UNIVERSIDAD POLITCNICA DE SINALOA

Biotecnologa mdica Profesor MC. Judith Haydee Gonzlez Benitez

Reporte Tincin de Giemsa

Beltrn Guadamuz Karla Isabel Correa Morales Lizet Gpe. Garca Ramrez Jorge Alberto Lizrraga Caedo Daniela Pardo Caedo Luis Rendn Ibarra Tanya Gabriela GRUPO BT 8-1

Mazatln, Sinaloa 28 de enero 2014

INTRODUCCIN En la sangre se encuentran los leucocitos o glbulos blancos que son las clulas mviles del sistema inmunitario. Todos ellos difieren en cuanto a su funcin y morfologa. Los leucocitos no desempean sus funciones cuando se encuentran en sangre, sino cuando abandonan sta y entran a los tejidos linfoides o a las zonas donde hay inflamacin intensa. En este sentido, la sangre es un medio de transporte, que le permite a las clulas sanguneas recircular entre los diferentes tejidos del cuerpo. Normalmente en sangre se encuentran cinco tipos de eucocitos: monocitos, linfocitos, neutrfilos, eosinfilos y basfilos. Adems de estas clulas, se encuentran presentes las plaquetas, que son fragmentos citoplasmticos de los megacariocitos que se asientan en la mdula sea. Los leucocitos se estudian en preparaciones coloreadas por dos razones: a fin de determinar la apariencia normal o anormal de las clulas y sus porcentajes elativos en el diagnstico de ciertas enfermedades. La sangre est compuesta por una parte liquida denominada plasma o suero y una parte slida que engloba a los elementos formes (glbulos blancos, glbulos rojos y plaquetas). Se debe tomar en cuenta que el extendido no debe ser ni muy grueso ni muy delgado para su correcta visualizacin en el microscopio. OBJETIVO GENERAL El alumno desarrollara la tcnica tincin de Giemsa y ser capaz de observar a travs del microscopio e identificar inmunolgico (Monocitos, los diferentes componentes del sistema Eosinfilos, Basfilo, Plaquetas,

Neutrfilos,

Macrfagos, Eritrocitos etc.)

METODOLOGA Obtencin de un frotis sanguneo:

1.-Obtener muestra (sangre capilar). Con lanceta realizar un pequeo corte en la yema del dedo ndice o corazn previamente desinfectado con alcohol de 70. 2.-Desechar la primera gota. 3.-Depositar una gota en el extremo de un portaobjetos. 4.-Proceder a tapar el dedo pinchado y desechar la lanceta en un contenedor de residuos. 5.-Realizar la extensin de la muestra .colocar el segundo portaobjetos por delante de la muestra con una inclinacin de 45 respecto al que contiene la muestra. Primero se proceder a un deslizamiento hacia el extremo donde se encuentra la gota de sangre. De esta forma se consigue que por capilaridad, la sangre ocupe todo el borde del segundo portaobjetos. Despus se proceder a la extensin en sentido contrario de forma rpida y uniforme. 6.-Dejar secar al aire. 7.- Etiquetar el portaobjetos. Tincin de Giemsa

1.-Fijar el frotis con alcohol metilo x 3 min. 2.-La solucin de Giemsa debe estar diluido 1:9 Buffer PBS o agua destilada. 3.-Agregar solucin Giemsa al frotis y dejar x 10 min. 4.-Lavar el portaobjetos con agua destilada (bien lavado). 5.-Dejar secar. 6.-Observar al microscopio.

RESULTADOS En la tabla 1 se observan los diferentes tipo de clulas obtenidas en el frotis sanguineo y teidas con tincin de Giemsa. Laboratorio Referencias Tipo de celulas Basofilos

Eritrocitos

Neutrofilo

Monocitos

Plaquetas

Macrofagos

Tabla 1. Resultados obtenidos con la tincin de Giemsa, de clulas sanguneas observadas al microscopio.

