El dengue es una enfermedad vrica transmitida por mosquitos que, en general, no ha existido en Norteamrica durante varios decenios.

El dengue puede transformarse en una forma mucho ms peligrosa de la enfermedad, conocida como fiebre hemorrgica del dengue. Los sntomas del dengue son: fiebre elevada, dolor de cabe a, dolor detrs de los o!os, facilidad para la producci"n de hematomas, dolor de las articulaciones, m#sculos, huesos, sarpullidos $ sangrado de encas. No ha$ una cura ni un tratamiento conocido del dengue que no sea descanso adecuado $ beber mucha agua. %ablando en general, el transmisor del virus es un tipo especfico de mosquito, Aedes aegypti. Aedes aegypti es una especie de las regiones tropicales $ subtropicales del mundo, limitada por las latitudes &'( Norte $ &') *ur, correspondiente a una isotrmica de verano de +((,. -tra limitante es la altitud, se ha registrado a .,.(( metros sobre el nivel del mar en ,olombia, donde la temperatura media anual es de +/(,, ms all del Ecuador rara ve se encuentra por arriba de los +,((( metros de altura 0Nelson, +1234. Llega a rebasar estas limitantes cuando las condiciones ambientales le son favorables, restringindola cuando cambian $ le son adversas. La especie es predominantemente domstica, prolifera en recipientes artificiales o naturales que se encuentran en las viviendas o en sus alrededores, #nicamente las hembras son hemat"fagas, se alimentan de sangre humana o de los animales domsticos que detectan por estmulos visuales, movimientos, tama5o, olor, humedad, temperatura, concentraci"n de ,-., entre otros. Esta sangre les es necesaria para desencadenar la maduraci"n de sus "vulos. Las hembras de los mosquitos Aedes aegypti son las responsables de transmitir el ma$or n#mero de enfermedades arbovirales al humano, una de estas es el dengue. 6dems de ser vectores eficientes, por sus hbitos domsticos se encuentran estrechamente relacionadas con el ser humano. *e encuentran ampliamente distribuidas en las regiones tropicales de todo el mundo. Esta especie de mosquito por mucho tiempo fue conocida como el mosquito de la fiebre amarilla, enfermedad que por siglos tuvo un papel relevante en la historia del pas. El dengue en los a5os recientes se le ha considerado la enfermedad transmitida por vector ms importante del mundo, que afecta al ma$or n#mero de humanos, este padecimiento tiende a tornarse a cuadros ms severos con episodios hemorrgicos con choque, presenta letalidad promedio del '7 en el mbito mundial. Las hembras son atradas por los humanos aunque se alimentan de otros animales vertebrados8 pican ma$ormente durante el da, su conducta es sutil $ astuta: se acercan al husped desde la sombra cuando el viento sopla a su favor $ pican generalmente alrededor de los tobillos, los machos llegan a presentar comportamiento similar sin tener la capacidad de picar ni de alimentarse de sangre. Las partes bucales del macho no estn adaptadas para chupar sangre, se alimentan de carbohidratos de cualquier fuente accesible como frutos o nctar de flores que satisface sus requerimientos energticos, las hembras tambin se alimentan de esta misma fuente como complemento indispensable. La cantidad de huevos que producen las hembras por cada ovipostura est directamente en relaci"n con el volumen de sangre que ingirieron, regularmente /. horas o menos son necesarias para que los ovocitos estn listos para fecundarse, la hembra grvida busca un sitio con agua en donde poner los huevos, $ as se cierra el ciclo de vida.

