Universidad Autnoma de Coahuila Facultad de Ciencias Qumicas

Filosofa y metodologa de la investigacin Dra. Anna Ilin

Desarrollo de la Produccin de Etanol a partir de Agave Tequilero por Fermentacin con Kluyveromyces marxianus
Equipo # 2 Jess Roberto Rodrguez Snchez Francisco Javier Alonso Montemayor

ndice

Marco terico..3 Hiptesis..... Objetivo...... Justificacin... Metodologa... Cronograma de actividades. Glosario.. Bibliografas...

1. Marco terico
Antecedentes

Desde que se origin la revolucin industrial entre la segunda mitad del siglo XVII y principios del siglo XX, la principal fuente de energa que se convirti ms tarde en la ms utilizada en la sociedad moderna proviene de la gasolina, petrleo, carbn y/o gas natural. Estos compuestos son llamados combustibles fsiles, porque tienen su origen en las plantas y los animales prehistricos y ocupan una enorme aplicacin industrial para satisfacer las demandas ms exigentes del hombre, tales como producir medicamentos, combustible para aviones, autos, motocicletas, barcos, fabricacin de hules, plsticos, objetos, etc. Pero este tipo de obtencin de energa presenta varios aspectos desfavorables, el ms notorio y el que es objeto de preocupacin por la sociedad es su inminente agotamiento ya que no es una energa renovable. Recientemente, en el siglo XXI se est presentando una crisis energtica ocasionada por el agotamiento de esas reservas petroleras, aunado a que segn hiptesis actuales, el uso excesivo de los combustibles fsiles est provocando un deterioro ambiental y de salud pblica. Entonces al hombre le surge la necesidad de desarrollar otras fuentes de energa de forma urgente; actualmente se han propuesto varias fuentes de energa que pueden reemplazar a las fsiles tales como la energa solar, la elica, la nuclear, (aunque esta ltima ha repercutido de forma peligrosa debido a acontecimientos de accidentes ocurridos como en Chrnobil, Ucrania y la central nuclear de Fukushima I en Japn). Se ha formulado por lo tanto una nueva propuesta interesante de obtencin de energa y es la llamada bioenerga de alto potencial. Para llevar a cabo este desafo se ha hecho un enfoque especial particularmente hacia el impulso y desarrollo de los llamados cultivos bioenergticos. Los cultivos energticos son

plantaciones de crecimiento rpido que se realizan con el propsito especfico de producir energa mediante su transformacin en biocarburantes1. [1] Mxico cuenta con un alto potencial de recursos bioenergticos resultado de su biodiversidad y de sus condiciones climticas y geogrficas. Es importante aprovecharlas ya que permitir al pas contar con mayor diversificacin de fuentes alternativas no contaminantes como las obtenidas a partir de la biomasa2 que son una excelente oportunidad para que especies como el Maguey, que es una planta tpica del pas, sean consideradas como recurso bioenergtico. El Maguey (Agave) representa una parte importante de nuestro legado histrico y cultural y actualmente es una fuente importante de empleo y de generacin de recursos para Mxico, siendo considerado como su centro de origen. En la taxonoma clsica se le ubica en la familia Amaryllidaceae, subfamilia Agavoideae. El gnero Agave es el ms grande de esta familia, comprendiendo aproximadamente, doscientas setenta y cinco especies (Lawrence 1951). Sin embargo, Hutchinson (1934) lo ubic dentro del orden Agavale, especficamente en la familia Agavaceae, en donde se incluye el gnero Agave. De las alrededor de 300 especies presentes en el contiene americano, 272 son reportadas que existen en Mxico. Es quizs la planta con mayor utilizacin y aprovechamiento a nivel mundial. De esta planta se pueden obtener bebidas alcohlicas por fermentacin, alimentos, forraje para rumiantes, fibras, materiales de construccin, papel y productos teraputicos, entre otros. Recientemente, tambin se le ha encontrado un alto potencial en la produccin de conglomerados para la fabricacin de muebles y como sustrato para la produccin de hongos y compostas. Tambin se utiliza para la elaboracin de alimentos agroalimentarios y de aplicacin industrial. El Maguey presenta varias ventajas competitivas en relacin a los cultivos bioenergticas tales como: alta eficiencia productiva, amplio rango de adaptacin, bajos requerimientos de insumo y de tecnologa, por lo que puede establecer una importante fuente agroecolgica proporcionando una considerable produccin

