1 INTRODUO

1.1INFECES BACTERIANAS
1.1.1 ASPECTOS GERAS
Segundo a Portaria n 2.616 de 12 de maio de 1998 do Ministrio da Sade, as
infeces so divididas em dois grandes grupos: nfeces comunitrias (C) e
nfeces hospitalares (H). Essas infeces diferem pela constatao se a
origem da infeco anterior ou posterior admisso do paciente no hospital
(BRASL, 1998).
Recentemente, tm sido relatados inmeros casos de infeces de carter
multirresistente fora dos hospitais, caso de infeces adquiridas pela
comunidade (ALANS, 2005). As infeces comunitrias so as responsveis
em sua maioria pelo uso indiscriminado e emprico de antimicrobianos pela
populao. Paralelo a esse uso, cresce e se expande o fenmeno de
resistncia de microrganismos patognicos aos efeitos farmacolgicos dos
frmacos antibacterianos.
1.1.2 PRNCPAS TPOS DE NFECES BACTERANAS E OS
SEUS AGENTES ETOLGCOS
Do conjunto de infeces merecem destaque:
nfeces respiratrias;
nfeces urinrias;
nfeces cutneas.
As infeces respiratrias representam o principal tipo de infeco comunitria,
alcanou o patamar de problema de sade publica e representada pelas
afeces especficas: amigdalite, faringoamigdalite aguda, rinofaringite e
pneumonia. Essas infeces podem ter etiologia viral ou bacteriana, tornando o
correto diagnstico um fator determinante para a adoo de uma
farmacoterapia adequada. Os principais microrganismos que podem estar
relacionados a essas afeces so Streptococcus pyogenes, Corynebacterium
diphtheriae, Yersinia enterocolitica, Arcanobacterium haemolyticum, Neisseria
gonorrhoeae,Corynebacterium ulcerans, Treponema pallidum, Chlamydia
pneumoniae, Mycoplasma pneumoniae, Haemophilus influenzae e Moraxella
catarrhalis(BANTAR,2011;MATOS,2007)
As infeces urinrias e cutneas tambm so de grande prevalncia na clinica
mdica e esto associadas ao uso de diversos tipos de antimicrobianos
(PRES, 2007). Os agentes patognicos principalmente envolvidos so
!scherichia coli, "lebsiella sp, !nterococcus sp, Staphylococcus aureus e at
mesmo a #seudomonas aeruginosa (LZARO,2011). Contudo, este ltimo
microrganismo est mais comumente associado a infeces hospitalares.
As infeces nosocomiais so responsveis por altos ndices de mortalidade e
elevao dos custos com pacientes hospitalizados (FRENCH, 1991).
Desde os anos 1970, as infeces nosocomiais tm sido associadas com pelo
menos 80.000 mortes por ano e so classificadas como a causa mais comum
entre mortes hospitalares nos Estados Unidos da America (HARLEY et al,
1985). Contudo, h carncia em estudos e por consequncia em dados amplos
sobre os nveis de mortalidade hospitalar atribuvel as infeces nosocomiais
(KAOUTAR et al, 2004).
Redues das taxas de infeces nosocomiais tem sido relatadas com a
implementao de programas de controle de infeco institudas nos hospitais
(BRAUN, 2009).
O tratamento farmacolgico para as infeces consiste na adoo de um ou
mais antimicrobianos que podem variar quanto a sua classe, mecanismo e
espectro de ao.
1.2ANTIBITICOS E RESISTNCIA MICROBIANA
1.2.1 ASPECTOS GERAS
O tratamento mdico para as infeces bacterianas se desenvolveu
principalmente aps a dcada de 1940 com o estudo de frmacos eficazes e
seguros com consequente reduo drstica da morbidade e mortalidade das
doenas microbianas. Entretanto, o desenvolvimento de agentes
antibacterianos eficazes tem sido acompanhado do aparecimento de
microrganismos resistentes a frmacos
1
(HANG & DALE, 2003).
A necessidade de novas classes de antibacterianos no combate s infeces
de carter multirresistente, com novos mecanismos de ao, tem se tornado
ponto importante e que tem ganhado espao na pesquisa acadmica
2, 3
(MUKHTAR & WRGHT, 2005), (BROWN & WRGHT, 2005). Propem-se
tambm a utilizao de inibidores dos mecanismos de resistncia para a
potencializao dos efeitos dos antibiticos j existentes (WRGHT, 2000).
