Endosporas bacterianas

Las endosporas son formas de reposo, con el metabolismo prcticamente detenido (criptobisis). Debido a su diseo, resisten condiciones fsicas y qumicas muy agresivas (radiaciones UV, calor, sequedad, disolventes, etc.). Son producidas por ciertas bacterias Gram positivas.

http://pro.corbis.com/search/Enlargement.aspx?CID=isg&med iauid=%7B1D5366E0-CE9E-4B38-982D-F452D1E583C0%7D

Endosporas bacterianas
Se producen cuando la bacteria detecta bajos niveles de nutrientes (C, N, P).

La espora se forma dentro de la clula vegetativa (endospora).

Al final de la esporulacin, la clula madre se autolisa, y la espora queda libre. La endospora resiste periodos largos en ausencia de nutrientes y estrs ambientales.

Cuando las condiciones son apropiadas, la espora germina y se surge una clula vegetativa.

Esporulacin
Algunas especies de bacterias Gram positivas (principalmente de los gneros Bacillus, Clostridium, Sporosarcina y Thermoactinomyces), disponen de una serie de estrategias adaptativas cuando se ven sometidas a privacin de nutrientes en su medio ambiente. Alcanzar un ambiente ms propicio mediante la sntesis de flagelos, la quiomiotaxis, la induccin de enzimas intracelulares y extracelulares o la produccin de antibiticos. Esporulacin (estado criptobitico).
http://ilovebacteria.com/spore.htm

Esporognesis
Es un proceso de diferenciacin que apareci evolutivamente en bacterias para lograr supervivencia en ausencia de nutrientes.

Nature Reviews Microbiology 1, 117-126 (November 2003)

Criterios taxonmicos

Su dimetro relativo al de la clula madre Deformantes No deformantes

Localizacin Subterminales Centrales Terminales

Partes de la endospora

Pared Corteza Protoplasto o ncleo

Cubiertas

Protoplasto (ncleo de la endospora)

DPA

DPC

Sus componentes estn inmovilizados en una matriz de quelatos de cido dipicolnico (DPA) con iones Ca2+ (dipicolinato de calcio, DPC), que llega a representar el 15% del peso.

Protoplasto (ncleo de la endospora)

Citoplasma muy deshidratado (10 - 30%) Contiene el cromosoma, pocos ribosomas, ARNt, ARN polimerasa, mono y di nucletidos pero no tri nucletidos (no ATP). Carece de componentes inestables: No ARNm No enzimas biosintticas No aminocidos ni bases nitrogenadas No cofactores reducidos (NADH, CoA, etc.)
Espora de Bacillus cereus http://www.shef.ac.uk/mbb/staff/moir-a

Protoplasto (ncleo de la endospora)

Gran cantidad de pequeas protenas especiales, las pequeas, cidas, solubles (SASP) que mantienen le pH ms bajo que en la clula vegetativa. Durante la germinacin se usarn como fuente de amino cidos. Acomplejan el ADN. Protegen de las radiaciones UV. Fuente de energa: 3-fosfogliceratoPEP

Membrana interna de la espora.

Rodea al protoplasto, membrana citoplsmica que carece de fluidez (estructura policristalina).

http://sitemaker.umich.edu/hanna_lab/home. A Bacillus anthracis endospore (False colored transmission electron micrograph, 92,000X, as shown on the cover of the Jan. 1, 2004 issue of the Journal of Bacteriology)

Pared de la endospora
Estructura muy delgada. A base de un Peptidoglucano similar al de la clula vegetativa. Constituye lo que ser la pared de la futura clula vegetativa. Se sintetiza a partir de la preespora

Corteza o crtex

Crtex

Al microscopio electrnico: gruesa, transparente a electrones, lminas concntricas, formado de un Peptidoglucano especial: 30% del NAM con tetrapptidos, pero con bajo grado de entrecruzamiento 15% del NAM tiene solo L-ala 55% lactama del cido murmico

Corteza o crtex
Origen: a partir de la clula madre. Tiene un bajo grado de entrecruzamiento: Estructura ms laxa, floja y flexible que el PG normal es capaz de expandirse o contraerse. Rpida autolsis durante la germinacin.

La lactama del murmico presenta gran resistencia a la lisozima.

Cubiertas

Aspecto muy voluminoso, distinto segn especies. Partes densas a los electrones.
Formada de una o ms protenas de tipo queratina, ricas en cistena y amino cidos hidrfobos.