energtica con un alto potencial. Un aspecto importante a resaltar es que en su produccin no se desplazan cultivos, ni se abren nuevas tierras y se pueden establecer en suelos pobres y con problemas de erosin. Algunas otras especies como hongos y animales pueden ser capaces de aumentar la efectividad del agave en procesos internos de fermentacin y reacciones qumicas, que actualmente estn siendo un objeto de estudio. La aplicacin de organismos vivos que participan en la produccin de bioenerga son ms importantes de lo que se cree y su aprovechamiento es meramente especial. El hongo Kluyveromyces marxianus es uno de ellos. [2] En la actualidad tres pases han desarrollado programas significativos para la fabricacin de bioetanol como combustible: Estados Unidos (a partir de maz), Brasil y Colombia (ambos a partir de caa de azcar). El etanol se puede producir a partir de otros tipos de cultivos, como remolachas, zahna, mijo perenne, cebada, camo, kenaf, patatas, mandioca y girasol. Tambin puede extraerse de mltiples tipos de celulosa "no til". Tambin se pueden obtener cantidades ms reducidas de alcohol combustible de los tallos, de elementos reciclados, de la paja, de las mazorcas de maz, y de productos sobrantes de las granjas que ahora se utilizan para hacer piensos, fertilizantes, o que se utilizan como combustibles de plantas de energa elctrica. De hecho, EEUU podra conseguir todo el etanol que necesita usando una mezcla de, por ejemplo, los tallos (parte no aprovechada) del maz y de la planta de maz, sin roturar ms tierras de labranto. En Mxico, desde hace varios siglos, se producen bebidas alcohlicas y destiladas a partir de agaves, y recientemente subproductos de las industrias tequilera y mezcalera se utilizan en la produccin de bioetanol. Actualmente en la pennsula de Yucatn se desarrollan tecnologas para utilizar el jugo, subproducto de la agroindustria de la fibra de henequn (Agave fourcroydes Lem). En 2005 esta industria proces 250 millones de hojas para producir 5000 ton de fibra, y origin 75 millones de litros de jugo como residuo. Este sustrato contiene un alto

porcentaje de oligofructanos3 que pueden ser utilizados en la produccin de bioetanol. En estudios preliminares Barahona y colaboradores obtuvieron 2.72% de etanol (v /v) al fermentar el jugo con Kluyveromyces marxianus cepa Cicy-Ki, lo que es una produccin baja si se compara con el 6-8% v/v obtenido al fermentar melaza con una cepa comercial de Saccharomyces cerevisiae; y el 4-5% v/v producido al fermentar el jugo con esta cepa. Se debe considerar que el etanol va aumentando de concentracin durante el proceso de fermentacin y debido a que es un compuesto txico, cuando su concentracin alcanza aproximadamente un 12 % de volumen, las levaduras tienden a morir. [3]

El etanol y las formas de obtencin

El etanol es un compuesto qumico obtenido a partir de la fermentacin de los azcares que puede utilizarse como combustible ya sea solo o bien mezclado en cantidades variadas con gasolina debido a que ambos tienen origen orgnico y su uso se ha extendido principalmente para reemplazar el consumo de derivados del petrleo. El combustible resultante de la mezcla de etanol y gasolina se conoce como gasohol o alconafta. Dos mezclas comunes son E10 y E85, con contenidos de etanol del 10% y 85%, respectivamente. El etanol tambin se utiliza cada vez ms como aadido para oxigenar la gasolina estndar, reemplazando al ter metil-tert-butlico (MTBE). Este ltimo es responsable de una considerable contaminacin del suelo y del agua subterrnea. Para la produccin de etanol en el mundo se utiliza mayormente como fuente biomasa. Este etanol es denominado, por su origen, bioetanol. El bioetanol es uno de los biocombustibles ms importantes que se produce a precios muy competitivos, a partir de sustratos renovables como la caa de azcar en Brasil y el maz en Estados Unidos. Es aqu cuando surge un problema serio ya