Sabe-se que a resistncia bacteriana compreende um conjunto complexo de
eventos biolgicos e que veem ocorrendo com grande frequncia. Refere-se a
cepas de microrganismos que so capazes de multiplicar-se em presena de
concentraes mais altas de antimicrobianos que aquelas que so utilizadas
nas doses teraputicas em humanos. um fenmeno biolgico natural que se
seguiu introduo de agentes antimicrobianos na prtica clnica
4
(WANNMACHER, 2004). A resistncia aos antibiticos e considerada
multifatorial, representando uma complexa interao entre fatores relacionados
ao medico e profissionais da sade, paciente e fatores ambientais (GOULD,
2008).
As bactrias importantes, tais como #seudomonas aeruginosa, Streptococcus
pneumoniae, Haemophylus influenzae, Campylobacter $e$uni, Staphylococcus
aureus, Mycobacterium tuberculosis, !scherichia coli, !nterococcus sp,
Shigella sp, Salmonella sp e %ibrio cholerae apresentam cepas resistentes aos
mais modernos antimicrobianos
5
(FAUC, 2001).
Estimou-se que em 2002 nos Estados Unidos que o Staphylococcus aureus
meticilino- resistente (MRSA) foi o responsvel por aproximadamente 102.000
casos de infeces adquiridas no ambiente hospitalar (tabela 1) (DAS, 2004).
Bactria antibitic!"R#$i$t#nt# Ca$!$ #$ti%a&!$
Meticilina/ S. aureus 102.000
Meticilina/ CNS (Staphylococcus Coagulase
negative)
130.000
Vancomicina/ Enterecoccus 26.000
Ceftazidima/ P. Aeruginosa 12.000
Ampicilina/ E. coli 65.000
mipenem/ P. aeruginosa 16.000
Ceftazidima/ K. pneumoniae 11.000
Tabela 1: Estimativa de casos de infeces hospitalares causadas por bactrias resistentes nos
Estados Unidos em 2002.
Fonte: DSA (2004).
O uso inadequado e o excesso de prescries de antimicrobianos so os
principais fatores responsveis pelo aumento significativo da prevalncia de
microrganismos resistentes a esses frmacos
6
(KATZUNG, 2005). Essa
prescrio abusiva e muitas vezes no dotada de critrios atualizados sobre
antibiticos originou o aumento do fenmeno de resistncia e consequente
disseminao de cepas de microrganismos resistentes, constituindo um grave
problema de sade pblica e com constante ascendncia em nvel mundial
(LNHARES, 2011).
Considerando a relevncia desse tema, a Organizao Mundial de Sade
escolheu a resistncia antimicrobiana como tema para o Dia Mundial da Sade
2011, dado o aumento significativo no mbito mundial desse fenmeno nos
ltimos anos, cujas consequncias incluem a maior morbidade e mortalidade e
alto custo de tratamento de doenas infecciosas
7
(WHO, 2011).
evidente a preocupao de vrias entidades sanitrias quanto ao assunto. A
OMS em 2001 publicou o relatrio "Estratgia Global para a Conteno da
Resistncia antimicrobiana onde estabelece recomendaes dirigidas desde
aos pacientes at os governos sobre vrios aspectos que devem ser adotados
para conter a resistncia antimicrobiana
8
(WHO, 2001). J no Brasil, em 2002,
a Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria do Ministrio da Sade publicou o
documento denominado "Uso Racional de Antimicrobianos que estabelecem
diretrizes quanto ao uso consciente de antimicrobianos
9
(BRASL, 2002).
A Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVSA) criou em 2004 um
instrumento informativo denominado Boletim nformativo da Rede Nacional de
Monitoramento da Resistncia Microbiana em Servios de Sade- Rede RM
que tem como funo primordial a orientao da adoo de medidas de
preveno e controle da resistncia microbiana em hospitais e outras
instituies. Aps sua criao, vrias atividades (cursos, seminrios, material
didtico) foram desenvolvidas para capacitar os profissionais de instituies e
hospitais filiados a Rede RM que aderiram para utilizao das padronizaes
para deteco dos testes de susceptibilidade aos antimicrobianos "Clinical and
Laboratory Standards nstitute (CLS)", e dos critrios diagnsticos das
infeces hospitalares "National Nosocomial nfections Surveillance (NNS)
System
10
(BRASL, 2007).
