RPRTEST SFILIS

FINALIDADE Sistema imunolgico com a finalidade de detectar reaginas da sfilis no soro. Somente para uso diagnstico in vitro. PRINCPIO RPRTEST uma modificao do V.D.R.L. para tornar a reao mais rpida e sensvel. O antgeno RPRTEST j est pronto para uso. Aps infeco pelo T. pallidum, os tecidos lesados do hospedeiro liberam uma frao lipdica que, atuando como hapteno, combina-se com fraes proteicas do espiroqueta, estimulando a produo de reaginas, anticorpos no especficos encontrados nos pacientes portadores de lues. RPRTEST um antgeno lipdico, no treponmico, constitudo por uma mistura balanceada de colesterol, cardiolipina e lecitina. A Cardiolipina um fosfolpide no nitrogenado, extrado do corao de boi e responsvel pela atividade antignica do RPRTEST. Os cristais de colesterol atuam como ncleos de aglutinao do complexo cardiolipina/lecitina, tornando as partculas antignicas maiores e facilitando a precipitao do complexo antgeno/anticorpo. A lecitina responsvel pela sensibilidade da reao. O complexo antignico est adsorvido a micropartculas de carbono e suspenso em tampo de fosfato e cloreto de colina pH 7.0, o que confere estabilidade ao mesmo. PARTICULARIDADES DO SISTEMA RPR (rapid plasma reagin) um teste no treponmico rpido para determinao de reaginas da sfilis. O antgeno uma suspenso de micropartculas de carbono sensibilizadas com lipdios complexos que se aglutinam na presena de reaginas, anticorpos presentes em pacientes com sfilis. O RPRTEST SFILIS Doles dispensa o preparo da suspenso antignica. O antgeno est pronto para o uso. REAGENTES Antgeno uma suspenso antignica contendo Cardiolipina(0.003%),Lecitina(0.020-0.022%), Colesterol(0.09%) e micropartculas de carvo ativado em tampo de fosfato 210 mmol/L e cloreto de colina(10%), azida sdica 0.95g/L. pH 7.0. Controle positivo: soro humano contendo reagina com ttulo igual ou superior a 1:1 em tampo de glicina (150mol/L), BSA 35g/L e azida sdica 0,95g/L. pH 8.2.

IMUNOLOGIA

APRESENTAO Antgeno (1 Ampola) - 2,5mL Controle positivo 1 x 0,5mL Frasco vazio para Antgeno 1 unidade Lminas para testes (reutilizveis) 5 unidades NMERO DE TESTES 125 testes EQUIPAMENTOS E MATERIAIS NECESSRIOS NO FORNECIDOS Pipetas semiautomticas de 50mL e 20mL. Ponteiras descartveis Cronmetro Salina Palitos para homogeneizar Agitador de Kline (opcional) ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE DOS REAGENTES Antgeno: armazenar temperatura de 2-8oC. No congelar. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento. Controle positivo: armazenar temperatura de 2-8oC. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento. CUIDADOS E PRECAUES COM O USO DO REAGENTE O reagente somente para uso diagnstico in vitro. O reagente contm azida sdica,seu manuseio deve ser cuidadoso, evitando-se o contato com pele e mucosas. Em caso de contaminao acidental, lavar a rea afetada em gua corrente, e procurar auxlio mdico. O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo-se aos critrios de biossegurana estabelecidos pelo laboratrio, de acordo com as normas locais, estaduais ou federais.
Observar ainda a simbologia constante nos rtulos do produto:
Risco Biolgico Irritante

As pesquisas de HbsAg, HCVAc, anticorpos HIV e sorologia para Lues foram negativas. Recomenda-se manuse-los como sendo potencialmente infectantes.