que la produccin mundial actual de etanol no es suficiente para satisfacer la demanda de energa completa, por lo que urgentemente se han recurrido a otros desarrollos funcionales biotecnolgicos que utilizan varios tipos de materias primas para la produccin a gran escala de etanol de origen biolgico (bioetanol). La sacarosa es un componente orgnico que puede funcionar como punto de partida para la produccin de etanol y que se lleva a cabo mediante procesos bioqumicos para su sntesis, por eso se requiere la ayuda de microorganismos capaces de llevar a cabo estas funciones.
!

Sustancias con alto contenido de sacarosa :

o o o o

Caa de azcar Remolacha Melazas Sorgo dulce

Sustancias con alto contenido de almidn :

o o o

Maz Patata Yuca

Sustancias con alto contenido de celulosa:

o o

madera residuos agrcolas

Sntesis qumica por estireno

El etanol para uso industrial se suele sintetizar mediante hidratacin cataltica del etileno con cido sulfrico como catalizador4. El etileno suele provenir del etano (un componente del gas natural) o de nafta (un derivado del petrleo). Tras la sntesis se obtiene una mezcla de etanol y agua que posteriormente hay que purificar mediante destilacin simple. Sin embargo, estos procesos ciertas veces

pueden volverse complicados por la sntesis un tanto complicada a partir del etano y algunas reacciones adversas posibles.

Biosntesis qumica por Kluyveromyces marxianus

La sntesis bioqumica de etanol es un proceso el cual comienza con el mero tratamiento del agave. Primeramente se procesa en un ambiente con un pH regulado y se adiciona ms tarde la enzima productora, la cual producir una hidrlisis enzimtica de la celulosa. Todos los azcares sern fermentados por la enzima del K. Marxianus para finalmente obtener el etanol. El proceso se muestra en la figura 1.1 como sigue:

Figura 1.1 Hidrlisis enzimtica de la glucosa.

Las colonias pastosas de los organismos que se adicionan al agave, corresponden a un grupo de hongos conocido como levaduras. stos son organismos unicelulares4 que cumplen con un ciclo de vida y se multiplican por germinacin5 o sexualmente mediante ascosporas6 o basidioesporas7 . Kluyveromyces marxianus es una levadura aerobia8 y se usa comercialmente para producir la enzima lactasa similar al uso de otros hongos como los del gnero Aspergillus. Adems estos hongos son mesfilos9, con una temperatura mxima de crecimiento entre 24 y 48C y necesita un pH ligeramente acido de 4.5 a 6.5 para su crecimiento ptimo [4]. Las caractersticas ms importantes del hongo K. Marxianus se describen en la tabla 1.2

Kluyveromyces marxianus
Clasificacin cientfica Reino: Fungi Filo: Ascomycota Subfilo: Saccharomycotina Clase: Saccharomycetes Orden: Saccharomycetales Familia: Saccharomycetaceae Gnero: Kluyveromyces Especie: K. marxianus Nombre binomial Kluyveromyces marxianus Van der Walt, 1971

Figura 1.2 Caractersticas biolgicas de la Kluyveromyces Marxianus

Bioqumica de la reaccin.
La gluclisis10 es la primera etapa de la fermentacin, lo mismo que en la respiracin celular, y al igual que sta necesita de enzimas para su completo funcionamiento. A pesar de la complejidad de los procesos bioqumicos una forma esquemtica de la reaccin qumica de la fermentacin alcohlica puede describirse como una gliclisis (en la denominada va Embden-Meyerhof-Parnes) de tal forma que puede verse como participa inicialmente una molcula de hexosa. C6H12O6 + 2 Pi + 2 ADP " 2 CH3-CH2OH + 2 CO2 + 2 ATP + 25.5 kcal