Frente ao contexto preocupante gerado pela resistncia bacteriana de igual
importncia a adoo de medidas que venham minimizar e reduzir a ocorrncia
desse fenmeno.
Entre as vrias medidas recomendadas, o desenvolvimento de novos
medicamentos antimicrobianos uma das principais estratgias para o controle
da resistncia bacteriana. Assim, estudos que visem o desenvolvimento de
novos prottipos a antimicrobianos so de grande importncia porque podem
subsidiar a pesquisa e desenvolvimento de novos agentes para a insero na
prtica clnica. Contudo, medida que a demanda por novos e eficazes
antibiticos cresceu nos ltimos anos, o desenvolvimento de novas drogas
diminui o que pode gerar, futuramente, uma dependncia exclusiva das classes
atualmente disponveis (KATZUNG, 2005).
Na ultima dcada percebeu-se que a indstria farmacutica retrocedeu o
desenvolvimento de novas molculas antibacterianas em diferentes fases
justificando um alto custo no processo, problemas relacionados segurana
alem de efetividade in vivo no compatvel com a efetividade constatada no
modelo in vitro fazendo com que o custo global no fosse vantajoso em termos
econmicos e por consequncia causando a reduo do numero total de novas
molculas de antibiticos (SPELLBERG, 2004).
Dados da DSA (nfectious Diseases Society of America) em 2004 concluem
que o problema da Resistencia aos antimicrobianos nas duas dcadas
passadas foi agravado por uma diminuio significativa no numero de
aprovaes de novos antibacterianos pelo FDA no perodo compreendido entre
os ltimos 10 a 15 anos (figura 1).
Figura 1: Novos agentes antibacterianos aprovados pelo FDA nos EUA entre 1983 a 2003.
Fonte: DSA (2004).
Segundo o Center for Disease Dynamics, Economics & Policy, em trabalho
intitulado The Antibiotic Pipeline de 2008, desde os anos de 1980 vem
declinando o numero de novas classes de antibiticos e a partir de 1968
somente cinco novos agentes foram disponibilizados no mercado (figura 2) e a
maioria dessas drogas se concentram em duas grandes classes: beta-
lactamicos e quinolonas (figura 3).
Figura 2: As 14 classes de antibiticos introduzidas para uso humano entre 1935 e 1968; desde
ento apenas cinco novas classes foram introduzidas no mercado.
Fonte: http://www.extendingthecure.org/sites/default/files/Policy_Brief6_May08_newdrugs.pdf.
Figura 3: Queda do numero de novos antibiticos desde 1980 e a maioria dessas drogas
pertencem s classes dos betalactamicos e quinolonas.
Fonte: http://www.extendingthecure.org/publication/antibiotic-pipeline.
Outras condies patolgicas so consideradas mais vantajosas em termos
econmicos pelas indstrias farmacuticas para concentrar as pesquisas e
favorecer o desenvolvimento de novos frmacos. Doenas crnicas,
debilitantes e no previamente tratadas e aquelas que causam impacto social
negativo e profundo no estilo de vida (disfuno ertil e distrbios depressivos,
por exemplo) causam uma perda de interesse em investimentos em novos
antibiticos (ALANS, 2005).
1.' MECANISMOS DE RESISTNCIA
A resistncia aos antimicrobianos pode ser de dois tipos: a natural (ntrnseca)
e a adquirida (extrnseca). A resistncia intrnseca aquela ligada ao
patrimnio gentico original do microrganismo, ou seja, surge em funo da
presena de genes de resistncia. A resistncia adquirida surge atravs de
mutaes, recombinaes genticas ou aquisio de genes de resistncia de
outros organismos. Os plasmdeos so determinantes na resistncia adquirida
(TENOVER, 2006) (GARCA, 2011).
Vrios so os mecanismos de resistncia que os microrganismos se utilizam
para afetar a ao dos frmacos, os principais incluem: Produo de
Betalactamases: enzimas responsveis pela hidrlise do anel beta-lactmico
de muitos antibiticos em uso clinico (Penicilinas e Cefalosporinas) (KNOX,
1996); Modificao do alvo: so mudanas estruturais nas Protenas Ligadoras
de Penicilina (PBPs) e Aumento do efluxo ou reduo do influxo por uma
bomba protica de transporte ativo: fenmeno que consiste na reduo da
concentrao do antibitico dentro da clula bacteriana por ao de uma
espcie de bomba de efluxo, codificada por plasmdeo (MARTN, 2002).
