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Universidade Catlica de Braslia UCB

Titulao e determinao de pKa: relatrio aula prtica

Caio de Oliveira Reges Gabriela de Campos Araujo Marccus Antonio Tolentino de Jesus Mariana Quaresma Cavalcante Curso de Medicina Turma XXVI Disciplina: Bioqumica

Maro, 2014 Braslia - DF

Introduo

A compreenso e anlise do funcionamento de sistemas biolgicos depende do conhecimento de certos tpicos como ionizao da gua, cidos e bases fracos assim como a determinao de suas constantes de dissociao e da concentrao de hidrnio no meio em que esto inseridos pela influncia direta ou indireta exercida em seu funcionamento. A gua, importante em diversos processos biolgicos, possui uma composio a qual facilita a formao de ons H3O+. A baixa massa atmica do hidrognio associada forte atrao de seu nico eltron pelo tomo de oxignio facilita sua interao com outra molcula de gua, ou seja, a hidratao de um on H+ formando o hidroxnio. Tal mobilidade de prtons conhecida como proton hopping (Lehningers Principles of Chemistry, fifth edition), e confere gua o carter de condutibilidade eltrica. A dissociao da gua segue a equao simplificada: H2O H+ + OHAo atingir o equilbrio qumico pode-se atribuir, a certa temperatura, um valor constante, varivel apenas com a temperatura chamado constante de ionizao da gua (Kw), representado simplificadamente por: Kw = [H+] [OH-] A 25C igual a 1,0 x 10-14

Adicionando-se uma quantidade de cidos ou bases fracas em gua eles so dissociados e fornecem (cido) ou consomem (base) um on H+ influenciando sua concentrao no meio. A concentrao total de H+ em uma soluo representada pelo pH (- log [H+]), e sua escala responsvel por designar as concentraes molares de H+ e OH-. O conhecimento do pH e sua escala importante pois ele interfere na estrutura de macromolculas importantes em processos biolgicos alterando sua funo e efetividade. cidos e bases fracos so assim denominados por no ionizarem completa em soluo aquosa e assim como a gua possuem uma constante especfica. A constante de dissociao de uma base (Kb) representa sua

tendncia de consumir um prton (H+) e de um cido (Ka) de fornecer um prton em soluo aquosa. O par formado por um doador de prtons (genericamente HA - cido) e um receptor de prtons correspondente (A- - base conjugada) conhecido como par cido-base conjugada e fazem parte do equilbrio: HA H+ + Apar conjugado

Quanto maior for a constante de dissociao de um cido, estar em maior concentrao de forma ionizada, ou seja, mais forte ser. A relao entre Ka e pKa (-log Ka) inversa, quanto maior o Ka menor ser o pKa. Uma ferramenta utilizada na determinao da concentrao de um cido a partir de uma soluo padro a titulao. Dessa forma, uma amostra do cido, de volume conhecido, titulada com uma soluo de base forte (soluo padro). Durante o experimento, baixas quantidades da base so adicionadas ao cido de forma gradual at que o cido seja totalmente neutralizado. Observando-se o comportamento da soluo durante a titulao permite a construo de um grfico que relaciona a variao de pH e o volume de base adicionada chamado curva de titulao. Cada cido em soluo possui sua curva especfica e, a partir dela, possvel determinar seu pKa. No ponto mdio da titulao (correspondente a 50% do volume total de base adicionado) o valor do pH corresponde ao pKa do cido, o momento em que a soluo equimolar em relao ao cido e sua base conjugada (mesma concentrao em mol/L). Na curva de titulao observa-se uma faixa que o pH mantm-se praticamente constante, h uma pequena variao, esse sistema conhecido como tampo. Por definio, tampes so sistemas aquosos de cidos (ou bases) fracos e sua base conjugada que tendem a ter baixa variao de pH ao adicionar um cido ou uma base forte. A manuteno de uma pequena faixa de pH importante para sistemas biolgicos pelos processos metablicos serem dependentes da concentrao

de H+. Um pH especfico importante no somente quando ons H+ so participantes diretos, macromolculas catalisadoras e reguladoras de processos biolgicos ou constituintes, como exemplo aminocidos, possuem partes ionizantes com pKa caracterstico e seu estado ionizado influenciado pelo pH do meio, o que determina seu funcionamento.

Fig. 2-18, pg.60 (Lehningers Principles of Biochem istry 5 Edio)

No corpo humano, o funcionamento celular est diretamente relacionado a um pH timo, dessa forma os sistemas tamponados assegura, o bom funcionamento do corpo, mantendo as variaes de pH em uma faixa pequena de valor. Dois tampes com grande importncia biolgica so os sistemas fosfato e bicarbonato. O primeiro age no citoplasma das clulas e o segundo age no sangue, controlando situaes de acidose e alcalose at certos nveis de variao. A equao de Henderson-Hasselbalch permite relacionar as constantes de dissociao do cido fraco constituinte do sistema tampo com o pH e a concentrao do cido com sua base conjugada:

A construo e observao de curvas de titulao, o reconhecimento de sistemas tampo bem como o entendimento das constantes de dissociao e

processos de ionizao so importantes para a compreenso de sistemas presentes no corpo humano, como o sangue. O objetivo da aula prtica de curvas de titulao e sistemas tampo seria colher dados e interpret-los para entender, de forma prtica, como funcionam e como mudanas de pH podem alterar funes de enzimas e suas consequncias.

