UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE CIENCIAS ESCUELA PROFESIONAL QUIMICA

MANUAL DE PRACTICAS L A B O R A T O R I O DE BIOLOGA CH 061

SEMESTRE ACADEMICO 2013-1 PILAR GARCA AVELINO Jefe de Prcticas

Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa

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Cronograma de Practicas de Laboratorio de BIOLOGA - CH 061

LABORATORIO CLASE INTRODUCTORIA AL LABORATORIO 1. Reconocimiento de Biomolculas 2. Extraccin de ADN 3. Metabolismo celular EXAMENES PARCIALES PRACTICA CALIFICADA 1 Bioseguridad y Laboratorios: 1, 2, 3 EXPOCIENCIA 4. Hongos ambientales PRACTICA CALIFICADA 2: Anlisis de un artculo cientfico EXMENES FINALES EXMENES SUSTITUTORIOS

Fecha

Entrega de Informe

10 y 11 de setiembre 17 y 18 setiembre 1 y 2 octubre 8 y 9 octubre 14 16 octubre* 23 octubre 5 al 8 noviembre 12 y 13 noviembre 19 nov., 05 pm 20 nov., 11 pm 09 11 diciembre* 16 18 diciembre* NO HAY LABORATORIO NO HAY LABORATORIO 24 y 25 set. 8 y 9 oct. 15 y 16 oct. NO HAY LABORATORIO En las horas de clase NO HAY LABORATORIO 19 y 20 noviembre

En la fecha de realizacin de los laboratorios se entregaran los preinformes correspondientes. * Las fechas definitivas de los exmenes parcial, final y sustitutorio sern definidas por el Dr. Guy Carvajal

Prof. Pilar Garca Avelino

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PRESENTACION DEL MANUAL DE PRCTICAS

El propsito del Laboratorio es familiarizar al estudiante con la metodologa de trabajo de la biologa, proporcionarle un ambiente donde tenga oportunidad de encontrarse con sustancias e instrumentos que le motive a experimentar. Considerando al laboratorio como un lugar donde el trabajo en equipo se facilita, da lugar a un proceso de constante integracin, comunicacin, investigacin, construccin de ideas, surgimiento de nuevas preguntas, donde las actividades experimentales propician la reorganizacin de conocimientos y facilitan el alcanzar un aprendizaje significativo. Para logra tales fines, se propone esta gua que, como material de apoyo didctico, reforzara el proceso constante de enseanza aprendizaje, requiriendo la participacin y gua del profesor. Material necesario para trabajar por alumno: Individualmente: un mandil, gafas de seguridad, guantes, plumn marcador, toalla, cuaderno de apuntes. Por equipo: El que se indique para cada prctica. INSTRUCCIONES GENERALES. 1. Busca conceptos, antecedentes previos a la realizacin de las prcticas. 2. Construye la hiptesis de trabajo, antes de solicitar su material. 3. Lee cuidadosamente los experimentos antes de ejecutarlos. 4. Recurre a tus libros de texto y/o consulta para aclarar dudas despus de realizadas las practicas, o consulta al profesor responsable. 5. Al efectuar cada uno de los pasos del desarrollo experimental, observa minuciosamente y anota los cambios ocurridos. 6. Al concluir el desarrollo experimental, resuelve el cuestionario para su futura revisin. 7. Elabora tus conclusiones. PRECAUCIONES PARA EL DESARROLLO DE CADA EXPERIMENTO Las medidas oportunas y la compresin de las prcticas a seguir, har del laboratorio un lugar seguro como cualquier ambiente de clases. Para ello debern tenerse en cuenta, en forma general las siguientes precauciones: 1. Observa donde dejas el material caliente, cerciorndote que este frio antes de tomarlo con la mano. 2. Cuando calientes un tubo de ensayo, no lo apuntes hacia ti o hacia tus compaeros, pude proyectarse su contenido. 3. Si cae sobre ti o en tu ropa un material corrosivo, lvate inmediatamente con abundante agua, e infrmalo al profesor del curso. 4. Nunca pruebes una sustancia. 5. Al detectar el olor de un liquido, no coloques la cara sobre la boca del recipiente, con tu mano abanica hacia ti el aroma. 6. Antes de usar un reactivo lee dos veces la etiqueta de su contenido. 7. Los tubos de ensayo no pueden calentar ser por el fondo sino por las paredes, para evitar su expulsin del contenido. 8. No arrojes cuerpos slidos en los lavaderos, no viertas directamente los cidos. 9. Rotula tu material de trabajo, as te ser fcil identificarlos. 10. Cuando trabajes con el mechero mantn tu cabello recogido. 11. Nunca emplear papel para encender el mechero.
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PRESENTACION DEL INFORME

