15. DUNN, R AND CROW, W.T. 2001. Introduction to plant nematology. Florida Nematode Management Guide from the Department of Entomology and

65

Nematology, Institute of Food Agriculture Science. University of Florida. Disponible en: http://edis.ifas.ufl.edu 16. ESCALANTE ESPINOSA, TANIA. 2003. En: Cuntas especies hay? Los estimadores no paramtricos de Chao. Elementos 52.Pp. 53-58. 17. GOODEY, J. Pg.1955 1958 18. GONZALO HALFFTER Y EXEQUIEL EZCURRA. 1992. Que es la B., FRANLINK, M. T. AND D.J. HOOPER. 1959.

Supplement to the nematodes parasites of plant catalogued under their host

Biodiversidad?" en La Diversidad Biolgica de Iberoamrica 19. HANDOO, ZAFAR and ELLINTONH, DONNA. 2003. Some productores for collecting and preparing nematodes for study. researches service). 20. HUGHES, J. d A.; Meerman, J.C.; Speijer, P.R.; Vernier, P.; Asiedu, R., - in collaboration with L. Dongo, C. KwosehJ. Mudiope*, O. Olatunde, A. Tchabi , G. Atiri, L. Kenyon, J. Peters, S.K. Offei, R. Plowright, and M. Gumedzoe. 1999. Improvement of yam-based production systems. Project 13. IITA. p 8, 12 USDA. ARS (agriculture

21. JACQ, V., FORTUNER, R., 1979 . Biological control of rice nematodes using sulphate reducing bacteria. Revue de Nematologie 2, 4150. 22. JATALA, P. AND BRIDGE, J. 1990. Nematode Parasites of Root and Tuber Crops. In: Plant Parasitic Nematodes in Subtropical and Tropical Agriculture. (Ed. by Luc, M., Sikora, R. A.; Bridge, J.), CAB International, Wallingford, UK. pp. 137180.

66

23. KREBS, C. J. 1989. Ecological methodology. Harper Collins publ. 654 Pp.

24. LOOF, P.

A.

A.

1960.

Taxonomic studies on the genus Pratylenchus

(nematoda). Tijdschrift Pflantenziekten 66: Pg. 29 90 25. LUC, M. AND DE IGUARAN. 1960. Les nmatodes asoceis aux plantes de l ouest Africain. Liste perliminare. Agronomie Tropicale (Nogent) 15: Pg. 434 449.

26. LUC, M.; HUNT, D. J.; MACHON, J.E.1990 . Morphology, anatomy and biology of plant parasitic nematodes .Plant parasitic nematodes in subtropical and tropical agriculture. Cab International. CAP 1. London .Pag 4 . 27. MELO, O. 2001 . Documento Base para el Componente Vegetacin en el Proyecto Zonas Aridas. Universidad del Tolima. 14 p. 28. NAS ,1978. Control de nematodos parsitos de plantas. Nacional Academy of Sciencies. Vol 4. Editorial Limusa. Mxico. Pg. 219 .

29. NOMBELA, G. & BELLO, A. 1983 . Modificaciones al mtodo de extraccin de Nematodos fitoparsitos por centrifugacin en azcar. Bol. Serv. Plagas 9,183189. 30. ORGANISMO INTERNACIONAL REGIONAL DE SANIDAD y traslado de

AGROPECUARIA (OIRSA). 1999. En: Toma, preservacin muestras vegetales para anlisis fitopatolgico.

67

31. PALMER, M. W., 1990. The estimation of species richness by strapolation. Ecology. 71:1195-1198. 32. SANCHES, J. 1978. Manual de nematologa. Ed. Temas de orientacin agropecuaria. 33. SASSER, J.N. AND FRECKMAN, D.W. 1987. A World Perspective on Nematology: The Role of the Society. In: Vistas on Nematology. (Ed. by Veech, J.A.; Dickson, D.W.), Society of Nematologists, Hyattsville, Maryland. pp. 714. 34. SEINHORST, J.W. (1966). Killing nematodes for taxonomic study with hot F.A. 4:1. Nematologica 12:178. 35. SHARMA, S.B.; PRICE, N.S. AND BRIDGE J. 1997. The past, present and future of plant nematology in International Agricultural Research Centers. Nematological Abstracts. Vol 6. No. 3. pp 119-142 36. SINGER, M.J. Y EWING, S. 2000 . Soil Quality. En Handbook of Soil Science. Chapter 11 (ed. Sumner, M. E.), 271-298, CRC Press, Boca Raton, Florida. 37. STIRLING,G.R. 1991. Biological control of plant parasitic nematodes. CAB internacional. Cap 3. London. Pg. 22 -45.