AMOSTRA Soro fresco. No necessrio inativar. As amostras utilizadas devero estar temperatura ambiente no momento da realizao do teste. Devem ser lmpidas e isentas de fragmentos de cogulo. Se o exame no for realizado no mesmo dia, congelar a amostra. As amostras congeladas devem ser totalmente descongeladas at a temperatura ambiente, antes de serem examinadas. Evitar

SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goinia) SAC: 0800 644 6433 (Demais localidades)

1/4

congelamento e descongelamento repetitivo das amostras. Todas as amostras biolgicas devem ser consideradas como potencialmente infectantes. PROCEDIMENTO TCNICO Homogeneizar por inverso o antgeno contido na ampola e transfer-lo para o frasco anexo. O antgeno RPRTEST Sfilis e a amostra devero estar temperatura ambiente no momento do teste. TESTE QUALITATIVO 1- A lmina utilizada dever estar limpa e isenta de gordura, o que permite que a reao seja corretamente homogeneizada. aconselhvel que a lmina seja desengordurada com lcool e que ocorra a completa evaporao deste, antes da realizao do teste. 2- Pipetar 50L de amostra ou controle em um crculo da lmina. 3- Homogeneizar a suspenso do antgeno por inverso do frasco. Aps a inverso, abrir o frasco com cuidado para evitar a perda do antgeno. 4- Pipetar 20L do antgeno, sobre a amostra a ser testada. 5- Misturar as gotas com o auxlio de um palito, espalhar o volume sobre a superfcie do crculo. 6- Girar a lmina, por 8 minutos, em agitador de Kline 80 a 100 r.p.m. ou 10 minutos contnuos, manualmente, atravs de movimentos rotatrios. 7- Ao trmino da homogeneizao, examinar imediatamente o aspecto das reaes. RESULTADOS Reagente (crculo 1): presena de floculao, com a formao de grumos de tamanhos variveis. A suspenso de aspecto heterogneo (ver desenho abaixo). No reagente (crculo 2): no h floculao. A suspenso de aspecto homogneo.

TESTE SEMIQUANTITATIVO Rotular 7 tubos (12x75mm) de 1 a 7, sendo o tubo 1 representado pelo soro sem diluio. Colocar, a partir do segundo tubo, 200 L de soluo fisiolgica (salina). Transferir 200L de soro do tubo 1 para o tubo 2, homogeneizar, transferir para o tubo 3, e assim, sucessivamente, at o tubo 6. Teremos ento as diluies que se seguem, com respectivos ttulos:
Tubo Tubo 1 Diluio: 1:1 2 1:2 Tubo 3 1:4 Tubo 4 1:8 Tubo 5 1:16 Tubo 6 1:32 Tubo 7 1:64

Proceder ao teste como descrito para teste qualitativo. RESULTADO Teste semiquantitativo: ser considerada positiva a maior diluio da amostra que apresentar floculao (resultado reagente).
Dil. 1:1=R Dil. 1:2=R Dil. 1:4=R

Dil. 1:8=NR

Dil. 1:16=NR

Dil. 1:32=NR

R: Reagente

NR: No Reagente

LIMITAES DO SISTEMA O antgeno RPRTEST Sfilis e a amostra devem estar temperatura ambiente no momento de uso. A reatividade da prova diminui em temperaturas abaixo de 20C e aumenta em temperaturas acima de 30oC. Alguns soros podem apresentar reaes falsonegativas eventualmente observadas nos soros fortemente reagentes no diludos por fenmeno de prozona. Recomenda-se que ao realizar o teste qualitativo, utilize-se, alm da amostra sem diluir, a amostra diluda com soluo fisiolgica a 1:16. Reaes falso-positivas tm sido encontradas em alguns casos de malria, mononucleose infecciosa, hansenase, brucelose, hepatites, linfogranuloma

2/4

SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goinia) SAC: 0800 644 6433 (Demais localidades)

