INMUNIDAD ADQUIRIDA

Adalucy Alvarez Aldana. Bacteriloga, MSc, PhD(c)

INMUNIDAD HUMORAL
CARACTERSTICAS DE LOS LsB
Los LB se originan en la mdula sea en donde maduran y
adquieren el receptor para Ag, BCR.

Al madurar los LB pierden la molcula CXCR4 que los
mantiene retenidos en la mdula, salen al torrente
circulatorio e ingresan luego a los rganos linfoides
secundarios, para vigilar si a ellos ha llegado el Ag
reconocido por su BCR especfico.
RECEPTOR PARA Ag DE LOS LB
Cada LB tiene un BCR que
puede reaccionar nicamente
con un Ag determinado y no
con otro.

Todo LB maduro posee en su
membrana el BCR (IgM) que
se fijan por su porcin Fc. Los
segmentos variables de las
cadenas pesada y livianas se
orientan hacia el exterior de
la clula para poder captar el
Ag.



La reaccin de un Ag con un LB
implica un proceso de seleccin
de aquellos L que, por
programacin gentica, poseen el
BCR especifico para determinado
Ag. Este proceso se denomina
seleccin clonal.

La IgM de la membrana del LB,
que acta como receptor de Ag,
difiere ligeramente de la
secretada por las clulas
plasmticas, por poseer 20 aa
ms.

RECEPTOR PARA Ag DE LOS LB
La molcula de IgM est
rodeada por cadenas Ig
(CD79a) e Ig (CD79b). En su
segmento intracitoplasmtico
tienen un dominio de activacin
basado en tirosina conocido
como ITAM (Inmunoreceptor
tyrosine-based activation
motif), que cuando el BCR
reconoce un Ag, pasa la
informacin al citoplasma.

RECEPTOR PARA Ag DE LOS LB
Los LB expresan en su membrana , adems de la
IgM, molculas de IgD cuya funcin es evitar que
el LB se haga tolerante a Ag externos.

La tolerancia que el SI adquiere frente a Ag
propios parece deberse a que los LB del feto
carecen de IgD y se hacen tolerantes.


RECEPTOR PARA Ag DE LOS LB
OTRAS MOLCULAS DE MEMBRANA DE LOS LB
Poseen receptores para factores del complemento (CD19
y CD21); DNA (TLR-9); diferentes clases de
inmunoglobulinas; receptores de citoquinas (CD25 para
la IL-2); el virus de Epstein-Barr (CD21); molculas de
adherencia (ICAM-I e ICAM-2) y molculas MHC clase II o
presentadoras de Ag.
INGRESO DE LOS LB A LOS RGANOS
LINFOIDES SECUNDARIOS
Una vez maduran los LB en
m.o, salen a circulacin e
ingresan a los rganos
linfoides secundarios. Lo
logran, a travs de LFA-1 e
ICAM-1 que les permiten
adherirse al endotelio
vascular en las venas
poscapilares, y buscar si
hay un Ag extrao.


Si no encuentran Ag, salen al torrente circulatorio y
entran a otros ganglios para continuar la bsqueda.

Si a los dos o tres das no encuentran Ag especfico,
mueren por apoptosis. Si lo encuentran, entran en un
proceso de activacin.

INGRESO DE LOS LB A LOS RGANOS
LINFOIDES SECUNDARIOS
Dentro de estos rganos,
los LB son atrados por la
quimioquina CXCL-13
(quimioatrayente de los
LB), producida por la
clulas del estroma de los
rganos linfoides
secundarios y que los
dirige a los folculos
linfoides.

INGRESO DE LOS LB A LOS RGANOS
LINFOIDES SECUNDARIOS
ACTIVACIN DE LOS LB
La activacin de un LB se inicia
por la unin a su BCR del Ag
correspondiente, unin que
juntamente con las molculas
coestimuladoras induce su
proliferacin y transformacin
en clula plasmtica
productora de Ac contra el
agente patgeno en el cual se
expresa el Ag reconocido.

El LB puede reconocer Ag solubles, pero su activacin es
mas rpida e intensa cuando le son presentados en los
ganglios linfticos y en el bazo por DC y macrfagos; o
cuando interacta con los LsT.

ACTIVACIN DE LOS LB
EVENTOS EN LA ACTIVACIN DE LOS LB
1. El BCR se une al Ag.

