INTERAES CLULA-CLULA E CLULA-MATRIZ EXTRACELULAR :

CLULAS NO SEU CONTEXTO SOCIAL (AULA 2)

INTEGRINAS

MATRIZ EXTRACELULAR
LAMINA BASAL

Profa. Elaine Guadelupe Rodrigues Unidade de Oncologia Experimental Disciplina de Biologia Celular

INTEGRINAS

a-actinin filamnin

INTEGRINAS
ligao entre clula-clula e clula-matriz extracelular 24 tipos descritos em humanos 100 a 140 kDa 18 a e 8 numerosos heterodmeros diferentes a1....an 1....n Sinalizao intracelular Mesmas integrinas em clulas diferentes podem apresentar diferentes especificidades de ligao fatores especficos de clulas modulam a interao das integrinas e seus ligantes Reconhecem peptdeos das molculas da matriz extracelular ou outras molculas de adeso (superfamlia das imunoglobulinas)

Low affinity interactions

Large number in a cluster (VELCRO effect). Cytoplasmic tail responsible for Clustering

Non-covalent bonds

Ca2+ or Mg2+ dependent Type of divalent ion influences affinity and specificity

INTEGRIN
a51

LIGAND
fibronectin

DISTRIBUTION
ubiquitous

a61
a71 aL2 (LFA-1)

laminin
laminin Ig superfamily

ubiquitous
muscle white blood cells

a23
a64

fibrinogen
laminin

platelet white blood cells

epithelial desmosomes (intermediate filaments)

1 integrinas, presentes na maioria das clulas. Cadgos KO no sobrevivem. 2 integrinas, white blood cells. Cell-Cell interactions, ligands to Ig superfamily. Human disease: Leucocyte adhesion deficiency, repeated bacterial infections 3 integrinas, variety of cells, platelets. Human disease: Glanzmanns disease, excessive bleeding a7 KO mice, distrofia muscular, pois no expressa a71 nos musculos

FENMENOS TRANSITRIOS LIGADOS INTEGRINAS:

ATIVAO E DESATIVAO DE INTEGRINAS (REGULAO ALOSTRICA DA CONFORMAO)

peptide

ATIVAO DE INTEGRINAS: CROSS-TALK ENTRE AS DUAS VIAS,

INSIDE-OUT & OUTSIDE-IN

PIP2
Compete com a cadeia a pela ligao com a cadeia

INTEGRINAS E SINALIZAO INTRACELULAR

Crescimento, proliferao e sobrevivncia so eventos DEPENDENTES DE

ANCORAGEM. O espraiamento celular, reconhecendo o substrato, tambm importante para

a sobrevivncia e crescimento celular

Integrinas e sinalizao intracelular : cooperao com outros receptores promovendo Sobrevivncia e proliferao celular

integrin ILK Rac1 Cdc42 Ras

Growth factor receptor RhoA

JNK

Erk p27kip p21cip

Cyclin D1

Cyclin E

+
cdk4/cdk6

+
cdk2

Cell proliferation/survival

INTERAES ENTRE INTEGRINAS: 1. TRANSITRIAS 2. ESTVEIS

INTERAO LINFCITOS-CLULAS APRESENTADORAS DE ANTGENOS: INTERAO TRANSITRIA

LEUKOCYTE ROLLING: INTERAO TRANSITRIA

Filamentos de actina terminam nas ADESES FOCAIS, que se concentram nos locais onde a clula se adere ao substrato pelas integrinas; acmulo de Protenas fosforiladas, incluindo FAK nesses locais. Ativao e desativao de FAKs permite a MIGRAO CELULAR

Verde: filamentos de actina Vermelho: phosphotyrosine Laranja: co-localizao

FOCAL ADHESION

Integrina X Matriz EC, clusters Subunidade /talina or Subunidade a/paxilina recrutam: FAK

FAK
P
2. Fosforilao Src dependente

FAK
Src P

1.

