2do Encuentro de Jvenes Investigadores en Ciencia y Tecnologa de Materiales Posadas Misiones, 16 - 17 Octubre 2008.

SNTESIS DE HIDROGELES PARA SU POSIBLE APLICACIN EN LIBERACIN CONTROLADA DE DROGAS.

Julio C. Cuggino (1)
(1)

Director/es: Prof. Dra. Cecilia Ins Alvarez Igarzabal Departamento de Qumica Orgnica Facultad de Ciencias Qumicas. Universidad Nacional de Crdoba Ciudad Universitaria Haya de la Torre y Medina Allende- Ciudad de Crdoba - Crdoba Email: jcuggino@fcq.unc.edu.ar

TPICO: MATERIALES POLIMRICOS RESUMEN Los hidrogeles son materiales polimricos que forman una red tridimensional, tienen la habilidad de hincharse en agua, manteniendo su forma hasta un determinado equilibrio sin disolverse. El proceso de absorcin de agua es reversible y en numerosos casos dependiente de las condiciones ambientales a las que el hidrogel es sometido. Esta importante caracterstica que les permite controlar la absorcin-desorcin del lquido, permite que los hidrogeles sean utilizados como sistemas de liberacin controlada de drogas en diferentes reas. En base a esta importante aplicacin, en este trabajo se realiz la sntesis y caracterizacin de nuevos hidrogeles. Los mismos se sintetizaron por polimerizacin a radicales libres, en solucin, usando monmeros tales como N-isopropil acrilamida (Nipa) y N-acriloil tris(hidroximetil) aminometano (NAT) entrecruzados con dialiltartradiamida (DAT) a 25 C. Se utiliz agua como solvente, persulfato de amonio (APS) como iniciador y tetraetilenmetilendiamina (TEMED) como activador. Los nuevos materiales fueron caracterizados mediante la evaluacin de algunos parmetros de red, tales como peso molecular entre puntos de entrecruzamiento (Mc), fraccin en volumen de polmero en estado hinchado (v2s ) y tamao de poro () en funcin de la temperatura. Adems, se realizaron estudios de cintica de hinchamiento en agua, y se determinaron los correspondientes coeficientes de difusin (D). Palabras claves: Hidrogeles termosensibles, parmetros de red, hinchamiento, liberacin de drogas. INTRODUCCIN Los Hidrogeles son materiales polimricos que forman una red entrecruzada con forma tridimensional. Estos materiales pueden tener origen natural o sinttico y tienen la interesante propiedad que se hinchan en contacto con agua u otro fluido formando materiales blandos y elsticos, pero no se disuelven [1]. El proceso de absorcin de agua es reversible y muchas veces dependiente de las condiciones a las que el material est sometido. Algunos estmulos fsicos como temperatura, luz, presin o qumicos como pH, fuerza inica y algn evento de reconocimiento molecular, han sido aplicados para inducir estas respuestas inteligentes [2-4]. Esta importante caracterstica de manejar el hinchamiento-deshinchamiento de estos materiales segn el medio circundante, adems de su gran retencin de agua, lo cual los hara biocompatibles, permite a los hidrogeles ser buenos candidatos para utilizarlos en sistemas de liberacin de drogas controlada por estmulos. Para la liberacin controlada en sistemas vivos y en particular en el cuerpo humano, la temperatura es una variable que se pueden utilizar cuando se piensa en disear un sistema que responda a este estmulo. Como ya es conocido, los polmeros de poli (N-isopropilacrilamida) han sido ampliamente estudiados debido a que presentan cambios reversibles de su estado hinchado-deshinchado de acuerdo a la temperatura [5]. La temperatura crtica de esta transicin de fase (LCST, lower critical solution temperature) se encuentra