2. Un molcula CD45, que es
una fosfatasa, remueve el grupo
fosfato de las quinasas Fyn, Lyn
y Blk.

3 y 4. Las quinasas se acoplan a
los ITAM de Iga e Igb.

7. La seal se refuerza con la
unin CD21-CD19 que se ligan al
C3d adherido al Ag.
5. Se genera el sealasoma
(ensamblaje de moleculas
como BLNK y PCLg2) permite
activar los factores de
transcripcin AP-1 y NF-kB.

6. Estos factores de
transcripcin llevan al ncleo
las seales para activar los
genes productores de
citoquinas y Ac.





EVENTOS EN LA ACTIVACIN DE LOS LB
8. BLNK y PCLg2 actuan sonre
PIP2 (fosfatidil inositol 4,5
fosfato y generan IP3 (inositol
trifosfato), se incrementa Ca
que activan enzimas.

9. Cuando la produccin de
Acs alcanza los niveles
necesarios, se activa CD22
que frena la Px de Acs.





EVENTOS EN LA ACTIVACIN DE LOS LB
FORMACIN DE CENTROS GERMINALES
Despus de que los LB se
unen a sus respectivos Ag,
incrementan la expresin
de CCR7 y son atrados por
un gradiente generado por
CCL21 hacia la zona T de los
rganos linfoides
secundarios, en donde
buscan la ayuda de los Ls T
y dan inicio a la formacin
de un centro germinal (CG).
El LB que empieza a proliferar en los GC se conoce como
centroblasto, aumenta su tamao, incrementa su movilidad
y activa su ciclo de reproduccin celular para generar un clon
de LB con el mismo BCR del LB original.




FORMACIN DE CENTROS GERMINALES
Cumplido el ciclo de proliferacin se convierte en centrocito
que recibe estmulos antiapoptticos e inicia su
transformacin en una de dos lneas, clula plasmtica o
clula de memoria.

El proceso de diferenciacin es inducido por una
subpoblacin de LT, llamada Tfh (T follicular helper cells).


FORMACIN DE CENTROS GERMINALES
Pocos das despus tanto Ls T y
B son inducidas a migrar a los
folculos linfoides primarios
ubicados en la cortical de los
ganglios, en donde proliferan.

Con la proliferacin de los LB
activados, se empieza a formar
dos zonas, una oscura
(proliferacin de L con el mismo
receptor) y otra clara
(transformacin en clula
plasmtica y en LB de
memoria).
FORMACIN DE CENTROS GERMINALES
El curso que sigue un LB maduro en los folculos linfoides difiere
segn el tipo de Ag que encuentre: Si este es timodependiente
dar origen a clulas plasmticas con capacidad de producir Ac,
inicialmente IgM, luego, Ac de mayor especificidad y de clase
diferente (IgG, IgA e IgE), adems se generan LB de memoria.

Si el Ag es timoindependiente (polmeros de carbohidratos,
lpidos y ac. nucleicos), que no requieren la ayuda de los LT, se
generarn clulas plasmticas productoras de Ac solo de clase
IgM y no habr transformacin de LB de memoria.


FORMACIN DE CENTROS GERMINALES
CLULAS PLASMTICAS
Se originan por accin de las
citoquinas IL-2 e IL-10 sobre los LB
activados. Estas citoquinas les
cambian el fenotipo porque dejan
de expresar CD19, CD20, CD21,
MHC II y BCR, adems dejan de
reproducirse.

Su citoplasma aumenta en tamao
por un gran crecimiento de su RE,
para dar cabida a una gran
cantidad de ribosomas encargados
de la produccin de Ac.
La clula plasmtica deja de expresar CXCR5, CXCR7 e
incrementa CXCR4. De esta manera se libera del contacto
con las DC y LTh, y migra del centro germinal a los cordones
medulares de los ganglios.

La activacin por el contacto con el Ag genera dos clases de
clulas plasmticas, unas de corta duracin que se ubican
en la medula del ganglio y luego salen rpidamente a la
circulacin y buscan el lugar por donde ingres el Ag para
iniciar in situ la produccin de Ac contra ese Ag.
CLULAS PLASMTICAS
Otras clulas plasmticas son de larga duracin y migran a
la mdula sea a buscar un nicho especial en donde
ubicarse e iniciar la produccin prolongada, en ocasiones
indefinida, de Ac IgG, con lo cual asegura una defensa
prolongada o permanente contra el Ag original.

