U ni dad 1 I nt r o ducci o n

B i o t ecno l o g a
I ngeni er a B i o q u mi ca
Ingeniera de Bioprocesos
I ngeni er a G ent i ca
Reactores Bioqumicos
Fermentaciones
Reacciones enzimticas
Ingeniera Ambiental
Alimentos
Produccin microbiana
Productos microbianos
1.1.- CONCEPTOS
Sustrato
Microorganismos
Enzimas
Productos
+
Ing. Procesos
(clulas, productos celulares)
1.2.- ALGO DE HISTORIA.....
VINO
CERVEZA
VINAGRE
QUESO
PAN
PEPINILLOS
CECINAS
PENICILINA
FERMENTACI ON
LODOS ACTIVOS
DIGESTION AEROBIA
DIGESTION ANAEROBIA
ANTIBIOTICOS
VACUNAS
ENZI MAS INDUSTRIALES
AMINOACI DOS
QUI MI OTERAPIA
VERTEDEROS
BIOGAS
MUTACI ON
CLONACION
DNA recombinante
ORGANISMOS TRANSGENICOS
ENZI MAS INMOVILI ZADAS
CELULAS INMOVILI ZADAS
CULTI VO CELULAR ANIMAL
ANTICUERPOS MONOCLONALES
FUSI ON CELULAR
Biotecnologa en Chile.....???
P r o ceso s de
t r ansf o r maci n
bi o l gi ca
V
S
P r o ceso s
Q u mi co s
T r adi ci o nal es
Conversiones de hasta un
100%, con un mnimo de
reacciones colaterales
Reacciones de alta
especificidad
Procesos de varias etapas,
con productos intermedios,
concentraciones mayores y
reacciones rpidas
Una sola etapa, sin productos
intermedios.
Reacciones lentas en baja
concentracin
Los biocatalizadores trabajan a
bajas temperaturas (20-60 C)
y a presin ambiental
Muchos procesos qumicos
se realizan en solventes
orgnicos de alto costo y
toxicidad
Todas las reacciones biolgicas
se realizan en presencia de
agua
Petrleo o sus derivados
Uso de recursos no
renovables
Azcares, almidn, residuos de
industrias agroalimentarias.
Materias poco convencionales
BI OPROCESO
PRODUCTOS
Alcoholes
Metano
cidos grasos
Enzimas
Biopolmeros
Anticuerpos
monoclonales
MATERI AS PRI MAS
Celulsicas
Almidn
Azcares
Aceites
Biomasa agrcola
Biomasa forestal
pulpas
DI SEO DE BI OREACTORES
Transporte de materia
Transmisin de calor
Agitacin y mezcla
Tanques agitados
Suministro de aire
Lechos rellenos
Biocintica
Bioinmovilizacin
I NSTRUMENTACION
Controladores para PC
Biosensores
Adquisicin de datos
Modelacin
Ensayos de productos
Anlisis econmico
AGENTES DE
BI OCONVERSI ON
Clulas microbianas
Clulas vegetales
Clulas animales
Clulas DNA rec
MO psicrfilos
MO termfilos
MO halfilos
Enzimas
MICROORGANISMOS MICROORGANISMOS
Existen en casi todo ambiente en que exista H
2
O lquida
Desde -20 a 110 C
Psicrfilos,mesfilosytermfilos
Aerobios, anaerobios, facultativos
Eucariontes,procariontes
Segn su Fuente de Energa
Segn su Estructura
Segn su Fuente de Carbono
Auttrofos: carbono inorgnico.
Hetertrofos: carbono orgnico.
Quimitrofos: energa qumica.
Fottrofos: energa solar (luz).
Procariontes: no poseen ncleo niorganelos.
Eucariontes: poseen ncleo y organelos.
Clasificacion Clasificacionde Microorganismos de Microorganismos
1.3.- CONCEPTOS DE MICROBIOLOGA Y BIOQUMICA
Segn la fuente de carbonoque utilizan, los seres vivos se dividen en
auttrofos, cuya principal fuente de carbono es el CO2, y hetertrofos
cuando su fuente de carbono es materia orgnica.
Por otra parte segn la fuente de energa, los seres vivos pueden ser
fototrofos, cuya principal fuente de energa es la luz, y los organismos
quimiotrofos, cuya fuente de energa es un compuesto qumico que se oxida.
Atendiendo a las anteriores categoras, entre las bacterias podemos
encontrar las siguientes formas, como puede apreciarse en el esquema:
Los organismosquimiohetertrofas, utilizan un compuesto qumico
como fuente de carbono , y a su vez, este mismo compuesto es la fuente
de energa. La mayor parte de las bacterias cultivadas en laboratorios y
las bacterias patgenas son de este grupo.
Los organismosquimioauttrofas, utilizan compuestos inorgnicos
reducidos como fuente de energa y el CO2 como fuente de carbono.