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alrededor de los 32 C. Por debajo de esta temperatura el material permanece hinchado, pero por encima de la misma el gel colapsa y se deshincha [6]. Con el objetivo de modificar la LCST de estos polmeros hacia temperaturas cercanas a la del cuerpo humano (37 C), varios investigadores han tratado de co polimerizar a NIPA con monmeros hidroflicos, lo cual, retardara la formacin de interacciones hidrofbicas que dan origen a la transicin. Por otro lado, el monmero hidroflico N- acriloil -TRIS (hidroximetil) aminometano (NAT), ha sido muy poco utilizado para la sntesis de hidrogeles. Solo algunos trabajos reportan el uso de este monmero en geles de electroforesis o como un componente de arcrilamidas multifuncionales [7-8]. En adicin, la eleccin de este monmero como co-monmero de NIPA tendra la posibilidad de aumentar la LSCT, proporcionarle al material un control de su hinchamiento pH dependiente, adems de introducir al material grupos funcionales tiles para futuras modificaciones. Con lo mencionado anteriormente, conocer la retencin de agua y las propiedades estructurales (tamao de poro, peso molecular entre puntos de entrecuzamientos) en funcin de la temperatura de estos polmeros, es el punto de partida para una futura aplicacin en sistemas de liberacin controlada de agentes activos con estmulos de temperatura. Por tal motivo, en este trabajo se realiz la sntesis de nuevos hidrogeles inteligentes, con dos objetivos principales. El primero, fue cambiar la LCST de los hidrogeles hacia temperaturas ms elevadas y cercanas a 37 C co-polimerizando NIPA con NAT. El segundo, analizar como afectan las diferentes composiciones monomricas (NIPA-NAT) y la temperatura en: la velocidad y retencin final de agua y en los parmetros estructurales de los materiales. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL 1. Sntesis de los Hidrogeles La sntesis de los hidrogeles fue realizada por polimerizacin radicalaria en solucin acuosa utilizando NIPA y NAT como monmeros y dialiltartradiamida (DAT) como agente entrecruzante (Figura 1), persulfato de amonio (APS) como iniciador y tetraetilenmetilendiamina (TEMED) como activador. En un procedimiento tpico, los monmeros, agente entrecruzante y APS fueron disueltos en agua en un tubo de ensayo y agitados por 20 minutos en un ultrasonido, tras lo que se burbuje nitrgeno por 5 minutos. Por ltimo, se adicion la solucin acuosa de TEMED y la reaccin se llev a cabo por 24 hs a 25 C. Las condiciones experimentales se muestran en la Tabla 1. Una vez finalizada la reaccin, los tubos fueron rotos y los hidrogeles extrados. Los productos en forma de barra fueron cortados en discos de 3-4 mm de espesor, se realizaron 3 lavados de los mismos con agua destilada y se dejaron secar en bomba de vaco por 2 das a 25 C.
O OH
O CH3 NH CH2 CH3
CH2 NH OH O O OH NH CH2

NH CH2 HO

OH

NAT

NIPA

DAT

Figura 1. Monmeros y agente entrecruzante utilizados. 2. Experimentos de Hinchamiento 2.1 Dinmica y equilibrio de hinchamiento: Muestras secas fueron colocadas en agua y mantenidas a temperatura ambiente (22 C), para determinar su comportamiento de hinchamiento. Las muestras hinchadas se removieron del bao de agua a diferentes intervalos de tiempo, fueron secadas superficialmente con papel tissue, pesadas y colocadas nuevamente en el bao de agua. Las medidas fueron realizadas hasta peso constante. La determinacin de la relacin de hinchamiento en peso a cada tiempo (qw) se realiz gravimtricamente utilizando la ecuacin 1. La misma relacin, pero en el equilibrio fue calculada a partir de la ecuacin 2: qw= mh / ms (1) qw,e = me / ms (2)

donde, mh es la masa del hidrogel hinchado a cada tiempo, me es la masa del hidrogel hinchado en el equilibrio y ms es la masa del hidrogel seco.

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Para las curvas de cintica de hinchamiento, se grafic qw en funcin del tiempo (min). Para determinar el tipo de transporte del agua dentro de las matrices, se us la ecuacin 3 [9]: F = Mt / M= k t n (3)

