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Manual de prcticas de Inmunologa

UNIVERSIDAD JUAREZ AUTONOMA DE TABASCO

DIVISION ACADEMICA DE CIENCIAS AGROPECUARIAS MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

MANUAL DE PRACTICAS DE INMUNOLOGA (F1116)

ELABORACION: Gerardo Cansino Arroyo Guadalupe Arjona Jimnez

REVISION:

REVISION: CONSEJO TCNICO Alma Catalina Berumen Alatorre

APROBACIN

VILLAHERMOSA, TABASCO ENERO DE 2013 Pgina 1 de 27

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Directorio UNIVERSIDAD JUREZ AUTNOMA DE TABASCO Dr. Jos Manuel Pia Gutirrez
Rector

Dra. Dora Mara Fras Mrquez

Secretaria de Servicios Acadmicos

M.A. Rubicel Cruz Romero

Secretario de Servicios Administrativos

DR. Wilfrido Miguel Contreras Sanchez

Secretario de Investigacin, Posgrado y Vinculacin

L.C.P. Marina Moreno Tejero

Secretara de Finanzas

M.A. Pnfilo Morales de la Cruz

Contralor General

DIVISIN ACADMICA DE CIENCIAS AGROPECUARIAS M. A. A. Alma Catalina Berumen Alatorre

Directora

Dr. Rodolfo Osorio Osorio

Coordinador de Investigacin y Postgrado

Dr. Carlos Corzo Sosa

Coordinador de Docencia
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INDICE
DESCRIPCIN PG .

PRESENTACIN............................ 1 2 3 4 PROPSITOS DEL SISTEMA DE PRCTICAS. DESCRIPCIN DEL SISTEMA DE PRCTICAS....... NORMATIVIDAD.. RECOMENDACIONES GENERALES DE SEGURIDAD...... PRCTICAS 1 CLULAS DEL LINAJE INMUNOLGICO Inmunidad Natural CONTEO LEUCOCITARIO Inmunidad Natural. FAGOCITOSIS Inmunidad Natural.. COMPLEMENTO C3 Inmunidad Natural COMPLEMENTO C4 Inmunidad Natural BRUCELOSIS: Aspectos generales y Serodiagnstico. Prueba 6 rpida en placa con antgeno Rosa de Bengala ROSA DE BENGALA (Card Test) BIBLIOGRAFA

4 5 7 9 12

14

2 3 4 5

16 19 21 23

24 27

NUMERO DE ALUMNOS POR PRCTICA: es variado, sin embargo se requiere un mnimo de 5 alumnos por prctica para su correcta realizacin.

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PRESENTACIN
La formacin de un estudiante, se complementa con los conocimientos tericos y prcticos, siendo stos ltimos, los que afirman lo adquirido en el seno de las aulas; de esta forma, se busca la formacin integral del aprendiz, mediante una serie de prcticas que refuerzan sus conocimientos.

A travs el complemento del conocimiento, es necesario considerar los aspectos visuales e intuitivos que estimulan al estudiante en su capacidad inherente de creatividad, discernimiento, construccin, reconstruccin, organizacin interna y externa de lo aprendido, considerando as mismo, las limitaciones de cada uno.

En la elaboracin de este Manual, se busca mantener la coherencia con el modelo educativo vigente, motivando al estudiante a la reflexin de su proceso de desarrollo y formacin futura, coadyuvando as a la formacin de un individuo crtico,

comprometido con los cambios, reelaborando sus valores y creencias, respetando a los dems y preservando el medio en el que vive.

Mediante esta visin fue como se estructur este Manual de Prcticas, considerando en sus aspectos generales, relacin que guarda con el contenido del programa de la asignatura de inmunologa, impartida en el Programa Educativo de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Incluye 5 prcticas que complementan los conocimientos de la asignatura. En la medicina veterinaria una de las asignaturas destacadas y que llevan a un mayor entendimiento de las enfermedades de los animales es la inmunologa, ya que al adquirir conocimientos de procesos inflamatorios y las clulas que participan en la respuesta inmune de un organismo vivo, la realizacin de llevar a cabo las practicas es para que el alumno relacione la teora, y sea mayor la comprensin de la asignatura.

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1. PROPSITOS DEL SISTEMA DE PRCTICAS

La asignatura de inmunologa tiene como objetivo principal proporcionar al alumno los conocimientos necesarios sobre los temas que en ste manual se exponen. En cuanto a la competencia profesional de Sistemas de Prcticas el alumno estar capacitado para tener el fundamento necesario para la comprensin de materias que le ante-proceden como son la anatoma, biologa celular, bioqumica y manejo del bienestar animal. Dando como resultado que el alumno tenga el conocimiento necesario, para desarrollar actividades de competencia en el campo laboral de su rea profesional de la Licenciatura de Medicina Veterinaria.