venreo, tuberculose, doenas do colgeno (artrite reumatoide, lpus eritematoso), viroses e em viciados em drogas. De causas outras que no a sfilis, as reaes falso-positivas biolgicas mostram, em geral, ttulos baixos < 1:8. Os testes positivos podero ser confirmados atravs do FTA-ABS. Os testes confirmatrios de lues detectam sempre a cicatriz sorolgica, no se negativam e, portanto, no se prestam para o controle teraputico. No utilizar o RPRTEST Sfilis Doles para pesquisas de antgenos no-treponmicos no lquor. O nico teste aprovado para pesquisa de anticorpos luticos no lquor a reao de VDRL. CONTROLE DA QUALIDADE DO SISTEMA 1.A limpeza e a secagem adequada do material a ser utilizado so de fundamental importncia para obteno de resultados corretos. 2.Utilizar controles positivo e negativo diariamente. 3.A gua utilizada na limpeza do material, deve ser de boa qualidade. 4.As pipetagens devem ser precisas. 5. absolutamente necessrio, para os laboratrios que realizam estes testes, a manuteno de um controle de qualidade, interno e externo. 6.A soluo de antgeno RPRTEST deve ser homogeneizada por inverso do frasco. SIGNIFICADO CLNICO A sfilis uma doena sexualmente transmitida (DST) e cujo agente etiolgico um espiroqueta, o Treponema pallidum. O mesmo penetra em nosso organismo atravs de escoriaes na pele e mucosas, atingindo a corrente sangunea, se disseminando no organismo atravs da mesma ou do sistema linftico. A contaminao pode se dar por transfuso de sangue contaminado. Na sfilis congnita, o feto se contamina in utero pelos treponemas provenientes da me infectada. Clinicamente, a lues dividida em trs estgios: Sfilis primria, que corresponde ao perodo de infeco com formao do cancro sifiltico na porta de entrada (geralmente genitlia), tendo uma durao mdia de 90 dias a partir do contgio. Sfilis secundria caracterizada por leses cutneas (rosolas -fase exantematosa / ppulas - fase papulosa)secundrias disseminao global do treponema. Neste estgio os testes sorolgicos so 100% positivos. O perodo de latncia, em geral assintomtico, evolue durante anos sendo o diagnstico feito

por testes sorolgicos. Embora possa ocorrer a cura espontnea, a maioria dos pacientes apresenta neste terceiro estgio leses sifilticas, predominantemente, localizadas e que se exteriorizam na pele ou nos ossos sob forma de gomas. Complicaes predominantes nesta fase so a neurossfilis e mesoaortite sifiltica (comprometimento da crossa da aorta com leses extensas na camada mdia - destruio das fibras elsticas - e formao de aneurisma com insuficincia artica secundria e acentuada dilatao de V.E.). Nessa fase, a percentagem de positividade nos testes sorolgicos varivel. A neurossfilis se traduz pela positividade do teste do VDRL no lquido cefalorraquidiano (LCR) em cerca de 50% dos casos ( sendo de at 90% na neurossfilis sintomtica e de apenas 10% quando assintomtica), porm com especificidade de 99,8% para este diagnstico. Os testes de cardiolipina no LCR podem mostrar decrscimo de ttulos entre o 3 e o 6 ms ps-tratamento, mas mantm-se positivos, geralmente, por longo tempo, de meses a anos. VDRL no LCR o nico teste laboratorial aprovado pelo CDC para o diagnstico de neurossfilis. No recm-nato, a sorologia positiva pode ser devida a duas possibilidades: sfilis congnita ou transferncia passiva de anticorpos maternos. Nesta ltima condio, os ttulos caem progressivamente e aps 3-4 meses se negativam. A presena de ttulos de RPRTEST 3 a 4 vezes maiores do que os ttulos maternos comprovam a presena de sfilis congnita. CARACTERSTICAS DE DESEMPENHO Foram reunidos 80 soros, aleatoriamente, e suas indicaes de testes eram outras que no sorologia para lues. A idade dos pacientes oscilou entre 10 e 65 anos. Nesses soros procedeu-se reao com antgeno RPR utilizando-se, paralelamente, os kits RPRTEST SFILIS Doles e RPR Quicktest (Syphilis) Stanbio. Foram testados ainda por ambas metodologias, quarenta e oito soros reagentes, havendo uma concordncia de 100% nos 128 testes. Repetitividade: foram titulados em triplicata por um mesmo tcnico, vinte soros no reagentes. Os 60 testes foram considerados no reagentes. Trs soros com ttulo 1:4 foram titulados em quadruplicata num total de 12 testes, havendo concordncia em 11 testes. O ttulo do teste discordante foi de 1:8.

SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goinia) SAC: 0800 644 6433 (Demais localidades)

3/4

Reprodutibilidade: um soro no reagente e outro com ttulo 1:8, aliquotados e congelados, foram titulados durante 20 dias subsequentes. Os resultados foram concordantes em 39 testes, obtendo-se 20 testes no reagentes e 19 testes reagentes 1:8. O teste discordante foi reagente 1:4.

