FACULDADES INTEGRADAS DA UNIO EDUCACIONAL DO PLANALTO
CENTRAL Aprovadas pela Portaria SESu/MEC N 368/2008 de 19/05/2008 (DOU 20/05/2008)
Relatrio de Aula Prtica N 02: EXTRAO E ANLISE DE CLULAS DA MEDULA SSEA DE CAMUNDONGO
GAMA MAIO, 2013
UNIO EDUCACIONAL DO PLANALTO CENTRAL FACULDADES INTEGRADAS DA UNIO EDUCACIONAL DO PLANALTO CENTRAL Aprovadas pela Portaria SESu/MEC N 368/2008 de 19/05/2008 (DOU 20/05/2008)
Relatrio de Aula Prtica N 02: EXTRAO E ANLISE DE CLULAS DA MEDULA SSEA DE CAMUNDONGO
Relatrio apresentado a Prof MS.c. Ana Elizabeth para obteno de nota na disciplina de Gentica Humana.
Adriana Gomes Girlene Oliveira Juliana Porto Saulo Arajo
A medula ssea um tecido encontrado dentro dos ossos, como o esterno, as costelas, a coluna vertebral, a pelve e as partes proximais do fmur e do mero. Uma rede fibrosa suporta as clulas tronco, que se diferenciam para formar clulas do sangue: leuccitos, hemcias e plaquetas. Qualquer doena ou anormalidade que afete a produo de clulas do sangue ou de seus precursores pode causar um distrbio da medula ssea. Estes podem ser classificados em: produo excessiva de um tipo de clula, que pode afetar a produo de outros tipos; produo de clulas com maturao ou funo anormal; crescimento excessivo da matriz fibrosa, prejudicando a formao de clulas; predomnio de um tipo de clula porque tem vida prolongada; diminuio da produo de clulas, ou diminuio de seu tempo de vida; deficincia de fatores nutricionais prejudicando a formao e a maturao das clulas; e invaso da medula ssea por neoplasias ou infeces de outros rgos. Aps a retirada e anlise das clulas da medula ssea podem-se observar, por meio de colorao especfica, clulas normocromticas, descritas como clulas velhas por que contm pouco ribossomo e pouca colorao. As clulas novas, chamadas de policromticas, contm muito ribossomo e colorao. A medula ssea o tecido encontrado no interior dos ossos, tambm conhecido popularmente por "tutano", que tem a funo de produzir as clulas sanguneas: glbulos brancos, glbulos vermelhos e plaquetas. A medula ssea se localiza na parte esponjosa dos ossos chatos (por exemplo, a bacia), onde o desenvolvimento das clulas do sangue acontece. A clula que origina as clulas sanguneas chamada de clula progenitora ou clula-me, estas clulas existem em pequeno nmero no sangue e em maior quantidade na medula ssea. As clulas- me se auto renovam ou se diferenciam e passam por diversos estgios de maturao, antes de passarem para o sangue. O processo de formao das clulas sanguneas chamado de hematopoeise. A clula progenitora mielide d origem aos eritrcitos, plaquetas, glbulos brancos granulcitos (neutrfilos, eosinfilos, basfilos), mastcitos e aos moncitos. O progenitor linfide da origem a linfcitos T e B e clulas NK (natural killer). Estima-se que em um adulto mdio, com aproximadamente 5 litros de sangue, existam em cada centmetro cbico de sangue, cerca de 4,5 milhes de glbulos vermelhos, seis mil glbulos brancos e 300 mil plaquetas. Isso significa um total aproximado de 22,5 bilhes de glbulos vermelhos, 30 milhes de glbulos brancos e 1,5 bilhes de plaquetas.
As clulas sangneas tem vida curta:
*os glbulos vermelhos tem uma vida mdia de 120 dias, *os glbulos brancos vivem em mdia uma semana, *as plaquetas nove dias. H, portanto permanentemente clulas morrendo, sendo destrudas ou eliminadas e substitudas por novas clulas normais.
