EVOLUCIN

RETICULADA Y PROTECCIN DE LA FLORA AMENAZADA: EL CASO DE

CENTAUREA SECT. WILLKOMMIA BLANCA (COMPOSITAE) Vctor N. Surez Santiago*, Mara J. Salinas Bonillo y Gabriel Blanca Lpez Dpto. de Botnica, Facultad de Ciencias, Universidad de Granada. c/ Severo Ochoa, s/n. 18071 Granada (Spain).

Los fenmenos de hibridacin introgresiva han contribudo a la transformacin de muchas poblaciones y especies de plantas, pudiendo provocar la extincin de entidades taxonmicas

previamente reconocidas (Rhymer & Simberloff, 1996; Wolf et al., 2001). La hibridacin es especialmente problemtica para aquellas especies raras o amenazadas que contactan con otras especies emparentadas ms abundantes, dada la rpida asimilacin gentica que puede ocurrir. Por sto, es un importante factor a ser considerado en los planes de manejo para la conservacin de especies amenazadas. Interpretar la implicacin evolutiva de la hibridacin y determinar el papel de las poblaciones hbridas para el ptimo desarrollo de los planes de conservacin es una tarea difcil y no exenta de controversia. A pesar de los efectos dramticos que puede tener sobre las especies amenazadas, la hibridacin natural representa un componente natural del proceso evolutivo de especies vegetales relacionadas, jugando un importante papel creativo en la evolucin adaptativa y en la especiacin (Abbott, 1992; Arnold 1997; Rieseberg, 1997; Grant & Grant, 1998; Ramsey & Schemske, 1998).

Adems, las zonas hbridas pueden servir como focos de biodiversidad y representar centros de abundancia para especies raras (Martinsen & Whitham, 1994; Whitham et al., 1994; Martinsen et al., 2001). As pues, debe analizarse qu fenmenos de hibridacin han tenido lugar o estn dndose en unas poblaciones, para poder actuar en consecuencia, de cara a la conservacin de las especies implicadas y averiguar las razones que han llevado a esta situacin. En resumen, evaluar la relevancia de estos fenmenos de hibridacin en txones amenazados resulta esencial para disear un modelo de gestin de conservacin adecuado y especfico para cada taxon en concreto. La biologa molecular se presenta como una nueva