Especificidade: o antgeno testado uma modificao do antgeno VDRL com adio de partculas de carvo. Sendo um antgeno sinttico, a incidncia de falsos positivos e falsos negativos bem inferior queles resultados obtidos com antgenos lipoides de extratos de rgos. Soros de 40 pacientes sem histria de lues, doenas infecciosas crnicas, neoplasias ou doenas do colgeno foram testados com RPRTEST Sfilis, obtendo-se resultado no reagente em todos testes. Quinze soros de sifilticos foram submetidos ao teste qualitativo com RPRTEST Sfilis, havendo positividade nos 15 soros. Sensibilidade: no decurso da infeco lutica, as reaoes sorolgicas sofrem modificaes em intensidade em relao fase da doena. Vinte soros positivos com ttulos oscilando entre 1:1 e 1:16 foram titulados em triplicata, confirmandose em todos soros os valores originais. Sensibilidade dos Testes Sorolgicos para Sfilis nos Diferentes Estgios da Doena Estgio da Doena Teste VDRL RPR FTA-ABS Primrio Secundrio Latente Terciria 74 - 87% 100% 77 100% 100% 70 - 100% 100%
100%

Limitaes do Sistema. As reaes falso negativas podem ocorrer devido a erro no procedimento tcnico, problemas no reagente, ou homogeinizao imprpria. Bilirrubina (0.5 a 20mg/dL), Hemoglobina(0.63 a 10g/L) e Lpides (0.63 a 10g/L) no interferem nos nveis de concentrao estudados. O fator reumatoide interfere quando presente na concentrao igual ou superior a 300 UI/mL. BIBLIOGRAFIA CONSULTADA Manual de Reaciones para el Diagnstico de la Sifiles. Publicao Cientfica n o 311, da Organizao Mundial de Sade, 1975. Jacobs D.S; Kasten B.L; Demott W.R; Wolfson W.L.: Laboratory Test Handbook, 4a ed. 428429, 1996. Henry J.B.: Clinical Diagnosis and Managment, 19a ed, 1183 - 1193, 1996. Chernecky C.C; Kwech R.L; Berger B.J.: Laboratory Tests and Diagnostic Procedures, 963-965, 1993. Ferreira A .W; vila S.L.M.: Diagnstico Laboratorial das Principais Doenas Infecciosas e Auto-Imunes, 127-132, 1996. Turgeon M.L.: Immunology and Serology In Laboratory Medicine; 2ed. 206-209,1996. Doles: dados de arquivo. TERMOS E CONDIES DE GARANTIA DA QUALIDADE DO PRODUTO As garantias do fabricante ao consumidor seguem estritamente as relacionadas na Lei no 8.078, de 11 de setembro de 1.990 - Cdigo de Defesa do Consumidor. Os reagentes que compem este sistema para diagnstico so garantidos na sua performance, reprodutibilidade e qualidade at a data de vencimento. Os produtos que apresentarem problemas tcnicos comprovados sero substitudos, sem nus para o consumidor. Doles Reag. Equip. para Laboratrios Ltda. CNPJ: 01.085.513/0001-05 Rodovia BR 153, Km 493, Lt.07 Conjunto Palmares. CEP: 74775-027 Goinia - GO Brasil e-mail: doles@doles.com.br M.S.: Reviso: n 10231810089 18 (04/2010)

Hemaglutinao 69 - 90%

98 100% 71% 95 100% 73% 100% 96%

97 100% 94%

Estudo realizado no Center for Disease Control and Prevention, segundo Larson A S, Steiner B.M, Rudolph AH: Laboratory Diagnosis and Interpretation of testes for syphylis. Clin. Microbiolgy Ver. 1995; 8:1. FATORES INTERFERENTES A homogeneizao deve ser feita em condies padronizadas, para que sejam obtidos resultados comparveis em diferentes provas. Soros velhos ou turvos podem dar falsas reaes. A amostra e Antgeno RPR devero estar temperatura ambiente no momento da realizao do teste, conforme mencionado em

4/4

SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goinia) SAC: 0800 644 6433 (Demais localidades)