OBJETIVOS
Aprender a retirar clulas da medula ssea de camundongo; Identificar as clulas normocromticas e policromticas; Identificar as fases de maturao da medula ssea;
MATERIAIS E MTODOS
Um bquer pequeno com 50 ml de NaCl (uma) Agulha e seringa de insulina; (um) Tubo de ensaio; Corante Pantico para clula sangunea; Seis Lminas de ponta fosca; 1 Pina, 1 bisturi e tesoura cirrgica Luvas 1 camundongo para extrao da medula ssea
Pegou-se um camundongo e foi feito o abate do mesmo puxando-o pelo rabo, firmando seu pescoo com uma pina, fez o deslocamento cervical imobilizando-o do pescoo para baixo. Com o auxilio de um bisturi retirou-se o fmur do camundongo. Foram cortadas as extremidades superiores e inferiores do fmur do camundongo, com uma tesoura cirrgica. Com uma seringa e agulha de insulina, pegou-se aproximadamente 100 u (1 ml) de NaCl Introduziu-se a agulha da seringa na extremidade superior do fmur injetando o NaCl dentro do fmur para retirada de medula ssea, o mesmo processo se repetiu na extremidade inferior sendo depositado em um tubo de ensaio. Pingou-se uma gota do NaCl com medula ssea em uma lmina, com o auxilio de outra lmina, fez-se um esfregao deixando secar em temperatura ambiente. Aps a secagem da lmina, foi realizada a sua colorao com o corante Pantico, onde foi submergida no corante um e dois por aproximadamente 10 segundos, e corante trs por um minuto. Deixou a lmina na vertical para escorrer e secar totalmente. Com a lmina totalmente seca, foi realizado o exame de microscopia ptica, onde se observaram na objetiva de 40x as clulas normocromticas e policromticas.
RESULTADOS
Eritrcito policromtico: eritrcito imaturo, numa fase de desenvolvimento intermediria, que ainda contm ribossomos e pode, por conseguinte, distinguir-se dos eritrcitos normocromticos maturos por colorao seletiva dos ribossomos. Clula mais jovem com maior quantidade de RNA no citoplasma, e apresentando colorao roxa.
Lmina com clula policromtica, microscopia ptica observada na objetiva de 40x
POLICROMTICOS Estes eritrcitos policromticos so clulas jovens liberadas pela medula e que ainda no tomaram a forma de disco bicncavo, por isso no tm a rea central clara.
Eritrcito normocromtico: eritrcito maduro a que faltam ribossomos e que pode, por conseguinte, distinguir-se dos eritrcitos policromticos imaturos por colorao seletiva dos ribossomos. Clula mais antiga que j perdeu o RNA do citoplasma e apresenta colorao laranja. Lmina com clula normocromtica, microscopia ptica observada na objetiva de 40x.
NORMOCROMTICOS So eritrcitos com contedo normal de hemoglobina, tm um centro claro que ocupa 1/3 do dimetro da clula. No esfregao pode observar discreta variao na intensidade no seu halo claro central, que varia entre as diferentes partes de um esfregao.
DISCUSSO
As clulas do sangue, os glbulos vermelhos, glbulos brancos leuccitos e as plaquetas so diariamente renovados. A medula ssea tutano do osso possui clulas totipotentes as chamadas clulas mes as quais, atendendo a estmulos especficos, produzem essas clulas. Possuem, ainda, essas clulas mes a capacidade de se auto renovarem, ou seja, quando uma delas se divide em duas uma dar origem s mencionadas clulas do sangue e outra guarda todo o potencial para a renovao do sangue. Teste do microncleo in vivo, um mtodo citogentico relativamente simples e rpido de avaliao de mutagenicidade induzida, que visa deteco de pequenos ncleos que se formam durante a eritropoiese na medula ssea de mamferos, como conseqncia de quebras cromossmicas, cromatdicas ou ainda de problemas na disjuno cromossmica. Uma vez que a verificao de sua presena feita em clulas da linhagem eritroctica, eles podem ser encontrados tanto em clulas jovens (eritrcitos policromticos-PCE) ou em clulas maduras (eritrcitos normocromticos - NCE).
CONCLUSO
Contam-se ao microscpio o nmero de microncleos presentes nos eritrcitos policromticos e estabelece-se uma relao entre os eritrcitos policromticos e normocromticos. A freqncia de eritrcitos policromticos micronucleados apresentou valores mais altos que os eritrcitos normocromticos, o que indica um quadro normal na linhagem de clulas da medula ssea, no apresentando toxicidade em relao ao numero de clulas antigas.
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
bdjur.almedina.net/item.php
http://www.hemonline.com.br/medula.htm
ALBERTS, B.; BRAY, D.; LEWIS, J.; RAFF, M.; ROBERTS, K. E WATSON, J. D. Biologia molecular da clula. 3a edio. Rio Grande do Sul: Artes Mdicas. 1997.
JUNQUEIRA, L.C. Biologia celular e molecular; Rio de Janeiro, Guanabara-Koogan, 2005.
POLIZELI, M. L. T. Manual prtico de biologia celular. Ribeiro preto - So Paulo: Holos Editora, 1999