El Espermograma

Conceptos Importantes y Procedimiento

Licda. Mildred Guancn. Supervisora Laboratorio de Androloga. Clnica Santa Mara 2010

La interpretacin de un anlisis de laboratorio deber realizarlo el mdico especialista a cargo,
sin embargo es necesario que una pareja que se encuentra bajo constante flujo de informacin sobre las
tcnicas de reproduccin asistida, tenga una nocin de qu habla su mdico cuando el Factor Masculino
est presente.
El espermograma, de acuerdo a las normas de las Organizacin Mundial de la Salud (WHO) en
su 4 edicin, establece que debern evaluarse los Aspectos Fsicos (Anlisis Macroscpico) y Anlisis
Microscpico (Examen Directo, Concentracin, Movilidad y Morfologa)

Aspectos Fsicos del Semen
Volumen
El volumen del eyaculado humano ha sido tema de amplio estudio. El eyaculado ocurre de
manera sincronizada entre la fraccin Prosttica y la fraccin de las vesculas seminales. La primera
fraccin (20-30% del eyaculado) es un fluido blanco no-viscoso proveniente de la prstata y contiene
principalmente espermatozoides, as como cido ctrico, zinc, albmina y factores fibrinolticos; sta
fraccin inmediatamente interacta con la segunda fraccin (70%), la cual es un fluido amarillento con
pH alcalino, fructosa y prostaglandinas proveniente de las vesculas seminales. Ambas glndulas
accesorias son dependientes de Andrgenos para su diferenciacin, crecimiento, desarrollo y
mantenimiento; son sumamente importantes para la Espermatognesis, ya que proveen el vehculo de
movimiento para las clulas flagelares.
El volumen normal para una abstinencia de 3-5 das es alrededor de 2ml por eyaculado.
Cuando el volumen est por debajo de este valor se le conoce como Hipospermia. Esta condicin
puede ocurrir por bajos niveles de Testosterona o en la mayora de los casos, debido a las condiciones
de abstinencia y la comodidad al momento de recolectar la muestra en el laboratorio. Es tambin
determinante el factor de la edad: pacientes jvenes tienen por lo general volmenes mayores de
eyaculado.

pH
El semen posee una alta capacidad de regulacin del pH, mucho ms alta que la mayora de los
fluidos corporales, sta caracterstica se debe al equilibrio entre las secreciones prostticas y de las
vesculas seminales explicadas con anterioridad, as como de sus componentes. El valor de referencia
de acuerdo a la Organizacin Mundial de la Salud (WHO por sus siglas en ingls) en la ltima dcada
se ha establecido en pH 7.2. El semen mantiene su pH cerca de la neutralidad en el ambiente cido
de la vagina con la finalidad de dar oportunidad a los espermatozoides de entrar y moverse en el moco
cervical. Si el pH es menor de 7.0 en una muestra con azoospermia, puede que exista una obstruccin
de los conductos eyaculatorios o que exista la condicin de Ausencia congnita bilateral de los vasos
deferentes.

Viscosidad y Licuefaccin
Las propiedades del semen empiezan a cambiar inmediatamente luego de la eyaculacin; el
eyaculado inicial rpidamente se coagula formando un material gelatinoso que posteriormente se licua.
La licuefaccin ocurre en un perodo de 5 minutos in vivo (dentro de la vagina), pero puede tomar de
20-30 minutos in vitro (es decir fuera del cuerpo). Los factores de coagulacin vienen de las vesculas
seminales y los factores de licuefaccin vienen de la prstata. Una medida de la viscosidad es
realizada y recomendada por Manual de la OMS (1999), la cual define como una viscosidad anormal a
aquella cuyo filamento mide ms de 2 cm, medidos a travs de una pipeta, mientras que una muestra
con viscosidad normal se torna lquida en un perodo corto de tiempo. Una viscosidad lquida permite
a los espermatozoides moverse correctamente. Es posible que una muestra normal presente pequeos
granos gelatinosos, los cuales no se licuan y aparentemente no tienen significado clnico.

Apariencia
La muestra de semen deber ser examinada inmediatamente luego de la licuefaccin o si esto no
fuera posible antes de una hora, a travs de una simple inspeccin macroscpica a temperatura
ambiente.
Una muestra de semen normal tiene una apariencia homognea gris-opalescente. Puede
observarse menos opaca u opalescente si la concentracin de espermatozoides es muy baja. Es posible
encontrar muestras caf-rojizas cuando hay presencia de glbulos rojos, as como muestras amarillentas
cuando hay ictericia o cuando se consumen ciertas vitaminas.

Las propiedades fsicas de una muestra de semen proporcionan una perspectiva general de su
contenido real. Es de suma importancia estar concientes que si una de las propiedades mencionadas
anteriormente se encuentra fuera de los parmetros, no significa en ningn momento que pueda
diagnosticarse el Factor Masculino; solamente la completa interpretacin del espermograma,
incluyendo la evaluacin Microscpica puede determinar el diagnstico.