La produccin de Ac se caracteriza por su especificidad,
cantidad, clase, isotipo y afinidad.
CLULAS PLASMTICAS
INHIBICIN DE LOS LB
Si un LB establece contacto con un autoantgeno,
dos molculas presentes en su membrana, CD22
y CD72, detectan este hecho, frenan su activacin
e inducen su muerte por apoptosis.
LINFOCITOS B DE MEMORIA
Algunos LB activados por un Ag
en lugar de transformarse en
clulas plasmticas, se
convierten en LB de memoria.

Parte de estas permanecen en
el ganglio, otras entran en la
circulacin sangunea y buscan
la regin subepitelial de la piel
o de las mucosas por donde
inicialmente entr el Ag. All
permanecen atentas a
detectarlo e iniciar la
produccin de Ac.
RESPUESTA PRIMARIA
Es la resultante de la activacin de un LB virgen (aquel
que no ha tenido contacto con el un Ag).








Esta respuesta suele durar unas pocas semanas.
RESPUESTA SECUNDARIA
Se genera cuando un LB de
memoria encuentra un Ag que
la gener. Esta respuesta es
rpida, ocurre de 24 a 72
horas despus del contacto
con l.

Genera Ac de otra clases, por
lo general IgG, con mayor
especificidad por el Ag y de
mayor magnitud.

Esta respuesta es de mayor
duracin que la primaria.
RESPUESTA SECUNDARIA
LOS LB COMO CLULAS PRESENTADORAS DE Ag
Los LB actan como
presentadores de Ag a los LT.

La IgM de membrana tiene
gran avidez por Ag de
diferente naturaleza. Los LB
interiorizan los Ag y los
procesan tomando el eptope
proteico antignico para
presentarlo a los LT-h por
medio de HLA-II.

LOS LB COMO CLULAS PRESENTADORAS DE Ag
Simultneamente los LB
expresan B7-1, B7-2 y CD40
que al interactuar con sus
ligandos en la membrana del
LT, los activa.
ANTICUERPOS O INMUNOGLOBULINAS
Son glicoprotenas especializadas, producidas por clulas
plasmticas y que reconocen un Ag especfico.

La composicin de las Ig es de 82-96% protena y un 4% a 18%
carbohidratos.

ANTICUERPOS O INMUNOGLOBULINAS

La parte proteica, tiene dos
regiones funcionales diferentes.
Una encargada del
reconocimiento del Ag que
posee gran variabilidad. La otra,
efectora, de composicin
constante y con capacidad de
fijar el complemento, de obrar
como opsonina, o de facilitar el
paso de Ac a travs de ciertas
barreras como la placenta.
Son de varias clases (IgA, IgM, IgG, IgE e IgD).

La IgG puede durar veinte das, mientras que la IgA o
IgM cuatro o cinco. Parte del catabolismo del los Ac lo
hace el sistema reticuloendotelial del hgado. Otra parte
se pierde en la saliva, la secrecin de los tractos
respiratorios, digestivo y gastrointestinal.

ANTICUERPOS O INMUNOGLOBULINAS
La IgG (180 kDa), pasa fcilmente del
torrente circulatorio hacia los tejidos y
se encuentra en humor acuoso,
liquido cefalorraqudeo, sinovial,
amnitico y peritoneal.

La IgM (900 kDa), no sale del torrente
circulatorio a los tejidos sino en
condiciones excepcionales.

En secreciones como la saliva, las
lagrimas, el moco nasal , lquidos
intestinales, la bilis, la orina, el calostro
y la leche, la Ig ms abundante es la
IgA pero puede presentarse la IgG.


ANTICUERPOS O INMUNOGLOBULINAS
BARRERAS AL PASO DE Ac
En el sistema nervioso central
la barrera hematoenceflica,
(endotelio aplanado de los
vasos sanguneos, recubierto
por prolongaciones de las
clulas gliales, que se adosan
ntimamente a las epiteliales),
impide el paso de toda clase
de Ac del torrente sanguneo
al sistema nervioso.