STERILE-MALE-RELEASE (SIT) El mtodo indicado p#blicamente para utili ar esos mosquitos genticamente modificados 09:4 en la erradicaci"n del dengue fue ;la modificaci"n con un gen adicional, o bacteria insertada, o la alteraci"n de un gen de forma que la descendencia fuera estril e incapa de transmitir el dengue o, sencillamente, muriera<. :s especficamente, se supone que los mosquitos macho genticamente modificados se empare!an con hembras naturales que producen larvas que mueren a no ser que est presente la tetraciclina, un antibi"tico, sin el cual una en ima se acumula hasta una concentraci"n tal que es lo suficientemente t"xica como para matar las larvas. Es importante se5alar que estos mosquitos genticamente modificados, conocidos como -='+&6, deben ser necesariamente del tipo Aedis aegypti para obtener los ob!etivos establecidos p#blicamente por los desarrolladores. >or lo tanto, los millones de mosquitos macho liberados al aire en .((1 $, de nuevo en .(+(, eran todos del tipo transmisor del dengue. Los mosquitos -='+&6 fueron desarrollados por una empresa de biotecnologa britnica llamada -xitec $ su posterior liberaci"n fue supervisada por la :?,@ 0@nidad de Anvestigaci"n $ ,ontrol de :osquitos4 en las islas ,aimn, un territorio britnico en ultramar. 6unque -xitec Limited fue el desarrollador que reali " la ma$ora del traba!o de base para los insectos genticamente modificados, el pro$ecto no era #nicamente su$o. La fundaci"n de Bill $ :elinda 9ates, la -rgani aci"n :undial de la *alud, las Cundaciones Cilantr"picas >ED $ algunas agencias gubernamentales en Estados @nidos, Anglaterra, :alasia, $ otras participaron en el desarrollo $ la promoci"n de los mosquitos modificados genticamente. -xitec ha creado los mosquitos -='+&6 mediante la tecnologa ?idl en la cual estos insectos contienen una modificaci"n que causa la muerte de su descendencia. Los machos ?idl se liberan para aparearse con hembras silvestres, su descendencia hereda el gen ?idl $ no sobrevivir hasta la edad adulta. La liberaci"n de los machos ?idl en cantidades suficientes durante un tiempo considerable puede llegar a suprimir, o incluso eliminar, la poblaci"n ob!etivo de la enfermedad. El atributo letal condicional protege contra el riesgo de liberaci"n accidental. El rasgo ?idl fue creado usando un transpos"n. Los transposones son elementos genticos m"viles 0Egenes saltarinesE4. *on similares a los virus, pero carecen de la capacidad de formar capas viral. ?idl fue creado por el transpos"n pigg$Bac originalmente aislado de un cultivo de clulas del gusano falso medidor, $ se ha utili ado ampliamente en ingeniera gentica de insectos. El vector pigg$Bac impide la replicaci"n independiente del cromosoma mediante la eliminaci"n de la en ima transposasa que es la en ima que permite multiplicarse $ moverse entre los cromosomas de las clulas que infecta. El mosquito macho transgnico que se liberar ha incorporado un gen marcador que produce una protena fluorescente ro!a para facilitar su identificaci"n. >ero el gen clave que confiere el rasgo letal dominante es el tF6G, que codifica un activador de una protena que reprime la transcripci"n de tetraciclina, impulsado por el promotor tet- de un gen Hrosophila que traba!a con choque de calor. En presencia de tetraciclina, se forma un comple!o tF6GI tetraciclina $ este comple!o no se une el promotor tet- , por lo que no ha$ expresi"n del gen tF6G. >ero en ausencia de tetraciclina, existe un circuito de retroalimentaci"n positiva en la que se produce una uni"n tF6G J tet-, conduciendo a una ma$or expresi"n del gen tF6G.

La producci"n excesiva de tF6G es t"xica $ mata a los insectos. >ero no se sabe por qu la excesiva presencia de tF6G es letal. En resumen, ?idl es un sistema letal que se reprime con la tetraciclina.

Estos insectos estriles son entonces liberados al medio ambiente en grandes cantidades con el fin de aparearse con los insectos nativos que estn presentes en el medio ambiente. @na hembra silvestre que se aparee con un macho estril producir huevos, pero los huevos no eclosionan. *i ha$ una suficiente elevado n#mero de insectos estriles entonces la ma$ora de las cruces son estriles, $ al paso del tiempo el n#mero de insectos nativos disminu$e $ la proporci"n de insectos estriles aumenta, lo que conduce a la extinci"n de la poblaci"n nativa, esto mediante la tcnica de liberaci"n de insectos estriles 0*AF4. La ingeniera de insectos para crear una hembra letal especfica podra ser utili ado para eliminar hembras antes de la liberaci"n. @n sistema basado en un gen letal Kliberaci"n de insectos portadores de un gen letal dominante 0?idl4L que los actos finales en el desarrollo sera prevenir que los mosquitos se conviertan en adultos, la #nica etapa de vida per!udiciales, aunque puedan sobrevivir $ competir en la fase larval. :odelado de este sistema predice que menos mosquitos machos de una cepa letal de #ltima necesidad de ser puesto en libertad en comparaci"n con aquellos que llevan un gen letal temprana o irradiados esfuer o para alcan ar un nivel equivalente de control de una poblaci"n ob!etivo 0+., +24. %emos informado previamente a la construcci"n de cepas letales de los insectos a travs del EtetIoffE la expresi"n de genes sistema basado en un transactivador sinttico reprimible de tetraciclina 0FF64. 6qu se describe la construcci"n de transgnicos 6e. aeg$pti, que combinan todas las caractersticas genticas necesarias para producir altamente penetrantes, dominante, a finales de acci"n, letalidad especficamente femeninas. El promotor derivado del 6edes aeg$pti actinaIM 06e6ctIM4 conduce a la expresi"n de tF6 en una etapa, de te!idos, la forma $ el sexoIespecficas que se deriven de femalespecific ?idl cepas para la supresi"n de la ma$ora de la poblaci"n importante vector de los virus del dengue. IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII

Preparation in advance of microinjection

Blood feed mosquitoes: for injection from Monday to Friday feed females on the previous Thursday. Prepare glass needles using program 3 or 2 see Materials!. "aying tu#e for the em#ryos is $rosophila culture vial. %et cotton &ool in the #ottom' &ith a &et dis( of filter paper covering it. Prepare plastic cover slip #y stic(ing dou#le)side tape to one end. Trim tape to cover slip so that it ends at edge of cover slip. Prepare oil for desiccation see Materials! *+, ml plastic #ea(er &ith a &et cotton &ool in the #ottom' covered &ith a &et dis( of filter paper -,mm %hatman! to (eep em#ryos after injection.

