Anda di halaman 1dari 2

Cara isolasi bakteri Streptomyces griseus.

dengan metode bioautografi


1. Metode bioautografi : bioautografi merupakan suatu metode yang spesifik untuk
mendeteksi bercak pada kromatogram hasil kromatografi lapis tipis atau kromatografi
kertas yang mempunyai aktifitas sebagai antibakteri, antifungi, dan anti viral.
Bioautografi juga merupakan suatu metode yang cepat untuk mendeteksi antibiotik
yang belum diketahui yang mana metode kimia atau fisika yang terbatas untuk
substansi yang murni. Sementara deteksi kimia reaksi warna hanya spesifik digunakan
sebagai pembanding hasil bioautografi sehingga kedua metode tersebut saling
melengkapi (Stahl, 1!"#.
$. Cara isolasi bakteri streptomyces griceus :
Bahan : %edia Nutrient Agar, %edia Potato Dextrose Agar (&'(#, %edia
International Streptomyces Project ()S&*+#, media Sg$ (media pertumbuhan# dan
Sg&1 (media produksi antibiotika#. ,arutan -.$&/+ "0 dan Silica 1el 12$"+
masing*masing digunakan sebagai eluen dan pelat pada -,3-3. Sebagai mikroba
penghasil antibiotika digunakan mutan Streptomyces griseus (344 15167 dan
sebagai bakteri uji digunakan Escherichia coli dan Staphylococcus aureus.
Produksi biomassa S. griseus ATCC 10137 : -ultur pada media persediaan &'(
berumur empat hari dipindahkan ke dalam 15 m, media pertumbuhan )S&*+ cair,
dikocok 185 putaran per menit (&&%# selama $+ jam pada suhu $8
o
4. Sebanyak "
m, suspensi dipindahkan ke dalam "5m, media pertumbuhan )S&*+ cair, dikocok
185 &&% pada suhu $8
o
4 dan p. awal 7,6. &engambilan sampel untuk membuat
kurva pertumbuhan dilakukan setiap tiga jam, disentrifugasi, supernatan dibuang, sel
dicuci dengan air suling, dikeringkan pada suhu 15"
o
4 sampai diperoleh berat
konstan. -ecepatan pertumbuhan dinyatakan sebagai berat kering sel per satuan
waktu (hari#.
Produksi AAG dari mutan S. griseus ATCC 10137 : -ultur pada media
persediaan &'( berumur empat hari dipindahkan ke dalam $" m, media
pertumbuhan cair, dikocok 185 &&% selama $+ jam pada suhu $8
o
4. Sebanyak $5
m, suspensi dipindahkan ke dalam $55m, media pertumbuhan Sg$, diinkubasi
pada rotary shaker dengan kecepatan pengocokan 185 &&% pada suhu $8
o
4 sampai
awal fasa stasioner, disentrifugasi !555 &&% selama 15 menit, supernatan dibuang,
sel dicuci dua kali masing*masing dengan $," m, 9a4l 5,0, disentrifugasi !555
&&% selama 15 menit. Supernatan dibuang, sel dimasukkan dalam media Sg&1
sebanyak 150 (b:v#, diinkubasi pada rotary shaker dengan kecepatan pengocokan
185 &&% pada suhu $8
o
4 selama empat hari.
Pemisahan dan karakterisasi antibiotika S .griseus : &emisahan antibiotika dari
kaldu fermentasi dilakukan dengan penyerapan menggunakan arang aktif, diikuti
dengan kromatografi kolom penukar kation (mberlite 41*"5 (9.+;# menurut
)snaeni (18#, merupakan modifikasi metode isolasi yang telah dilakukan oleh
/kachi and 9ara (177#.
Penapisan AAG mutan S. griseus ATCC 10137 : &enapisan ((1 ditujukan untuk
mengetahui adanya inti streptidin dan $*'/S dalam antibiotika mutan S. griseus
(344 15167. <luat kromatografi kolom filtrat hasil fermentasi ditotolkan pada
kertas kromatografi, dikeringkan dan disemprot dengan pereaksi warna Sakaguchi
dan 9a*nitroprusid untuk identifikasi gugus guanidin dalam inti streptidin. =arna
ungu kemerahan akan tampak setelah kertas dikeringkan. Sebagai penampak noda
untuk $*'/S digunakan ninhidrin. =arna biru keunguan akan tampak setelah kertas
dipanaskan pada suhu 115
o
4 selama 15 menit ()snaeni, 18#.
Bioautografi antibiotika mutan S .griseus ATCC 10137 : 2raksi aktif hasil
kromatografi kolom dikumpulkan, dipekatkan dengan liofilisasi menggunakan
freeze ryer. Sebanyak ! >, konsentrat ditotolkan pada lempeng -,3-3, dielusi
dengan larutan -.$&/+ "0 (4laes, 18$#. Bioautogram dibuat dengan cara
meletakkan hasil -,3-3 (yang telah dikeringkan dengan aliran udara untuk
menghilangkan sisa eluen# di atas permukaan media agar perbenihan dalam cawan
petri yang berisi media Nutrient Agar mengandung bakteri uji !. su"tilis &4)*$1
(5," >,:1"m, media#, kemudian disimpan di dalam lemari es selama dua jam agar
proses difusi senyawa dalam noda kromatogram ke dalam media sempurna. 4awan
&etri dikeluarkan dari lemari es, lempeng -,3-3 diangkat dari permukaan agar,
biakan diinkubasi pada suhu 65
o
4 selama $+ jam. ?ona yang terbentuk pada posisi
noda diamati dan diukur diameternya. ()snaeni, 18#.