Material e mtodos 1- Material: Bureta graduada; pHmetro; Beckers; Papel toalha; Pisseta com gua destilada; Funil; Haste de ferro; Bailarinas; Agitador magntico;

Solues: 25mL de cido actico 0,2 M 25 mL de cido clordrico 0,2M 25mL de NaOH 0,4M 25 mL de um aminocido, concentrao a ser determinada

2- Metodologia Prenda a bureta na haste de ferro com os ganchos, ela deve estar firme sem que esteja apertada demais, e verifique se a vlvula est funcionando antes de comear o experimento (faa isso enchendo um pouco a bureta com gua e mantendo um Becker em baixo para evitar que vaze; se estiver vazando, troque a bureta, se no, continue o experimento). Para as solues de cido actico, cido clordrico e do aminocido repetir os procedimentos a seguir: - Adicionar 25 mL da soluo num Becker contendo uma bailarina - Posicione o Becker sobre o agitador magntico, ligue o agitador e ajuste a velocidade de rotao da bailarina para a mais baixa possvel; - Adicionar NaOH 0,4M na bureta at a marcao mais alta (lembre-se de ajustar o menisco) e posicion-la sobre o Becker; - Introduzir o eletro do na soluo contida no Becker (lembre-se que o bulbo do pHmetro deve ser mergulhado por completo na soluo e no deve tocar o fundo do Becker nem ser tocado pela bailarina); - Anotar o pH, adicionar 1 mL de NaOH e aguardar estabilizao do pHmetro; - Repetir o procedimento anterior at at que a soluo atinja pH 12. Traar o grfico (curva de titulao) do valor do pH em funo do volume adicionado de NaOH e determinar o valor do pKa; Antes de repetir o experimento, lave o eletrodo com gua destilada e deixe-o mergulhado em um Becker com gua destilada ou em uma soluo prpria.

Resultados A tabela e o grfico ilustrados abaixo representam a variao do pH de acordo com a adio de base (NaOH concentrao 0,4M), em mL, na titulao do cido Actico (concentrao 0,2M, pHinicial= 3,02).

mL 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

pH 3,18 3,6 3,9 4,4 4,65 4,76 4,91 5 5,14 5,34 5,6 5,89

13 11,23 14 11,51 15 12,39

A tabela abaixo, assim como o grfico, mostra a variao de pH a partir da quantidade, em mL, de NaOH (concentrao de 0,4M) adicionada durante a titulao do cido Clordrico (concentrao 0,2M e pHinicial=0,78).

mL 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22

pH 0,92 1,13 1,23 1,34 1,4 1,6 1,82 2 2,17 2,3 2,41 2,79

24 26 28 30

2,98 3,2 10,4 12,1

Discusso Durante o experimento foi possvel perceber a regio de tamponamento, no caso do cido Actico, essa foi mais visvel entre a quarta e a oitava amostragem, onde o pH variou aos poucos de 4,4 para 4,91. Tambm foi ntida a sada completa da regio tamponante da dcima segunda para a dcima terceira amostragem, onde o pH foi de 5,89 para 11,23. No caso do cido Clordrico, a regio tamponante se deu entre a segunda e a stima amostragem e a sada completa da zona de tamponamento se deu da dcima quarta para a dcima quinta amostragem, onde o pH foi de 3,12 para 10,4. Como o cido Clordrico um cido forte ele leva maior tempo para se dissociar o que justifica sua zona de tamponamento ser maior, como foi visto no experimento, quando comparada com a zona de tamponamento do cido Actico, cido fraco.

Referncias Bibliogrficas

Textos: Marzzoco, Anita e Torres, Bayardo B. Bioqumica Bsica, Rio de Janeiro: Guanabara, 1990.

Cox, Michael M. e Nelson, David L. Lehningers Principles of Biochemistry, 5th edition. New York: W.H. Freeman and Company

STRYER, Lubert., TYMOCZKO, John L.,BERG, Jeremy M. Bioqumica. 5ed. Rio de Janeiro: Guanabara-Koogan, 2004.

Imagens: Vogel, Arthur Israel, 1905-Qumica Analtica Qualitativa / Arthur I. Vogel ; [traduo por Antonio Gimeno da] 5. ed. rev. por G. Svehla.- So Paulo : Mestre Jou, 1981 . QUMICA - UM CURSO UNIVERSITRIO / Mahan, Bruce M / Myers, Rollie J.- 2002 4 ed. < http://www.infoescola.com/quimica/constantede-ionizacao/> Lehningers Principles of Biochemistry, 5th edition (Cox, Michael M.; Nelson, David L.)