Proceso por el cual se restringen, completa o parcialmente los grados de libertad de movimiento de enzimas, dando lugar a una forma

de los mismos insoluble en agua.

Enzimas inmovilizadas.
1) Enzima adherida a un soporte slido. 2) Actualmente se refiere al procedimiento en el cul la enzima se encuentra confinada en un espacio definido. 3) Esto abre la posibilidad de usar soportes solubles (-celulosa) que nos permitan incrementar el peso molecular de los agregados de enzimas.

Permite uso en continuo del enzima. Simplifica las etapas de purificacin del producto. Mayor rendimiento. Mayores caudales de entrada/salida para el mismo tamao de reactor. Mayor estabilidad del enzima. Resistencia a la desnaturalizacin. Reduce el riesgo de contaminaciones accidentales del proceso.

 El proceso de inmovilizacin puede afectar a la actividad del enzima. Aumento de la complejidad del sistema. Conversiones de varias etapas: preferible el uso de clulas enteras.

Un soporte para inmovilizacin debe tener las siguientes propiedades: Elevada resistencia mecnica, qumica y biolgica Insolubilidad Hidrofilicidad Elevada razn rea/volumen Regenerabilidad Bajo costo

Por regla, no todas estas propiedades estn simultneamente presentes en un determinado soporte: necesario evaluar todas las alternativas.

 Buena relacin rea/volumen Muy flexibles en su configuracin Bajo costo en algunos casos (residuos orgnicos)

Mayor resistencia Mayor regenerabilidad Propiedades fsicas (ej. porosidad) controlables

 Las enzimas normalmente se inmovilizan a travs de algn tipo de interaccin entre sus residuos aminoacdicos y el soporte. Esto puede producir perdidas considerables de actividad, al comprometer los aminocidos en el, o vecinos del, sitio activo. Para minimizar este problema se inmoviliza por intermedio de las molculas de carbohidratos (enzimas glicoproteicas) o por la utilizacin de espaciadores.

 Los mtodos de inmovilizacin se pueden dividir en:

Enlaces qumicos a) Adsorcin b) Enlace covalente c) Entrecruzamiento d) Inclusin en matrices (geles) e) Retencin por membranas

Confinamiento

ADSORCIN ENLACE COVALENTE ENLACES CRUZADOS ATRAPAMIENTO

MEMBRANAS

ADSORCIN
Para enzimas y clulas enteras.

Sus interacciones son de tipo inico, puentes de hidrogeno, Van der Waals Es un proceso muy suave en el cual la actividad de la enzima se conserva y su proceso es reversible en funcin de las condiciones (T, pH).

Enlace covalente
Formacin de enlaces covalentes entre enzima y soporte. Mucho ms fuertes que el caso anterior. Variedad de soportes: Naturales (celulosa, dextrano, etc.), sintticos (polmeros), Vidrio, materiales cermicos. La unin covalente debe afectar a grupos funcionales del enzima que no intervengan en el proceso cataltico.

Enlaces cruzados
Formacin de agregados tridimensionales entrecruzados, insolubles en disolucin acuosa. Se prescinde del soporte. Tiene una fcil preparacin y alta especificidad en ensayos prueba-error.

Atrapamiento
Mayoritariamente para clulas. Poco usado para enzimas (baja retencin). La matriz se forma en presencia de la enzima o clula. Uso de polmeros sintticos o geles de origen natural.

Membranas
Retencin del encima en un espacio limitado por una membrana semipermeable.
A) Microencapsulacin
Partculas esfricas de pequeo tamao. El enzima queda incluido en suspensin dentro de las esferas. Ventaja: se consigue una suspensin en medio lquido.

B) Membranas preformadas
Membrana impermeable a las enzimas y permeable a substrato/producto. Fibras huecas: Reactor cilndrico con enzimas retenidos en membranas.

Caractersticas

Adsorcin
Simples

Enlace covalente
dificil

Inclusin en matrices
dificil

Retencin por Membranas Simples

Preparacin

Costo
Fuerza de ligacin Liberacin de enzima Aplicabilidad Problemas en la utilizacin Efectos de la matriz Restricciones difucionales Proteccin microbiana

bajo
variable si amplia elevados si no no

elevado
fuerte no selectiva bajos si no no

moderado
flaca si amplia elevados si si si

elevado
fuerte no Muy amplia elevados no si si

Aplicaciones de la enzimas inmovilizadas

Aplicaciones analticas: biosensores. Aplicaciones mdicas: tratamientos con enzimas inmovilizadas. Aplicaciones industriales: tratamiento de aguas residuales

Biosensores
Los biosensores se estn convirtiendo en una herramienta imprescindible en medicina, en el control de calidad de los alimentos y en el control medioambiental.

Aplicaciones mdicas
Existen muchas enfermedades causadas por una alteracin o carencia de una determinada enzima. El tratamiento con estas enzimas inmovilizadas permitira una accin ms prolongada, ya que seran ms resistente a la accin de las

proteasas.

Tratamiento de aguas residuales

Recientemente, se ha desarrollado un mtodo para la reduccin de nitratos a nitritos en aguas residuales que emplea enzimas inmovilizadas . El benceno es otro compuesto muy txico que puede ser degradado mediante clulas de Pseudomonas putida atrapadas en geles de poliacrilamida.

Aplicacin de las lipasas en procesos alimentarios.

Sustratos lcteos lipolizados (crema, mantequilla, grasa butrica). Maduracin acelerada de queso. Maduracin acelerada de embutidos. Incremento de sabor y aroma en Yogurt. Preparacin de pescados ahumados.

ENZIMAS LIPOLITICAS
LECHE
LIPIDOS Acidos grasos PROTEINAS CITRATO

Aminocidos A. lctico Acido actico Diacetilo Acetaldehdo Etanol Acido propinico

Tiosteres

Ventajas del uso de enzimas inmovilizadas en el procesamiento de alimentos.

La enzima puede ser reusada. Se puede realizar un control ms preciso del proceso. Se puede evitar la inhibicin por producto. Mayor estabilidad al pH y la temperatura Es ms facil detener la reaccin. El producto puede ser obtenido libre de enzima. Se abre la posibilidad de usar enzimas que no provengan de microorganismos GRAS.

Lactasa (-Galactosidasa)
Lactosa Fructosa + Glucosa

Evita la textura arenosa en los helados. Produccin de leche delactosada.

La leche delactosada es un producto que se obtiene mediante el uso de una enzima inmovilizada

LACTASA

Enzimas inmovilizadas superficie de clulas de levaduras para

Produccin de cervezas de dieta (levadura/glucoamilasa)

Mejoras de viscosidad y facilidad filtracin (levadura/ endo 1,4--Dglucanasa)

Mejorar la auto clarificacin de vinos (levadura/ pepsina)

Amilasas
Jarabes Panificacin Malteado Produccin de Dextrinas Remocin de almidn de jugos de frutas