herramienta para comprender mejor estos fenmenos. En el presente trabajo, haciendo uso de las regiones espaciadoras que se transcriben del ADN ribosmico nuclear, demostramos la importancia que han tenido los fenmenos de hibridacin en la evolucin de los txones pertenecientes a la seccin Willkommia Blanca del gnero Centaurea L. Esta seccin, endmica de la mitad este de la Pennsula Ibrica y noroeste de frica, la integran 22 especies, 17 subespecies y 9 variedades, en su mayora endmicas de reas muy reducidas. De ellas, slo 6 reciben algn tipo de figura de proteccin y 8 se incluyen en la lista roja de la Flora Vascular espaola. Dentro del
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gnero, la seccin se encuadra en el grupo Jacea, subgrupo Acrolophus, junto a dos secciones ms: la seccin Acrolophus (DC.) Cass. y la seccin Phalolepis (DC.) Cass. En los anlisis realizados se observa que los txones de las tres secciones del subgrupo Acrolophus localizados en el mediterrneo occidental comparten un mismo ribotipo (ribotipo Willkommia), mientras que el resto de txones muestran otro (ribotipo AcrolophusPhalolepis) que se diferencia del anterior en 20 posiciones diagnsticas (8 en la regin ETS y 12 en la regin ITS) y que es de amplia distribucin. Estos ribotipos quedan patentes en las filogenias resultantes, donde sus secuencias forman los principales clados, tal y como vemos en el rbol ms verosmil obtenido tras el anlisis de las regiones ITS y ETS combinadas. La sustitucin del ribotipo Acrolophus-Phalolepis por el ribotipo Willkommia, en los txones de las secciones Acrolophus y Phalolepis del mediterrneo occidental, evidencia claramente la distribucin y homogeneizacin del ribotipo Willkommia entre estos txones por un proceso de hibridacin expansiva y evolucin concertada sesgada de las secuencias. Esta hiptesis est apoyada por el conflicto existente entre la estructuracin geogrfica de los ribotipos y las evidencias morfolgicas que apoyan la clasificacin seccional, por las escasas o nulas barreras reproductivas existentes dentro y entre las tres
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secciones del subgrupo, y por las escasas divergencias entre las secuencias tipo Willkommia, lo que se traduce en su agrupacin, en las hiptesis filogenticas, en un gran clado muy poco resuelto y donde no hay agrupacin de los txones coespecficos, tal y como podemos ver. Dentro de este gran clado se han delimitado 5 subclados en los que gracias a la presencia de posiciones polimrficas con carcter aditivo en las secuencias de sus txones, junto a las evidencias morfolgicas y biogeogrficas, ha sido posible trazar cmo han ocurrido los fenmenos de reticulacin. Uno de los ejemplos ms claros es el proporcionado por los txones del clado Nevado-Filbride. Cuando Blanca describi C. sagredoi, incluy a C. pulvinata en sta con rango subespecfico, limitando la subespecie tipo a la sierra de Filabres y la subespecie pulvinata a un rea restringida de Sierra Nevada. Este autor consider un tercer taxon subordinado a C. sagredoi, C. gadorensis, que se encuentra en la Sierra de Gdor y en la vertiente sur de Sierra Nevada, prxima a las poblaciones de C. pulvinata. En la hiptesis filogentica, la agrupacin C. sagredoi-C. pulvinata est apoyada por 5 posiciones nucleotdicas (2 en el ETS y 3 en el ITS), siendo estas tres ltimas polimrficas en C. pulvinata. Pues bien, estos polimorfismos muestran aditividad con los nucletidos de las otras dos especies en dichas posiciones, lo que sugiere, junto a su proximidad geogrfica, que C. pulvinata es el resultado de la

hibridacin entre C. sagredoi y C. gadorensis. Esta hiptesis tambin est apoyada por la presencia de caracteres morfolgicos y ecolgicos en C. pulvinata compartidos diferencialmente con C. gadorensis y C. sagredoi y caracteres intermedios entre ambas. Este estudio aporta una valiosa informacin para la gestin de estas especies, las tres catalogadas como vulnerables en la Lista Roja de la Flora Vascular Espaola (VV. AA., 2000). Al tratarse de especies estrechamente emparentadas y con poblaciones