Examen Directo
Durante la investigacin inicial de la muestra, se obtiene un estimado de la concentracin,
movilidad y morfologa de los espermatozoides, as como la presencia de otro tipo de clulas (glbulos
rojos/blancos).

Preparacin para Examen Directo
a. Colocar un volumen de 10 uL de semen licuado en lmina portaobjeto, cubrir con portaobjeto de
22mmX22. El peso de este cubreobjeto permitir que la muestra se despliegue correctamente,
evitar la formacin de burbujas al momento de colocar el cubreobjeto.
b. Dejar estabilizar la muestra alrededor de 1 minuto. Observar bajo objetivo de 10X la muestra en
busca de agregacin de espermatozoides (nudos espermatozoides) o aglutinacin.
c. Observar en objetivo de 40X, establecer un estimado de espermatozoides por campo. Este
estimado permitir decidir la dilucin correcta para establecer la concentracin real de
espermatozoides en la cmara de Neubauer.
Tabla 1. Diluciones y Factores de conversin para Cmara de Neubauer.

Factores de
Conversin
Nmero de
cuadrados contados
Espermatozoides
por campo (40x)
Dilucin
Semen+Diluyente
25 10 05
<15 1:5 20 8 4
15-40 1:10 10 4 2
40-200 1:20 (5uL+95uL) 5 2 1
>200 1:50 2 0.8 0.4
Todas las muestras donde no se observan espermatozoides en 40x, debern ser centrifugadas para detectar presencia de
espermatozoides en su sedimento. Solamente cuando no se observa ningn espermatozoide post-centrifugado la muestra
deber ser clasificada como AZOOSPERMICA.

Determinacin de concentracin espermtica.
La concentracin de espermatozoides se determina utilizando la cmara de Neubauer con dos
preparaciones de la muestra, una para cada lado de la cmara. Ambas preparaciones con la misma
dilucin, la cual fue determinada en el paso previo (1:5, 1:10, 1:20, 1:50). De manera que para una
dilucin 1:20 (5uL de semen liquado + 95uL diluyente)
DILUYENTE: NaHCO3 50g + Formalina 35%v/v 10ml hasta volumen final de 1 litro con agua destilada.
i. Asegure el cubreobjeto de la cmara y transfiera 10uL de la dilucin a ambos lados de la
cmara. Cuidar de llenar correctamente la cmara y no mover el cubreobjeto una vez
montado.
ii. Colocar la cmara de Neubauer en cmara hmeda por 3-5 minutos para dejar reposar la
muestra y observar en objetivo de 40x.
iii. El conteo se realizar en la cuadrcula central de la cmara. La cuadrcula central de una
cmara de Neubauer est formada por 25 cuadros mayores quienes a su vez estn
formados por 16 cuadros ms pequeos.
Cuntos cuadros se debern contar?
Para muestras que contienen menos de 10 espermatozoides en un cuadro
grande, se debern contar los 25 cuadros que forman la cuadrcula central.
Para muestras que presentan de 10-40 espermatozoides por cuadro, se
cuentan 10 cuadros.
Para muestras con ms de 40 espermatozoides en un cuadro, se cuentan 5
cuadros nicamente.
iv. Para determinar finalmente la concentracin de espermatozoides en la muestra original de
semen, en Millones/ml el promedio espermatozoides contados en ambos lados de la
cmara se divide dentro del factor de conversin apropiado.
Ejemplo:
Para un promedio de 230 de espermatozoides contados.
Empleando una dilucin 1:20
10 cuadros contados.
Empleando la tabla 1 como referencia se obtiene que el factor de conversin es 2
Resultado: 230/2 = 115x10
6
espermatozoides/ml.
v. Existen actualmente en el mercado cmaras que no necesitan dilucin para realizar el
recuento, tales como la cmara de Makler y la cmara Microcell.

Figura 1. Cmara de Makler.












Determinacin de la Movilidad Espermtica
La movilidad de cada espermatozoide es clasificada en cinco categoras, de acuerdo a la velocidad
y expresadas en porcentaje.
a. Grado A: Movimiento progresivo rpido (>25m/s)
b. Grado B: Movimiento progresivo lento (5-25 m/s)
c. Grado C: Moviemiento no progresivo(<5 m/s)
d. Grado D: Inmviles
Con fines de control de calidad debern contarse 200 clulas y clasificar el movimiento.
La Movilidad espermtica puede requerir observar inicialmente la muestra como un todo para
luego establecer en base al movimiento los porcentajes esperados.
El campo de observacin ser siempre el rea central del cubreobjeto y ubicando 8
puntos estratgicos para contar. Ver figura 1.

Figura 1. Cubreobjetos 22x22 ubicando 8 puntos en el rea central para contar y establecer
movilidad.