PASO DE LOS Ac
La IgG pasa de la madre al feto atravesando el trofoblasto
(TRANSCISTOSIS) para entrar al torrente sanguneo circulatorio
del feto. La IgA pasa de la membrana basal del epitelio de la
mucosa digestiva a la luz intestinal a travs de las clulas de la
mucosas, no entre ellas.


La presencia en el cordn
umbilical de IgM implica que
el feto sufri durante su vida
intrauterina algn proceso
infeccioso.

Durante el ultimo trimestre
del embarazo pasan de la
madre al feto, por
transcistosis grandes
cantidades de IgG que
protegen al nio de las
infecciones durante los
primeros meses de vida.

PASO DE LOS Ac
En las primeras 24 horas de vida, el nio podr absorber por
el tracto digestivo una cantidad apreciable de Ac que la
madre le pasa en el calostro y la leche. La capacidad de
absorcin de Ac desaparece rpidamente al madurar el
tracto digestivo.

En la vida extrauterina, al iniciar el nio el contacto con los
Ag que le presentan por va oral y respiratoria, inicia la
produccin de sus propios Ac que reemplaza, pasados seis
meses, los recibidos de la madre.
PASO DE LOS Ac

La capacidad de sintetizar sus propios Ac obedece a un proceso
gradual de maduracin del sistema inmune.
Entre el cuarto y quinto mes de vida extrauterina existe un
periodo crtico, de baja concentracin de IgG, ya que los Ac de
esta clase que recibi de la madre han sufrido el proceso
catablico, y no alcanzan a ser reemplazados por los producidos
por el nio.

PASO DE LOS Ac
ESTRUCTURA GENERAL DE LAS Ig
Las protenas del plasma se pueden separar por
electroforesis en varias bandas, la y la , representan las
zonas donde se concentra la mayor parte de los Ac.

ESTRUCTURA GENERAL DE LAS Ig
La caracterstica general
mas importante y comn
a todas las Ig se basa en la
unin de dos cadenas
pesadas (H) de 440 aa
cada una, unidas a su vez
a dos cadenas livianas (L)
de 220 aa cada una.
La unin de las dos cadenas
livianas a las dos pesadas
forma una especie de pinza,
encargada de atrapar el Ag.


ESTRUCTURA GENERAL DE LAS Ig
Esta estructura bsica forma un
monmero que se puede encontrar
en el plasma o en las membranas, y
que es la forma de presentacin de
IgG, IgD e IgE.

La IgM suele estar en forma
pentamrica y la IgA puede circular
en el plasma de forma monomrica,
pero en las mucosas es secretada
como un dmero.

ESTRUCTURA GENERAL DE LAS Ig
CADENA LIVIANA
Por los puentes disulfuro, forma dos
asas que permiten dividirla en dos
segmentos de 107 a 110 aa cada
uno, llamados dominios.

El primer dominio se llama variable
de la cadena liviana (VL), debido a
que cambia en cada Ac.

El segundo segmento de la cadena
liviana de los Ac se llama constante
(CL), debido a que la secuencia de
aa es prcticamente igual en todos
los Ac de la misma clase.
CADENAS PESADAS
Cuatro (IgG, IgD e IgA) o cinco (IgM e IgE) dominios .

El primero es de 100 a 110 aa se conoce como segmento
variable (VH).

Los dominios restantes tienen una secuencia de aa que es igual
para todos las molculas de una misma clase y se conocen
como CH1, CH2, CH3 y CH4.


SEGMENTOS VARIABLES
Tanto el VL como el VH tienen en
su secuencia de aa regiones
hipervariables, conocidos como
CDR (Complementarity
determining regions).

La funcin de los segmentos
variables es la de unirse
directamente con el Ag por
asociaciones no covalentes que
incluyen fuerzas electrostticas,
puentes de H e interacciones de
tipo Van der Walls.

SEGMENTO CL Y CH1
Todo Ac de los muchos
existentes contra distintos
Ag tiene una secuencia de
aa similar en estos
dominios que tienen la
funcin de estabilizar las
estructuras terciarias y
cuaternarias de la
molcula para facilitar y
hacer ms estable la
reaccin de los
segmentos variables con
el Ag.
GOZNE o BISAGRA
Representa una zona de transicin (8 a
15 aa) en la cadena, que se encuentra
intercalada entre el primer segmento
constante y el segundo.