donde Mt denota la cantidad de agua difundida dentro del hidrogel a tiempo t (masa hinchada a tiempo t masa seca) mientras que M corresponde a la cantidad de agua difundida dentro de la matriz a tiempo infinito (en el equilibrio), k es una constante relacionada con la estructura de la red y el exponente n es un nmero que determina el tipo de transporte. As, se grafica ln F versus ln t utilizando solo los valores hasta un 60 % de hinchamiento y luego se calcula n y k a partir de la pendiente y de la ordenada al origen de las lneas, respectivamente. El coeficiente de difusin del agua a travs de las redes fue calculada de la ecuacin 4 [9]. D = r2 (k/4)1/n (4) donde r = radio del hidrogel seco. 2.2 Hinchamiento de la red en funcin de la temperatura: Para los estudios de hinchamiento en respuesta a la temperatura, los hidrogeles secos fueron equilibrados en buffer fosfato a pH=7,4 en una rango de temperaturas entre 20 y 80 C por 24 hs. A cada temperatura los hidrogeles fueron removidos del agua, secados superficialmente con papel tissue y pesados. Luego, fueron re equilibrados a una nueva temperatura y los pesos hinchados fueron tomados nuevamente luego de 24 hs. El hinchamiento de equilibrio y algunos parmetros de red a cada temperatura fueron calculados para todos los hidrogeles. 3. Parmetros estructurales de las redes [9] La densidad de cada producto fue determinada midiendo la masa, el radio y el espesor de los discos secos. El Volumen aproximado fue calculado como un cilindro. La fraccin en volumen de polmero en el estado hinchado v2s fue calculado como la ecuacin 5: v2s= [ 1 + (((me/ms 1) 2) / 1)] -1 (5)

donde, 2 = densidad del polmero seco y 1 = densidad del liquido de hinchamiento. El peso molecular entre puntos de entrecruzamientos Mc fue calculado de acuerdo a la ecuacin 6: Mc = ( (1-(2/)) V1 2 v2r2/3 v2s1/3) / (ln(1-v2s) + v2s + v2s2) (6)

donde, = funcionalidad del entrecruzante (=4), V1 = volumen molar del solvente (18ml mol-1), = parmetro de interaccin entre polmero y solvente ( = 1/2 + v2s/3) y v2r = fraccin en volumen del polmero despus de su preparacin calculado como ecuacin 7 y 8: v2r =C0 Vr (7) Vr = (MNIPA fNIPA + MNAT fNAT) / 2 (8)

donde: C0 = concentracin inicial de monmeros (mol mL-1), Vr = el volumen molar promedio de las unidades repetitivas del polmero, M= pesos moleculares de monmeros, f = fraccin molar de monmeros. El tamao de poro de las redes fue calculado a partir de la ecuacin 9 [10]: = v2s-1/3 (((2Cn Mc)/ Vr)1/2) l

(9)

donde, Cn = radio caracterstico de Flory del polmero para un solvente determinado (aproximado como el valor de NIPA Cn= 9.2) y l = largo de los enlaces de la cadena principal del polmero (1.54 para polmeros vinlicos). RESULTADOS Y DISCUSIN

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1. Sntesis de los Hidrogeles Todos los hidrogeles sintetizados resumidos en la Tabla 1 dieron polmeros del tipo barra insolubles. La masa total de polmero respecto a monmeros inicial puestos a reaccionar fueron aproximadamente iguales lo cual indicara que el rendimiento de las reacciones fue casi de 100%. Tabla 1.Condiciones de sntesis y resultados de dinmica y equilibrio de hinchamiento de los hidrogeles.
Ha) H1 H2 H3 H4 H5 NAT Mmol 7.08 5.01 3.66 2.13 -NIPA Mmol --2.13 3.52 4.99 7.13 qw,e 7.94 12.02 13.85 15.33 24.76 n 0.55 0.58 0.58 0.62 0.68 k 0.0235 0.0158 0.0212 0.0136 0.0042 D (x 10-5) cm2/s 6.39 5.43 5.38 4.96 2.26

a) Todos los geles fueron preparados con 5 ml de agua destilada, 0.132 Mmol de DAT, 0.075 Mmol APS y 0.625 mL de solucin acuosa de TEMED 0.32 M.