Como por ejemplo, Nitrobacter, Thiobacillus.
Los organismosfotoauttrofas, utilizan la luz como fuente de energa y
el CO2 como fuente de carbono. Bacteriaspurpureas.
Los organismosfotohetertrofas, utilizan la luz como fuente de energa
ybiomolculascomo fuente de carbono. Ejemplos comoRodospirillumy
Cloroflexus.
Clulas Eucariontes
Clulas Eucariontes
Hongos, protozoos, algas, clulas animales y vegetales
Poseen ncleo y organelos citoplasmticos
Organelos: Estructuras celulares de presencia
constante y funcin definida
La clula est rodeada por una membrana, denominada "membrana plasmtica".,
que delimita el territorio y controla el contenido qumico de la clula.
En la composicin qumica de la membrana entran a formar parte lpidos, protenas y
glcidosen proporciones aproximadas de 40%, 50% y 10%, respectivamente. Los
lpidos forman una doble capa y las protenas se disponen de unaforma irregular y
asimtrica entre ellos. Estos componentes presentan movilidad, lo que confiere a la
membrana un elevado grado de fluidez.
Por el aspecto y comportamiento el modelo de membrana se denomina "modelo de
mosaico fluido"
Las funciones de la membrana podran resumirse en :
1.TRANSPORTE
El intercambio de materia entre el interior de la clula y su ambiente externo.
2.RECONOCIMIENTO Y COMUNICACIN
Gracias a molculas situadas en la parte externa de la membrana, que
actan como receptoras de sustancias.
MEMBRANA PLASMATICA
Transporte a travs de membrana
La bicapa lipdica de la membrana acta como unabarrera que separa dos medios
acuosos, el medio donde vive la clula y el medio interno celular. Las clulas requieren
nutrientes del exterior y deben eliminar sustancias de desecho procedentes del
metabolismo y mantener su medio interno estable. La membrana presenta una
permeabilidad selectiva, ya que permite el paso de pequeas molculas, siempre que
sean lipfilas, pero regula el paso de molculas no lipfilas.
El paso a travs de la membrana posee dos modalidades:
- pasiva, sin gasto de energa
-activa, con consumo de energa
1. El transporte pasivo. Es un proceso de difusin de sustancias a travs de la
membrana. Se produce siempre a favor del gradiente, es decir, de donde
hay ms hacia el medio donde hay menos. Este transporte puede darse
por:
Difusin simple. Es el paso de pequeas molculas a favor del gradiente; puede
realizarse a travs de la bicapa lipdica o a travs de canales proteicos.
1.1 Difusin simple a travs de la bicapa . As entran molculaslipdicascomo
las hormonasesteroideas, anestsicos como el ter y frmacos liposolubles.
Y sustanciasapolarescomo el oxgeno y el nitrgeno atmosfrico. Algunas
molculas polares de muy pequeo tamao, como el agua, el CO2, el etanol y
la glicerina, tambin atraviesan la membrana por difusin simple. La difusin
del agua recibe el nombre de smosis
1.2 Difusin simple a travs de canales .Se realiza mediante las denominadas
protenas de canal. As entranionescomo el Na+, K+, Ca2+, Cl-. Las
protenas de canal son protenas con un orificio o canal interno, cuya apertura
est regulada, por ejemplo por ligando, como ocurre con neurotransmisores u
hormonas, que se unen a una determinada regin, el receptor de la protena
de canal, que sufre una transformacin estructural que induce laapertura del
canal.
Difusin facilitada . Permite el transporte
de pequeas molculas polares,
como los aminocidos,
monosacridos, etc, que al no poder,
que al no poder atravesar la bicapa
lipdica, requieren que protenas
trasmembranosas faciliten su paso.
Estasprotenassreciben el nombre de
protenas transportadoras o
permeasasque, al unirse a la
molcula a transportar sufren un
cambio en su estructura que arrastra a
dicha molcula hacia el interior de la
clula.
2. El transporte activo. En este proceso tambin actan protenas de membrana,
pero stas requieren energa, en forma de ATP, para transportar las molculas al otro
lado de la membrana. Se produce cuando el transporte se realiza en contra del
gradiente electroqumico. Son ejemplos de transporte activo la bomba deNa/K, y la
bomba deCa.
La bomba deNa+/K+Requiere una protenatransmembranosaque bombeaNa+
hacia el exteriorde la membrana y K+ hacia el interior. Esta protena acta contra el
gradiente gracias a su actividad como ATP-asa, ya que rompe el ATP para obtener la
energa necesaria para el transporte.
Por este mecanismo, se bombea 3Na+ hacia el exterior y 2 K+ hacia el
interior, con la hidrlisis acoplada de ATP. El transporte activo deNa+ y K+
tiene una gran importancia fisiolgica. De hecho todas las clulas animales
gastan ms del 30% del ATP que producen ( y las clulas nerviosas ms
del 70%) para bombear estosiones.