Se puede ver que la fermentacin alcohlica es desde el punto de vista energtico una reaccin exotrmica, se libera una cierta cantidad de energa. La fermentacin alcohlica produce gran cantidad de CO2, que es la que provoca que el cava11 (al igual que el Champagne y algunos vinos) tengan burbujas. Este CO2 (denominado en la edad media como gas vinorum) pesa ms que el aire, y puede llegar a crear bolsas que desplazan el oxgeno de los recipientes donde se produce la fermentacin. Por ello es necesario ventilar bien los espacios dedicados a tal fin. Un clculo realizado sobre la reaccin qumica muestra que el etanol resultante es casi un 51% del peso, los rendimientos obtenidos en la industria alcanzan el 7%. Se puede ver igualmente que la presencia de fsforo (en forma de fosfatos), es importante para la evolucin del proceso de fermentacin. La fermentacin alcohlica se produce por regla general antes que la fermentacin malolctica, aunque existen procesos de fermentacin especficos en los que ambas fermentaciones tienen lugar al mismo tiempo. La presencia de azcares asimilables superiores a una concentracin sobre los 0,16 g/L produce invariablemente la formacin de alcohol etlico en proceso de crecimiento de levadura (Saccharomyces cerevisiae) incluso en presencia de exceso de oxgeno (aerbico), este es el denominado efecto Crabtree, este efecto es tenido en

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cuenta a la hora de estudiar y tratar de modificar la produccin de etanol durante la fermentacin. Si bien el proceso completo (vaEmbden-Meyerhof-Parnes) descrito simplificado anteriormente, explica los productos resultantes de la fermentacin etlica de una hexosa, cabe destacar que el proceso se puede detallar en una gliclisis previa gobernada por un conjunto de enzimas en la que se obtiene 2 piruvato tal y como se describe a continuacin: C6H12O6 " 2 CH3COCOO# + 2 H2O + 2H+ La reaccin qumica se describe como la reduccin de dos molculas de Nicotinamid adenina dinucletido (NAD+) de NADH (forma reducida del NAD+) con un balance final de dos molculas de ADP que finalmente por la reaccin general mostrada anteriormente se convierten en ATP (adenosn

trifosfato). Otros compuestos trazados en menores proporciones que se encuentran presentes tras la fermentacin son: el cido succnico, el glicerol, el cido fumrico. En ms detalle durante la fermentacin etlica en el interior de las levaduras, la va de la gluclisis es idntica a la producida en el eritrocito (con la excepcin del piruvato que se convierte finalmente en etanol). En primer lugar el piruvato se descarboxila mediante la accin de la piruvato descarboxilasa para dar como producto final acetaldehdo liberando por ello dixido de carbono (CO2) a partir de iones del hidrgeno (H+) y electrones del NADH. Tras esta operacin el NADH sintetizado en la reaccin bioqumica catalizada por el GADHP se vuelve a oxidar por el alcohol deshidrogenasa, regenerando NAD+ para la continuacin de la gluclisis y sintetizando al mismo tiempo etanol. [5]

Hiptesis
La modificacin de las condiciones fsicas y qumicas con las que se trabaja en el pretratamiento del Agave para producir etanol, influirn directamente en la capacidad de rendimiento de la cepa de levadura del K. Marxianus.
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Objetivo general.
Desarrollar y determinar el potencial del Agave Tequilero para la produccin de etanol mediante cultivos de K. Marxianus.

Objetivos especficos
- Investigar el efecto de la hidrlisis enzimtica de la K. Marxianus y el mtodo de la hidrlisis cida trmica para la cantidad de bioetanol liberado en la reduccin de azcares presentes del agave.
-Utilizar la cepa S. Cerevisiae en las mismas condiciones y comparar su rendimiento con el rendimiento de etanol producido por la K. Marxianus.

Justificacin
El impacto ambiental del planeta est estrechamente relacionado con un problema social surgido por la utilizacin creciente del petrleo: la reduccin de los niveles de emisin de sustancias txicas y de los llamados "gases de invernadero" tales como: CO2, metano, xido nitroso y los cloro-flurocarbonatos, reflejan la necesidad de una accin concertada de la sociedad para mitigar dichos efectos. Considerando el potencial del etanol para reducir la contaminacin, es una fuente de combustible que arde formando dixido de carbono y agua, como la gasolina sin plomo convencional. Para cumplir la normativa de emisiones se requiere la adicin de oxgeno para reducir emisiones del monxido de carbono. El aditivo metil tert-butil ter actualmente se est eliminando debido a la contaminacin del agua subterrnea, por lo tanto el etanol se convierte en un atractivo aditivo alternativo. Como aditivo de la gasolina, el etanol al ser ms voltil, se lleva consigo gasolina, lanzando as ms compuestos orgnicos voltiles.