Permite la movilidad de los dos
primeros segmentos de la cadena
pesada, a los cuales estn adheridas las
cadenas livianas, y facilita el que estos
puedan unirse a dos terminaciones
antignicas que estn ms o menos
separadas.
.
GOZNE o BISAGRA
Gracias a esta movilidad, pueden
juntarse o separarse formando una Y
para reaccionar con el Ag.

Esta regin es diferente entre cada
clase y subclase de Ig. El nmero de
puentes disulfuro vara en cada
subclase de IgG (2 para IgG1 e IgG3, 4
para IgG2 y 7 para IgG4).
SEGMENTO CH2
Constituye el primer domino
del segmento Fc del Ac. En l
se unen lateralmente algunas
cadenas de carbohidratos, y
es la base de funciones
biolgicas como la unin de
factores del complemento
una vez que ha ocurrido la
reaccin Ac-Ag.

SEGMENTO CH2
La remocin de las
terminaciones de cido silico
de este lugar, facilita la
fagocitosis de las molculas
de Ac por las clulas
reticuloendoteliales del
hgado, haciendo posible su
catabolismo.


SEGMENTO CH3
Cumple el papel de opsonina,
gracias a que los macrfagos y
los PMN poseen un receptor
especial de membrana para los
extremos distales de las
cadenas pesadas de Ac.

En el caso de la IgG parece que
esos receptores reaccionan
directamente con el CH3, lo
cual permite que la Ig se fije a
los macrfagos y facilite que
stos fagociten al Ag.

SEGMENTO CH3
En la placenta, los trofoblastos
tienen igualmente receptores
para este segmento de la IgG, y
debido a su interaccin se
logra el transporte activo de
los Ac de la madre al feto.

El segmento CH3 de la
molcula de IgD es el
responsable de que sta pueda
adherirse a la membrana de los
LB.
SEGMENTO CH4
Este dominio est presente en
la IgE y la IgM.

Por este la IgE se fija
slidamente a los mastocitos,
que tienen receptores para
este segmento.

En la IgM este segmento
participa en la activacin del
sistema del complemento.

Mediante l se une IgM a los
receptores Fc de los
macrfagos.
FRAGMENTACIN DE UN Ac
Con el empleo de
enzimas ha sido posible
dividir la molcula de Ac
en diferentes
fragmentos.


CLASES DE Ig
Existen cinco clases de Ig.
Varios factores determinan
que clase de Ig debe ser
sintetizada en respuesta a la
presencia de un Ag.

Por ejemplo los LPS generan
IgM, en tanto que los
alergenos inducen la
produccin de IgE.
Tambin influyen el tipo de citoquinas que participen en la
activacin de los LB. Por ejemplo la IL-4 ayuda a producir
IgG1 e IgE, la IL-5, IgM e IgA.

SUBCLASES DE Ig
Cada clase puede tener varias
subclases. Se conocen 4
diferentes para la IgG (IgG1,
IgG2, IgG3 e IgG4), que se
diferencian por el nmero y
ubicacin de los puentes
disulfuro en el gozne.

La IgA tiene dos subclases
(IgA1 catabolizada por M.O,
IgA2), que se diferencian por
la rapidez con que son
metabolizadas. Igualmente
para IgM (IgM1 e IgM2).
CLASES DE Ig
Cadenas livianas
Se conocen dos tipos, las kappa y las lambda,
pero hasta el presente no se ha identificado la
diferencia biolgica en su actividad.
ISOTIPOS?
La clase de cadena pesada. As, las
cadenas pesadas de los isotipos
indican la clase de Ig (A, M, E, G o
D). Los isotipos no tienen que ver
con la capacidad de la Ig para
reaccionar con el Ag. As, Ac de
diferentes clases pueden
reaccionar con un mismo Ag.

Toda Ig, puede inducir una RI cuando es introducida en una
animal de una especie diferente. La inoculacin de cualquier IgG
humana al conejo, induce la produccin de Ac contra la cadena
pesada tipo gamma. Los determinantes antignicos, propios de
cada cadena pesada, reciben el nombre de determinantes
isotpicos.

ALOTIPOS
Se entiende por alotipo las
pequeas diferencias en la
secuencia de aminoacidos en
la regin constante de las
cadenas ligeras y pesadas de
los anticuerpos producidos
por los distintos individuos de
una especie, y se heredan.

