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Espectrofotometria Uv Visible:

Aplicaciones en el analisis qumico


Curso: Quimica Analtica II
2012
Profesor: Juan Carlos Sturm
emisor LED
525nm
Muestra
Fotodiodo
detector
Microprocesador Display
LCD
No faltan algunos componentes en este instrumento?
Fotmetro o espectrofotmetro ?
Fuentes de radiacion electromagnetica para
espectroscopia
Fuente region usos
Lamp. H
2
D
2
continua, 160-380 nm absorcin molecular UV
L. Tungsteno, continua 320 -2400 nm absorcin molecular visible
L. Arco de Xe continua 200 1000 nm e. molecular fluorescente
Alambre de nicron continua 0,75 20 m e. absorcin IR
L. Ctodo hueco lneas Uv-Vis. E Absorcin atmica
Laser lnea , UV-Vis Abs atmica , molecular, fluoresc.
L. vapor de Hg lneas fluorescencia molecular
diodo lnea -vis Abs. Molec vis.



Fuente
continua
Fuente
de
lineas
Detector clase rango seal
fototubo foton 200-1000 nm corriente
Fotomultiplicador foton 110 1000nm corriente
Fotodiodo de Si foton 250 1100 nm corriente
Fotoconductor foton 750 6000 nm carga- resistencia
celda fotovoltaica foton 400- 5000 nm voltaje o corriente
termocupla termico 0.8- 40 m voltaje
Termistor termico 0.8- 40 m variacion resistencia



Transductores para espectroscopia optica
Filtros pticos
Prismas
Rejillas de difraccin
Monocromador
Ancho de
banda :
Caractersticas de la espectroscopia
molecular

Aplicacin en sistemas orgnicos e inorgnicos
Lmites de deteccin bajos ( 10
-4
a 10
-5
M)
Selectividad moderada a alta
Buena exactitud ( incertidumbres relativas < 2% )
Medicin y adquisicin de datos simple

Aplicaciones
Determinacin de iones metlicos y complejos de
elementos de transicin ( Ni
+2
, Cu
+2
, Co
+2
, Cr
2
O
7

-2
)
Complejos de transferencia de carga
ej: Fe(II 1,10 Fenantrolina , Fe(III) tiocianato
Compuestos orgnicos con enlaces conjugados,
heterociclos
Campos: industrial, clnico, forense, medio
ambiente

Espectros de absorcin molecular
La concentracin de la solucin no modifica la forma del espectro
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
200 220 240 260 280 300 320 340 360
a ) AAS = 25 mg/l
b ) AAS = 12,5 mg/l
Espectro de absorcin de cido acetil saliclico en HCl 0,05 M
b )
a )
A
b
s
o
r
b
a
c
i
a

( nm )
Anlisis Cuantitativo, procedimiento:
Seleccin del rango de concentraciones para la medicin con
menor error
Seleccin de la longitud de onda
de medicin: ( si se
desea la mas alta sensibilidad se elige una
longitud de onda correspondiente a un
pico mximo)
Verificar cumplimiento de la ley de
Beer
A = a b C
T = P/P
0
-log T = a b C
existen variables que influyen en la
absorbancia como: tipo de disolvente, pH de la
solucin , temperatura , sustancias interferentes
Ley de Beer - ideal : A = abC ,
Seal = constante * conc. de analito

Ley de Beer - real : A = abC + n
n= intercepto seal de fondo (blanco)
Ambas ecuaciones
representan rectas
A vs C
0 2 4 6 8 10
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a
Concentracin
0 2 4 6 8 10
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
rango lineal
intercepto
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a
Concentracion
Pendiente = sensibilidad
Nefelometra scattering
Turbidimetra
Refractometra refraccin
Difraccion difraccin de rayos x
Dispersin dispersin ptica rotatoria

Otras tcnicas espectroscpicas sin intercambio de
energa
Ver tambien : Modern Analytical Chemistry
D. Harvey , Mc Graw Hill , cap 10
Mtodos de cuantificacin
Curva de calibracin con estndares externos

Mtodo de adicin estndar:
- a volumen final constante
- a volumen variable

Curva de calibracin con estndares externos
blanco
muestra
A
0
A
1
A
2
A
3
A
4
A
5
A
6
Ax

Los estndares de calibracin deben aproximarse en lo
posible a la composicin general de las muestras
Curva de calibracin
Concentracion
mg/L
Absorbancia
0 0,010
2 0,100
4 0,200
6 0,300
8 0,405
10 0,500
12 0,590
muestra 0,340
0 2 4 6 8 10 12
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
r =0,9997
A =0,0066 +0,0490*C A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a