espacialmente cercanas, podran ocurrir fenmenos de introgresin que actuaran en detrimento de alguna de ellas. Un caso diferente al anterior, tambin proporcionado por txones de la seccin Willkommia, es el de C. boissieri y C. resupinata. Ambas especies son de amplia distribucin y muestran tal variabilidad morfolgica que en muchos casos se reconocen rangos subespecficos y varietales. Tales entidades morfolgicas ocurren frecuentemente prximas a las zonas marginales del rea de distribucin, donde son simptricos con otras especies. Sin embargo, en la filogenia obtenida vemos que las secuencias de los txones subespecficos de ambas no se agrupan por afinidad taxonmica, sino que se distribuyen entre los diferentes clados formados. Este hecho, junto a la distribucin de la variabilidad morfolgica, parece indicar que estas especies se ajustan al modelo de compiloespecie, de forma que en los lmites de sus reas de distribucin, por medio de sucesivas hibridaciones
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introgresivas son capaces de incorporar material gentico de las especies con las que contactan, lo que explicara el elevado polimorfismo morfolgico que muestran en estas zonas, adems de explicar los polimorfismos aditivos que presentan en sus secuencias ribosmicas. La diapositiva muestra la distribucin de C. boissieri en la Pennsula Ibrica (los tringulos) y los txones con los que contacta, y adems las bases correspondientes a las posiciones 185 y 252 del alineamiento de la regin ETS. Vemos que las diferentes subespecies de C. boissieri presentan polimorfismos en estas posiciones, siendo aditivos estos polimorfismos respecto a los txones con los que contactan. Al igual que estas evidencias biogeogrficas y moleculares, los caracteres morfolgicos tambin apoyan la implicacin de la hibridacin introgresiva en la diversificacin de C. boissieri, dada la presencia de algunos caracteres compartidos con las especies con las que pueden haber intercambiado material gentico. Como por ejemplo C. boissieri subsp. prostrata, que es la nica subespecie de C. boissieri que presenta el involucro adelgazado en la base, carcter que es tpico de la especie con la que contacta, C. resupinata. De acuerdo con la categorizacin de la hibridacin realizada por Allendorf et al. (2001), el caso de C. boissieri entrara en la hibridacin de Tipo 2: Hibridacin Introgresiva natural que no conlleva un fenmeno de especiacin. Este taxon hibrida con los
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txones que contacta en los lmites de su distribucin, pero son hibridaciones introgresivas hacia C. boissieri, ya que se mantiene el fenotipo (y por tanto el genotipo) especfico. Sin embargo, este tipo de poblaciones pueden tener alelos del otro taxon, pero la frecuencia de estos alelos no incrementa gracias a la introgresin, de forma que slo aquellos alelos neutrales o ventajosos son adquiridos, o sea estas poblaciones funcionan como un filtro selectivo de alelos (Clarke et al., 1998; Martinsen et al., 2001). En estos casos, la introgresin es parte del proceso evolutivo y por tanto, es preciso asegurar tanto el mantenimiento de estas franjas naturales de hibridacin, como la proteccin de las formas morfolgicas (en este caso subespecies) originadas. Como se ha puesto de manifiesto, en la evolucin de los txones del subgrupo Acrolophus en el mediterrneo occidental, y en especial de la seccin Willkommia, la reticulacin ha sido un fenmeno crucial y en gran medida responsable de la diversidad morfolgica existente. Estos txones representan un claro ejemplo en el que determinar e interpretar el papel evolutivo de los fenmenos de hibridacin puede ser determinante para disear planes de conservacin adecuados.

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Vctor N. Surez Santiago, Mara J. Salinas y Gabriel Blanca Universidad de Granada

Facultad de Ciencias
Departamento de Botnica
II CONGRESO DE BIOLOGA DE LA CONSERVACIN DE PLANTAS

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Hibridacin introgresiva Asimilacin gentica

Extincin

Wolf et al. (2001)

Extincin de taxon nativo ms probable si: Sin ventajas competitivas Raro Barreras reproductivas dbiles Elevada tasa de extincin 5 generaciones
II Congreso de la Biologa de la Conservacin de Plantas

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Efectos negativos? Hibridacin en los planes de conservacin Componente natural del proceso evolutivo?

Implicaciones evolutivas de la hibridacin Papel de las poblaciones hbridas

Evaluacin

II Congreso de la Biologa de la Conservacin de Plantas

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ADNrn
26S IGS ETS 18S ITS1 5.8S ITS2 26S

Sect. Willkommia Blanca 22 especies, 17 subespecies y 9 variedades Elevada endemicidad

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Sistemtica Gnero Centaurea L. Grupo Jacea Subgrupo Acrolophus Seccin Acrolophus (Cass.) DC.
Acrolophus

Seccin Willkommia Blanca Seccin Phalolepis (Cass.) DC.