Las prcticas podrn realizarse en el laboratorio multidisciplinario de la esta institucin. Ya que dicha prctica vista desde este sistema nos ayudar a definir claramente las destrezas y actitudes que el alumno deber tener para afrontar cada una de las competencias aqu expuestas.

Las prcticas de la materia sern realizadas en el rea de los laboratorios de la Divisin Acadmica de Ciencias Agropecuarias; Que se encuentran a disposicin de los alumnos dentro de las instalaciones de la Universidad Jurez Autnoma de Tabasco.

Conocimientos tericos requeridos para abordar la prctica. Se requieren conocimientos previos de Fisiologa, Anatoma, Biologa celular, Bioqumica.

DESCRIPCIN DEL SISTEMA DE PRCTICAS: Estructura del sistema de prcticas:

Presenta un informe detallado del nmero, nombre, competencia, tiempo de duracin de la prctica y fecha. Las prcticas llevan un orden lgico y el estudiante necesita llevarlas todas para acreditar el curso. Pgina 5 de 27

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1.1

Niveles de Desempeo
El grado de responsabilidad que lograr el individuo al desarrollar cada una de las siguientes prcticas.

Nivel 1. Se realizan funciones rutinarias de baja complejidad. Se reciben instrucciones. Se requiere baja autonoma. Nivel 2. Se realiza un conjunto de significativo de actividades de trabajo, variadas y aplicadas en diversos contextos. Algunas actividades son complejas y no rutinarias. Presenta un bajo grado de responsabilidad y autonoma en las decisiones. A menudo requiere colaboracin con otros y trabajo en equipo. Nivel 3. Se requiere un importe nivel de toma de decisiones. Tiene bajo su responsabilidad recursos materiales con los que opera su rea. As como control de recursos financieros para adquisicin de insumo. Nivel 4. Se desarrollan un conjunto de actividades de naturaleza diversa, en las que se tiene que mostrar creatividad y recursos para conciliar intereses. Se debe tener habilidad para motivar y dirigir grupos de trabajo. Nivel 5. Se desarrollan un conjunto de actividades de naturaleza diversa, en la que se tiene que mostrar un alto nivel de creatividad, as como buscar y lograr la cooperacin entre grupos e individuos que participan en la implementacin de u n problema de magnitud institucional.

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2. DESCRIPCIN DEL SISTEMA DE PRCTICAS

2.1 Estructura del Sistema de Prcticas Informa del nmero, nombre y duracin de cada prctica, as como el lugar fsico de donde se llevar a cabo sta. De la misma manera explica en forma muy simplificada el criterio de desempeo de cada prctica, esto se refiere especficamente hasta donde el alumno es competente al trmino de cada prctica. Cuadro 1. Programacin de prcticas. N de prctica 1 Nombre de la prctica CLULAS LINAJE INMUNOLGICO Inmunidad Natural 2 CONTEO LEUCOCITARIO Inmunidad Natural 3 FAGOCITOSIS Inmunida Natural Instalaciones DACA. Instalaciones DACA. Que el alumno sepa interpretar un conteo leucocitario, describir el tipo de respuesta inmune. Que el alumno identifique las 4 horas 4 horas DEL Instalaciones DACA. Que el alumno identifique los distintos tipos clulas que intervienen en la inmunidad natural. 4 horas Tipo Criterio de desempeo Duracin

clulas fagocticas y entienda la importancia de este proceso para que se implemente una respuesta adquirida.

COMPLEMENTO C3 Inmunidad Natural

Instalaciones DACA.

Que

el

alumno del

comprenda sistema

la del

4 horas

importancia

complemento en un diagnostico, 5 COMPLEMENTO C4 Inmunidad Natural Instalaciones DACA Que el alumno del adquiera del 4horas

conocimientos

sistema

complemento y su importancia en la respuesta inmune. 6 BRUCELOSIS: Aspectos generales y Pgina 7 de 27 Instalaciones DACA. Que el alumno sea capaz de aplicar una prueba diagnostico en base a 4horas

DACA-UJAT Serodiagnstico. Prueba placa rpida con en

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una respuesta inmunolgica.

antgeno

Rosa de Bengala ROSA DE BENGALA (Card Test)

Cada prctica se evaluar en el momento de hacerla e individualmente, se tomarn en cuenta: Desempeo. Cooperacin. Competencia. Limpieza. Orden. Presentacin del reporte escrito. PROGRAMA DE PRCTICAS CON CALENDARIO:

PRACTICA.