No olvidarse de indicar el grupo de laboratorio (incluido horario) que pertenecen: A1, A2, B1, B2, C1, C2
I. II. Resumen (1 p) Qu teoras lo sustentan? En relacin al desarrollo de los experimentos. Objetivos especficos (1 p) Tema central de estudio para cada experimento desarrollado Observaciones experimentales, datos y resultados (para c/experimento) (3 p) Durante el desarrollo del experimento: Qu se observ? Qu datos hubieron? Cules fueron los resultados?Qu reacciones se dieron? Se indican los resultados tal y como se dieron durante la investigacin. Se debe describir los pasos ejecutados durante la experimentacin Se pueden presentar los datos en tablas, grficas, o figuras, debidamente numeradas Discusin de las observaciones experimentales, datos y resultados (3 p) Se obtuvieron los resultados correctos segn la teora? Si, no? Qu sucedi? Es la etapa que encadena los resultados obtenidos por la investigacin. Se relaciona, interpreta y discute los resultados. Se pone a prueba la capacidad analtica y de autocrtica del investigador. La discusin pone el toque personal al trabajo. Conclusiones (2 p) Qu significan los resultados? Las conclusiones estn relacionadas con los objetivos. Es el anlisis del cumplimiento de cada uno de los objetivos de la prctica Cuestionario (1.5 p) Preguntas relacionadas al tema Bibliografa (0.5 p) Qu autores se consultaron para fundamentar la investigacin? Qu fuentes han sido consultadas (libros, artculos, tesis? REVISAR: Referencias Bibliografas al estilo Vancouver, en: http://www.unap.cl/p4_biblio/docs/Normas_VANCOUVER.pdf

III.

IV.

V.

VI.

VII.

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PREINFORME DEL LABORATORIO N 1

RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS
Nombre del Alumno: Grupo: Fecha:
Recuerde que el PREINFORME debe de entregarlo de manera individual, el da de realizacin del laboratorio, se presenta en hojas A4 bond, que tiene un peso mximo de 4 ptos. sobre la nota del Laboratorio.

Calificacin

1. Realice el DIAGRAMA DE FLUJO de los experimentos a desarrollar PROCEDIMIENTO, realice un esquema de trabajo de cada experimento. Es el plan ordenado de la forma en que se realiz la prctica para lograr el objetivo de la misma. (2 puntos) Ejemplo:

A
Se indica el proceso (Se adiciona se separa)

C
a. b. c. d. e. Identificacin de azucares reductores Hidrolisis de la sacarosa Reconocimiento del almidn Reconocimiento de protenas Reconocimiento de lpidos

2. Cuestionario: a. Mencione algunos carbohidratos alimenticios, segn la clasificacin de la siguiente tabla: Monosacridos (3 ej.) Disacridos (3 ej.) Oligosacridos (1 ej.) Polisacridos (2 ej.) b. c. d. e. Qu es la inversin de la sacarosa? Qu sucede qumicamente al aadir lugol a las muestras positivas para la reaccin? Cul es la reaccin que tiene lugar entre el reactivo de Biuret y las protenas? Cul es el valor de la polaridad de la acetona y el cloroformo?