Willkommia

Phalolepis

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Acrolophus-Phalolepis

Willkommia

ETS

ITS

Ribotipo Willkommia

C G - T T T T - G C G G T CA G T G T T

Ribotipo Acrolophus-Phalolepis T A T A C C C T - T T C A T C A G A C C
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Ribotipo Willkommia: secciones Willkommia, Acrolophus y Phalolepis

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97 100/90 100
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C. avilae C. alba alba C. boissieri willkommii C. resupinata resupinata C. resupinata lagascae C. gadorensis C. carratracensis C. pauneroi C. cordubensis C. monticola C. paniculata paniculata C. paniculata castellana C. micrantha herminii C. alba costae C. alba latronum C. saguntina C. pinae pinae C. pinae integrifolia C. pinnata C. paui C. x beltranii C. resupinata rifana C. delicatula C. boissieri funkii C. resupinata spachii spachii C. resupinata spachii humilis C. citricolor C. pomeliana pomeliana C. pomeliana rouxiana C. pulvinata C. sagredoi C. bombycina xeranthemoides C. rouyi rouyi C. rouyi macrocephala C. rouyi suffrutescens C. boissieri boissieri C. boissieri mariolensis C. boissieri prostrata C. jaennensis C. resupinata vulnerariifolia C. bombycina bombycina C. corymbosa C. diffusa Ribotipo C. deusta AcrolophusC. pseudoleucolepis C. vankovii Phalolepis C. sterilis C. exarata C. jacea

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Hibridacin expansiva Evolucin concertada sesgada de secuencias ADNr

Distribucin y homogeneizacin ribotipo Willkommia

Ribotipo A-Ph Ancestral Ribotipo Willkommia

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Conflicto estructuracin geogrfica diversidad gentica vs. evidencias morfolgicas seccionales Barreras reproductivas escasas o nulas Numerosos hbridos descritos Coexistencia intragenmica de ribotipos

Divergencias medias ribotipo Willkommia: 0.447% para ITS, 0.274% para ETS Clado poco resuelto y txones coespecficos no monofilticos
II Congreso de la Biologa de la Conservacin de Plantas

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Clado Willkommia

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C. avilae C. alba alba C. boissieri willkommii C. resupinata resupinata C. resupinata lagascae C. gadorensis C. carratracensis C. pauneroi C. cordubensis C. monticola C. paniculata paniculata C. paniculata castellana C. micrantha herminii C. alba costae C. alba latronum C. saguntina C. pinae pinae C. pinae integrifolia C. pinnata C. paui C. x beltranii C. resupinata rifana C. delicatula C. boissieri funkii C. resupinata spachii spachii C. resupinata spachii humilis C. citricolor C. pomeliana pomeliana C. pomeliana rouxiana C. pulvinata C. sagredoi C. bombycina xeranthemoides C. rouyi rouyi C. rouyi macrocephala C. rouyi suffrutescens C. boissieri boissieri C. boissieri mariolensis C. boissieri prostrata C. jaennensis C. resupinata vulnerariifolia C. bombycina bombycina

Ribotipo A-P

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Clado1a Noreste NevadoFilbride

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C. avilae C. alba alba C. boissieri willkommii C. resupinata resupinata C. resupinata lagascae C. gadorensis C. carratracensis C. pauneroi C. cordubensis C. monticola C. paniculata paniculata C. paniculata castellana C. micrantha herminii C. alba costae C. alba latronum C. saguntina C. pinae pinae C. pinae integrifolia C. pinnata C. paui C. x beltranii C. resupinata rifana RifanaC. delicatula Delicatula C. boissieri funkii C. resupinata spachii spachii C. resupinata spachii humilis C. citricolor C. pomeliana pomeliana C. pomeliana rouxiana C. pulvinata C. sagredoi C. bombycina xeranthemoides C. rouyi rouyi C. rouyi macrocephala Alicantino C. rouyi suffrutescens C. boissieri boissieri C. boissieri mariolensis C. boissieri prostrata C. jaennensis C. resupinata vulnerariifolia C. bombycina bombycina