Fosforilao cruzada,

focal adhesion kinase

P
P FAK P
Stio para outras protenas de sinalizao e Fosforilao de outras protenas no stio de adeso focal

Sinalizao

FAKs na migrao celular:

Too many focal adhesions FAK helps disassemble focal adhesions: loss of adhesions is required for cell migration Cancer cells : elevated FAK

HEMIDESMOSSOMAS: INTERAO ESTVEL

DISTRIBUEM FORAS ATRAVS D EPITLIO

Integrin a64, e interao com KERATINA Mutaes em qualquer dos componentes: doenas bolhosas na pele

MATRIZ EXTRACELULAR (MEC)

Variaes na quantidade relativa de cada componente da MEC e a maneira como eles se organizam geram diferentes tipos de MEC, adaptada s necessidades funcionais de um determinado tecido. Ex. MEC calcificada nos ossos e dentes MEC transparente na crnea MEC em forma alongada nos tendes, que aguenta fortes presses Conchas dos moluscos, carapaa dos besouros e lagostas

interface entre epitlio e tecido conectivo, lamina basal (controle celular)

Estrutura ativa no controle das clulas em contato com MEC, controlando crescimento celular, proliferao, migrao,

sobrevivncia

INTERAO CLULA - MATRIZ EXTRACELULAR

clulas epiteliais clulas endoteliais fibroblastos

matriz extracelular apoptose tumorigenicidade adeso

proliferao celular
polaridade diferenciao

migrao
desnecessario

Clulas que produzem a MEC : fibroblastos

Crnea de rato, colgeno e fibroblastos ( componentes que formam gel removidos)

COMPONENTES DA MATRIZ EXTRACELULAR

1. GAGs (GLICOSAMINOGLICANOS) podem estar associados com protenas : PROTEOGLICANOS A. HIALURONANA B.CONDROITIN SULFATO E DERMATAN SULFATO C.HEPARAN SULFATO D. KERATAN SULFATO 2. PROTENAS FIBROSAS A. COLGENO, B. ELASTINA, C. FIBRONECTINA,

GAGs: unbranched, repeating disaccharide units one sugar is always an amino sugar (N-ac-glucosamin ou N-ac-galactosamin, mostly sulfated Highly negatively charged, attracting Na2+ : large amounts of water: turgor, respond to compressive forces Strongly hydrophilic

Extended conformation, that occupied large volumes : porous

hydrated gels

Repeating disaccharide units of various glycosaminoglycans

hyaluronan

Dermatan sulfate

Chondroitin sulfate

Heparan sulfate

Keratan sulfate

polyglucose

Chitin

Poly-N-acetylglucosamine

Hyaluronate molecules may consist of as many as 25,000 disaccharide units, with molecular weights of up to 107. Hyaluronates are important components of the vitreous humor in the eye and of synovial fluid, the lubricant fluid of joints in the body. They are thought to facilitate cell migration. The chondroitins and keratan sulfate are found in tendons, cartilage, and other connective tissue, whereas dermatan sulfate, as its name implies, is a component of the extracellular matrix of skin. Glycosaminoglycans are fundamental constituents of proteoglycans

PROTEOGLICANS ER - Golgi

Proteoglycans Colorao mais escura, core proteico Colorao mais clara, GAGs

FUNES DE PROTEOGLICANAS Resistem a foras compressivas Cadeias de GAGs formam gel com variados tamanhos de poros e Densidade de cargas : FILTRO que regula trfego de molculas e clulas de acordo com o tamanho ou carga ou ambos Envolvidas em sinalizao: 1. Heparan sulfato e FGFs: dimerizao prvia ligao ao receptor