Bacterial endospores. Panel A shows endospores from B. subtilis one of which is still retained within the rod shaped 'mother cell'. In B. subtilis, spores are approximately 1.2 m in length and are ellipsoidal. Released spores have a clear protective shell known as the spore coat and is comprised of as many as 25 different protomeric components assembled into discrete layers. Panel B shows a typical SDS-PAGE (12.5%) fractionation of solubilised spore coat proteins revealing predominant species. Ricca and Cutting Journal of Nanobiotechnology 2003 1:6 doi:10.1186/1477-3155-1-6

Estructura insoluble e impermeable que impide la entrada de numerosos agentes qumicos agresivos, incluyendo txicos.

Exosporio
Estructura membranosa transparente, a modo de saco delgado y flojo a base de protenas, polisacridos complejos y lpidos Muy resistente a enzimas proteolticas

Esporulacin
Estmulo desencadenante de la esporulacin: estado de inanicin (carencia de nutrientes) Dura 7-8 horas en Bacillus subtilis o en B. megaterium.

Las fases se nombran con un nmero romano (I, II,....VII). Se suele indicar los lmites de tiempo en los que transcurre la fase (ej: t2-t3 significa que la fase transcurre entre la 2 y la 3 hora)

Fase I (t0-t1)
Los dos cromosomas se condensan formando un filamento. Se inician dos tabiques, cada uno cerca de un polo. Se degradan protenas viejas y los aminocios se emplean en fabricar protenas especficas de la esporulacin. Se sintetizan y liberan al medio: antibiticos y exoenzimas (proteasas, amilasas, ribonucleasas, etc.).

Fase II (t1-t2)

Se termina el septo acntrico en uno de los polos (el otro septo no se completa, aborta). Cada nucleoide queda en un: Compartimiento pequeo, la prespora. Compartimiento grande la clula madre. Sigue sntesis de antibiticos y exoenzimas (proteasas, amilasas, ribonucleasas, etc.).

Fase III (t2-t3)

Formacin del protoplasto de la espora debido a: Degradacin selectiva del PG del septo. La membrana citoplsmica de la clula madre va avanzando hacia el polo, envolviendo a la prespora. Resultado: prespora posee dos membranas, con polaridad opuesta.

La sntesis de protenas sigue en la clula madre, pero se detiene en la prespora.

Fase IV (t3-t4)
Formacin de la corteza: deposicin de PG de la clula madre entre las dos membranas de la prespora. Deposicin del PG de la pared, procedente de la prespora. La espora puede verse ya refrctil en fresco. Comienza sntesis de DPA y acumulacin de Ca2+. Comienza la sntesis del exosporio.

Fase V (t4-t5.5)
Deposicin de materiales de las cubiertas por fuera de la membrana externa de la espora. Contina la acumulacin de DPA, que secuestra iones Ca2+ para formar el DPC en el protoplasto.

Fase VI (t5.5-t7)
Maduracin de prespora a endospora. Maduracin de la corteza (PG especial, ms laxo, con pocos entrecruzamientos). Maduracin de las cubiertas. Citoplasma se hace ms homogneo y denso a los electrones.

Resistencia al calor y al cloroformo.

Resistencia a las radiaciones UV. Resistencia a la lisozima.

Fase VII (t7-t8)

Autolisis de la clula madre y liberacin de la espora. El exosporio pierde agua y se pega a las cubiertas.

Propiedades biolgicas de las endosporas

Hipometabolia. La ms baja tasa metablica.

Dormancia. Gran inercia a los sustratos exgenos, la espora slo perder la dormancia cuando se haya activado para la germinacin.
Resistencia al calor. Es un subproducto de los cambios que llevan a la deshidratacin como medio de lograr la hipometabolia y la dormancia. Algunas resisten 120C durante 15 minutos lo que condiciona los parmetros para esterilizar materiales.

Propiedades biolgicas de las endosporas

Deshidratacin. Refrigencia al microscopio ptico: El DPA va entrando al protoplasto de la espora El Ca2+ entra a la espora se forman quelatos de DPC. La corteza se queda sin cationes, las cargas negativas del PG cortical se repelen, la corteza se expande, se topa con las cubiertas y hay extraccin de agua del protoplasto. El protoplasto queda muy deshidratado, con componentes inmovilizados.

Scanning Electron Micrograph of the Endospores of Bacillus anthracis

Propiedades biolgicas de las endosporas

Resistencia a los rayos UV: Absorcin de UV por cubiertas. Presencia del DPC. Las protenas SASP forman complejos con el ADN. Por la deshidratacin del protoplasto no se generan dmeros de pirimidina. Por la presencia de las SASP se genera fotoproducto de la espora, que ser reparado durante la germinacin. Resistencia a los agentes qumicos. Debida principalmente a la gran impermeabilidad de las cubiertas (grosor, composicin a base de protenas ricas en aminocidos hidrfobos y con abundantes puentes disulfuro.