DISCUSIN Con el fin de estudiar satisfactoriamente los frotis sanguneos, es necesario colorearlos, lo cual esto se lleva acabo con tcnica de tincin. Existen diferentes tcnicas empleadas en los laboratorios especializados para el anlisis de clulas sanguneas, las cuales son la tcnica de tincin de Giemsa y la tincin de Wright. La tcnica de Wright en conocida como policromatica debido a que produce varios colores, es la ms utilizada en la tincin de celas sanguneas para distinguir los componentes celulares. En esta tcnica se emplea una solucin de alcohol metlico con un colorante cido (eosina) y un colorante bsico (azul de metileno) y una solucin amortiguador. Donde el alcohol es el encargado de fijar las clulas en el porta objeto y de acuerdo del pH de las clulas va ser el color del cual se van a teir, la solucin amortiguadora se encarga de mantener el pH de la solucin. A diferencia de la tincin de Giemsa que adems de ser utilizada para el estudio de clulas sanguneas tambin se emplea para la identificacin de paracitos en la sangre como en el caso de malaria (plasmodium spp.) y tripanosomiasis (Trypanosoma cruzi). La solucin de Giemsa tambin incluye una solucin de metanol absoluto con un colorante de eosina y otro de azul de metileno adicionando glicerol para dilucin. En las dos tcnicas se obtienes los mismos resultados con algunas diferencias en los tiempos de exposicin de los colorantes en las clulas. Los basofilos son clulas redondeadas cuyo tamao oscila entre 10 y 13 m. El ncleo, de cromatina densa, posee generalmente dos o tres lbulos unidos por puentes cromatnicos. Los grnulos basfilos se disponen encima del ncleo. adquiere una coloracin rojo-violcea oscura con las tinciones panpticas y tiene una forma poligonal. El hemate o eritrocito es el elemento ms maduro de la eritropoyesis. Su misin fundamental es la captacin de oxgeno y su transporte a los tejidos. Los eritrocitos son elementos anucleados, de color rosado y de forma redondeada u oval, con una depresin o zona ms clara en el centro.

Los neutrofilo son clulas redondeadas, de tamao entre 12 y 14 um. Su ncleo est segmentado en 2 a 5 lbulos, unidos por unos finos puentes cromatnicos. El citoplasma contiene numerosos grnulos neutrfilos que se tien de color marrn con las coloraciones panpticas habituales, as como cierto nmero de grnulos primarios o azurfilos dificilmente visibles al quedar enmascarados por los neutrfilos. Los monocitos son las clulas de mayor talla halladas en la sangre perifrica. Su tamao oscila entre 15 y 30 m de dimetro, adquiriendo una forma irregular, cuadrangular u oval. El ncleo, situado en posicin central, es voluminoso y adopta formas abigarradas en herradura, indentado o doblado; la cromatina es densa y con aspecto como peinada en finas franjas cromatnicas, lo cual es caracterstico de estas clulas. Las plaquetas estan desprendidas del citoplasma de los megacariocitos adultos, pasan a la sangre perifrica donde ejercen sus funciones en los mecanismos de coagulacin. En los frotis se observan con frecuencia en aglomerados, debido a su gran capacidad de agregacin. Los macrofagos son clulas mononucleadas que se caracterizan por su capacidad de fagocitar y degradar material particulado se originan a partir de clulas de la mdula sea que dan origen a los monocitos de la sangre los que luego migran desde el lumen de los capilares sanguneos al tejido conjuntivo donde terminan su diferenciacin. Los macrfagos de los tejidos conjuntivos miden entre 10 y 30 um de dimetro y su estructura se modifica segn su estado de actividad. CONCLUSIN En general, los estudios de sangre se hacen en extensiones que son preparaciones obtenidas por la expansin de un lquido biolgico. Dicho esto la tcnica que se emple fue la tcnica llamada tincin de Giemsa la cual se usa principalmente para teir frotis de sangre y punciones medulares, para ser examinadas al microscopio. Esta tcnica consiste en azul de metileno y sus productos de oxidacin, eosina como tinte cido, lo que da una amplia gama de colores. La accin combinada de estos colorantes produce una coloracin prpura a los ncleos de los leucocitos y a los grnulos neutroflicos y da color rosado a los

eritrocitos. Con esto se observa su amplio uso para distinguir fcilmente las clulas de la sangre, adems de ser usada para el conteo de los glbulos blancos y ser una tcnica rutinaria usada cuando hay sospecha de infecciones, aunque presenta un alto porcentaje de degeneracin celular, en especial en clulas inflamatorias, pudiendo dar falsos positivos.

Trabajos citados
Harrison. T. R., 1999. Principios de medicina interna. Ed 14. McGraw-Hill. Madrid.
Curtis, H. (2001). Biologia . En H. C. Barnes, Biologia (pg. 514). mexico: Medical Panamericana. Mader, S. S. (2008). Biologa . En S. S. Mader, biologia (pg. 933). mexico : Mc Graw Hill. http://www.info-farmacia.com/medico-farmaceuticos/informes-tecnicos/corticosteroides-comoinmunosupresores