Alguns estudos sugeriram que a composio e organizao dos lipdeos de
membrana poderiam ser determinantes na aquisio de resistncia a certos
antibiticos como as tetraciclinas e polimixinas. A variao na composio e no
tipo de lipdeos poderia interferir na ligao e at mesmo entrada dos frmacos
no microrganismo alvo (DUNNCK & O'LEARY, 1969).
1.( USO RACIONA) DE MEDICAMENTOS ANTIMICROBIANOS E A
REDUO DO FEN*MENO DE RESISTNCIA
Os antibiticos so os medicamentos mais vendidos nos pases em
desenvolvimento (KUNN et al, 1987). O consumo em nvel mundial s
superado pelos medicamentos para doenas cardiovasculares (SMMONS,
1974). Mudaram dramaticamente a prtica mdica, pois cerca de um tero de
todos os pacientes internados receberam alguma terapia onde se incluam
antibiticos, resultando em milhes de vidas salvas, que certamente teriam sido
perdidas por causa de infeces (BRNBAUMER, 2000).
O uso excessivo e irracional desses medicamentos pode no s provocar o
surgimento de microrganismos patognicos resistentes, mas tambm pode
gerar grandes perdas econmicas e o aumento na manifestao de reaes
adversas na populao (GYSSENS, 2001).
Vrios fatores esto associados ao uso incorreto dos antibiticos, entre eles,
fatores econmicos, aqueles associados aos prescritores, incerteza diagnstica
e marketing das indstrias farmacuticas, tanto em pases desenvolvidos
quanto em pases em desenvolvimento (KUNN, 1990), (ORTON, 2001).
Os antimicrobianos so muitas vezes utilizados na pratica clinica de forma
profiltica, mas no so encontrados na literatura resultados suficientemente
vlidos que comprovem sua eficincia nessa situao. Essa quimioterapia
irracional ate os anos de 1970 era satisfatoriamente substituda por certas
combinaes de antibiticos tais como eritromicina e cloranfenicol, tetraciclina
e penicilina, novobiocina e tetraciclina entre outros (ECHENWALD, 1964).
Atualmente a terapia com um nico agente prefervel, pois reduz os riscos de
toxicidade e de interaes medicamentosas potencialmente perigosas, alm
disso, reduz o custo e a inconvenincia do tratamento e por consequncia
contribui para a melhor adeso e para o sucesso da antibioticoterapia. Mas
deve-se salientar que existem circunstncias em que a terapia multidroga de
antimicrobianos adequada e at mesmo essencial para a resoluo do
quadro patognico (SMPSON, 2002).
Considerando que h grande incidncia do fenmeno de resistncia
microbiana no ambiente hospitalar, caso de infeces nosocomiais, muitos
hospitais possuem polticas para orientao do uso de antibiticos, uso de
protocolos clnicos, por exemplo, para auxiliar escolhas racionais (TUNGER et
al, 2000).
Entre as medidas propostas pela Organizao Mundial da Sade para o
controle do avano da resistncia aos antibiticos no mundo inclui-se a
promoo do uso Racional de Medicamentos (WHO, 2001)
8
. Assim a
participao conjunta de todos os profissionais da sade para o uso correto,
adequado e oportuno desses frmacos de extrema relevncia. Alm disso,
reconhecido que a regulao da comercializao de antibacterianos contribui
sobremaneira para a conteno de seu uso indiscriminado (ALVAREZ
CASTELLO et al., 2008).
No Brasil, a ANVSA atravs da Resoluo da Diretoria Colegiada (RDC) n44
de 28 de Outubro de 2010 estabeleceu s critrios regulatrios para a venda de
antibiticos, estabelecendo a necessidade de prescrio para que esses
medicamentos sejam dispensados. A proposta central a diminuio da
automedicao e por consequncia o uso irracional dos antibacterianos
colaborando para processo de conteno da resistncia (BRASL, 2010). Esse
aumento na regulao foi de fundamental importncia, pois dados da ANVSA
apontavam para um uso de antimicrobianos de forma inapropriada em nveis
alarmantes e a regulao da venda de agentes antimicrobianos reconhecida
como uma importante medida para evitar o uso e abusos destes medicamentos
(GARCA, 2011).
