Docente: Maria Gardenny Pimenta Martins Disciplina: Microbiologia Geral Discente: Estevo Costa Monteiro Pontes

ESTUDO DIRIGIDO
1. A primeira prova que as bactrias realmente causavam doenas foi

fornecida por Robert Koch em 1876. Koch estabeleceu uma sequncia de passos experimentais para correlacionar diretamente um micro-organismo especfico a uma doena especfica. Esses passos ficaram conhecidos como Postulados de Koch. Cite-os.
R - Os postulados so quatro: 1 Associao constante do patgeno-hospedeiro: o patgeno deve ser encontrado associado em todas as plantas doentes examinadas 2 Isolamento do patgeno: o patgeno deve ser isolado e crescido em meio de cultura nutritivo e suas caractersticas descritas (parasitas no-obrigatrios) ou em planta hospedeira suscetvel (parasitas obrigatrios) e sua aparecia e sintomas registrados. 3 Inoculao do patgeno e reproduo dos sintomas: o patgeno vindo de uma cultura pura deve ser inoculado em plantas sadias de mesma espcie ou variedade na qual apareceu, e deve provocar a mesma doena nas plantas inoculadas. 4 Reisolamento do patgeno: o patgeno deve ser isolado novamente em cultura pura e suas caractersticas devem ser exatamente as mesmas observadas anteriormente.

2. Os experimentos de Pasteur foram de grande importncia para o

estabelecimento da Microbiologia como cincia. Explique.

R - Louis Pasteur lembrado por suas notveis descobertas das causas e prevenes de doenas. Entre seus feitos mais notveis pode-se citar a reduo da mortalidade por febre puerperal, e a criao da primeira vacina contra a raiva. Seus experimentos deram fundamento para a teoria microbiolgica da doena. Foi mais conhecido do pblico em geral por inventar um mtodo para impedir que leite e vinho causem doenas, um processo que veio a ser chamado pasteurizao. Pasteur tambm fez muitas descobertas no campo da qumica, principalmente a base molecular para a assimetria de certos cristais.

3. Como so classificados os procariotos?

R - Arquea e Bactria 4. Apresente as diferenas entre uma clula eucaritica e uma procaritica. R - Clulas procariticas so mais simples que as eucariticas. Nestas, o DNA no est envolto por uma membrana, no h ncleo definido pela carioteca (membrana nuclear) e podemos encontrar ribossomos dispersos no citoplasma, organelas estas responsveis pela sntese

proteica. Molculas circulantes de DNA, os plasmdios, tambm podem ser encontradas. Externamente membrana plasmtica destas clulas, h a parede celular. Indivduos procariticos so unicelulares, sendo estes: as bactrias, cianofceas, micoplasmas, rickttsias e clamdias. J as clulas eucariticas, possuem maior tamanho e complexidade, a comear pelo ncleo individualizado, envolvido pela carioteca. Seu citoplasma interconectado por uma rede de tubos e canais membranosos e onde, alm de ribossomos, tambm so encontradas mitocndrias, retculo endoplasmtico granuloso e no granuloso, complexo golgiense, lisossomos, peroxissomos, centrolos, dentre outras organelas. Exemplos de indivduos eucariotas: animais, vegetais, fungos e protozorios. 5. Diferencie uma bactria Gram-positiva de uma Gram-negativa. R - Gram-positivas: bactrias que possuem parede celular com uma nica e espessa camada de peptidoglicanos. Pelo emprego da colorao de Gram, tingem-se na cor prpura ou azul quando fixadas com cristal violeta, porque retm esse corante mesmo sendo expostas a lcool. Gram-negativas: bactrias que possuem uma parede celular mais delgada e uma segunda membrana lipdica - distinta quimicamente da membrana plasmtica - no exterior desta parede celular. No processo de colorao o lipdio dessa membrana mais externa dissolvido pelo lcool e libera o primeiro corante: cristal violeta. Ao trmino da colorao, essa clulas so visualizadas com a tonalidade rosa-avermelhada do segundo corante, safranina que lhes confere apenas a colorao vermelha. 6. Como as bactrias so classificadas de acordo com a forma e arranjo? R - Formas de cocos (esfricas): grupo mais homogneo em relao a tamanho sendo clulas menores. Os cocos tomam denominaes diferentes de acordo com o seu arranjo: - Diplococos: cocos agrupados aos pares. Ex: Neisseria meningitides (meningococo). - Ttrades: agrupamentos de quatro cocos. - Sarcina: agrupamentos de oito cocos em forma cbica. Ex: espcie Sarcina. - Estreptococos: cocos agrupados em cadeias. Ex: Streptococcus salivarius, Streptococcus pneumoniae (pneumococo). Streptococcus mutans. - Estafilococos: cocos em grupos irregulares, lembrando cachos de uva. Ex: Staphylococcus aureus. - Micrococos: cocos que se separam completamente aps a diviso celular Forma de bastonete: so clulas cilndricas, em forma de bastonetes que apresentam grande variao na forma e tamanho entre gneros e espcies. Dentro da mesma espcie os bastonetes so relativamente constantes sob condies normais de crescimento, podendo variar em tamanho e espessura (longos e delgados, pequenos e grossos, extremidade reta, convexa ou arredondada). Quanto ao arranjo podem variar em : - Diplobacilo: bastonetes agrupados aos pares. - Estreptobacilos: bastonetes agrupados em cadeias. - Paliada: bastonetes alinhados lado a lado como palitos de fsforo. Ex: bacilo da difteria.

