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UNIVERSIDADE FEDERAL FLUMINENSE

BIOQUMICA IV
TURMA F1
MARCEL DA SILVA AMORIM GOMES


RELATRIO DE BIOQUMICA




CINTICA ENZIMTICA




















NITERI
NOVEMBRO DE 2013

1 METODOLOGIA

1.1 Materiais


- Equipamentos, vidrarias e reagentes utilizadas:
Tabela 1 Equipamentos, Vidrarias e Reagentes utilizados no experimento.
Equipamentos e Vidrarias Quantidade
Bquer
4
Pipetas
6
Tubos de Ensaio
16
gua destilada (solvente branco)
24 mL
Para-nitrofenilfosfato de sdio 1mM
4,0mL
Soluo NaOH 0,02 N
2,0 mL

1.2 - Procedimento Experimental

- Influncia do tempo de reao:
O primeiro experimento utilizou-se de 6 tubos de ensaio, em um tubo de ensaio
(tubo 1), colocou-se 2mL da soluo de NaOH, 2,0mL de gua destilada e 3,0mL de
substrato e 0,5mL da soluo de homogeneizado, no restante dos cincos tubos de ensaio
(tubos 2 6) colocaram-se em cada 2mL de gua destilada, 3 mL de substrato, 0,5mL
da soluo de homogeneizado e por ltimo 2 mL da soluo de NaOH, foram analisados
as cores desenvolvidas em cada tubo aps o tempo de adio de NaOH.

- Influncia da concentrao da enzima:
O segundo experimento utilizou-se de 4 tubos de ensaio, em um tubo de ensaio
(tubo 7), colocou-se 1,0 mL de gua destilada e 3,0mL de substrato, no tubo 8 colocou-
se 0,9 mL de gua destilada, 3,0mL de substrato e 0,1mL da soluo de homogeneizado,
no tubo 9 colocou-se 0,5 mL de gua destilada, 3,0mL de substrato e 0,5mL da soluo
de homogeneizado, no tubo 10 colocou-se 0,5 mL de gua destilada, 3,0mL de substrato
e 0,5mL da soluo de homogeneizado, no tubo 10 colocou-se 3,0mL de substrato e
1,0mL da soluo de homogeneizado. Aps 5 minutos de reao foram adicionados
2mL de NaOH em cada tubo e analisados a cor desenvolvida na reao.

- Influncia da concentrao do substrato:
O terceiro experimento utilizou-se de 6 tubos de ensaio, em um tubo de ensaio
(tubo 7), colocaram-se os reagentes em cada tubo de acordo com a tabela abaixo:

TUBO SUBSTRATO (M) SUBSTRATO
(mL)
GUA
(mL)
HOMOGENEIZADO
(mL)
11 0,0 0,0 5,0 0,5
12 54,5 0,3 4,7
0,5
13 163,0 0,9 4,1 0,5
14 272,0 1,5 3,5 0,5
15 545,0 3,0 2,0 0,5
16 909,0 5,0 0,0 0,5

Aps 10 minutos de reao foram adicionados 2,0mL de NaOH em cada tubo, e
analisado a cor desenvolvida nos tubos.

















2 RESULTADOS E DISCUSSO

Enzimas so catalisadores biolgicos, formados por longas cadeias de molculas
pequenas, chamadas de aminocidos. Portanto so um tipo de protena com atividade
cataltica, sendo encontradas na natureza em todos os seres vivos. Sua funo
viabilizar a atividade das clulas, quebrando molculas ou juntando-as para formar
novos compostos.
A cintica enzimtica um ramo da cintica qumica que estuda as propriedades
catalticas das enzimas. O estudo cintico de uma enzima visa primariamente
caracterizar a atividade e que tipo de reaes pode catalisar, com que substratos pode
interatuar e como se modifica essa enzima.
No primeiro experimento que estuda a influncia do tempo na reao, as cores
observadas nos trs tubos de ensaio foram um colorao amarelo indo do mais claro
para o tubo 1 para um amarelo mais escuro no tubo 6. Ao longo do tempo mais
substrato levam a formao de produto, enzima com o substrato diminui transformando
em produto at um ponto de equilbrio.
Geralmente as enzimas so ativas numa faixa restrita de pH e na maioria dos
casos h um pH timo definido. A adio da soluo de NaOH leva a um efeito do pH
sobre a enzima a partir da variao no estado de ionizao dos componentes do sistema
medida que o pH varia, com a reduo da atividade e termino da reao enzimtica ou
at mesmo desnaturao irreversvel.
O segundo experimento estuda a influncia concentrao da enzima na reao,
sob determinadas condies, a velocidade de transferncia do substrato em produto
proporcional quantidade de enzima. A concentrao da enzima existe uma taxa
mxima na qual certa quantidade de enzima pode catalisar uma reao, ou seja, quanto
mais diluda a reao ocorre uma menor concentrao de enzima presente produzindo
pouco produto e uma colorao mais clara.
Assim a colorao dos tubos varia do incolor (tubo 7) sem a presena da enzima
no homogeneizado, de um amarelo mais claro (tubo 8 e 9) com menores concentrao
de enzima para um amarelo mais escuro (tubo 10) com maior concentrao enzimtica.
O terceiro experimento verificou a influncia concentrao do substrato na reao,
quando a concentrao de substrato extremamente alta, a taxa mxima de saturao
pode ser alcanada, isto , seus stios ativos esto todos ocupados por molculas de
substrato ou produto.
Nesta condio, um aumento na concentrao de substrato no afetar a taxa de
reao porque todos os stios ativos j estaro sendo utilizados. Em condies celulares
normais, as enzimas no esto saturadas com o substrato. Em um determinado tempo,
algumas das molculas de enzima podero estar inoperantes por falta de substrato,
assim, a velocidade de reao influenciada pela concentrao de substrato.
Assim a colorao dos tubos varia do incolor (tubo 11) sem a presena do
substrato, a um amarelo mais claro (tubo 12, 13 e 14) para um amarelo mais escuro
(tubo 15 e 16) com maiores concentraes enzimticas.

















3 BIBLIOGRAFIA
1. FULY, A. L. Roteiros de Aulas Prticas. Universidade Federal Fluminense, Rio
de Janeiro, 2007.
2. LEHNINGER, A. L. Fundamentos da Bioqumica. 4 Ed. Editora Sarvier, 2006.

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