3. Bibliografa: cite correctamente la bibliografa consultada

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GUIA DE LABORATORIO N 1

RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS
INTRODUCCIN En los organismos se encuentran cuatro tipos diferentes de molculas orgnicas en gran cantidad: carbohidratos, lpidos, protenas y nucletidos. Todas estas molculas contienen carbono, hidrgeno y oxgeno. Adems, las protenas contienen nitrgeno y azufre, y los nucletidos, as como algunos lpidos, contienen nitrgeno y fsforo. Se ha dicho que es suficiente reconocer cerca de 30 molculas para tener un conocimiento que permita trabajar con la bioqumica de las clulas. Dos de esas molculas son los azcares glucosa y ribosa; otra, un lpido; otras veinte, los aminocidos biolgicamente importantes; y cinco las bases nitrogenadas, molculas que contienen nitrgeno y son constituyentes claves de los nucletidos. En esencia, la qumica de los organismos vivos es la qumica de los compuestos que contienen carbono, es decir, los compuestos orgnicos. El carbono es singularmente adecuado para este papel central, por el hecho de que es el tomo ms liviano capaz de formar mltiples enlaces covalentes. A raz de esta capacidad, el carbono puede combinarse con otros tomos de carbono y con tomos distintos para formar una gran variedad de cadenas fuertes y estables y de compuestos con forma de anillo. Las molculas orgnicas derivan sus configuraciones tridimensionales primordialmente de sus esqueletos de carbono. Sin embargo, muchas de sus propiedades especficas dependen de grupos funcionales. Una caracterstica general de todos los compuestos orgnicos es que liberan energa cuando se oxidan. Entre los tipos principales de molculas orgnicas importantes en los sistemas vivos estn los carbohidratos, los lpidos, las protenas y los nucletidos. OBJETIVOS Determinar cualitativamente los azucares reductores. Hidrolizar la sacarosa. Reconocer la presencia de almidn. Reconocer cualitativamente las protenas presentes en muestras biolgicas. Demostrar la solubilidad de los lpidos en diferentes tipos de solventes.

MATERIALES Y REACTIVOS Tubos de ensayo, mechero, placas petri, vasos de precipitado, gradillas, pipetas graduadas, propipetas, pinzas de madera, pisceta, almidn. Reactivo de Fehling, solucin de azucares, solucin de almidn, acetona, cloroformo, sulfato de cobre, hidrxido de sodio Por grupo: un huevo, 5 ml leche, 1 papa (elementos crudos)
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IDENTIFICACIN DE AZCARES REDUCTORES (I)

FUNDAMENTO Los monosacridos (figura 1) y la mayora de los disacridos poseen poder reductor, que deben al grupo carbonilo que tienen en su molcula. Este carcter reductor puede ponerse de manifiesto por medio de una reaccin redox, llevada a cabo entre ellos y el sulfato de cobre (II). Tras la reaccin con el glcido reductor se forma xido de cobre (I) de color rojo. De este modo el cambio de color indica que se ha producido la reaccin y que el glcido presente es reductor. Figura N1. Algunos monosacridos

Reaccin de Fehling: Es una reaccin cualitativa que sirve para determinar la presencia de un azcar reductor que no sea sacarosa (carece de carbono anomrico y no es azcar reductor). El reactivo de Fehling presenta sulfato de cobre, carbonato de sodio, citrato de sodio, y agua. En la reaccin para determinar a los azucares reductores los agentes estabilizantes de la reaccin son el carbonato y citrato, el sulfato de cobre es el reactante especficamente el Cu que va a reaccionar con los grupos qumicos de aldehdos y cetonas. Que en reacciones de oxido reduccin el Cu se convierte en CuO dando un color rojo ladrillo que precipitar posteriormente, como lo expresa la siguiente reaccin (figura 2):

Figura N2. Reaccin de Fehling

PROCEDIMIENTO Rotular 6 tubos de ensayo, adicionar el azcar correspondiente. Adicionar los reactivos en el orden sealado Mezclar por inversin el reactivo con cada uno de sus componentes Someter a la accin del calor hasta ebullicin La reaccin ser positiva si en la muestra se forma un precipitado color rojo ladrillo (CH2O), y ser negativa si se queda azul o cambia a un tono de azul-verdoso.

