LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO

Los Medios de Cultivos son un conjunto de sustancias nutritivas que se utilizan en el laboratorio para el desarrollo y aislamiento de microorganismos. Algunas bacterias pueden crecer satisfactoriamente en casi cualquier medio de cultivo, otras bacterias necesitan medios especiales y existen algunas que no crecen en ninguno de los medios desarrollados hasta ahora. Sus componentes bsicos deben satisfacer las mnimas exigencias nutricionales para el desarrollo microbiano y varan segn el tipo de bacteria. Incluyen: agua, nutrientes como fuente de nitrgeno, carbono y energa. Adems se considera necesario O 2, CO2 parcial o total y condiciones ptimas de pH y temperatura de incubacin. El agar es un agente solidificante, es un polisacrido complejo que se obtiene de algas de origen marino cuyas propiedades son de gran utilidad en la preparacin de medios de cultivos slidos; no es degradado enzimticamente por los microorganismos, se funde aproximadamente a 100C y permanece en estado lquido mientras la temperatura no descienda por debajo de 45 50C.

CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO POR SU CONSISTENCIA Lquidos o Caldo: Son aquellos que estn disueltos en agua sus nutrientes necesarios para el crecimiento de los microorganismos. Slidos: Contienen nutrientes disueltos en agua pero se les aade un agente solidificante llamado agar y se aade, para solidificar un medio lquido, en una concentracin del 1,5%; los medios con agar se envasan en tubo o en placa de Petri. Semislidos: Son similares a los medios slidos, pero la concentracin del agente solidificante es menor, generalmente del 0,4% con lo que, una vez solidificados mantienen una consistencia gelatinosa. Se utilizan, por ejemplo, para determinar la movilidad de los microorganismos.

POR SU UTILIZACIN Comunes: Contienen todos los nutrientes necesarios para el crecimiento de muchos tipos de microorganismos; poseen componentes como las peptonas o triptonas (protenas animales digeridas enzimticamente), el extracto de carne y el extracto de levadura. Un ejemplo es el caldo TSB, que contiene tripticasa y Agar TSA. Enriquecidos: Adems de las sustancias nutritivas normales se les incorpora una serie de factores para el crecimiento de microorganismos exigentes; este enriquecimiento se hace por adicin de sangre u otros productos biolgicos como: suero, leche, huevo, bilis, etc. Selectivos: son medios que favorecen el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una poblacin polimicrobiana inhibiendo el desarrollo de uno de ellos; Contienen un agente selectivo como: antibiticos, productos qumicos, colorantes, etc. Diferenciacin o Diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia caractersticas bioqumicas que ayuden a diferenciar gneros o especies. La adicin de azucares en el medio se utiliza para este fin ejemplo Agar TSI (Triple Azcar Hierro), Agar LIA (Lisina Hierro Agar), etc. Transporte: Se usan para el transporte de muestras clnicas que no pueden sembrarse inmediatamente. Su utilizacin debe hacerse introduciendo la torunda con la que se obtuvo lamuestra en el interior del medio (generalmente en un tubo). Ejemplo medios Stuart, Amies, Cary Blair, etc. Conservacin: Se usa para conservar una cepa que por diversas razones nos interesa

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mantener ejemplo liofilizando una suspensin bacteriana o congelando la cepas en leche descremada estril al 0.1%.

POR SU COMPOSICIN Medios Complejos: fueron los primeros medios utilizados se preparan a partir de tejidos animales, restos vegetales, etc. Medios Sintticos: contienen sustancias qumicas conocidas que se disuelven en agua destilada en proporciones determinadas, resultando un medio de composicin perfectamente definida.

PREPARACION :
Se elige el medio de cultivo que se va a preparar. Independiente que se vaya a preparar agar o caldo; es necesario tener en cuenta la fecha de vencimiento de los medios de cultivo y verificar los componentes del medio, antes de prepararlo. Antes de preparar el medio se realizan los clculos pertinentes para el volumen que se desee preparar. Teniendo los clculos hechos, se procede a pesar la cantidad deseada. Tenga en cuenta el tipo de balanza que est utilizando. Con una esptula limpia y seca pesar la cantidad deseada. Asegrese que la esptula no contenga restos de otros medios pesados anteriormente. Verificar que el peso que salga en la balanza sea el nmero que se desea, hallado por medio del clculo. Despus de hidratar con el volumen de agua deseado, se calienta hasta que se disuelva completamente. Se enva el medio a la autoclave con cinta indicadora (segn el fabricante). Los medios de cultivo generalmente se sirven en las placas junto a un mechero de gas para evitar que se contamine el medio.

Por ltimo se dejan enfriar para que se solidifique el agar. No se olvide de rotular las placas Petri con el nombre del medio de cultivo, es muy importante que el marcaje sea correcto para evitar problemas en los resultados.

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