El Ncleo celular
El ncleo es un orgnulo caracterstico de las clulaseucariotas. El material gentico
de la clula se encuentra dentro del ncleo en forma de cromatina.
El nucleodirige las actividades de la clula y en l tienen lugar procesos tan
importantes como la autoduplicacindel ADNo replicacin, antes de comenzar la
divisin celular, y la transcripcino produccin de los distintos tipos de ARN, que
servirn para la sntesis de protenas. El ncleo cambia de aspecto durante el ciclo
celular y llega a desaparecer como tal. Por ello se describe el ncleo en interfase
durante el cual se puede apreciar las siguientes partes en su estructura:
envoltura nuclear: formada por dos membranas concntricas perforadas por poros
nucleares. A travs de stos se produce el transporte de molculas entre el ncleo y el
citoplasma.
el nucleoplasma, que es el medio interno del ncleo donde se encuentran el resto de
los componentes nucleares.
nuclolo, o nuclolos que son masas densas y esfricas, formados por doszonas:
una fibrilar y otra granular. La fibrilar es interna y contiene ADN, la granular rodea a la
anterior y contiene ARN y protenas.
la cromatina, constituida por ADN yproteinas, aparece durante la interfase; pero
cuando la clula entra en divisin la cromatina se organiza en estructuras individuales
que son los cromosomas.
Retculo Endoplasmtico
Est formado por una red de
membranas que forman cisternas,
sculosy tubos aplanados. Delimita
un espacio interno llamadolmendel
retculoy se halla en continuidad
estructural con la membrana externa
de la envoltura nuclear.
Se pueden distinguir dos tiposde retculo:
1. El Retculoendoplasmticorugoso (R.E.R.), presenta ribosomasunidos a su
membrana. En el se realiza la sntesisproteca. Lasproteinassintetizadas por
los ribosomas, pasan al lmendel retculo y aqu maduran hasta ser exportadas
a su destino definitivo.
2. El retculoendoplsmicoliso (R.E.L.), carece de ribosomas y esta formado por
tbulos ramificados y pequeas vesculas esfricas. En este retculo se
realiza lasntesis de lpidos.
En el retculo de las clulas del hgado tiene lugar ladetoxificacin, que
consiste en modificar a una droga o metabolito insoluble en agua,en soluble en
agua, paraasmeliminar dichas sustancias por la orina.
Las mitocondrias son los orgnulos celulares encargados de suministrar la mayor
parte de la energa necesaria para la actividad celular, actan por tanto,como
centrales energticasde la clula y sintetizan ATP a expensas de los carburantes
metablicos (glucosa, cidos grasos y aminocidos). Laultraestructura mitocondrial
est en relacin con las funciones que desempea: en la matriz se localizan los
enzimas responsables de la oxidacinde los cidos grasos, los aminocidos, el
cidopirvicoy el ciclo dekrebs.
En la membrana internaestn los sistemas dedicados al transporte de los electrones
que se desprenden en las oxidaciones anteriores y un conjunto deprotenas
encargadas de acoplar la energa liberada del transporte electrnico con la sntesis de
ATP,estas protenas le dan un aspecto granuloso a la cara interna de la membrana
mitocondrial.
Tambin se encuentran dispersas por la matrizuna molcula de ADN circular y unos
pequeos ribosomasimplicados en la sntesis de un pequeo nmero de protenas
mitocondriales
Mitocondria
Aparato de Golgi
Descubierto por C. Golgi en 1898, consiste en un conjunto de estructuras de
membrana que forma parte del elaborado sistema de membranas interno de las
clulas. Se encuentra ms desarrollado cuanto mayor es la actividad celular.
La unidad bsica del orgnulo es el sculo, que consiste en una vescula o cisterna
aplanada. Cuando una serie desculosse apilan, forman undictiosoma.Adems,
pueden observarse toda una serie de vesculasms o menos esfricas a ambos
lados y entre lossculos. El conjunto de todos losdictiosomasy vesculas
constituye el aparato deGolgi.
El dictiosoma se encuentra en ntima relacin con el retculoendoplsmico, lo que
permite diferenciar dos caras: la caracis, ms prxima al retculo, y la caratrans,
ms alejada. En la caracisse encuentran las vesculas de transicin, mientras que
en la caratrans, se localizan las vesculas de secrecin. El sistema de membranas
comentado al principio, constituye la respuesta de las clulaseucariotasa la
necesidad de regular sus comunicaciones con el ambiente en el trasiego de
macromolculas. Para ello, se han desarrollado dos mecanismos enlos que el
aparato deGolgi est involucrado.