TEMA. DINAMICA DE PRESENTACIN.

SEMANA.

Practica nmero uno.

CLULAS

DEL

LINAJE

Semana uno.

INMUNOLGICO Inmunidad Natural Practica nmero dos. CONTEO Inmunidad Natural Prctica nmero tres. FAGOCITOSIS Inmunidad Natural Semana seis. LEUCOCITARIO Semana cuatro.

Prctica nmero cuatro. Prctica nmero cinco Prctica nmero seis Pgina 8 de 27

COMPLEMENTO Natural

C3

Inmunidad

Semana ocho.

COMPLEMENTO C4 Inmunidad Natural BRUCELOSIS: Aspectos generales y Serodiagnstico.Prueba rpida en

Semana doce. Semana quince.

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placa con antgeno Rosa de Bengala ROSA DE BENGALA (Card Test)

El personal que trabaja en esta rea est expuesto a adquirir enfermedades, lo cual se debe reducir al mnimo al igual que los riesgos de lesiones y de contagio asociado a dichas prcticas. Esto que aparentemente es una debilidad en el sistema acerca al estudiante a una realidad en la que va actuar la mayora de las veces en el desempeo profesional.

Requisitos Indispensables: 1.- Deben estar vacunados contra ttanos, etc. 2.- Deben contar con bata o filipina. 3.- Deben usar guantes desechables para la manipulacin de muestras de sangre. 4.-No ingerir alimentos, fumar ni consumir bebidas alcohlicas durante la Prctica. As como guardar comportamiento adecuado. 5.- Conservar sus equipos de exploracin limpios y desinfectados. 6.- No dejar basura ni equipos utilizados en el lugar de la prctica. 7.- Se debe levantar una hoja de registro de actividades. 8.- Hacer un reporte escrito despus de haber terminado la prctica. 9.-Lavarse las manos y todo el instrumental despus de haber realizado la prctica.

3. NORMATIVIDAD

PRACTICAS GENERALES DE SEGURIDAD REGLAMENTOS 1.- Requisito indispensable: Antes de realizar cada prctica leer cuidadosamente el protocolo de la prctica para familiarizarse con el trabajo que va a desarrollar. Al conocer el protocolo disminuye la posibilidad de que ocurran accidentes y adems puede aprovechar el tiempo de manera eficaz. Pgina 9 de 27

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2.- Prohibido: Comer, beber, fumar y distraer al Profesor a la hora de la prctica y el acceso a toda persona ajena al rea. 3.- Proteccin: Llevar el equipo de proteccin personal necesario. Esto garantiza que cualquier accidente que pueda ocurrir sea de menor gravedad, de no acatar las reglas no se permitir acceso a la prctica. 4.- Material y Equipo: Aportado por el alumno: Debe llevar aquellos materiales estrictamente necesarios para la prctica que va a desarrollar. Aportado por la Institucin: Ser solicitado con tiempo suficiente antes de la prctica y ser entregado mediante un vale al alumno. Ser cuidadoso con todo el material y equipo que utilice para evitar accidentes y deterioro del mismo en las prcticas. 5.- Limpieza: Dentro del rea que se va a trabajar se comienza limpiando el rea de trabajo y se repite este procedimiento despus de que se haya terminado. El material de desecho depositarlo en el lugar que corresponde y el material reutilizable lavarlo y desinfectarlo. 6. Higiene: Durante la sesin de trabajo lavarse las manos con agua y jabn antes de hacer cualquier procedimiento y al finalizar repita el mismo procedimiento para mantener buenas condiciones higinicas. 7. Solventes: Si trabaja con sustancias, evite inhalarlo. 8. Desechos: Si utiliza guantes, frascos de medicamentos vacos, jeringas, cubre bocas, portaobjetos, cubreobjetos, etc., no reciclar y desecharlos. 9. Indisciplina: Se sancionara con la anulacin de la prctica o expulsin parcial o total del alumno, segn el caso lo requiera. 10. Responsabilidades: En caso de accidente o lesin, avisar inmediatamente al profesor o responsable de la prctica para que pueda auxiliar con rapidez y eficacia al alumno.