2. TGF- e CORE PROTEICO de proteoglicanas, inibindo a atividade

3. Regula atividade de enzimas proteolticas e inibidores enzimticos 4. Regula atividade de protenas secretadas, p.ex. quimiocinas em

respostas inflamatrias

PROTEOGLICANAS COMO REGULADORES DE ATIVIDADE DE PROTENAS SECRETADAS

1. Imobilizao

2. Bloqueio estrico
3. Reservatrio para liberao prolongada 4. Proteo contra degradao proteoltica

5.Concentrar a protena para apresentao mais efetiva aos receptores da superfcie celular

PROTEOGLICANAS Quando presentes como componentes da membrana plasmtica (core proteico transmembrana ou ligada por GPI anchor) podem atuar como co-receptores, que colaboram com outros receptores de superfcie Ex. Syndecans e glipicans (heparan sulfate proteoglican)

Colgenos : protenas FIBROSAS majoritrias na MEC

Protenas fibrosas Estrutura em tripla hlice, rgida Rica em Prolina e Glicina 42 genes, 1 gene=1 cadeia 40 tipos de colgenos (I, II, etc) Resiste a foras tensoras

Pele de embrio de galinha

TYPE

MOLECULAR FORMULA

POLYMERIZED FORM

Fibril-forming (fibrillar)

I
II III V XI

[a1(I)]2a2 (I)
[a1(II)]3 [a1(III)]3 [a1(V)]2a2(V) and a1(V)a2(V)a3(V) a1(XI)a2(IX)a3(XI) a1(IX)a2(IX)a3(IX) [a1(XII)]3 [a1(IV)]2a2(IV) [a1(VII)]3 [a1(XVII)]3

fibril
fibril fibril fibril (with type I) fibril (with type II) lateral association with type II fibrils lateral association with some type I fibrils sheetlike network anchoring fibrils not known not known (ENDOSTATIN)

Fibril-associated

IX XII

Network-forming

IV VII

Transmembrane Others

XVII

XVIII [a1(XVIII)]3

Mutaes no gene do colgeno tipo I: osteogenese imperfeita Mutaes no gene do colgeno tipo II: chodrodysplasias Mutaes no gene do colgeno tipo III: Ehlers-Danlos syndrome

(fragile skin and blood vessels, hypermobile joints)

Proteolytic enzimes

Depois da liberao no espao extracelular, as fibras de colgeno so reforadas por ligaes cruzadas

Cross-links formed between modified lysine side chains within a collagen fibril. Covalent intramolecular and intermolecular cross-links are formed in several steps. First, certain lysines and hydroxylysines are deaminated by the extracellular enzyme lysyl oxidase to yield highly reactive aldehyde groups. The aldehydes then react spontaneously to form covalent bonds with each other or with other lysines or hydroxylysines. Most of the cross-links form between the short nonhelical segments at each end of the collagen molecules.

FIBRAS ELSTICAS (FIBROSAS) Tropoelastin, precursor biossinttico solvel Elastin, altamente hidrofbica Cross-linking por ligaes covalentes, formando as fibras elsticas 2 tipos de segmentos curtos alternados: Segmentos hidrofbicos, propriedades elsticas Segmentos em a-hlice ricos em alanina e lisina, que fazem a ligao entre molculas adjacentes. Cada segmento codificado por um exon. Protena dominante na MEC de artrias

Fibras elsticas compostas tambm por microfibrilas, compostas por diversas glicoprotenas, por exemplo fibrilina. Importantes na formao da fibra elstica

AORTA

White arrows - Direction of elastic fibers in Tunica media Yellow arrows - Tunica Media Blue arrow - Tunica intima

FIBRONECTINA

RGD

Dimer, Multiple domains with binding sites, 5 or 6. May bind integrins, MEC, receptors on cells 1 gene with 50 exons, alternative RNA splicing, isoforms Multiple isoforms: plasma fibronectin (soluble, blood clotting, wound healing, phagocytosis) and fibronectin fibrils (dimers cross-linked by S-S bonds at MEC) RGD sequence sufficient to inhibit interaction Uteroglobin: example of inhibiting protein