2. Experimentos de Hinchamiento 2.1 Dinmica y equilibrio de hinchamiento: Cuando geles secos se ponen en contacto con agua, en una primera instancia el agua comienza a penetrar dentro de la red polimrica a una velocidad determinada que comienza a disminuir poco a poco hasta llegar a un equilibrio. Este equilibrio se alcanza cuando las fuerzas que generan las molculas de agua para ingresar y las fuerzas elsticas inversas que generan las cadenas de la red para contrarrestar dicho efecto son iguales. Segn la composicin qumica y estructural que los hidrogeles presenten, tanto la velocidad de entrada de agua como el valor de hinchamiento en equilibrio se vern modificados. En la Tabla 1 se muestran los resultados de los diferentes parmetros estudiados. El valor de qw,e disminuye conforme a la disminucin de la cantidad de NIPA. Esta tendencia podra ser explicada en base a que la presencia del monmero NAT podra dar origen a mayores interacciones puente hidrogeno intramoleculares entre las cadenas, ya que posee tres grupos hidroxilos. De esta manera, las cadenas polimricas tendran una interaccin puente hidrogeno cada vez menor con el agua a medida que aumenta la cantidad de NAT en las estructura y menor cantidad de agua podra ser absorbida.
30.0 27.5 25.0 22.5 20.0 17.5

H1 H2 H3 H4 H5

qw

15.0 12.5 10.0 7.5 5.0 2.5 0.0 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 4500 5000 5500 6000 6500 7000 7500

tiempo (min)

Figura 2. Dinmica de hinchamiento de los hidrogeles en agua. En la Figura 2 se muestran las cinticas de hinchamiento en agua de los hidrogeles a 25 C. Interesantemente, el equilibrio de la mayora de los hidrogeles se alcanza luego de 50 horas. Este lentitud de entrada de agua podria ser un indicio de que el agua no entra solo por difusin, sino que el polmero ejerce

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algn efecto para reacomodar sus cadenas lo cual hace lento el proceso. Esta explicacin se condice con los valores obtenidos que determinan el mecanismo de entrada de agua (n ver Tabla 1). Los valores de n de todos los hidrogeles se encuentran en el intervalo 0,5 1, lo cual indica que el proceso de hinchamiento est controlado tanto por difusin de agua como por relajacin de las cadenas (tipo no Fickniano). De todos modos, se observa una tendencia de un incremento de n a medida que NIPA incrementa, lo cual podra deberse a la diferencia de hidrofilicidad que los dos monmeros presentan. La presencia de mayores grupos con caractersticas hidroflicas en el monmero NAT hara que la difusin de agua en los primeros estadios se viera favorecida. Esta explicacin es sostenida por los valores de D para cada una de las matrices. 2.2 Hinchamiento de la red en funcin de la temperatura: Con el objetivo de determinar la LCST de cada uno de los hidrogeles y el efecto de la presencia de NAT sobre la misma, los qw,e se determinaron como funcin de la temperatura. La Figura 3 muestra los resultados de los experimentos.
14 13 12 11 10 9 8

H1 H2 H3 H4 H5

qw,e

7 6 5 4 3 2 1 0 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85

temperatura ( C)

Figura 3. Hinchamiento en equilibrio en buffer pH=7,4 en funcin de la temperatura Como era esperado, la incorporacin del monmero NAT a la estructura de NIPA provoc un aumento en su LCST. Ademas, el hidrogel con un 100 % de NIPA en su estructura posee un transicin de fase muy marcada, pasa de un estado hinchado a temperatura ambiente a un estado colapsado por encima de los 32 C. A medida que aumenta la cantidad de NAT en las redes el efecto de la variacin del hinchamiento con la temperatura se ve cada vez menos marcado, posiblemente a la disminucin de la presencia de grupos isopropilo aportados por NIPA que dan origen a la transicion. Un fenmeno interesante fue encontrado, el hidrogel H1 con NAT solo en su estructura, presenta una transicin de fase entre 60 y 70 C, lo cual podra ser atribuida a la ruptura de las fuerzas puente hidrogeno entre las cadenas que aumentara la cantidad de agua albergada. El fenmeno disminuye muy rpido con la disminucin de NAT en la estructura. 3. Parmetros estructurales de las redes En base a evaluar la posibilidad de usar un hidrogel como un material de liberacin de drogas con dependencia de la temperatura, conocer los parmetros que definen su estructura a diferentes temperaturas es muy importante. En la Tabla 2 se presentan los valores de v2s y Mc para los hidrogeles hinchados en agua, ademas se presentan los valores de v2s y obtenidos para cada uno de los hidrogeles a tres temperaturas diferentes calculados con los valores de Mc (a cada temperatura) obtenidos para los hidrogeles hinchados en buffer pH= 7,4. Analizando la influencia de la composicin monomerica en los parmetros de red obtenidos se puede observar que a medida que NIPA incrementa los valores de v2s disminuyen a 22 C, ciertamente debido a su mayor hinchamiento. De acuerdo a ello incrementa. Contrariamente a 35 C los valores de v2s incrementan a medida que NIPA aumenta en la serie, por lo tanto disminuyen. Este comportamiento se explica debido a