IDIOTIPOS
Estn constituidos por las
diferencias que distinguen un
segmento variable de otro y,
por lo tanto, representan la
especificidad de cada Ac.

Un individuo tendr tantas Ig
de distintos idiotipos como
tanto como Ac diferentes
pueda fabricar.
CAMBIO DE CLASE DE Ig

La primera clase de Ac que se
produce es IgM.
Paulatinamente se produce
un cambio en la cadena
pesada de la Ig generando Ac
de las clases IgG, IgA, IgE e
IgD, con un incremento
progresivo de la especificidad
del Ac.
ORIGEN DE LA DIVERSIDAD DE LAS Ig
El nmero de Ac con distinta especificidad es de orden
de 10
5
a 10
8
.

La diversidad de las regiones variables se origina por la
recombinacin somtica de ms de 765 genes y la
diversidad se incrementa por medio de mutaciones y
recombinaciones ocurridas por el desarrollo evolutivo
del SI.

Los segmentos variables y constantes de cada cadena
de Ig son codificados por genes distintos, que estn
separados en la lnea germinal y que se recombinan
para formar una sola cadena polipeptdica.

ORIGEN DE LA DIVERSIDAD DE LAS IG
La aproximacin de los genes
que deben controlar la sntesis
de las cadenas variables con las
que van a generar la parte
constante se logra por un
proceso de excisin-insercin:
el gen V es transferido y
empalmado cerca al gen C.

Es importante tener en cuenta que los genes de las distintas
cadenas no estn en los mismos cromosomas. En el humano los
genes para las cadenas pesadas estn en el cromosoma 14; los que
codifican para la cadena liviana lambda, en el 22 y para la liviana
kappa, en el cromosoma 2.






ORIGEN DE LA DIVERSIDAD DE LAS IG
La variabilidad de los
segmentos hipervariables es
muy grande y est controlada
por la interaccin de diversos
genes V que interactan con
los J o de unin. En una
cadena V completa participan:
V y J para la cadena liviana y
V, J y D para la cadena pesada.

ORIGEN DE LA DIVERSIDAD DE LAS IG

El nmero de genes presentes
para las cadenas L es de unos
70 V y 9 J. En la generacin de
la fraccin V de la cadena
pesada intervienen 65 V, 27 D
y 6 J, lo cual da una capacidad
de variabilidad de grandes
proporciones.

ORIGEN DE LA DIVERSIDAD DE LAS IG
RECEPTORES PARA Ig
Varias de las funciones de los Ac se cumplen
por medio de interacciones con clulas que
presentan en su membrana receptores para
diferentes clases y subclases de Ig.
Activacin del complemento
Unin a receptores en clulas fagocticas: Quimiotaxis y
opsonizacin
Traspaso por membranas o tejidos
Formacin de complejos inmunes
Inmovilizacin o neutralizacin de microorganismos
Degranulacin: mastocitos y basfilos

FUNCIONES GENERALES DE LOS
ANTICUERPOS
ANTICUERPOS MONOCLONALES
Las Ig presentes en el suero
integran un conjunto de Ac con
idiotipos diferentes, de un clon de
clulas plasmticas.

Mieloma mltiple (proliferacin
anormal clulas plasmaticas) px Ig
idnticas en isotipo, alotipo e
idiotipo, generando Acs
monoclonales

Hibridoma al fusionar linfocitos
especficos con clulas de
mieloma, para obtener un un clon
secretor de una Ig monoclonal.
LA INMUNIDAD HUMORAL EN LA CLNICA
La aplicacin de concentrados de gammaglobulina
se emplea con creciente frecuencia en el
tratamiento de la hipogammaglobulinemia y en
procesos autoinmunes.


ANTICUERPOS MONOCLONALES
Con creciente frecuencia
aparecen en el mercado
AcMc que se emplean con
xito en el tratamiento de
afecciones autoinmunes,
alrgicas y malignas y en el
manejo de trasplantes.


REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
LIBROS:

Abbas, A K, et al. Celular and Molecular Immunology. 7 ElSeiver Saunders, 545 pages.

Rojas, W et al. Inmunologa, 16. edicin, Ed. Corporacin para Investigaciones
Biolgicas, 2012,

Kindt TJ. et al. Inmunologa de Kuby. 6 Ed. Interamericana- McGraw Hill. Espaa.2008.
665 Pags.