PROCEDIMIENTOS DE SEGURIDAD INDUSTRIAL: Reglamento del rea: El ingreso al rea, estar limitada exclusivamente al personal que demuestre tener alguna actividad que realizar en el mismo. Pgina 10 de 27

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El personal que deba ingresar al rea de trabajo deber cumplir con las normas de seguridad y bioseguridad detalladas en el presente manual; respecto del equipo de proteccin personal requerido y normas de conducta dentro del mismo. Es responsabilidad de todo usuario que el rea, se mantenga limpia as como el material utilizado despus de cada actividad y hacer buen uso del equipo e instalaciones de rea. Penalizaciones aplicables segn la gravedad de la falta

FALTA Ingreso sin autorizacin.

SANCIN Llamada de atencin y registro del incidente en la bitcora.

Observar mala conducta dentro Expulsin del rea y registro del incidente en del rea. la bitcora.

Dejar material y las instalaciones Negarle el acceso en ocasiones posteriores sucias. y registro del incidente en la bitcora. SEALIZACIN SEGN NOMS.

Identificar las NORMAS OFICIALES MEXICANAS que observen equipamiento de seguridad personal: Indumentaria y condiciones fsicas y de higiene personal requeridas para el acceso al taller, laboratorio o rea funcional, y su importancia en consideracin a la proteccin integral del individuo y la proteccin a los procesos llevados a cabo.

No. DE LA NORMA NOM-017-STPS-1994

NOMBRE DE LA NORMA Relativa al equipo

PROCEDENCIA de Secretara del trabajo, y

proteccin personal para los Previsin Social (1994). trabajadores en los centros de trabajo. NOM-020-STPS-1994 Relativa a los medicamentos Secretara del trabajo y Previsin Social.

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Identificar las Normas Oficiales que se observen la preservacin y disposicin de insumos txicos y/o peligrosos: que se estilicen en la unidad productiva, etc. Los efectos que los hacen peligrosos o txicos y que procedimiento se adoptaran para su control.

No. DE LA NORMA NOM-110-STPS-1994

NOMBRE DE LA NORMA

PROCEDENCIA

Relativa a las condiciones de Secretara del trabajo y seguridad. Previsin Social. PROCEDENCIA

No. DE LA NORMA NOM-062-ZOO-1999

NOMBRE DE LA NORMA

Especificaciones tcnicas SAGARPA para la Produccin, Cuidado y Uso de los Animales de Laboratorio.

La funcin de SAGARPA nos indica el cuidado y uso de los animales de laboratorio mediante la aplicacin de tcnicas tendientes a garantizar la produccin proteger la salud y favorecer el buen uso de los animales.

4. RECOMENDACIONES GENERALES DE SEGURIDAD

REGLAMENTO DEL REA DE MEDICINA Y PRODUCCIN AVCOLA REGLAMENTO INTERNO VILLAHERMOSA, TABASCO ENERO 2013

SOBRE EL PERSONAL.

1. El

personal deber usar la ropa adecuada al momento de entrar

al

rea de trabajo y laboratorio: Guantes Cubre boca Bata o filipina Zapatos cerrados

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2. Los integrantes del equipo debern permanecer dentro del rea durante la prctica y conocer sus deberes para ejecutarlos en forma conveniente. 3. Los casos clnicos en general se rotaran en los equipos existentes los cuales debern contar con su equipo propio en caso de alguna necesidad y ajustarse a las normas de requisicin de material. 4. Cada equipo ser el responsable de cada caso hasta la recuperacin del paciente y deber informar de esto al profesor. 5. Dentro del rea se debern seguir las siguientes normas: No Fumar, No Introducir Alimentos, Guardar Silencio y No Manchar las Instalaciones con materiales ajenos a ellas. 6. En caso de errores o dudas preguntar inmediatamente al profesor. 7. En el interior del rea solo se aceptara la presencia de los miembros del equipo y el maestro o asesor de la actividad. 8. Al trmino de la actividad el quipo deber dejar limpia el rea de trabajo (pisos, mobiliario y botes de basura).

DE LA REQUISICIN DEL MATERIAL

1.- Antes de la prctica se deber solicitar: Hoja de registro numerada Formato de requisicin del material 2.- La hoja registro se llenara correctamente durante la actividad y se devolver al termino de esta, la hoja de requisicin ser firmada por el Profesor. 3.- Al retirarse del rea debern llenar la bitcora correspondiente.