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Tabla N1. Azucares reductores TUBO DE ENSAYO 1 1.Solucin de glucosa 2.Solucin de maltosa 3.Solucin de lactosa 1% 1% 1% 3 ml 3 ml 3 ml 3 ml 3 ml 3 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1ml 1 ml 1 ml 2 3 4 5 6

COMPONENTES

4.Solucin de fructuosa 1% 5.Solucion de galactosa 1% 6.Solucin de sacarosa 0.5% Reactivo de Fehling A Reactivo de Fehling B Calor: ebullicin (aprox. 5)

mechero / bao mara

GRAFICAR / ESQUEMATIZAR / ANOTAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS (De las distintas muestras)

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HIDROLISIS DE LA SACAROSA (II)

FUNDAMENTO La sacarosa (figura 3) es un disacrido que no posee carbonos anomricos libres por lo que carece de poder reductor y la reaccin con el licor de Fehling es negativa, como ha quedado demostrado en el anterior experimento. Sin embargo la presencia de HCl y el calor, la sacarosa se hidroliza, es decir incorpora una molculas de agua y se descompone en los monosacridos que la forman: glucosa y fructuosa, que s son reductores (figura 4). Figura N 3. Sacarosa

Figura N 4. Disacridos: (a) reductor, (b) no reductor

PROCEDIMIENTO Mezclar por inversin el reactivo con cada uno de sus componentes, ver la tabla 3. Someter a la accin del calor hasta ebullicin Tabla N2. Componentes de la hidrolisis de la sacarosa COMPONENTES Solucin de sacarosa cido clorhdrico HCl 0.5% 1M Enfriar Hidrxido de sodio NaOH 1M Reactivo de Fehling A Reactivo de Fehling B Calor: ebullicin 1 ml 1 ml 1 ml Muestra sacarosa 3 ml 1 ml 5

Calentar al mechero

mechero bao mara La reaccin ser positiva si en la muestra se forma un precipitado color rojo ladrillo (CH2O), ser negativa, si la hidrolisis no se ha realizado correctamente, apareciendo una coloracin verde en el tubo de ensayo.

GRAFICAR / ESQUEMATIZAR / ANOTAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS

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RECONOCIMIENTO DE POLISACARIDOS: ALMIDN (III)

FUNDAMENTO El almidn es un polisacrido vegetal formado por dos componentes: la amilosa y la amilopectina. Esta prueba usa como reactivo el lugol, se basa en la especificidad del almidn cuando est presente en solucin, la cual da un color azul en presencia del Yodo. El lugol presenta: yoduro de potasio y yodo, ms agua (solucin de Lugol). El yodo de la solucin tiene afinidad por los enlaces 1-4 y 1-6 de la molculas de almidn, esta interaccin del yodo por dichos enlaces producen el cambio de coloracin no por una reaccin qumica sino por una reaccin de adsorcin o fijacin de iodo en la superficie de la molcula de amilosa, lo cual solo ocurre en frio (a temperatura ambiente) La amilosa en disolucin coloidal y en presencia de iodo se colorea de azul toma color azul, la amilopectina da una coloracin rojo violcea. Figura N 5. Fragmento de la molcula del almidn (amilopectina) En el crculo un monmero de glucosa.

PROCEDIMIENTO Colocar los componentes indicados en la tabla 4, adicionar el reactivo de lugol y observar los primeros cambios de coloracin. Tabla N 3. Reconocimiento del almidn COMPONENTES Solucin de almidn 2% Papa rallada Albmina Reactivo de Lugol 3 gotas 3 gotas TUBO DE ENSAYO 1 1 ml 1 ml 1 ml 3 gotas
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Mezclar por inversin y anotar los resultados, ser positivo si se torna azul, violceo. Calentar suavemente, sin que llegue a hervir, hasta que pierda el color. Enfriar el tubo de ensayo en agua fra, observar como a los 2-3 minutos reaparece el color azul

GRAFICAR / ESQUEMATIZAR / ANOTAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS

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RECONOCIMIENTO DE PROTENAS (IV)

FUNDAMENTO Las protenas son macromolculas formadas por la unin de muchos aminocidos (figura 6) por enlace peptdico (estructura primaria). Adems pueden darse uniones por enlaces dbiles de distinta naturaleza que hacen que la protena adquiera una conformacin tridimensional caracterstica (estructura terciaria) ver la figura 7. Las variaciones de pH, temperatura o concentracin salina pueden destruir esos enlaces dbiles de manera que la protena pierde su conformacin y se dice que se desnaturaliza.