Germinacin de la endospora
Fases: Preactivacin Activacin Germinacin Crecimiento ulterior (entrada en fase vegetativa)

Preactivacin
Las cubiertas deben erosionarse, de modo natural por envejecimiento progresivo y de modo artificial se puede lograr: 100C durante unos minutos Radiaciones ionizantes pH bajo Tratamiento con sustancias que posean grupos SH libres como Mercaptoetanol

Electron micrograph of Bacillus anthracis endospores (a) Viable and (b) following lethal plasma exposure.

Activacin
Etapa an reversible. Metabolismo an latente. Desencadenada por un agente germinante (iones inorgnicos [Mg2+, Mn2+], L-ala, glucosa u otros azcares, adenina u otras bases nitrogenadas). El germinante es detectado por un receptor alostrico en la MI de la espora. El receptor activado adquiere capacidad proteoltica. Rompe la proenzima unida covalentemente al PG de la corteza. La enzima reconoce al anillo del NAM e hidroliza el PG de la corteza. Empieza a entrar agua al protoplasto espora pierde la refringencia y comienza a perder resistencia al calor.

Germinacin

El proceso se hace ya irreversible, se rompe la dormancia, hay metabolismo, pero es endgeno: Se pierde DPA y se supone la prdida de Ca2+. Ca2+ pasa a corteza y neutraliza cargas negativas del PG hay rehidratacin e hinchamiento del protoplasto y ms contraccin de la corteza. El 3-fosfoglicerato 2fosfoglicerato PEP ATP SASPs se hidrolizan por una proteasa activa y los aminocidos se reutilizan en fabricar nuevas protenas. Comienza la transcripcin de genes vegetativos.

Terminacin
El metabolismo ya se hace exgeno.
Se sintetiza ADN. Protoplasto crece.

La pared de la espora sirve como germen para la pared de la clula vegetativa La clula vegetativa sale rompiendo las cubiertas.

Cuerpos parasporales
Producidos en algunas especies: Bacillus thuringiensis y B. popiliae.
Cristales proteicos octadricos (bipiramidales) formados en el esporangio durante la esporulacin. Agregacin regular de subunidades de una glucoprotena de 120 kD en fase IV (protenas Cry). Son insecticidas ecolgicos, especficos frente a larvas de: colepteros y dpteros.

Toxinas Cry

Toxinas Cry

Acta como insecticida. Oruga ingiere materia vegetal con bacterias esporuladas que producen Cry. La protena Cry se disuelve en el tracto digestivo. El pH alcalino provoca la proteolsis que activa a la toxina.

La toxina altera la permeabilidad del epitelio intestinal, pasa a la hemolinfa lo que provoca la parlisis y muerte de la larva.

Bacillus anthacis

Bacilo Gram positivo. Esporulado. Causa el carbunco o ntrax en animales herbvoros. Es de origen geoflico.
http://srs.dl.ac.uk/Annual_Reports/AnRep01_02/anthrax.htm

Clostridium tetani
Causante de ttanos Toxina (Tetanospamina) Afinidad por sistema nervioso (neurotoxina) Bloquea neurotransmisores Provoca espasmo muscular

Clostridium botulinum
Botulismo Intoxicacin alimentaria Alimentos enlatados pH cidos (vegetales) Toxina resistente al calor Parlisis flacida

Inhibe a la acetilcolina

Clostridium perfringens
Intoxicacin alimentaria (Diarrea, enterotoxina) Gangrena gaseosa (hemolisinas, proteasas, lipasas, colagenasas, hialuronidasas, etc.)

Geobacillus stearothermophilus
Bioindicadores de esterilizacin en autocalve

Negativo Positivo

Esporas bacterianas

Esporas fngicas
Reproduccin Sexual en hongos filamentosos y levaduriformes
Zigosporas

Ascosporas

Basidiosporas

Quistes o Cistos bacterianos

Quistes de Azotobacter

Se producen en algunas especies por engrosamiento de la pared celular de la clula vegetativa, por deposicin de nuevos materiales sobre la membrana citoplsmica (alginatos), al mismo tiempo que se acumulan materiales de reserva en el citoplasma (PHA). Poseen metabolismo endgeno y resisten el calor, la desecacin y los agentes qumicos ms que la clula vegetativa (pero menos que las endosporas

Mixobacterias
Microquistes de Mixobacterias, llamados mixosporas. Sus envolturas constan de una corteza, rodeada de cubiertas (interna y externa). Estas cubiertas se componen de una glucoprotena muy rica en polisacridos.

http://cms.daegu.ac.kr/sgpark/microbiology/myxobacteria.jpg

Mixobacterias

Nature Reviews Microbiology 1, 45-54 (October 2003)

Quistes de Eucariotes

Entamoeba histolytica