Universidad de Santiago de Chile

Facultad de Qumica y Biologa

Fisicoqumica III, Licenciatura en
Qumica
1er semestre 2014

1

LABORATORIO 3
CINETICA DE REACCIN COMPETITIVAS: Radicales peroxidados.

Dr. Eduardo Pino, Dr. Cristhian Berros


1. Objetivo.

Estudiar la cintica de la reaccin competitiva (ordenes parciales, orden total, constante
de velocidad de la reaccin).

Estudiar el efecto de la temperatura y los parmetros de Arrehenius


2. Actividades a realizar.

2.1. Lea la informacin de la seccin 3. Fundamento Terico sobre cintica de una reaccin.

2.2. Busque informacin adicional de los temas presentados con el fin de resolver sus dudas. Se
recomienda el uso de libros de fsico-qumica.

2.3. Con la informacin adjunta y lo buscado en libros, revise y defina:

- Reacciones consecutivas - Stress oxidativo
- Control Difusional - Absorbancia
- Especies reactivas de oxigeno (ROS) - Punto isobestico
- Abstraccin de hidrogeno - Buffer
- Capacidad antioxidante

2.4. En base a la informacin leda relacionada con la cintica de una reaccin y el efecto de la
temperatura, en su Bitcora/Cuaderno de Notas proponga una HIPTESIS que
exprese lo que espera del prctico a realizar y una Metodologa de trabajo y tambin
indique cmo va a determinar la cintica de la reaccin, estudiar el efecto de la
temperatura y del solvente en la reaccin con mediciones en el laboratorio.


2.5. La Bitcora/Cuaderno de Notas debe ser entregado al finalizar el prctico con las
definiciones, hiptesis y la metodologa propuesta del punto 2.3 y 2.4,
respectivamente.




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3. Breve Fundamento Terico.

Las reacciones radicalarias se encuentran ntimamente ligadas a diferentes lneas de
investigacin en capacidad antioxidante y estress oxidativo. Donde las especies reactivas de
oxigeno (ROS) son reemplazables del dao que ocasiona patologas como cncer y
mutaciones.
Dentro de las metodologas para estudiar capacidad antioxidante se encuentran la
metodologas tipo ORAC. Donde se pueden utilizar diferentes molculas blanco (Pirogalol
rojo, piranina, fluoresceina, c-ficocianina, etc) y una fuente de radicales. El consumo de la
molcula blanco es monitoreado durante la reaccin utilizando espectrometra UV-visible o
Fluorescencia. Este tipo de experimentos se basan en reacciones competitivas. Una de las
fuentes ms utilizada para generar radicales es el ABAP que en presencia de oxigeno
utilizando luz o calor genera radicales peroxidados:

ABAP R

+ O
2
RO
2

[1]

En este practico se evaluara el consumo de pirogalol rojo (PGR) al reaccionar con
radicales:

PGR + RO
2

PGR

+ RO
2
H [2]

Posteriormente, se evaluara el efecto de antioxidantes (trolox y acido ascrbico) en la
cintica de consumo del PGR

ArOH + RO
2

ArO

+ RO
2
H [3]

siendo las reacciones [2] y [3] competitivas respecto a los radicales trmicamente generados.



4. Procedimiento a realizar en el
laboratorio.
4.1.- Reactivos

ABAP (2,2-Azobis(2-methylpropionamidine)
dihydrochloride)
TROLOX (6-Hydroxy-2,5,7,8-
tetramethylchromane-2-carboxylic acid)
ACIDO ASCORBICO
PIROGALOL ROJO (PGR)
Buffer Fosfato pH 7.0 (10 y 50 mM)





4.2.- Procedimiento
i) Evaluar la cintica de consumo de PGR
(
obs
: 540nm) utilizando las condiciones
descritas en la tabla 1 a una temperatura de
37 C.
ii).- Evaluar el efecto de la temperatura a 25
C y 45 C utilizando [ABAP]: 10mM.



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Tabla 1: Soluciones a preparar.

Solucin [PGR]
/ M

[antiox
idante]
/ M

ABAP
/ mM
1 5 0 10
2 5 5 10
3 5 30 10
4 5 50 10
5 5 75 10
6 5 100 10


4. Bibliografa:

- Textos de Fisicoqumica.
- Artculos cientficos.
- Publicaciones cientficas en general como Handbooks, manuales de laboratorios, entre otros.
- Articulo cientfico: Free Radical Research 2006, 40, 979-985.