Figura N6. Unidad de la protena: aminocido

Figura N7. Estructura de las protenas

Las protenas debido al gran tamao de sus molculas forman con el agua soluciones coloidales que pueden precipitar formndose cogulos al ser calentadas a temperaturas superiores a 70C o al ser tratadas con soluciones salinas, acidas, alcoholes, etc. Una de las reacciones coloreadas especficas de las protenas, que sirven para su identificacin, cabe resaltar la reaccin de Biuret (figura 8). Esta reaccin los producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos, ello se debe a la presencia del enlace peptdico CO-NH que se destruye al liberarse los aminocidos Reaccin de Biuret (figura 8) Se debe a los componentes que presenta: el hidrxido de sodio y sulfato de cobre (II); el cual el agente denaturante de las protenas es el hidrxido y el reactante es el sulfato de cobre. Las protenas despus de ser denaturadas facilitan la interaccin del Cu con los pares de electrones sin compartir del grupo amino del pptido mediante enlaces de coordinacin con la formacin de un complejo coloreado prpura violceo, cuya intensidad depende de la concentracin de protenas.
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Figura N8. Complejo de cobre formado en la reaccin de Biuret

PROCEDIMIENTO Rotular tres tubos de ensayo, en el primero agregar 2 ml de albmina (huevo), en el segundo tubo 2 ml de leche, y en el tercero 2 ml de la solucin de almidn. Aadir 0.5 ml de hidrxido de sodio (NaOH) al 5%, y 0.5ml de sulfato de cobre (Cu2SO4) al 1% a cada tubo. Tabla N4. Ensayos de protenas TUBO DE ENSAYO 1 Albmina (huevo) Casena (lcteo) Sol. almidn NaOH 5% 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml 2 ml 2 ml 2 ml 0,5 ml 0,5 ml 2 3

COMPONENTES

Rvo. Biuret: Cu2SO4 1% -

Observe la formacin del color violeta en los tubos que presentan protenas, siendo Biuret (+), de no haber un cambio de color ser Biuret (-).

GRAFICAR/ESQUEMATIZAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS

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RECONOCIMIENTO DE LPIDOS (V)

FUNDAMENTO Los lpidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en pequesimas gotas formando una emulsin de aspecto lechoso que es transitoria, pues al dejarlo en reposo desaparece por la reagrupacin de las gotitas de grasa en una capa que por su menor densidad se sita sobre el agua. Las grasas son solubles en disolventes orgnicos. En este experimento el reconocimiento de lpidos ser por la prueba de solubilidad, identificando el comportamiento de las molculas de aceite con el agua, las cuales no se homogenizan, debido a que estas presentan caractersticas diferenciales, mientras que el agua es polar, el aceite es no polar, esto hace que microscpicamente se note que el aceite forme micelas en solucin acuosa. Donde las colas hidrofbicas de las molculas de aceite se esconden del agua adoptando la forma de micelas. PROCEDIMIENTO Tabla 8. Reconocimientos de lpidos por solubilidad TUBO DE ENSAYO COMPONENTES 1 Aceite Agua destilada Acetona Cloroformo 1 ml 2 ml 2 ml 2 ml 2 1 ml 3 1 ml

Agregar por las paredes del tubo cada componente:

Rotular los tubos y en cada uno de ellos adicionar 1 ml de aceite Luego por las paredes de cada tubo adicionar: 2ml de agua para el primer tubo, 2ml de cloroformo para el segundo tubo y cloroformo para el tercer tubo NO HOMOGENIZAR! Hacer la primera observacin. Mezclar por inversin cada tubo, dejar en reposo por 5 minutos Anotar las observaciones respectivas.