1.+ DESEN,O),IMENTO DE NO,OS F-RMACOS E NO,OS
ANTIBACTERIANOS
A descoberta de novos frmacos envolve diferentes cincias. A Qumica e suas
subreas como a Qumica Orgnica at a Qumica Medicinal. Essa, tambm
conhecida como Qumica Farmacutica uma disciplina de base na qumica,
que envolve aspectos de natureza biolgica, mdica e cincias farmacuticas
de extrema relevncia no processo de desenvolvimento e estudo de novos
frmacos (WERMUTH et al, 1998).
Dessa forma, explorar os enfoques relacionados qumica orgnica das
substncias ativas nos processos de desenvolvimento ou descoberta, a
elucidao do mecanismo de ao e de desenvolvimento de agentes
teraputicos o objetivo de muitas pesquisas na rea da qumica farmacutica.
Neste sentido, reconhecida a contribuio e importncia das disciplinas de
qumica, bioqumica, biologia molecular, fisiologia e farmacologia tanto para o
desenvolvimento como para o aprendizado da Qumica farmacutica, que
ocupa, assim, posio estratgica na interface entre a qumica e a biologia
(MENEZES, 2005).
A Qumica farmacutica preocupa-se com vrios aspectos relacionados aos
compostos biologicamente ativos desde a sua inveno, descoberta, "design,
identificao e preparao at o estudo do seu metabolismo, a interpretao do
modo de ao a nvel molecular e a construo das relaes estrutura-
atividade Assim, essas substncias candidatas a frmacos e os
frmacos propriamente ditos so o centro do estudo da qumica
farmacutica. Esse processo de investigao exige a participao de
diversos profissionais e integrao de conhecimentos de vrias reas do
conhecimento, demonstrando a interdisciplinaridade da qumica farmacutica
(WERMUTH et al, 1998).
A Qumica farmacutica tambm estuda o processo de sntese e procura
racionalizar uma sequncia de etapas sintticas objetivando rendimentos
melhores, maior grau de pureza, economia no processo sinttico e a incluso
de reaes chave que possibilite alcanar tais objetivos. Portanto, a sntese de
substncias com atividade biolgica, aqueles que em sua maioria so anlogos
ou modificaes de substncias prottipos de produtos naturais, vem sendo o
alvo de inmeras pesquisas, bem como a construo de molculas em seus
diversos nveis de complexidade a preocupao central da sntese de
frmacos que constitui um importante captulo da qumica orgnica e
consequentemente da qumica farmacutica (MENEGATT et al ,2001).
O desenvolvimento de novos frmacos requer muitas vezes a modificao
estrutural de muitos compostos orgnicos prottipos, para que se obtenha
determinada atividade biolgica. Dentre essas modificaes incluem a
formao de ligaes carbono-carbono (LAROCK, 2005).
Na literatura crescente o nmero de trabalhos publicados, de rotas sintticas
ou semi-sintticas para a construo dessas novas molculas dentre elas
aquelas com potencialidade biolgica. Com isso, assumem papel de destaque
as metodologias para a formao de ligao carbono-carbono. Muitas vezes
essas metodologias constituem a etapa chave na construo de uma
substncia sinttica desejada. A cadeia carbnica a base para a construo
das molculas mais simples at as mais complexas (CAREY & SUNDBERG,
2001).
Nesse contexto, existem vrias metodologias para a formao de ligao
carbono-carbono, sendo muitas desenvolvidas mais recentemente, entre as
quais se destacam: a reao de Grignard, a reao de Reformatsky, a reao
de adio de Michael, a condensao de Claisen, a anelao de Robinson, a
reao de acoplamento pinacol, a reao de Wittig, a reao de Petasis, a
reao de Mukaiyama, a alquilao e acilao de Friedel- Crafts. Podem-se
citar tambm algumas reaes que so catalisadas por vrios tipos de metais
ou em alguns casos por molculas orgnicas (casos de organocatlise) tais
como, as reaes de Heck e de Stille, a reao de Diels-Alder e a reao de
Morita-Baylis-Hillman (MBH). Esta ltima encontra-se hoje em ascenso na
qumica orgnica que visa sntese de novos compostos (SLVA & JONES JR,
2001).
