Biotecnologa

El conocimiento en bioqumica de los cidos nucleicos ha experimentado un avance espectacular a lo largo de los ltimos 20 aos, logrando una traduccin hacia la clnica de los avances alcanzados en este periodo y traspasando procedimientos para su utilizacin como herramientas diagnsticas.

M. Garca, C.Toms-Verdera y P. Castn, Biotools, B & M Labs, S.A.

Evolucin de las tcnicas moleculares aplicadas en biotecnologa; de la PCR tradicional a los sistemas gelificados de alta resolucin

Estas aportaciones al conocimiento ya permiten rastrear de modo muy preciso la localizacin en el genoma de una alteracin o modificacin del material gentico, vinculndola a diferentes sndromes o patologas con total fidelidad. Igualmente, tambin se ha estandarizado la identificacin de material gentico perteneciente a agentes patgenos en muestras clnicas, a un nivel de resolucin que las tcnicas basadas en mtodos tradicionales no permiten. En este contexto, la empresa espaola Biotools B&M Labs ha seguido un desarrollo tecnolgico que ilustra perfectamente la evolucin experimentada por los sistemas de amplificacin, caracterizacin y genotipado de cidos nucleicos, migrando desde los sistemas convencionales de PCR a la microPCR, la PCR a tiempo real o los sistemas gelificados de PCR con high throughput. El inicio de esta evolucin en paralelo tuvo lugar durante los aos 90 con la aplicacin masiva de la PCR; una tcnica capaz de multiplicar porciones de un determinado material gentico, con una alta fidelidad sobre cada una de las variaciones encontradas en origen, para su posterior estudio y anlisis. Detectando el potencial diagnstico de este descubrimiento en el marco de la Bioqumica moderna, una serie de desarrollos iniciales permitieron plasmarlo en desarrollos
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Figura 1. Imagen ilustrativa de una prueba de PCR clsica en Tiempo Final (comparativa de Biotools HotSplit DNA Polimerasa con una DNA Polimerasa convencional).

de aplicacin diagnstica a los largo de las dos ltimas dcadas. Entre estos desarrollos cabe destacar varios kits pioneros en el mbito de la seguridad biolgica y calidad alimentaria para la identificacin de GMOs y trazabilidad de materias primas, o diversos kits de caracterizacin gentica aplicados al mbito de la salud. Estos planteamientos de genotipado inicial para patgenos como los virus hepatotropos o herpticos an presentes en el catlogo de esta compaa, junto con los avances experimentados en otros campos de la biologa molecular, han resultado claves para los continuos adelantos tcnicos enfocados a monitorizar el funcionamiento molecular de los seres vivos, lle-

gando a convertirse en excelentes exponentes de lo que se conoce como economa basada en el conocimiento. Dando continuidad al desarrollo de nuevos mtodos de genotipado, uno de los avances fundamentales se ha logrado con el uso de la tcnica de PCR a tiempo real para la deteccin de secuencias en diferentes tipos de muestras, incluyendo las provenientes de seres humanos y animales, y de la industria alimentaria. Esta tcnica, adems de permitir la deteccin de trazas genticas en cantidades residuales no detectables mediante otras aproximaciones, ha definido un nuevo punto de partida para la aplicacin de tcnicas moleculares en nuevos contextos de
FARMESPAA INDUSTRIAL

EL INICIO DE ESTA EVOLUCIN EN PARALELO TUVO LUGAR DURANTE LOS AOS

90 CON LA
APLICACIN MASIVA DE LA

PCR

Figura 2. Imagen ilustrativa de una prueba de PCR cuantitativa en Tiempo Real. (Biotools HotSplit DNA Polimerasa optimizada para una amplificacin altamente especfica).

salud. Estos avances tambin estn recogidos a modo de diferentes productos de segunda generacin en el catlogo de Biotools, ilustrando cmo la qPCR comenz el camino de la implantacin efectiva en estudios diagnsticos, de validacin en la industria alimentaria o en el campo de la epidemiologa molecular. De esta manera, se confirma el discurrir paralelo que tienen los avances en el campo de la I+D y la generacin de productos que directamente se aplican para mejora de las condiciones diagnsticas, de anlisis gentico a nivel de poblacin etc. Llegados a este punto, los avances que ha experimentado durante los ltimos aos tanto el campo de la Biologa Molecular, como el mbito de su explotacin industrial, estn marcados ms por la combinacin de tcnicas preexistentes, que por el descubrimiento de nuevas actividades enzimticas. De nuevo, la integracin de tecnologas de desarrollo propio como el proceso de Gelificacin para estabilizacin a 4C de reactivos de PCR, la generacin de sondas Lion propias y especficas para qPCR o las tcnicas de microsecuenciacin, ilustran este proceso a travs de la evolucin de esta compaa. Estos hitos adquieren importancia a nivel individual, ya que por ejemplo la Gelificacin permite por primera vez vencer la cadena del fro para reactivos moleculares de carcter enzimtico, que pueden estabilizarse a 4 durante largos periodos de tiempo como mezclas de reaccin complejas. Pero igualmente ponen en valor su uso conjunto, al permitir estandarizar reacciones diagnsticas en formatos gelificados, individualizados y estables, con gran proyeccin clnica. De hecho, los avances ms recientes en el mbito de la aplicacin en diagnstico de estos desarrollos, se sustancian con nuevas patentes propias para la identificacin de polimorfismos de longitud variable en fragmentos de PCR mediante
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Figura 3. Imagen ilustrativa de tecnologa high throughput (Tecnologa de Gelificacin de Biotools).

ESTOS
PLANTEAMIENTOS DE GENOTIPADO INICIAL HAN RESULTADO CLAVES PARA LOS CONTINUOS ADELANTOS TCNICOS ENFOCADOS A MONITORIZAR EL FUNCIONAMIENTO MOLECULAR DE LOS SERES VIVOS

nuevas tecnologas de anlisis molecular al medio hospitalario. De esta manera, Biotools contina generando un marco de referencia donde puede seguirse el desarrollo de la investigacin bsica a travs del lanzamiento de nuevos productos, aplicables a campos tan distintos como la medicina personalizada o la epidemiologa molecular aplicada a la bsqueda de relaciones causales entre diferentes cepas de inters clnico.
REFERENCIAS www.biotools.eu Novel genes retrieved from environmental DNA by polymerase chain reaction: Current genome-walking techniques for future metagenome applications. Kotik M. J Biotechnol. 2009 Aug 25. PMID: 19712711 Bench-to-bedside review: the promise of rapid infection diagnosis during sepsis using polymerase chain reaction-based pathogen detection. Dark PM, Dean P, Warhurst G. Crit Care. 2009;13(4):217. Epub 2009 Jul 15.PMID: 19664174 SEPTIEMBRE/OCTUBRE09 91

pirosecuenciacin en anlisis clnico. Este avance en particular, permite la deteccin exacta mediante el anlisis de secuencias patgenas en muestra directa, hemocultivo o hemocultivo, afianzando la entrada de