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que a 35 C se est por encima de la LCST de NIPA, por lo cual disminuye el hinchamiento del gel y colapsa. Cuanta ms cantidad relativa de NIPA en las muestras mayor y ms rpido es el colapso. Una tendencia similar ocurre a 40. Tabla 2.Valores de los parmetros de red obtenidos a diferentes temperaturas.
Ha) H1 H2 H3 H4 H5 22 C en agua 22 C a pH= 7,4 35 C a pH=7,4 40 C a pH=7,4

v2s
0,1143 0,0800 0,0738 0,0618 0,0453

Mc g/mol
42838 134372 160773 310048 786110

v2s
0,160 0,125 0.089 0,096 0,081

()
99 166 422 303 423

v2s
0,158 0,130 0,113 0,235 0,501

101 150 247 41 7

v2s
0,158 0,133 0,117 0,334 0,610

101 143 194 18 4

Por otro lado, si observamos la influencia de la temperatura sobre los parmetros de red, podemos observar claramente que: H1 no presenta modificaciones en v2s y debido a que su estructura no presenta cambios con la temperatura. Sin embargo, modificaciones cada vez mas marcadas en los parmetros estructurales v2s y de los geles se observan a medida que la cantidad de NIPA aumenta, posible consecuencia de la propiedad del monmero NIPA de colapsar por encima de 32 C lo cual modifica la estructura de cada hidrogel. CONCLUSIONES 1. En este trabajo, nuevos hidrogeles termosensitivos con diferente composicin de monmeros como NIPA y NAT han sido sintetizados. 2. El valor de difusin de agua dentro de los hidrogeles para los primeros estadios de tiempo (D) mostr una mayor velocidad de entrada de agua en los hidrogeles con mayor cantidad de NAT, sin embargo los hinchamientos en equilibrio favorecieron a los geles con mayor cantidad de NIPA. 3. La temperatura de transicin de fase critica LCST de polmeros con NIPA pudo ser modificada hacia valores mas cercanos a 37 C utilizando un 30 % del monmero NAT como copolmero, sin embargo la incorporacin de NAT en las matrices provoca una transicin de fase cada menos abrupta en funcin de la temperatura. 4. Los parmetros de red presentaron modificaciones ms marcadas a medida que la cantidad de NIPA aument con variaciones en la temperatura entre 20 y 35 C. H4 y H5 presentaron las mayores diferencias de estos parmetros. 5. Las diferencia en el tamao de poro de H4 entre 20 y 40 C, su alto grado de contenido de agua, adems de su LCST mas cercana a 37 C permite pensar en la posible incorporacin a este hidrogel de drogas con un tamao de entre 40 a 300 donde su liberacin podra ser controlada por la temperatura de ascuerdo a los . REFERENCIAS 1. J. Kopecek, Polymer chemistry: swell gels, Nature 2002, 417: 424. 2. Liu, Y.Y; Fan X. D. Polymer 2002, 43: 4997. 3. Kuckling, D.; Harmon, M. E.; Frank, C. W. Macromolecules 2002, 35: 6377. 4. Suzuki, A.; Tanaka, T. Nature (London) 1990, 346: 345 5. Zakir M.O. Rzaev, Sevil Dincer, Erhan Piskin Prog. Polym. Sci. 2007, 32: 534. 6. Hirokawa Y, Tanaka T. Volume phase transition in a non-ionic gel. J Chem Phys 1984, 81:6379. 7. Saito N, Sugawara T, Matsuda T. Macromolecules 1996, 29: 313. 8. Kozulic M, Kozulic B, Mosbach K. Anal Chem 1987, 163: 506. 9. Tuncer Caykara, Simin Kiper, Gkhan Demirel. Eur. Pol. Journal 2006, 42: 348. 10. Gudeman L. F. and Peppas N. A. J Membrane Science 1995, 107: 239