LIGAO INTEGRINAS, SINALIZAO

EXPOSIO DE STIO DE LIGAO FIBRONECTINA ( CRPTICO)

FORMAO DE FIBRAS DE FIBRONECTINA, CONECTADAS ACTINA INTRACELULAR

Glicoproteins in MEC help guide Cell Migration

Fibronectin

Actin

SURFACE INTEGRINS

Deficincia na sntese do dissacardeo do dermatan sulfato Indivduos de baixa estatura, envelhecimento precoce da aparncia, defeitos generalizados na pele, articulaes, msculos e ossos Camundongos deficientes em decorin : reduzida resistncia tenso na pele Inibio da hidroxilao da prolina para a formao do colgeno, como a deficncia de cido ascrbico (vit.C): escorbuto, cadeias formadas no formam tripla hlice, degradada pela clula. Paredes dos vasos ficam fragilizadas e os dentes ficam soltos degradao e reposio de colgenos nesses tecidos rapida Mutaes do colgeno I osteogenesis imperfecta Mutaes do colgeno II chondrodysplasias, cartilagem anormal, ossos e articulaes deformadas Mutaes colgeno III Ehlers-Danos syndrome, pele e paredes vasculares frgeis e hipermobilidade articular Mutaes no gene da fibrilina que forma a fibra elstica causa a sindrome de Marfan, onde a aorta pode se romper

Cadgo deficiente em fibronectina morre durante embriogenese (EC no formam Vasos sanguneos funcionais

LAMINA BASAL

LAMINA BASAL: formaes RESISTENTES, flexveis, finas de MEC especializada que est em contacto com tecidos e tubos epiteliais. Separa o tecido epitelial do tecido conectivo.

Filtrao seletiva

Fig. 2. Skin; newborn Sprague-Dawley rat with junctional epidermolysis bullosa.

Skin; newborn Sprague-Dawley rat with junctional epidermolysis bullosa. The follicular and surface epithelia of the epidermis are detached from the dermis, forming a subepidermal cleft. HE. Bar = 75 m. Inset: The basement membrane appears to be located at the base of the cleft (arrowhead). HE. Bar = 30 m.
Brenneman K A et al. Vet Pathol 2000;37:336-339

LAMINA BASAL : Sintetizada pelas clulas que se depositam sobre ela, dos 2 lados

E=epithelial cells BL = basal lamina C = colagen (connective tissue)

COMPONENTES
GLICOPROTENAS: Lamininas Isoformas de Colgeno tipo IV Mais flexvel

Nidognio
PROTEOGLICANAS:

Perlecan
MOLCULAS ASSOCIADAS REDE:

COLAGENO TIPO XVIII

FIBRONECTINA

LAMININAS

3 polypeptide chains, a, , g Dissulfide bonds a1...n, 1...n, g1...n: Several isoforms of each chain, forming a large family (basal lamina with distinctive properties) g1 chain, major component KO mice die at embryogenesis Several functional domains

Cell Receptors: integrins and dystroglycan

RECEPTORES LAMININA

MOLCULAS DA LAMINA BASAL E SUAS INTERAES

MOLCULAS DA LAMINA BASAL E SUAS INTERAES

FUNES
1. Papel na estrutura tecidual importante na regenerao aps trauma 2. Atua como filtro altamente seletivo (glomrulo) 3. Determina polaridade celular 4. Influencia o metabolismo celular 5. Organiza as protenas ao redor da clula 6. Promove sobrevivncia, proliferao e diferenciao 7. Barreira seletiva na migrao celular (EXCETO MACRFAGOS, LINFCITOS E CLULAS NEURAIS)

FUNO NA REGENERAO TECIDUAL: LAMINA BASAL COMO MOLDE PARA REGENERAO TECIDUAL

ALTERAO NA FUNO DE FILTRAO:

mutaes no gene do colgeno IV: Sndrome de Alport

NORMAL

ALPORT