Ribotipo A-P

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NevadoFilbride

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C. avilae C. alba alba C. boissieri willkommii C. resupinata resupinata C. resupinata lagascae C. gadorensis C. carratracensis C. pauneroi C. cordubensis C. monticola C. paniculata paniculata C. paniculata castellana C. micrantha herminii C. alba costae C. alba latronum C. saguntina C. pinae pinae C. pinae integrifolia C. pinnata C. paui C. x beltranii C. resupinata rifana C. delicatula C. boissieri funkii C. resupinata spachii spachii C. resupinata spachii humilis C. citricolor C. pomeliana pomeliana C. pomeliana rouxiana C. pulvinata C. sagredoi C. bombycina xeranthemoides C. rouyi rouyi C. rouyi macrocephala C. rouyi suffrutescens C. boissieri boissieri C. boissieri mariolensis C. boissieri prostrata C. jaennensis C. resupinata vulnerariifolia C. bombycina bombycina

Ribotipo A-P

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C. gadorensis

C. sagredoi

C. pulvinata
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C. sagredoi C. pulvinata C. gadorensis

A A G

A A G

T C/T C

A A/G G

T T/C C

Sitios polimrficos aditivos

Proximidad geogrfica

C. sagredoi x C. gadorensis C. pulvinata

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Caracteres morfolgicos y ecolgicos C. sagredoi C. pulvinata C. gadorensis

Micasquistos

Micasquistos

Caliza

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C. resupinata

C. boissieri

Gran variabilidad morfolgica en zonas marginales

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Clado1a Noreste NevadoFilbride

II Congreso de la Biologa de la Conservacin de Plantas

C. avilae C. alba alba C. boissieri willkommii C. resupinata resupinata C. resupinata lagascae C. gadorensis C. carratracensis C. pauneroi C. cordubensis C. monticola C. paniculata paniculata C. paniculata castellana C. micrantha herminii C. alba costae C. alba latronum C. saguntina C. pinae pinae C. pinae integrifolia C. pinnata C. paui C. x beltranii C. resupinata rifana RifanaC. delicatula Delicatula C. boissieri funkii C. resupinata spachii spachii C. resupinata spachii humilis C. citricolor C. pomeliana pomeliana C. pomeliana rouxiana C. pulvinata C. sagredoi C. bombycina xeranthemoides C. rouyi rouyi C. rouyi macrocephala Alicantino C. rouyi suffrutescens C. boissieri boissieri C. boissieri mariolensis C. boissieri prostrata C. jaennensis C. resupinata vulnerariifolia C. bombycina bombycina

Ribotipo Acrolophus-Phalolepis

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Variabilidad morfolgica en zonas marginales

No hay agrupacin por afinidad taxonmica (especies transclado)

Compiloespecies

Polimorfismo morfolgico

Sitios aditivos polimrficos en ADNr

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C. boissieri

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C. resupinata A/T R/C G/C C. boissieri prostrata A/T R/C R/C C. boissieri G/C A/Y G/C R/C R/C

C. boissieri boissieri C. boissieri willkommii C. boissieri funkii C. boissieri prostrata C. boissieri mariolensis

C. resupinata
C. resupinata spachii C. resupinata lagascae C. resupinata resupinata

C. monticola C. jaennensis C. bombycina

C. bombycina bombycina C. bombycina xeranthemoides

C. rouyi
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Hibridacin
(Allendorf et al., 2001)

Natural Tipo1
txon hbrido natural

Antropognica Tipo3
zona hbrida natural

Tipo2
introgresin natural

Retrocruzamiento

Slo F1

Zona hbrida

F1 estril

C. boissieri

Tipo4
hibridacin sin introgresin

Tipo5
hibridacin generalizada

Tipo6
mezcla completa

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Clarke et al., 1998; Martinsen et al., 2001 Franjas de hibridacin natural Filtro selectivo de alelos

Introgresin= proceso evolutivo de las especies

Proteccin franjas de hibridacin y formas mofolgicas

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