(
A
)
Concentracin ( mg/L)
Cx = 6,80 mg/L
Mtodo de adicin de estndar:
a volumen final constante y varias adiciones
Las dificultades de contar con un patron con una composicin general que se
asemeje a la de las muestras hace recomendable este mtodo. Requisito: se
cumple la ley de Beer
blanco
Ajuste 0 Vx Vx Vx Vx Vx


Vst
1
Vst
2
Vst
3
Vst
4
A
TOTAL
= Ax + Ast

T T
T
V
Vst Cst b a
V
Vx Cx
b a A

+

=
Graficar A vs Vst :
recta con pendiente e
intercepto

Entonces: A
T
= + Vst

Dividiendo


Despejando
Cst b a
Vt
Vt
Vx Cx
b a

Vx
Cst
Cx

T T
T
V
Vst Cst b a
V
Vx Cx
b a A

+

=
Mtodo de adicin de estndar:
a volumen final variable y una adicin
|
.
|

\
|
+
+
=
Vst Vx
VstCst VxCx
ab A
2
) (
) (
2
1
VstCst VxCx ab
Vst Vx abCx
A
A
+
+
=
Vx Vx + Vst
A
1
A
2
abCx A =
1
VstCst VxCx
CxVst CxVx
A
A
+
+
=
2
1
VstCst A VxCx A CxVst A CxVx A
1 1 2 2
+ = +
VstCst A VxCx A CxVst A CxVx A
1 1 2 2
= +
factorizando | | VstCst A Vst A Vx A A Cx
1 2 1 2
) ( = +
Vst A Vx A A
VstCst A
Cx
2 1 2
1
) ( +
=
Ejercicio 1
Se desea determinar el manganeso en un acero. Se disolvi una muestra de acero
de 0,4895 g , el manganeso se oxid a MnO
4
-
y la solucin se diluy a 100 ml en
un matraz aforado. La absorbancia a 525 nm en una celda de 1 cm fue 0,396 .
Una solucin de MnO
4
-
de 3x 10
-4
M presenta una absorbancia de 0,672

Cx b a
Cst b a
Ax
Ast


=
Ast =a b Cst 0,672= a1 3x10
-4
a = 2240
Ax = a b Cx 0,396 = 22401Cx Cx = 1,77 x 10
-4
M

Otra forma de clculo:
Cx
4
10 3
396 , 0
672 , 0

=
Ejercicio 2: Ver en versin internet
Curva de calibracion con patrones independientes
Interpolacion de una muestra tratada de la misma
forma que los patrones

Ejercicio 3 : Ver en versin internet
Clculo de concentracin mediante adicin estndar y
volumen constante
Clculo del porcentaje de Mn en acero :
ver en versin internet
Ejercicio 4: Ver en version internet
Adicin de estndar con un punto e incremento de volumen


Calcular el porcentaje de Mn en el acero
En el matraz de 100 ml encontramos una concentracin 1,77 10
-4

M de MnO
4
-
.
Calculemos los mg de Mn en 100ml
El PA Mn = 54,94; 1,7710
-4
54,94 = 9,7 10
-3
g/L Mn
9,7 mg/1000mL Mn
0,97 mg /100 ml Mn
Calculemos los mg de Mn por 100 g de muestra ( porcentaje)
100 4895 , 0
97 , 0 X mgMn
=
X = 198,2 mg Mn / 100g muestra
% = 0,2 g Mn /100g muestra
X = 0,2 %
En los 100ml se disolvieron 0,4895 g de acero y hay 0,97 mg
de Mn. Cuantos mg de Mn hay en 100g de acero ?)
Ejercicio 2
El hierro forma un complejo con 1,10 fenantrolina el cual
presenta un mximo de absorcin a 510 nm.
A partir de una solucin patrn de 1000 mg/l de hierro se
prepar una curva de calibracin , obtenindose los siguientes
datos:

conc
( mg/L)
A

2 0.160
4 0.313
6 0.460
8 0.619
muestra 0,203
25,0 ml de una muestra de agua subterrnea se
colocaron en un matraz de 50,0 ml despus de ser
tratada para formar el complejo coloreado , al igual
que la curva de calibracin , fue aforada. La
absorbancia fue de 0,203 .
Calcular la concentracin de Fe de la muestra de
agua en mg/L
La ecuacin de la recta es : A = 0,007 + 0,0762Cx
r = 0,9998
Interpolando el valor de A de la muestra :Cx = 2,57 mg/L (conc en el matraz de 50)
Conc. real de la muestra : 2 x 2,57 = 5,14 mg/L ( por la dilucin de 25 ml a 50ml )
Ejercicio 3
Basado en el ejercicio anterior plantearemos la siguiente metodologa :
25,0 ml de una muestra de agua subterrnea se colocaron en un matraz de
50,0 ml despus de ser tratada para formar el complejo coloreado Fe/1-10
fenantrolina , fue aforada. La absorbancia fue de 0,203 .
En otros matraces iguales fueron colocados 25 ml de la muestra , el reactivo
complejante y respectivamente : 0, 1 ; 0,2 y 0,3 ml de solucin patrn de Fe de
una concentracin de 1000 mg/L. Calcule la concentracin de Fe en la muestra
Estamos aqu frente a un mtodo de adicin estndar con volumen final fijo :
0 0.203
0.1 0.363
0.2 0.516
0.3 0.663
DATOS:
Vx
Cst
Cx