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El agave es una de las plantas tpicas del pas que podra ser mejor para producir etanol que otras plantas. Debido a sus caractersticas que favorecen la produccin bioenergtica en un mundo en el que las tierras cosechables y el agua escasean cada vez ms, stas son propiedades vitales. Adems produce elevados niveles de azcar, que por medio de fermentacin son capaces de ser transformados en etanol y posteriormente en combustible.

Metodologa
Todos los reactivos fueron de grado analtico. Enzima inulinasa (Sigma-Aldrich) se obtuvo a partir de Aspergillus Nger con una actividad declarada de 2,000 U ! ml-1 y una densidad de 1,13 g-cm-3. Una unidad enzimtica se define como la cantidad de enzima necesaria para liberar un g de azcares reductores por minuto a 50 C. El material vegetal Las hojas de agave se obtuvieron de plantas sanas cultivadas en los jardines del Centro de Investigacin Cientfica de Yucatn AC. Se enjuagaron con agua del grifo y se pasan a travs de un molino de tres rodillos para extraer el jugo, que se filtr para eliminar los residuos slidos de la hoja y se almacen a -20 C hasta su uso. Hidrlisis cida trmica Las variables que se consideran importantes en este proceso fueron la temperatura, tiempo de calentamiento y la concentracin de H2SO4. Un diseo factorial completo que conduce a ocho series de experimentos se utiliz para determinar el efecto de las variables arriba mencionadas sobre la liberacin de azcares reductores. Los niveles de cada variable se determinaron sobre la base de la experiencia previa con la hidrlisis de jugo de agave y se decidieron las