Considerando a importncia da oferta de novas molculas de antibiticos 'e de
grande importncia investimentos em pesquisas e incentivo para colaborao
entre empresas privadas e instituies acadmicas e de pesquisa (ALANS,
2005).
O estudo da relao estrutura-atividade (EREA) de agentes antibacterianos
envolve a qumica medicinal e a biologia molecular e constitui um passo
extremamente importante no desenvolvimento de novas molculas alem disso
sabe-se que a progressiva otimizao de processos sintticos e de EREA
resultaram na melhoria da atividade antibacteriana, farmacocintica e fatores
relacionados a tolerncia de muitas classes de antibacterianos atualmente
comercializados (BRYSKER, 2006).
1.. REAO DE MORITA BA/)IS"0I))MAN
1.6.1 CONSDERAES GERAS
A reao de Morita-Baylis-Hillman surge como uma reao que auxilia na
obteno de ligao do tipo sigma carbono-carbono, tornando essa
modificao estrutural uma das reas mais desafiadoras e fascinantes da
qumica orgnica (BASAVAAH et al, 2007). Trata-se de uma reao qumica
onde ocorre a formao de uma nova ligao o (sigma) carbono-carbono
atravs da condensao entre carbonos eletroflicos de configurao sp de
uma substncia carbonilada (aldedo geralmente) e a posio d de uma olefina
ativada (consequncia da presena de grupos retiradores de eltrons),
catalisada por fosfinas ou aminas tercirias, conforme mostrado no esquema 1
(MORTA, 1968), (BAYLS e HLLMAN, 1972).
R
1
O
H
R
2
+ R
1
OH
R
2
catalisador
12C34
'
2M!rita4
DABCO 2Ba35i$ # 0i55%an4
Esquema 1: Reaes descritas por Morita, Baylis e Hillman.
1.6.2 MECANSMO REACONAL
O mecanismo inicialmente proposto para a reao de MBH envolve quatro
etapas (Esquema 2). Na primeira etapa, ocorre uma adio de Michael do
catalisador (amina terciria ou fosfina) ao sistema d,-insaturado , gerando o
zwitterion . A condensao aldlica entre e o aldedo V gera o alcxido V,
que sofre uma transferncia de prton, em um estado de transio cclico de
quatro membros, para fornecer o enolato V. Neste estgio, ocorre eliminao
da base levando ao produto d-hidroxi--metileno carbonilado V (aduto de
MBH), com regenerao do catalisador , que volta ao ciclo cataltico.
O
6
R
'
N 6
O
R
1
6
O O
NR
'
R
1
6
O O0
NR
'
R
1
6
O O0
Etapa 1
Etapa 2
Etapa 3
Etapa 4
2I4
2II4
2III4
2I,4
2,4
2,I4
2,II4
R
1
0
O
R
'
N
0
Esquema 2: Mecanismo de Morita-Baylis-Hillman, inicialmente proposto.
Para que se apresente como uma metodologia de sntese, para
desenvolvimento de novos frmacos, dentre eles antimicrobianos, a reao de
Morita-Baylis-Hillman apresenta algumas caractersticas que torna vantajosa a
sua adoo: pode ser efetuada em verses inter e intramolecular, quimio, regio
e estereosseletiva, pois o aduto de Morita-Baylis-Hillman (MBH) quando
formado gera pelo menos um centro estereognico(COELHO e ALMEDA,
2000).
Outra vantagem da RMBH a aplicao dos princpios de "Qumica Verde,
como elevada economia de tomos, impacto ambiental reduzido devido ao
baixo nvel de resduos gerados na reao, baixo nmero de etapas, maior
grau de funcionalizao til e condies reacionais brandas caracterizando a
reao como uma transformao sustentada (ANASTAS e WARNER, 1998) (
HORVATH, 2007).
Assim, devido a essas caractersticas e considerando a relevncia da
otimizao de mtodos sintticos para que se desenvolvam novas molculas
com potencialidade farmacolgica, a Reao de Morita-Baylis-Hillman surge
como uma importante alternativa em sntese orgnica e de mltipla
aplicabilidade na qumica farmacutica moderna. Nesse aspecto pode-se
afirmar que a reao de MBH uma das transformaes de maior economia de
tomos que se conhece em qumica orgnica (GOMES, 2010).