- Tricomas: similares a cadeias de bastonetes, mas com uma rea de contato muito maior entre as clulas adjacentes. Ex: espcies Beggiatoa e Saprospira Formas helicoidais ou espiraladas: constituem o terceiro grupo morfolgico sendo caracterizada por clulas de forma espiral que se dividem em: - Espirilos: possuem corpo rgido e se movem s custas de flagelos externos, dando uma ou mais voltas espirais em torno do prprio eixo. Ex: Aquaspirillium - Espiroquetas: So flexveis e locomovem-se provavelmente s custas de contraes do citoplasma, podendo dar vrias voltas completas em torno do prprio eixo. Ex: Treponema pallidum, Treponema denticola. Alm desses trs tipos morfolgicos, existem algumas formas de transio. Quando os bacilos so muito curtos, podem se assemelhar aos cocos, sendo ento chamados de cocobacilos (Ex: Brucella melitensis). Quando as formas espiraladas so muito curtas, assumindo a forma de vrgula, eles so chamados de vibrio (Ex: V. cholerae).

7. Que fatores influenciam a atividade enzimtica? Explique. R - A atividade enzimtica pode depender da presena de determinadas molculas, genericamente chamadas cofatores. A natureza qumica dos cofatores muito varivel, podendo ser, por exemplo, um ou mais ons metlicos (como o ferro), ou uma molcula orgnica (como a vitamina B12). Estes cofatores podem participar ou no diretamente na reao enzimtica. Determinadas substncias, podem inibir a atividade de algumas enzimas, diminuindo-a ou eliminando-a totalmente; so os chamados inibidores enzimticos. Pelo fato de serem protenas com estrutura terciria ou quaternria, as enzimas so dotadas de dobramentos tridimensionais em suas cadeias polipeptdicas, o que lhes confere uma forma caracterstica e exclusiva. Assim, diferentes enzimas tm diferentes formas e, portanto, diferentes papis biolgicos. Para que uma enzima atue, necessrio que os substratos "se encaixem" na enzima. Esse "encaixe", porm, depende da forma, isto , do "contorno" da enzima. Por isso, substratos que se "encaixam" em uma determinada enzima no se "encaixam" em outras diferentes, e a reao no ocorre; da a especificidade das enzimas quanto aos substratos em que atuam. Uma vez ocorrido o "encaixe", forma-se o complexo enzima-substrato, que se assemelha ao sistema "chave-fechadura". O local da enzima onde o substrato se "encaixa" denominado stio ativo (ou centro ativo). No caso de substncias que reagem entre si, sob a ao catalisadora das enzimas, a reao facilitada, tornando-se mais rpida, pois a proximidade entre as molculas "encaixadas" acelera o processo reativo; aps a reao, a enzima desliga-se do substrato e permanece intacta. 8. Cite e explique os fatores fsicos necessrios para o crescimento microbiano. R - Os fatores necessrios para o crescimento microbiano podem ser divididos em duas categorias principais: fsicos e qumicos. Os fatores fsicos incluem temperatura, pH e presso osmtica. Os fatores qumicos incluem fontes de carbono e nitrognio (principais micronutrientes), enxofre, fsforo, potssio, magnsio, clcio e sdio (outros macro nutrientes),

micronutrientes, fatores orgnicos de crescimento e oxignio. A maioria dos microrganismos cresce bem nas temperaturas ideais para os seres humanos e animais. Contudo, certas bactrias so capazes de crescer em extremos de temperatura que certamente impediriam a sobrevivncia de quase todos os organismos eucariticos. 9. Como podemos classificar os micro-organismos a partir da utilizao do

oxignio molecular (O2).