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siguientes: 60 y 100C; tiempo de calentamiento: 15 y 30 min; la concentracin de H2SO4 = 1 y el 5% (v/v). Estos niveles fueron decididos no slo basados en las caractersticas del sistema de reaccin, sino tambin basados en factores econmicos y prcticos. Experimentos de hidrlisis cida trmicos se llevaron a cabo en 250 frascos Erlenmeyer con 80 ml de jugo de la hoja de agave. El jugo fresco se utiliz como referencia para la concentracin inicial de azcares reductores. La hidrlisis enzimtica Para estudiar la hidrlisis12 enzimtica, se utiliz un enfoque ms clsico. Las condiciones de los ensayos preliminares se basaron en los datos de enzimas proporcionadas por el fabricante. El mtodo se llev a cabo en matraces Erlenmeyer de 25 ml con 5 ml de jugo de agave a pH 4,5. Se utilizan dos temperaturas: 55, 60C y se ensayaron usando 22.82 U de enzima y 90 min de tiempo de incubacin. Posteriormente, tres concentraciones de la enzima se ensayaron a 60C: 5.75, 11.47 y 22.82 U de enzima y 40 min de tiempo de incubacin. Para los ensayos de fermentacin, la hidrlisis enzimtica se llev a cabo en matraces de 250 ml Erlenmeyer con 180 ml de jugo de agave prima. Se utiliz una concentracin de enzima de 5,75 U. La incubacin se llev a cabo a 60C durante 30 min y el pH 4,5. Todas las incubaciones de hidrlisis enzimtica se llevaron a cabo a 150 rpm. Las cepas de levadura El Kluyveromyces marxianus se aisl a partir de la base de las hojas de agave en un procedimiento de aislamiento clsico. Se caracteriza por pruebas fenotpicas y moleculares. La cepa comercial Saccharomyces cerevisiae se obtuvo de Safmex SA de CV (Mxico). Ambas levaduras se mantuvieron en placas de Petri en YPGA
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en un medio que contiene glucosa (20 g L - 1), extracto de levadura (5 g L - 1), peptona (10 g L - 1) y agar (20 g L - 1), y se incubaron a 30 2C en la oscuridad. Los cultivos se recogieron en agua estril y se mantuvieron a 4C hasta su uso. La viabilidad de las suspensiones de clulas se midi mediante tincin con azul de metileno. Las viabilidades de la suspensin celular $ 95 % de ambas cepas se utilizaron en todos los experimentos. Las curvas de crecimiento Las curvas de crecimiento se generaron en frascos Erlenmeyer de 250 ml con 100 ml de cido trmico o enzima de jugo de agave hidrolizado ajustndose el pH a 4,5. Antes de la hidrlisis, los slidos solubles del jugo de agave en bruto se ajustaron a 6Bx13. El sulfato de amonio (1,5 g L - 1) se us como la fuente de nitrgeno y una concentracin celular de 3 x 107 clulas. Los matraces se incubaron a 30 2C con agitacin de 150 rpm durante 33 h donde las muestras se recogieron cada 3 horas. El jugo de agave no hidrolizado se utiliz como una referencia y en este caso, para evitar la contaminacin, el jugo se calent a 80C y se enfri inmediatamente a temperatura ambiente despus de ajustar los slidos solubles a 6Bx. Fermentaciones La inoculacin14 para las fermentaciones se prepararon con cido trmico o jugo de agave hidrolizado con una concentracin de slidos solubles de 6Bx y una concentracin inicial de clulas de 3 % 107 clulas ml - 1. El pH se ajust a 4,5 y 1,5 g se aadi L - 1 de sulfato de amonio. El crecimiento se mantuvo a 30 2C durante 18 horas. La cantidad del inculo fue de 10 % del volumen total de fermentacin. Las fermentaciones se llevaron a cabo en matraces Erlenmeyer de 250 ml con 180 ml de cido trmico no diluido o jugo de agave hidrolizado. El pH se ajust a 4,5 y 1,5 g se aadi sulfato de amonio. Despus de la inoculacin, los matraces se mantuvieron a 30 2 C durante 48 horas sin agitacin.
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Los mtodos de anlisis La concentracin de slidos solubles se midi con un refractmetro porttil (Cole Parmer FG103/113) y se expres como Bx. La reduccin de las concentraciones de azcares se determin en los hidrolizados y durante las fermentaciones. La absorbancia de las muestras se ley a 550 nm. Para la cuantificacin de etanol, 25 ml de muestra fermentada se diluy con 25 ml de agua destilada y se destil a 100C hasta 25 ml de destilado recuperado. La concentracin de etanol se determin por el mtodo de dicromato y la absorbancia de las muestras se ley a 585 nm. El anlisis estadstico Todos los experimentos se realizaron por triplicado(n=3).Para el anlisis estadstico se utiliz como software el Statgraphics Centurion XV. Las diferencias significativas entre los tratamientos se determinaron mediante la prueba de Tukey HSD con p & 0,05. Para el anlisis de superficie de respuesta, el MINITAB 16.

Cronograma de actividades
Actividades Periodo de realizacin
Se solicitaron hojas de agave al El pedido se realiz el 1 de enero del 2014, Centro de Investigacin Cientfica llego el 4 de ese mes el tratamiento y de Yucatn. Se considera el tiempo almacenaje se realiz del 5 al 6 de ese mes. que tarda en llegar a su destino. Posteriormente se enjuagaron con agua de grifo, se extrajo el jugo, se filtr para eliminar residuos slidos y se almacena -20 C. Se realiz la hidrlisis cida 10 enero de 2014 adicionando cido sulfrico concentrado con el jugo de agave modificando la temperatura. Se hicieron 4 pruebas