1.6.3 ADUTOS DE MORTA-BAYLS-HLLMAN E SUAS APLCAES
A reao de MBH fornece molculas poli-funcionalizadas que as transformam
em interessantes substratos para a sntese de produtos naturais, substncias
biologicamente ativas e de prottipos candidatos a frmacos (COELHO e
ALMEDA, 2000).
Os adutos de Morita-Baylis-Hillman apresentam como principal caracterstica a
presena de trs grupos funcionais proximos, o que os transforma em
potenciais substratos para a sntese total de frmacos e molculas
biologicamente ativas (BASAVAAH et al, 2007).
Varios compostos de interesse farmacolgico foram sintetizados a partir de
AMBH como, por exemplo, o Captopril, Cloranfenicol, Fluoranfenicol,
Tianfenicol, Norfloxacina entre outros compostos (figura 4).
Figura de compostos sintetizados a partir de AMBH
2 OB7ETI,OS
2.1OBEJETVOS GERAS
O presente Trabalho de Concluso de Curso teve por objetivo geral sintetizar
adutos de Morita-Baylis-Hillman (MBH), carcateriz-los por RMN e
posteriormente submet-los a uma avaliao da atividade antibacteriana.
2.2 OBJETVOS ESPECFCOS
Neste trabalho de Concluso de Curso objetivou-se especificamente aplicando
os conhecimentos adquiridos no curso de farmcia e de acordo com rea afim
ao mesmo:
Sintetizar alguns adutos de Morita-Baylis-Hillman que apresentem
substituintes heteroaromticos e aromticos em suas estruturas e
grupos doadores de eltrons nesses sistemas;
Caracterizar os adutos sintetizados por mtodos fsicos;
Bioavaliar in vitro a atividade antibacteriana dos adutos sintetizados
' METODO)O8IA DO TRABA)0O
3.1ADUTOS DE MORTA BAYLS-HLLMAN (AMBH)
nicialmente foi proposta a sntese de 11 adutos. Contudo, devido
indisponibilidade dealguns dos aldedos de partida para a sntese de 3 dos
adutos, foi feita a excluso de uma molcula e a substituio de outras duas.
Salienta-se que as novas molculas apresentam as caractersticas de interesse
para o trabalho, nesse caso, trata-se de molculas aromticas e/ou
heteroaromticas.
Os adutos foram sintetizados utilizando metodologia j bem estabelecida pelo
grupo de pesquisa do Laboratrio de Sntese de Produtos Naturais e Frmacos
do Departamento de Qumica Orgnica do nstituto de Qumica da
Universidade Estadual de Campinas (COELHO et al, 2002).
Figura x. Molculas propostas inicialmente no trabalho.
Figura com os adutos sintetizados
Esses adutos apresentam em suas estruturas algumas caractersticas que
permitiu antever um bom perfil antibacteriano para cada um deles. De maneira
geral esses adutos apresentam atividade antiproliferativa (COELHO, 2002)
bastante pronunciada. Acredita-se, baseado nesse precedente que eles
tambm devem apresentar atividade antibacteriana. A atividade antiproliferativa
est baseada na presena do sistema alfa-beta insaturado e da substituio
por grupos doadores e retiradores de eltrons no anel aromtico. A presena
de um sistema insaturado caracteriza esses produtos como bons aceptores de
Michael, o que pode explicar, em parte, a atividade antiproliferativa. Essas
substncias apresentam tambm elevadas cito toxicidade, o que as qualificam
para testes com agentes antibacterianos. O grupo nitro est presente em um
antibacteriano muito utilizado no combate de algumas infeces bacterianas
especificas o cloranfenicol. Assim essa analogia levou a sntese de derivados
contendo um grupo nitro em duas posies diferentes. Alem disso sabe-se que
outros frmacos antibacterianos apresentam ncleos aromticos ou
heteroaromticos o que subsidia a inteno bsica desse projeto.

3.2 METODOLOGA PARA O PREPARO DOS AMBH
A metodologia para o preparo dos adutos de MBH foi a utilizada pelo grupo de
pesquisa do LSPNF Q-UNCAMP (COELHO, 2002). E consiste basicamente
em utilizar como alqueno ativado o acrilato de metila ou acrilonitrila juntamente
ao aldedo ativado de partida dissolvido e utilizando como catalizador o
DABCO, em temperatura ambiente.