38. THURSTON, H. D. 1998 . Tropical Plant Diseases. 2th Edition. APS PRESS.

68

39. USDA, 2002.

United

States

Department Agriculture.

Nematology

Laboratory. Web: http://www.barc.usda.gob/psi/nem/what-nem.htm 40. VALAREZO, J. 2001. Comp. Manual de Fertilidad de Suelos. Universidad Nacional de Loja, rea Agropecuaria y de Recursos Naturales Renovables, Carrera de Ingeniera Agronmica. 84 p. 41. VAN DER WAL, A. F.1994 . Nematology; summary nematology lectures. En: International course on integrated pest management. Mar 20, Jul 2, pag 25. 42. VAN GUNDY. S, D.1965 1985. Factors in survival of nematodos. Annu., Rev Phytopathology. 3:43-68.

43. VOLCY, C.1998. Nematodos diversidad y parasitismo .Tomo II .Medelln, Universidad Nacional de Colombia.182 Pg. 44. WALLACE, H. R. 1969. The influence of nematode numbers and of soil particle size, nutrients and temperature on the reproduction of Meloidogyne javanica. Nematologica 15, pp. 55-64. 45. WALLACE, H.R.1958. Movement of eelworms. The influence of pore size and moisture content of the soil, Heterodera glycines .Ann,Appl. Bicl.46:7485. 46. YOUNG T.W. 1954. An incubation method for collecting migratory endo
nematodes. Plant Dis. Rep. 38:794-795. parasitic

69

70

ANEXO 1. Anlisis fisicoqumico de la parcela de estudio.

Mateo Prez - Sampus Textura pH % M.O Humedad Temperatura Franco arenoso 8.20 1.73 78 26-29C

ANEXO 2. Muestra de suelo para anlisis fisicoqumico

71

ANEXO 3. BARRENO

ANEXO 4 EXTRACCION DE NEMATODOS MEDIANTE TAMICES. Mtodo de tamizado de Cobb

72

ANEXO 5. Vista De Nematodos a travs Del Microscopio 1

ANEXO 6. Vista de nematodos a travs del microscopio 2 ANEXO

73

ANEXO 7.Tabla de resultados de valores observados y estimados

Samples
1 2 3 4 5 6 7

Sobs
13,79 21,38 26,23 29,57 31,96 33,57 35

Bootstrap
13,79 25,08 30,84 34,25 36,47 37,94 39,24 89,19%

Chao1
15,77 24,53 29,84 33,11 36,35 39,29 43,25

74

ANEXO 8. Frecuencia mensual de nematodos por hbito alimenticio

.

Meses Fitoparsitos Fungvoros Bactervoros Omnvoros Predadores

jul-07 21 6 15 34 6

ago-07 12 10 8 23 5

sep-07 14 0 0 5 0

oct-07 20 5 3 51 1

nov-07 343 31 9 54 4

dic-07 746 20 9 44 27

ene-08 663 13 16 48 5

Total 1819 85 60 259 48

ANEXO 9. Precipitacin y temperatura.

Meses Precipitacion promedio en mm Temperatura promedio en C

jul-07 3 28,02

ago-07 7,9 27,01

sep-07 7,1 27,8

oct-07 5,4 26,8

nov-07 0,9 27,5

dic-07 1,2 26,4

ene-08 0,5 27,7

ANEXO 10. Diversidad y dominancia

Meses Diversidad de Shannon (H`) Dominancia de Simpson ()

Julio 3,61 0,098

Agosto 3,22 0,141

Septiembre 2,59 0,386

Octubre 2,32 0,252

Noviembre Diciembre 1,67 1,07 0,538 0,734

Enero 1,27 0,643

75