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PRACTICA N 1
CLULAS DEL LINAJE INMUNOLGICO Inmunidad Natural OBJETIVO Diferenciar el sistema de defensa del organismo humano, desde su origen hasta el foco de infeccin o el encuentro con el antgeno. FUNDAMENTO Los leucocitos (glbulos blancos) son clulas que circulan por la sangre con la funcin de combatir infecciones o cuerpos extraos. Son parte de las defensas inmunitarias del organismo, pero en ocasiones pueden atacar los tejidos normales del cuerpo. Existen dos grupos de leucocitos: los granulocitos (neutrfilos, basfilos y Eosinfilos) y los agranulocitos (monocitos y linfocitos). Los neutrfilos defienden el organismo contra bacterias y otros microorganismos. Se les puede denominar neutrfilos en banda o segmentados, dependiendo de si presentan o no divisiones de sus ncleos en 3 a 5 lbulos. Si el nmero es mayor, se habla de neutrfilos hipersegmentados. Los basfilos poseen grnulos de heparina e histamina, mediadores de la inflamacin. Actan en estados de hipersensibilidad retardada. La liberacin masiva del contenido de sus grnulos puede causar choque anafilctico, mortal si no es controlado. Los Eosinfilos poseen actividad fagoctica: se comen los agentes extraos. Sus grnulos tienen sustancias que degradan lo fagocitado, sobre todo las larvas de parsitos. Adems, inician y regulan las reacciones alrgicas. Los monocitos poseen actividad fagoctica bactericida. Ante estmulos qumicos pueden seguir a los neutrfilos. Pueden fijarse a tejido de bazo, hgado y pulmn, dando lugar a macrfagos tisulares que forman el sistema retculo-endotelial, encargado de remover material extrao circulante en sangre. Los linfocitos B constituyen la memoria del pool linfocitario circulante (10%- 20%). Maduros, pasan de la mdula sea a la sangre y se dirigen hacia los rganos linfticos perifricos para ubicarse en los folculos linfoides. Bajo estmulo antignico, Pgina 14 de 27

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se activan y proliferan formando el centro germinal en el interior del folculo linfoide. Pueden seguir un proceso de estimulacin hasta transformarse en inmunoblastos, y stos en clulas plasmticas secretoras de inmunoglobulinas. Pueden tambin regresar al estado pequeo linfocito B con memoria inmunolgica, para pasar a formar parte del manto o corona. Los linfocitos T forman una poblacin mayoritaria. En el adulto normal oscilan entre 65% y 75%, con variaciones segn la edad. Ejercen sus efectos mediante la liberacin de protenas solubles, citocinas, encargadas de la transmisin de seales a otras clulas, o bien mediante interacciones directas con otras clulas. MUESTRA Sangre venosa con anticoagulante EDTA. Tubo morado MATERIAL Agujas Jeringas Torundas Torniquete Alcohol Microscopio ptico Portaobjetos Tincin de Wright Aceite de inmersin Papel para microscopio MTODO 1) Mezclar la sangre durante 3 minutos. 2) Realizar un frotis sanguneo. Poner una gota de sangre sobre un portaobjetos y con otro portaobjetos limpio, se deslizara la gota sin hacer presin, pero uniforme. Dejar secar y despus se fija con metanol, sumergindolo y sacndolo rpidamente, despus se introducir en el Pgina 15 de 27

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colorante de eosina( rojo) por 15 segundos, se enjuaga y luego se introducir en el colorante azul de policromo por 15 segundos se enjuaga y se deja secar. 3) Leer en el microscopio bajo objetivos 10x y 40x. 4) Identificar las clulas y anotar los resultados.

PRACTICA N 2
CONTEO LEUCOCITARIO Inmunidad Natural OBJETIVO Comprender la importancia de las clulas inmunolgicas con relacin a la presencia de agentes agresores o lesiones. FUNDAMENTO Los leucocitos (glbulos blancos) son clulas que circulan por la sangre con la funcin de combatir infecciones o cuerpos extraos. Son parte de las defensas inmunitarias del organismo, pero en ocasiones pueden atacar los tejidos normales del cuerpo. Existen dos grupos de leucocitos: los granulocitos (neutrfilos, basfilos y Eosinfilos) y los agranulocitos (monocitos y linfocitos). Los neutrfilos defienden el organismo contra bacterias y otros microorganismos. Se les puede denominar neutrfilos en banda o segmentados, dependiendo de si presentan o no divisiones de sus ncleos en 3 a 5 lbulos. Si el nmero es mayor, se habla de neutrfilos hipersegmentados. Los basfilos poseen grnulos de heparina e histamina, mediadores de la inflamacin. Actan en estados de hipersensibilidad retardada. La liberacin masiva del contenido de sus grnulos puede causar choque anafilctico, mortal si no es controlado. Los Eosinfilos poseen actividad fagoctica: se comen los agentes extraos. Sus grnulos tienen sustancias que degradan lo fagocitado, sobre todo las larvas de parsitos. Adems, inician y regulan las reacciones alrgicas. Pgina 16 de 27