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Se realizaron otras 4 pruebas de 11 de enero de 2014 experimentacin para la hidrlisis cida. Se completan entonces las 8 series de experimentos. Se realiz la hidrlisis enzimtica 13 de enero de 2014 en una incubacin de 90 minutos usndose dos temperaturas :55 C y 60C con 22.82 U de enzima en matraces Erlenmeyer 25 ml con 5 ml de jugo de agave. Se hicieron las mismas pruebas 15 de enero de 2014 pero con 5.75, 11.47 y 22.82 U con 40 min a 60C. Se consigue la cepa comercial 17 de enero de 2014 Saccharomyces Cerevisiae. Ambas levaduras se incuban a 30 18 de enero de 2014 +/- 2C en la oscuridad Los cultivos se recogieron en agua 19 de enero de 2014 estril y se mantuvieron a 4C. Se realizaron pruebas de viabilidad 21 de enero de 2014 de la suspensin de las clulas con azul de metileno. Se generaron las curvas de 22 de enero de 2014 crecimiento en frascos Erlenmeyer con 100 ml de enzima de jugo de agave hidrolizado ajustando el pH a 4.5 Los slidos solubles en el jugo de 23 de enero de 2014 agave se ajustaron a 6 Bx. Se adicion sulfato de amonio y una concentracin celular. Se incubaron a 30 +/- 2C con agitacin de 150 rpm. El jugo de agave no hidrolizado se 25 de enero de 2014 calent a 80C y se enfri a temperatura ambiente ajustando los slidos solubles a 6Bx. Se realiz la fermentacin de los 26 de enero de 2014 inculos con el jugo de agave ya hidrolizado con un pH de 4.5 y 1.5 g de sulfato de amonio. El crecimiento se mantuvo a 30 +/2C .

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Despus de la inoculacin los 27 de enero de 2014 matraces se mantuvieron a 30 +/- 2 C sin agitacin. Se midieron la concentracin de slidos solubles con un refractmetro porttil. Se realizan los anlisis de la reduccin de las concentraciones mediante las sustancias hidrolizadas y de fermentacin 30 de enero de 2014

1 de febrero de 2014

Se cuantific la cantidad e etanol, 3 de febrero de 2014 usando 25 de ml de muestra fermentada con 25 ml de agua destilada a 100C. Se recupera el destilado. Al resultado anterior se le aplic el 4 de febrero de 2014 mtodo de dicromato con absorbancias de 585 nm. Se hace el anlisis estadstico 5 de febrero de 2014 mediante el software Statgraphics Centurion XV y el Minitab 16. Anlisis de resultados de la 8 de febrero de 2014 comparacin del rendimiento de las 2 levaduras.

Glosario
Biocarburantes1: Mezcla de hidrocarburos que se utiliza como combustible en los motores de combustin interna y que deriva de la biomasa. Biomasa2: Fuente energtica puede ser aprovechada mediante su combustin directa a travs de su transformacin en biogs, bioalcohol, etc.
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Catlisis3: Proceso por el cual se aumenta o disminuye la velocidad de una reaccin qumica, debido a la participacin de una sustancia llamada catalizador Unicelulares4: Un organismo que est formado por una nica clula Germinacion5: Es el proceso mediante el cual una semilla se desarrolla hasta convertirse en una nueva planta. Ascosporas6: Son las esporas sexuadas internas que se originan en un nmero limitado dentro de una clula llamada asco (capa que envuelve las esporas como si fuera un saco). Basidioespora7: Son las esporas sexuadas externas que se originan en el basidio (estructura encargada de formar las esporas) Organismo Aerobio8: Organismos que pueden vivir o desarrollarse en presencia de oxgeno diatnico (O2) Mesofilas9: Aquel que tiene una temperatura ptima de crecimiento de entre 15 y 35 C. Oligofructanos 10: Estructura lineal formado por entre 10 y 20 monmeros de fructosa, unidos por enlaces ' (1"2) y que pueden contener una molcula inicial de glucosa Gluclisis11: va metablica encargada de oxidar la glucosa con la finalidad de obtener energa para la clula.

Hidrlisis12: reaccin qumica entre una molcula de agua y otra molcula, en la cual la molcula de agua se divide y sus tomos pasan a formar parte de otra especie qumica. Los grados Brix13: (smbolo Bx) sirven para determinar el cociente total de sacarosa disuelta en un lquido. Inoculacin14: es la accin de introducir un organismo vivo menor a uno mayor con la finalidad de causar algn cambio.

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Bibliografa
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