R - Os microrganimos podem ser classificados a partir da utilizao do oxigncio (O 2 ) em: Aerbios obrigatrios: exigem a presena de oxignio; Anaerbios obrigatrios: no toleram a presena de oxignio; Anaerbios facultativos: crescem na presena ou ausncia de oxignio, e Microaerfilos: exigem a presena de oxignio em pequena quantidade, no toleram as presses normais de oxignio atmosfrico. 10. Diferencie: meio quimicamente definido, complexo, diferencial e seletivo. R - Os meios quimicamente definidos so preparados pela adio de quantidades precisas de compostos qumicos inorgnicos ou orgnicos altamente purificados a uma determinada quantidade de gua destilada. Assim sendo, a exata composio qumica de um meio definido conhecida. Os meios complexos frequentemente empregam produtos da digesto de casena, de carne, de soja, de leveduras ou de vrias outras substncias nutritivas. Tais produtos encontram-se disponveis comercialmente na forma de ps, que podem ser pesados e prontamente dissolvidos em gua destilada originando um meio de cultura, no qual a composio qumica varia um pouco de acordo com o lote. Diferencial - quando contm substncias que permitem estabelecer diferenas entre microrganismos muito parecidos, tais como meio de Teague ou Eosina Azul de Metileno (diferencial para coliformes), gar MacConkey para a diferenciao de enterobactrias, gar sangue, gar Baird-Parker para isolamento e diferenciao de cocos Gram positivos (slidos). Seletivos - os que contm substncias que inibem o desenvolvimento de determinados grupos de microrganismos, permitindo o crescimento de outros. Exemplo: meios com telurito de potssio (para isolamento de Corynebacterium diphtheriae), gar Salmonella-Shigella (SS) e gar MacConkey, meios com sais biliares e verde brilhante para isolamento seletivo de Salmonella, meios com 7,5% de cloreto de sdio, meio Baird-Parker, para isolamento de Staphylococcus aureus, meios com antibiticos para isolamento de diversos microrganismos (TSC, SFP, meio de Blaser, meio de Skirrow, etc.). A maioria deles tambm diferencial, permitindo diferenciar as colnias (slidos) dos microrganismos. 11. Quais as principais tcnicas de contagem direta da populao microbiana? R - As principais tcnicas de contagem direta da populao microbiana so: Contagem total das clulas, contagem de viveis, massa de clulas, turbidimetria, anlises qumicas e nmero mais provvel (NMP).

12. Apresente e explique as fases do crescimento das bactrias em uma cultura. R - A curva de crescimento bacteriano que demonstra o crescimento bacteriano em determinado perodo obtida quando se realiza a contagem da populao em intervalos aps o inculo de pequena quantidade bacteriana em meio lquido. Fase lag: adaptao. Clulas em latncia. H pouca ou nenhuma diviso celular e alta atividade metablica, especialmente a sntese de DNA e enzimas. Fase log/exponencial: crescimento exponencial. Tempo de gerao atinge valor constante e h alta sensibilidade a fatores ambientais. a fase de maior metabolismo. Fase estacionria: diminuio na velocidade de crescimento. O nmero de bactrias geradas torna-se prximo ao de bactrias mortas. A populao fica estvel. As razes para o fim do crescimento exponencial no esto devidamente elucidadas. Fase de morte ou declnio: o nmero de bactrias mortas supera o de bactrias geradas. A populao gradualmente desaparece. 13. Explique a forma mais comum de reproduo bacteriana. R - A reproduo mais comum nas bactrias assexuada por bipartio ou cissiparidade. Ocorre a duplicao do DNA bacteriano e uma posterior diviso em duas clulas. As bactrias multiplicam-se por este processo muito rapidamente quando dispem de condies favorveis (duplica em 20 minutos). A separao dos cromossomos irmos conta com a participao dos mesossomos, pregas internas da membrana plasmtica nas quais existem tambm as enzimas participantes da maior parte da respirao celular.