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Los monocitos poseen actividad fagoctica bactericida. Ante estmulos qumicos pueden seguir a los neutrfilos. Pueden fijarse a tejido de bazo, hgado y pulmn, dando lugar a macrfagos tisulares que forman el sistema retculo-endotelial, encargado de remover material extrao circulante en sangre. Los linfocitos B constituyen la minora del pool linfocitario circulante (10%-20%). Maduros, pasan de la mdula sea a la sangre y se dirigen hacia los rganos linfticos perifricos para ubicarse en los folculos linfoides. Bajo estmulo antignico, se activan y proliferan formando el centro germinal en el interior del folculo linfoide. Pueden seguir un proceso de estimulacin hasta transformarse en inmunoblastos, y stos en clulas plasmticas secretoras de inmunoglobulinas. Pueden tambin regresar al estado quiescente de pequeo linfocito B con memoria inmunolgica, para pasar a formar parte del manto o corona. Los linfocitos T forman una poblacin mayoritaria. En el adulto normal oscilan entre 65% y 75%, con variaciones segn la edad. Ejercen sus efectos mediante la liberacin de protenas solubles, citocinas, encargadas de la transmisin de seales a otras clulas, o bien mediante interacciones directas con otras clulas. MUESTRA Sangre venosa con anticoagulante EDTA. MATERIAL Agujas Jeringas Torundas Torniquete Alcohol Pipetas de leucocitos Agitador de pipetas blancos Boquillas para pipetas Microscopio ptico Pgina 17 de 27

DACA-UJAT Portaobjetos Cmara de Newbauer Solucin de Turk Tincin de Wright Aceite de inmersin Contador de leucocitos Cronmetro Papel para microscopio MTODO 1) Mezclar la sangre durante 5 minutos.

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2) Tomar una alcuota de sangre con la pipeta de leucocitos. 3) Limpiar la punta de la pipeta sin perder lquido. 4) Llenar la pipeta con solucin de Turk hasta el 1.1. 5) Mezclar el contenido de la pipeta en el agitador de pipetas. 6) Desechar las primeras 3 gotas de la pipeta de blancos. 7) Depositar la cuarta gota de la solucin en la cmara de Newbauer. 8) Leer la cmara en el microscopio bajo objetivos 10x y 40x. 9) Hacer el conteo en los cuadrantes para leucocitos (4 cuadrantes). 10) Multiplicar el total por 100. Nota: los leucocitos se observan como puntos formes luminosos y oscuros. a) Realizar un frotis sanguneo. Con la tcnica que se menciono en la prctica anterior b) Leer en el microscopio bajo 40x. c) Contar los leucocitos hasta 100 con ayuda del contador. Cules son los valores normales del recuento leucocitario? Qu indica un valor elevado en el recuento? Pgina 18 de 27

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PRACTICA N 3
FAGOCITOSIS Inmunidad Natural OBJETIVO Comprender el proceso de fagocitosis in Vitro y aplicar los conocimientos tericos en casos de dao tisular, traumas o invasin de mltiples microorganismos o sustancias. FUNDAMENTO El sistema fagoctico mononuclear cumple dos funciones principales, cada una llevada a cabo por un tipo de clula procedente de mdula sea: Macrfagos profesionales: eliminan partculas antignicas. Clulas presentadoras de antgeno (CPA): ingieren, procesan y presentan los antgenos a los linfocitos T. Pertenecen al sistema fagoctico mononuclear tanto los monocitos (macrfagos) como los granulocitos. Los monocitos estn presentes en la sangre. Presentan un tamao de 10-18 m de dimetro. Su ncleo tiene generalmente forma de herradura y suele contener grnulos azurfilos. Poseen membranas irregulares y muchos lisosomas con peroxidasa e hidrolasas cidas, importantes en la destruccin intracelular de los microorganismos. Una vez extravasados son llamados macrfagos. Los granulocitos se dividen a su vez en neutrfilos, basfilos y eosinfilos, en funcin a la coloracin cida o bsica de sus grnulos citoplasmticos. Los neutrfilos (polimorfonucleares) son los ms numerosos. Poseen un ncleo lobulado de forma irregular (polimrfico). Intervienen en la defensa, destruccin de clulas viejas y regeneracin tisular. Liberan interleucina 1, un mensajero inmunitario. Realizan un proceso de heterofagia que les causa la muerte. La fagocitosis constituye una de las principales defensas del organismo contra infecciones producidas por bacterias y hongos. El proceso comprende pasos secuenciales: quimiotaxis, adherencia del antgeno a la superficie de los fagocitos, captacin/ingestin (fagocitosis) y muerte intracelular mediada por mecanismos oxgeno-dependientes o independientes. Los fagocitos poseen receptores para el componente C3b del sistema del complemento, as como para la regin constante de las inmunoglobulinas. Esto permite que los microorganismos opsonizados puedan adherirse, facilitando la Pgina 19 de 27