Tabla 9. Resultados de la solubilidad de los lpidos Muestra Soluble Aceite + agua destilada Aceite + acetona Aceite + cloroformo

GRAFICAR/ESQUEMATIZAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS

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INFORME DEL LABORATORIO N 1

RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS
Nombre del alumno (Apellidos, Nombre) Pre informe (4 p) Informe (12 p) Desempeo (4 p)

Nota

1. Resumen (1p)

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2. Objetivos especficos (1p)

3. Datos y observaciones experimentales (4 p)

Experimento N 1: Identificacin de Azucares Reductores
Tabla N1. Resultados de azucares reductores GLCIDO Reductor Importante: Es necesario indicar la formacin de precipitado y la cantidad con un signo (+++). glucosa maltosa lactosa fructuosa galactosa sacarosa

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Experimento N 2: Reconocimiento del Almidn

Tabla N2. Resultado de reconocimiento del almidn Muestra Reaccin al lugol almidn papa Clara de huevo

Experimento N 3: Reconocimiento de polisacridos: Almidn

Tabla N3. Resultado de reconocimiento del almidn Muestra Almidones? Importante: Es necesario indicar la intensidad del color con un signo (+++). almidn papa huevo

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Experimento N 4: Reconocimiento de Protenas

Tabla N4. Ensayos de protenas

Muestra Protenas

albmina

casena

almidn

Importante: Es necesario indicar la intensidad del color con un signo (+++).

Experimento N 5: Reconocimiento de Lpidos

Tabla N5. Resultados de la solubilidad de los lpidos Muestra Soluble Aceite + agua destilada Aceite + acetona Aceite + cloroformo

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4. Discusin de observaciones, datos y resultados (3 p)

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5. Conclusiones (2 p)

6. Cuestionario (1.5 p)
1. Qu azcares son reductores? 2. Qu funcin tiene el cido clorhdrico? 3. Al trabajar con el lugol Por qu se da el cambio de coloracin despus de sometido al calor? Fundamente su respuesta. 4. Qu es la desnaturalizacin? 5. Qu la provocado que la desnaturalizacin en la muestra? 6. Cul de las muestras empleadas tiene mayor cantidad de protenas? 7. Qu es una emulsin transitoria? 8. Qu es una emulsin permanente? 9. Con cul de los solventes orgnicos fue soluble el aceite? 10. En nuestro sistema digestivo que enzima se encarga de solubilizar las grasas que consumimos?

7. Bibliografa (0.5 p)
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ANEXO 1

PREPARACION DE REACTIVOS LABORATORIO: RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS

a. Soluciones de azucares glcidos al 1% Glucosa, maltosa, lactosa, fructuosa, galactosa, sacarosa, almidn. Se pesa 1 gramo de un glcido y se disuelve en 100 ml de agua destilada, agitando hasta disolverse por completo. Se vierte en un frasco limpio y se rotula, indicando la fecha de preparacin. As para cada uno de ellos. Para el caso del almidn, debe emplearse agua destilada caliente y agitacin constante b. Solucin de almidn al 2% Se pesa 2 gramos de almidn y se disuelve en 100 ml de agua destilada caliente y en agitacin constante. c. Hidrxido de sodio al 5% Se pesa 5 gramos de NaOH y se disuelve en 100 ml de agua destilada. d. Reactivo de Fehling Solucin A: solucin al 3% de sulfato cprico cristalizado Pesar 30 g de sulfato cprico Cu2SO4 y aforar en un litro con agua destilada Solucin B: solucin al 15% de sal de Rochelle (tartrato de sodio y potasio) en solucin acuosa al 5% de hidrxido de sodio NaOH. Preparar un litro de hidrxido de sodio al 5% (50 grs en 1 L) y adicionarle 150 g de tartrato de sodio y potasio e. Solucin de lugol: yodo/yoduro de potasio Adicionar 2 g de yoduro de potasio y1 g de yodo a 80 ml de agua destilada, agitar hasta solubilizar los reactivos Aforar 100ml de agua. f. Reactivo de Biuret Solucin A: 17.3 g de sulfato de cobre Cu2SO4 en 100 de agua destilada caliente Solucin B: 17.3 g de citrato sdico Na2CO3y 100 g de bicarbonato de sodio anhidro NaHCO3 en 800 ml de agua destilada caliente. Se mezclan ambas soluciones, se enrazan a un litro y se ponen en un matraz cubierto para evitar la accin de la luz. El reactivo se guarda en un frasco color mbar.

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