0,00 0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30


0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
-----------------
A 0,2063
B 1,533
-----------------
R
---------------
0,99982
---------------
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a

ml de estandar agregado
Cst = 1000 mg/L
Vx = 25 ml
= 0.2063
= 1,533
30 . 5
32 . 38
3 . 206
25 * 533 . 1
1000 * 2063 . 0
= = = Cx
A = 0,2063 + 1,533 Vst
Concentracin de la muestra = 5,30 mg/L; Ojo : no hay factor de dilucin
ya que tanto muestra como Patrones se sometieron a la misma dilucin.
Ejercicio 4
Una solucin cida de in cprico tiene una absorbancia de 0,062 a la
longitud de onda de mxima absorcin.
A 5,0 ml de esta solucin se le agreg 1,0 ml de solucin 0,01 M de in
cprico y se determin que la absorbancia fue de 0,102 a la misma
longitud de onda : Cual es la concentracin de la muestra ?
R: La muestra con un volumen de 5 ml fue enriquecida con patrn aumentando
el volumen a 6 ml ( adicin std. con un punto y con incremento de volumen)
Vst Vx
CstVst CxVx
b a A
Cx b a A
+
+
=
=


2
1
CstVst CxVx
Vst Vx Cx
A
A
+
+
=
) (
2
1
Tarea : verifique el
resultado usando la
formula deducida
anteriormente
M x Cx
Cx Cx
Cx
Cx
3
10 1 , 2
00062 , 0 31 , 0 612 , 0
1 01 , 0 5
6
102 , 0
062 , 0

=
+ =
+
=
Limitaciones de la ley de Beer
Solo es aplicable a soluciones diludas (<10
-2
M)
(Interacciones entre iones o molculas afectan la absorcin de
radiacin, variacin del ndice de refraccin)
Desviaciones qumicas debido a la asociacin o
disociacin del analito ( se forman productos con caractersticas
absorbentes distintas al analito. Ej : indicadores acido base)( desv.
positiva o negativa )
Desviaciones por radiacin policromtica y radiacin
parsita ( limitacines instrumentales ) (desviacion negativa )
Fluorescencia y Turbidez ( disminucin de absorbancia por
radiacin emitida o aumento de absorbancia por partculas en
suspensin )
+
+ In H HIn
Cuando un analito se disocia , se asocia o reacciona con el disolvente
para dar un producto con espectro de absorcin diferente al del
analito se producen desviaciones de la ley de Beer.
Color 1 Color 2
Ka = 1,34 x 10
-5

La siguiente tabla * muestra el desplazamiento del equilibrio motivado
por la dilucin ( solucion no tamponada)
HIn, M

[HIn]
X 10
5

[In
-
]
X 10
5

%
disociado
A
430
A
570

2,00 x 10
-5

4,00 x 10
-5

8,00 x 10
-5

12,00 x 10
-5

16,00 x 10
-5

0.88
2.22
5.27
8.52
11.9
1.12
1.78
2.73
3.48
4.11
56 %
44.5%
43.1%
29 %
25.7 %
0.236
0.381
0.596
0.771
0.922
0.073
0.175
0.401
0.640
0.887
* Skoog, West, Holler, QUIMICA ANALITICA, VI Ed. Pag 407-408
Desviaciones qumicas
Desviaciones quimicas
A medida que la concentracin
aumenta la disociacin es
menor dando una curvatura
positiva a 570 nm
Skoog, West, Holler, QUIMICA ANALITICA, VI Ed. Pag 407-408
Desviaciones instrumentales por radiacin policromtica
En el espectro (grafico superior) la
absortividad del analito es casi
constante en la banda A.
En la grafica de la ley de Beer, al
usar la banda A hay una relacin
lineal.
En el espectro la banda B muestra
cambios notables de la absortividad
resultando en una marcada
desviacin de la ley de Beer
Skoog, West, Holler, QUIMICA ANALITICA, VI Ed. Pag 409
* Skoog, West, Holler, QUIMICA ANALITICA, VI Ed. Pag 410
Cuando la medicin de
absorbancia se efecta con
radiacin compuesta por
diversas longitudes de onda , la
absorbancia es una combinacin
dada por las absortividades
diferentes a cada longitud de
onda .
Desviacin aparente de la ley de Beer por diversas
cantidades de radiacin parsita ( o difusa)
La radiacin parsita limita la
absorbancia mxima de
respuesta lineal ya que cuando
la absorbancia es alta la
potencia radiante que llega al
detector se vuelve pequea,
similar o menor al nivel de luz
parsita.
Radiacin parsita o difusa:
Cualquier radiacin que llega
al detector pero que no
sigue la va ptica entre la
fuente y el detector
Skoog, West, Holler, QUIMICA ANALITICA, VI Ed. Pag 411
Error instrumental en funcin de la transmitancia
Se ha visto que la incertidumbre en la medida
espectrofotomtrica de la concentracin vara en forma
no lineal con la magnitud de la transmitancia
% 100 x
x
x x
relativo error
t
t