DACA-UJAT fagocitosis. MUESTRA

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Sangre venosa con anticoagulante heparina. Una cepa pura de Staphylococcus aureus, coagulasa negativo. MATERIAL Agujas Jeringas Torundas Torniquete Alcohol Asa de siembra ,mechero de alcohol Tubos de ensayo de 12 x 75 mm Pipetas Pasteur con bulbo Microscopio ptico Aceite de inmersin Portaobjetos Tincin de Wright Termmetro Bao Mara a 37oC Cronmetro Papel para microscopio MTODO 1) Identificar 1 tubo de ensayo de 12 x 75 mm; 2) Agregar 2-3 gotas de sangre (MUESTRA) de la cepa Staphylococcus aureus al tubo. 3) Incubar el tubo preparado en bao Mara por 30 minutos. Pgina 20 de 27

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4) Realizar un frotis sanguneo de la muestra que ser el control negativo. Y se realizara otro frotis con la muestra del tubo incubado y con la cepa bacteriana 5) Teir los frotis con la tcnica de Wright. 6) Poner una gota de aceite de inmersin a los frotis y distribuirlo homogneamente. 7) Revisar los frotis en el microscopio bajo el objetivo de 100x. Describa el proceso de la fagocitosis. Qu papel juega en fagocitosis el complemento C3b y C4b?, Qu defectos pueden presentar los fagocitos; qu consecuencias traen consigo?

PRACTICA N 4
COMPLEMENTO C3 Inmunidad Natural OBJETIVO Comprender la importancia del sistema del complemento en el diagnstico. FUNDAMENTO El sistema del complemento es un sistema de alrededor de 30 protenas sricas que interaccionan, formando una cascada enzimtica que amplifica la respuesta humoral. El CH50 y CH100 son pruebas de la actividad del sistema del complemento, para determinar el desarrollo de una enfermedad, para monitorear la gravedad de la misma o para establecer la eficacia de un tratamiento. Por ejemplo, pacientes con lupus eritematoso activo pueden tener niveles de C3 y C4 bajos. La cascada del complemento suele iniciarse por complejos antgeno- anticuerpo. El producto final es la unidad de ataque a membrana, que crea agujeros en l as membranas bacterianas, induciendo su destruccin. El C3, componente de la cascada del complemento, se fija a las bacterias y las destruye directamente. Pgina 21 de 27

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Existen productos secundarios de la cascada del complemento que atraen ciertos leucocitos y aumentan su capacidad para ingerir y destruir bacterias. Algunas bacterias no requieren la presencia de anticuerpos especficos para activar el sistema de complemento. MUESTRA Suero. Tubos rojos MATERIAL Agujas Jeringas Torundas Torniquete Alcohol Kit para complemento C3 centrifuga Tubos de ensayo de 13 x 100 mm Tubos de ensayo de 12 x 75 mm Pipetas serolgicas Micropipetas y puntas Espectrofotmetro Cronmetro MTODO El descrito en el kit para complemento C3. Los resultados se deben extrapolar con la curva patrn de Kit de complemento3

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PRACTICA N 5
COMPLEMENTO C4 Inmunidad Natural OBJETIVO Comprender la importancia del sistema del complemento en el diagnstico. FUNDAMENTO El sistema del complemento es un sistema de alrededor de 30 protenas sricas que interaccionan, formando una cascada enzimtica que amplifica la respuesta humoral. La activacin del sistema del complemento y su fijacin a microorganismos facilita la eliminacin del antgeno y genera una respuesta inflamatoria. La mayora de los componentes del sistema se sintetizan en el hgado. Existen varios receptores especficos para los componentes del sistema, localizados en distintas poblaciones de leucocitos. Las consecuencias de la activacin y fijacin del sistema del complemento incluyen: Lisis del microorganismo o clula diana. Opsonizacin; facilitacin de la fagocitosis. Quimiotaxis sobre fagocitos. Control de la respuesta inflamatoria. Amplificacin de la respuesta humoral. Eliminacin de inmunocomplejos. Va de las lectinas. Conexin del sistema de inmunidad adaptativa por medio de la va clsica. Conexin del sistema de inmunidad natural por medio de la va alterna. La prueba de complemento C4 se realiza para determinar la concentracin de C4, componente srico del sistema del complemento. MUESTRA Suero. Pgina 23 de 27