Set up of forced laying

.ollect /)*, #lood fed females &ith the use of an aspirator and transfer them to the $rosophila culture vial &ith &et cotton and filter paper. Put the mosquitoes #ac( into insectory conditions in the dar(' and allo& to lay eggs for *h and *+min. "et adults fly into the cage and remove the filter paper dis( &ith em#ryos. To line up eggs' do so under dissecting scope. 0sing fine forceps 1o. + or a fine paint#rush' pic( gray to dar(ish)grey em#ryos and arrange in line on square of 3MM %hatman paper soa(ed &ith &ater. 2ll em#ryos must #e in the same orientation' as injection has to #e at the posterior pole. The anterior end of the em#ryo is slightly &ider than the posterior. $ry the filter paper &ith em#ryos #y pressing dry filter paper to it &et things &on3t stic( to tape!. To transfer the eggs' invert the slide containing the dou#le)sided tape and gently press against the eggs. The posterior end of the eggs have to #e very close to the edge of the dou#le sided tape. $esiccate the em#ryos a#out * min. at room temperature. They start to dimple slightly as they dry. .over desiccated em#ryos &ith halocar#on oil to prevent further desiccation.

Microinjection of the embryos

The most important aspect of good injection is the quality of the needle see Materials!. Fill a needle &ith the $12 solution to #e injected #y using a microloader. 4ery little injection solution is needed: * to 2 5l.

.onnect the needle to the Transjector' &hich controls the injection time Manu! and pressure /,,!' and the #ac(pressure 2+,!. Microinjection is performed using a microscope &ith a moving stage "eica! at 6 *, magnification and micromanipulator. 7f necessary' a raised microscope stage may #e prepare #y stac(ing 8)+ microscope slides. Place the cover slip carrying the em#ryos onto raised stage. 7nject em#ryos hori9ontally to prevent tearing of the endochorion: penetration should #e at the posterior pole. For injection' 7 (eep the needle stationary and move the stage of the microscope. 7nject ,.2),.+ nl of solution' corresponding to appro6imately *)+; of the em#ryo volume. .ontrol the injection volume #y adjusting the injection pressure and time. The slightly #o&ed' desiccated em#ryos should regain their turgid appearance follo&ing injection. Pic( em#ryos from the cover slip using fine forceps or a fine #rush' and place them in a plastic #ea(er &ith &et cotton and &et filter paper. .over #ea(er &ith tissue paper. <eep in place &ith elastic #and around the rim and return to insectary conditions for 8 days.

Post-injection

Four days after' carefully place em#ryo paper' em#ryo)side do&n' on the &ater in large plastic #o6 &ith a small amount of food. =m#ryos hatch over a very long period: don3t thro& out the culture until at least 8)+ &ee(s post) injection.

Notes
DNA for injection Plasmid $12 solution for injection &as isolated using =ndoFree plasmid (it. .onstruct and >elper plasmid mi6 together in right concentration' precipitated &ith i9opropanol. The pellet &as &ashed &ith ?,; ethanol #efore resuspending in injection #uffer. Before injection' clean $12 using Mille6)@4 column.

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2557089/?tool=p bme!

Cig. .. >henot$pe of -=&3(M, crossed Nith -=&'/3 0t?EIHs?ed.4 and reared in the absence of tetrac$cline. 064 Cunctional elements of -=&3(M. &( @F? sequences and pigg$Bac ends have been omitted for clarit$. >rotein coding regions are as folloNs, from left to right: 0i4 tF6G under the control of a promoter fragment from 6e6ctM. -=&3(M, has an engineered translation initiation codon 06F94 '( to the alternativel$ spliced intron of 6e6ctM 06e6ctM8 Cig. +4, so this intron is Nithin the tF6 open reading frame8 0ii4 G>+3 under control of t?E, and hence responsive to tF6G protein8 and 0iii4 fluorescent marOer 0Hs?ed.4 under control of the %r'IAE+ promoter. 0B4 late fourthIinstar female larvae. Dhite 0,4 and fluorescent 0H4 light micrographs of male and female pupae from -=&3(M, alone 0Fop4 and -=&3(M, P t?EIHs?ed 0Bottom4. :ale and female adults 0-=&3(M, P t?EIHs?ed4 under Nhite 0E4 and fluorescent light 0C4. *trong red fluorescence is visible in the AC:s of females, but not of males. *ome bacOground red fluorescence is visible from the transformation marOers, especiall$ the punctate overall fluorescence in B, the developing AC:s are the bright pair of spots in each thorax 0for one larva these are indicated b$ Nhite arroNs4.

http:QQNNN.!ove.comQdetails.phpRidS.+1 El ciclo de vida del mosquito 6e. aeg$pti comprende huevo, cuatro estadios larvales, uno de pupa $ adulto.

http:QQNNN.ncbi.nlm.nih.govQpubmedQ2(32&M1 http:QQNNN.ncbi.nlm.nih.govQpubmedQ+21/1(+/ http:QQNNN.ncbi.nlm.nih.govQpmcQarticlesQ>:,.''/(21QRtoolSpubmed