=
El error relativo en la concentracin para una medida
espectrofotomtrica esta dada por la siguiente expresin :
T T
T
C
C
log
434 , 0
=

T = error fotomtrico
(incertidumbre absoluta para la
transmitancia)
Por ejemplo 0,005 = 0,5%T
100 x
C
C
Ejercicio
Calcular el error relativo en concentracin porcentual para
mediciones con absorbacias de ; 0,125 ; 0,434 y 0,900
suponiendo que existe una incertidumbre fotomtrica instrumental
de un 1 %
046 , 0
749 , 0 log 749 , 0
01 , 0 4343 , 0
= =

C
C
368 , 0 log 368 , 0
01 , 0 4343 , 0
=

C
C
0,125 = 74,9 %T
0,434 = 36,8 %T
0,900 = 12,5%T
=4,6%
125 , 0 log 125 , 0
01 , 0 4343 , 0
=

C
C
=-0,027 ; =2,7%
=-0,038 ; =3,8%
A
Conclusin: se eligir un rango de concentraciones de trabajo tal que la
transmitancia se mantenga en el rango 20%T 70%T (0,7A -0,15A)
T T
T
C
C
log
434 , 0
=

Determinacin de mezclas
Se basa en que, a una determinada longitud de onda la absorbancia
observada es igual a la suma de las absorbancias de cada
componente
200 220 240 260 280 300 320
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
AAS 25 ppm
CAF 10 ppm
Mezcla
A
/nm
1
2
A
TOTAL 1
= a
AAS,1
bC
AAS
+ a
CAF1
bC
CAF

A
TOTAL 2
= a
AAS,2
bC
AAS
+ a
CAF2
bC
CAF
Resolver este sistema de ecuaciones simultneas para las
incgnitas C
AAS
y C
CAF
Para que la exactitud y precisin de los resultados sean buenas es necesario
seleccionar ambas longitudes de onda de forma que a
AAS
<

a
CAF
a una de las
longitudes de onda y lo inverso a la otra longitud de onda . La precisin
optima se logra cuando la diferencia de absortividades sea lo mas grande
posible . Se deben fijar las condiciones de pH para evitar la presencia de
especies en equilibrio variable.

Ejercicio
Se pueden determinar las concentraciones de una mezcla de Fe
+3

y Cu
+2
formando el complejo con hexacianorutenato (II) ,
Ru(CN)
6
-4
, que forma un complejo de color azul- violceo con el
Fe
+3
( max = 550 nm) y un complejo gris plido con el Cobre
(max = 396 nm) Las absortividades molares de los complejos de
metal se resumen en la tabla siguiente:

550

396

Fe
+3
9970 84
Cu
+2
34 856
Cuando una muestra que contiene
Fe
+3
y Cu
+2
se analiza en una cubeta
de 1 cm de paso ptico la
absorbancia a 550 nm fue de 0,183 y
la absorbancia a 396 nm fue de
0,109. Cul es la concentracin molar
de Fe
+3
y Cu
+2
en la muestra ?
a 550 nm : 0,183 = 9970 C
Fe
+ 34 C
Cu
a 396 nm : 0,109 = 84 C
Fe
+ 856 C
Cu
Despejamos C
Cu
en la primera ecuacin
34
9970 183 , 0
Fe
Cu
C
C

=
y sustituimos en la segunda
Fe
Fe
Fe
C x
C
C
) 10 251 ( 607 , 4
34
9970 183 , 0
856 84 109 , 0
5
=
(

+ =
Despejando : C
Fe
= 1,80 x 10
-5
M
C
Cu
= 1,26 x 10
-4
M

Ref: D:Harvey, Qumica Analtica Moderna , pag. 281
Otras aplicaciones
Determinacin de constantes de equilibrio
( p.ej. La constante de acidez de un indicador acido-
base)
Caracterizacin de la estequiometra de un
complejo metal-ligando
( p. ej. ML; ML
2
, ML
3
etc.)
. Titulaciones espectrofotomtricas
(usa graficas de absorbancia vs volumen de titulante,
formacin de un producto absorbente o decoloracin
de un reactivo titulante coloreado)
http://en.wikipedia.org/wiki/Beer%E2%80%93Lambert_law