DACA-UJAT MATERIAL Agujas Jeringas Torundas Torniquete Alcohol Kit para complemento C4 centrifuga Tubos de ensayo de 13 x 100 mm Tubos de ensayo de 12 x 75 mm Pipetas serolgicas Micropipetas y puntas Espectrofotmetro Cronmetro MTODO

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El descrito en el kit para complemento C4. Se requiere de la curva patrn para extrapolar los datos de la prctica. RESULTADOS Cmo encontrara C4 en caso de lupus eritematoso? Qu indicara un valor bajo de C4?, Cules son los valores de referencia de C4? Explique la va del complemento.

PRACTICA N 6
BRUCELOSIS: Aspectos generales y Serodiagnstico Prueba rpida en placa con antgeno Rosa de Bengala ROSA DE BENGALA (Card Test) OBJETIVO Desarrollar la prueba de tarjeta rosa de bengala como prueba tamiz para diagnstico de brucelosis. Pgina 24 de 27

DACA-UJAT FUNDAMENTO

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Esta prueba se basa en la bsqueda de Abs que se ponen de manifiesto para hacerse reaccionar con los antgenos complementarios que existen en la superficie bacteriana. Es una prueba rpida de aglutinacin en la que se emplea una suspensin de clulas de B. abortus (99S) teidas con colorante Rosa de Bengala y disueltas en cido lctico a pH 3.6. Esta prueba ha sustituido a la prueba de Huddleson, por ser ms sensible y especfica. Se considera como prueba positiva cuando ocurre cualquier tipo de aglutinacin y negativa cuando no hay aglutinacin al cabo de 4 min. Cuando esta reaccin es positiva el diagnstico se debe de complementar desarrollando las pruebas de aglutinacin en tubo y/o microplaca y la prueba de aglutinacin con 2-mercaptoetanol (2-Me) en tubo y/o microplaca. Anteriormente, se realizaba la prueba de Huddleson y fue muy utilizada en todo el mundo para diagnstico de brucelosis, pero segn observaciones de la Universidad de Minnesota, este mtodo si se utiliza solo debe usarse como prueba de seleccin porque se han encontrado a menudo reacciones falsamente positivas.

METODOLOGA 1) Centrifugar la sangre y separar el suero del paquete celular (1500 rpm). 2) Antes de utilizar cualquier antgeno se debe llevar a cabo una prueba del antgeno a utilizar con un suero control positivo y un suero control negativo. Se depositan 0.08 ml de suero positivo en un valo de la placa serolgica y 0.08 ml de suero negativo en otro valo, se agrega una gota de antgeno en cada uno, se mezcla con aplicador y se somete a rotacin mecnica o elctrica durante cuatro min. 3) Con una pipeta serolgica (Bang) se extrae suero (a temperatura ambiente) problema. Manteniendo la pipeta en ngulo de 45 se deposita en una placa de vidrio serolgica, en el primer valo se depositan 0.08 ml, en el segundo 0.04 ml, en el tercero 0.02 ml, 0.01 y 0.005 ml. 4) El frasco que contiene el antgeno se homogeniza por agitacin (a temperatura ambiente) y se deposita una gota (0.03 ml) del antgeno sobre cada una de las cantidades de suero problema.

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5) Con un removedor o aplicador de madera se mezclan el antgeno y el suero (comenzando con la dilucin ms baja a la ms alta), extendindose cada una de las mezclas en crculos. 6) Agitar la placa manualmente o por rotacin mecnica, durante cuatro min. 7) Observar la placa sobre un fondo bien iluminado. 8) Anotar y registrar el grado de aglutinacin en los primeros cuatro min. 9) Reportar el ttulo del suero como recproco de la ltima dilucin donde se observe aglutinacin.

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BIBLIOGRAFIA
http://www.tuotromedico.com/temas/estudio_complemento.html Manual de Laboratorio de Inmunologa Bsica y Clnica. Secretara de Educacin Pblica del Instituto Nacional. Abril de 2011. REDVET Revista electrnica de Veterinaria. Mosby Company. 8va. edition. Margni (1997). Inmunologa e inmunoqumica. Editorial Panamericana. Pg 290-295. Roitt, Brostoff, Male. Inmunologa. 5ta edicin. Charles, Janeway. Inmunobiologa: el sistema inmunitario en condiciones de salud y enfermedad. Turgeon (1990). Immunology and serology in laboratory medicine.

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