A mistura reacional foi monitorada por Cromatografia em Camada Delgada
(CCD). Aps o termino da reao, o excesso de acrilato ser evaporado sob
presso reduzida e o produto ser seco com sulfato de sdio anidro.
Posteriormente haver a purificao em coluna cromatogrfica com gradiente
de eluio apropriado de hexano:acetato de etila. As separaes
cromatogrficas do tipo "flash sero realizadas em colunas utilizando gel de
slica Merck de granulao 0,040 0,0063 mm.
O acompanhamento das separaes cromatogrficas e dos processos
reacionais foi realizado sobre cromato folhas de alumnio de gel de slica 60
Kieselgel (E. Merck) irradiadas com ultravioleta a 245 nm.
3.3 CARACTERZACAO DOS AMBH
Todos os adutos sintetizados foram caracterizados por Ressonncia Magntica
Nuclear de
1
H e
13
C a 250 MHz. Os espectros de nfravermelho (R) tambm
foram obtidos e caracterizados. Os dados obtidos sero comparados com os
dados de literatura para os casos no inditos.
Os espectros de RMN
1
H e RMN
13
C foram obtidos em um aparelho Varian
Mercury Spectra AC 20 (250 MHz para
1
H e 83,33 MHz para
13
C) em CDCl
3
com tetrametilsilano (TMS) como padro interno. As multiplicidades referentes
a cada absoro so expressas da seguinte forma: singleto (s), singleto largo
(sl), dubleto (d), multipleto (m), tripleto (t), duplo dubleto (dd) e duplo duplo
dubleto (ddd). As multiplicidades dos sinais dos carbonos sero observados
pelo uso da tcnica de APT (CDCl3).
3.4 AVALACAO DA ATVDADE ANTBACTERANA
3.4.1 CRESCMENTO BACTERANO
As linhagens bacterianas da Tabela 1 foram crescidas em BH Agar. As
condies de crescimento foram de 37C durante um perodo de 18 24 horas.
Os testes de atividade antibacteriana dos compostos sintetizados nesse
trabalho sero realizados em meio slido (antibiograma) e lquido (Mnima
Concentrao nibitria) de Mueller Hinton. Sero seguidas para os testes as
especificaes prescritas no Manual de testes de sensibilidade a agentes
antimicrobianos da ANVSA (BRASL, 2003), desenvolvido mediante normas de
ao globais do NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory
Standards).
3.4.2 TESTE DE SENSBLDADE BACTERANA (ANTBOGRAMA) E
DETERMNAO DA MNMA CONCENTRAO NBTRA (MC)
Uma alquota de 10 l de cada composto na concentrao de 100 g/mL em
DMSO ser depositada assepticamente sobre um disco de filtro esterilizado
(Wattman n3) com dimetro de 5 mm e levado estufa a 37C durante 24
horas para a eliminao do solvente. Em seguida o disco ser depositado
sobre uma placa de Petri contendo o meio de cultura previamente inoculado
com uma das linhagens bacteriana da Tabela 1, tambm conforme as
especificaes da ANVSA, j citada acima. Para isso 200 L de uma
suspenso bacteriana em soluo salina a 0,9% ser adicionada sobre o meio
de cultura e espalhada com o auxlio de ala de Drigalsky devidamente
esterilizada.
Para a obteno do controle negativo, o mesmo procedimento ser empregado
para o DMSO.
As placas sero incubadas segundo as especificaes de cada linhagem
bacteriana e a leitura realizada 18-24 horas de incubao verificando-se se h
formao de halos de inibio.
Para os compostos que apresentarem atividade antibacteriana, a determinao
da Mnima Concentrao nibitria ser realizada atravs de diluies seriadas
de 12,5, 25, 50, 100, 250, 500, 1000 g/ml e exposio s devidas linhagens
bacteriana em condies especficas para cada uma.
( RESU)TADOS E DISCUSSAO
(.1 RENDIMENTOS DAS SINTESES
(.2 ANTIBIO8RAMAS
(.'DETERMINACAO DA CONCENTRACAO MINIMA INIBITORIA
+ CONC)USOES
. 1ARTE E61ERIMENTA) DO TRABA)0O
..1 1RE1ARO DOS AMB0
..2 1URIFICACAO
..'IDENTIFICACAO
..( ANTIBIO8RAMA E MIC
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