Determinacin de la Morfologa

i. Preparar dos lminas portaobjetos con frotes o improntas, tal y como si fuera un frote
Hematolgico, o bien colocar una gota de semen en el medio de una lmina portaobjeto
para dejar caer sobre la gota una segunda lmina de tal manera que el semen se despliegue
entre ambas caras y luego arrastrar la segunda lmina hacia fuera.
ii. Dejar secar al aire y una vez seca, preparar la tincin. Idealmente se utiliza la tincin de
Papanicolaou. Sin embargo para mayor facilidad pueden utilizarse mtodos rpidos como
Diff-Quick o tambin una sencilla tincin de Wright o Giemsa.
iii. Luego de realizada la tincin, dejar secar al aire y observar la lmina en objetivo de
inmersin (Condensador arriba y diafragma abierto). Contar 100 clulas y expresar los
resultados en porcentaje. Duplicado por control de calidad.
iv. Determinar la Morfologa:
Un espermatozoide Normal deber tener una cabeza, cuello y cola normal. La
cabeza es ovalada en su forma con la regin acrosomal bien definida ocupando cerca
del 40-70% de la cabeza. El cuello o pieza media es delgado (menos de 1 um de
grosor) sin evidencia de vacuolas. La cola deber ser recta, uniforme y ms delgada
que la pieza media. (Kruger et al 1986)












La clasificacin de la morfologa se realiza en base a las tres reas principales:
Defectos Cabeza: larga, pequea, piriforme, atachada, acrosoma reducido,
vacuolas, dos cabezas o cualquiera de las combinaciones.
Defectos Pieza Media: Principalmente cuellos doblados, cuellos gruesos o
vacuolados, o cualquiera de las combinaciones.
Defectos Cola: Generalmente colas cortas, mltiples, rotas, gruesas, o enrolladas.






















v. Observe que no es necesario que describa el tipo de anormalidad encontrada en cada
clasificacin, observe 200 clulas y determine los porcentajes que corresponden para
cada rea del espermatozoide.







Nomenclatura
En base a la observacin Microscpica de una muestra encontramos los siguientes Valores de
referencia.

a. Concentracin espermtica
Valor referencia: Adulto con capacidad de fertilizacin >20 millones/ml
<20 millones/ml: Oligozoospermia.
>200 millones/ml: Polizoospermia.
Ausencia de Espermatozoides: Azoospermia.

b. Movilidad Espermtica
Valor referencia: Adulto con capacidad de fertilizacin >50% Grado A+B
<50% A+B: Astenozoospermia
Ausencia de Movimiento: Necrozoospermia

c. Determinacin de la Morfologa
Valor de referencia de acuerdo a Criterio de Kruger et al 1986 (criterio estricto): Adulto con
capacidad de fertilizacin >15% espermatozoides Normales.
<15% espermatozoides normales: Teratozoospermia.
Ausencia de acrosoma y formas redondas: Globozoospermia.

Resultado con los tres parmetros dentro de los valores de referencia: NORMOZOOSPERMIA.

Resultados combinados
OLIGO-ASTENO-ZOOSPERMIA
OLIGO-TERATO-ZOOSPERMIA
ASTENO-TERATO-ZOOSPERMIA

Resultado con los tres parmetros fuera de los valores de referencia.
OLIGOASTENOTERATOZOOSPERMIA






















LABORATORIO DE ANDROLOGIA
Nombre Paciente: Farid Bahis Fecha: 14 / 04 / 10
Nombre Cnyuge: Cristina Khoury Edad: 30
Solicitado Por: Dr. Mario Ruata Archivo: Clnica Santa Mara

ESPERMOGRAMA

Abstinencia: 04 d Hora de Emisin: 07:10 h Hora de Procesamiento: 08:40

Volumen: 4.8 cc Consistencia: Normal
pH: 8.0 Apariencia: Normal
Licuefaccin: Completa.

EXAMEN DIRECTO: Aglomeracin: (++) Aglutinacin: ( - )
Debris: (+++) Clulas redondas: 8-9/ Campo

CONTEO DE ESPERMATOZOIDES POR CC: 4,000,000
V.N. mayor 20,000,000
MOTILIDAD
Grado A (mov. progresivo rpido) 20 %
Grado B (mov. progresivo) 27 %
Grado C (mov. pendular sin desplazamiento) 38 %
Grado D (inmviles) 15 %
V.N. mayor 50% A + B

MORFOLOGIA
Normales: 10 %
Anormales: 90 %
V.N. mayor 15 % Normales
Cabeza: 24 %
Pieza Media: 39 %
Cola: 37 %
Observaciones: Resultado Controlado.

DIAGNSTICO: Oligoastenoteratozoospermia.

Licda. Mildred Judith Guancn
Qumica Biloga
Colegiado 3203


Clnica Santa Mara
Especialistas en Fertilizacin in Vitro
Multimedica Clnica 402
Telfonos (502) 23857578-79-80
Fotografas. Anormalidades ms comunes en Espermatozoides

Cabeza







Pieza Media






Cola
























Espermatozoides Normales: 1*,2,4,5,7*,10,12
*Vacuolados