La adquisicin de sustancias se lleva a cabo por endocitosis, mecanismo que
consiste en englobar sustancias con la membrana plasmtica para su posterior
internalizacin. La expulsin de sustancias se realiza por exocitosis, mecanismo
que, en ltimo trmino, consiste en la fusin con la membrana celular de las
vesculas que contienen la sustancia a exportar.
Estos mecanismos dan sentido funcional al aparato deGolgi:
Maduracin de lasglucoprotenasprovenientes del retculo.
Intervenir en los procesos de secrecin, almacenamiento , transporte y
transferencia deglucoprotenas.
Formacin de membranas: plasmtica, del retculo, nuclear..
Formacin de la pared celular vegetal.
Intervienen tambin en la formacin de los lisosomas.
Los principales representantes de este reino Procariota son las bacterias. De
organizacin muy sencilla, laclula bacteriana consta:
! citoplasma. Presenta un aspecto viscoso, y en su zona central aparece un
nucleoideque contiene la mayor parte del ADN bacteriano, y en algunas
bacterias aparecen fragmentos circulares de ADN con informacin gentica ,
dispersos por el citoplasma: son losplsmidos. La membrana plasmtica
presenta invaginaciones, que son losmesosomas, donde se encuentran enzimas
que intervienen en la sntesis de ATP, y los pigmentos fotosintticos en el caso
de bacterias fotosintticas.
! En el citoplasma se encuentran inclusiones de diversa naturaleza qumica.
! Muchas bacterias pueden presentar flagelos generalmente rgidos, implantados
en la membrana mediante un corpsculo basal . Pueden poseer tambin,
fimbrias opili muy numerosos y cortos, que pueden servir como pelos sexuales
para el paso de ADN de una clula a otra
! Poseen ARN y ribosomas caractersticos, para la sntesis de protenas.
! pared celulares rgida y con molculas exclusivas de bacterias.
! El xito evolutivo de las bacterias se debe en parte a su versatilidad metablica.
Todos los mecanismos posibles de obtencin de materia y energa podemos
encontrarlos en las bacterias.
Clulas Procariontes
Flagelos: otorgan movilidad
Mesosomas: pliegues internos de la membrana plasmtica
Ribosomas: sntesis de protenas
DNA procarionte: molcula nica, circular, no asociada a
protenas. Generalmente ligado a un mesosoma.
Generalmente las bacterias se reproducen por biparticin, como se ve
en el siguiente esquema:
Tras la duplicacin del ADN, que esta dirigida por la ADN-
polimerasaque se encuentra en losmesosomas, la pared
bacteriana crece hasta formar un tabique transversal separador
de las dos nuevas bacterias. Pero adems de este tipo de
reproduccin asexual, las bacterias poseen unos mecanismos
de reproduccin sexual oparasexual, mediante los cuales se
intercambian fragmentos de ADN .
Puede realizarse por :
Transformacin
Conjugacin
Transduccin
CONJUGACIN: En este
proceso, una bacteria
donadora F+ transmite a
travs de un puente opili, un
fragmento de ADN, a otra
bacteria receptora F-. La
bacteria que se llama F+
posee unplsmido, adems
del cromosoma bacteriano.
TRANSFORMACION: Consiste
en el intercambio gentico
producido cuando una bacteria
es capaz de captar fragmentos
de ADN, de otra bacteria que se
encuentran dispersos en el
medio donde vive.
TRANSDUCCIN:En este caso la
transferencia de ADN de una bacteria
a otra , se realiza a travs de un
virus bacterifago, que se comporta
como un vector intermediarioentre
las dos bacterias.
P r o car i o nt es
Eucar i o nt es
Eubact er i as
A r caebact er i as
L a gr an mayo r a
de l as bact er i as
M ET A N O G EN I C A S
H A L O F I L A S
T ER M O A C I D O F I L A S
C l ul as veget al es
C l ul as ani mal es
P r o t i st as
A l gas
P r o t o zo o s
F ungi
V i r us
L evadur as
H o ngo s
f i l ament o so s
C l asi f i caci n de o r gani smo s
cel ul ar es
Control de los fermentadores
Un fermentador puede disponer de una unidad de control remoto para la
visualizacin y el registro del comportamiento de la microbiota durante todo
el proceso de fermentacin que permite la simultaneidad de trabajo de los
distintos equipos.
Sistema fermentador: El biorreactor dispone de sensores especficos que permiten la
medida y el control "in situ" de las variables de una forma precisa y reproducible.
Variables implicadas: Los microorganismos crecern a una velocidad
caracterstica que depende tanto de la composicin del medio de cultivo
como de la temperatura, pH, oxgeno suministrado y condiciones de la
mezcla. Por este motivo, durante el proceso de produccin se controlan
mediante los oportunos sensores las siguientes variables:
! pH
!temperatura
!presin parcial de oxgeno
!produccin de espumas
!nivel
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Fermentador de laboratorio (2-5 L)
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