DIVISIN DE CIENCIAS BIOLGICAS Y DE LA SALUD

LICENCIATURA
QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA


MDULO: OBTENCIN DE METABOLITOS DE INTERS INDUSTRIAL
PARA LA SALUD
(336020)


Comisin de actualizacin de la carta descriptiva
Dra. Rina Mara Gonzlez Cervantes
Dr. Lino Mayorga Reyes
Dr. Alejandro Azaola Espinosa
Dr. Juan Esteban Barranco Florido
Fecha de conclusin de la actualizacin 30/11/2009

UNIVERSIDAD
AUTONOMA
METROPOLITANA
UNIDAD
XOCHIMILCO
Casa abierta al
tiempo
2
NDICE

Pg.
DATOS GENERALES 3
INTRODUCCIN 4
OBJETO DE TRANSFORMACIN 4
PROBLEMA EJE 6
OBJETIVO DEL MDULO 7
LNEAS DE INVESTIGACIN 8
ESTRUCTURA DEL MDULO 9
UBICACIN DEL MDULO EN EL PLAN DE ESTUDIOS 9
CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES 10
PRIMERA UNIDAD
SEGUNDA UNIDAD
TERCERA UNIDAD
CUARTA UNIDAD
QUINTA UNIDAD
SESIONES EXPERIMENTALES
BIBLIOGRAFA
MODALIDADES DE EVALUACIN
3

DATOS GENERALES


Nombre del mdulo: OBTENCIN DE METABOLITOS DE INTERS INDUSTRIAL PARA LA SALUD
Clave del mdulo: 336020
Trimestre de imparticin: Trayectoria A, XI; Trayectoria B, IX y Trayectoria C, VIII
Crditos: 45
Mdulo precedente: Prevencin y control de la propagacin microbiana
Mdulo subsiguiente: Trayectoria A, Aseguramiento de la calidad en la industria qumico farmacutica, o
Tecnologas moleculares para el diagnstico y la teraputica, o Tratamiento de residuos
industriales, o Evaluacin biofarmacutica, o Anlisis instrumental aplicado; Trayectoria B,
Diseo y obtencin de medicamentos de calidad y Trayectoria C, Los frmacos como
modificadores de la funciones biolgicas
No. Hrs./teora/semana: 15
No. Hrs./prcticas/semana: 15
No. Hrs./ totales por trimestre: 330
No. Unidades Tres
Fecha de elaboracin: Diciembre 2004
Comisin de diseo del mdulo Dr. Alejandro A. Azaola Espinosa, Dr. Juan Esteban Barranco Florido, M. en C. Francisco
Bravo Alemn, Dra. Rina Mara Gonzlez Cervantes, Dra. Marisol Lpez Lpez y Dr. Lino
Mayorga Reyes
Fecha de actualizacin: Septiembre 2009
Comisin de actualizacin de la carta
descriptiva
Dra. Rina Mara Gonzlez Cervantes, Dr. Lino Mayorga Reyes, Dr. Alejandro Azaola
Espinosa
Responsable de la actualizacin Dr. Juan Esteban Barranco Florido
Perfil idneo del profesor de este
mdulo
Lic. Qumico Farmacutico Bilogo, Ingeniero Bioqumico Industrial, Ingeniero en
Alimentos. Maestra en Biotecnologa, Doctorado en Biotecnologa
4
INTRODUCCIN

El mdulo Obtencin de metabolitos de inters industrial para la salud se ubica en el Tronco de Carrera de la licenciatura de QFB de la Divisin
de Ciencias Biolgicas y de la Salud, y corresponde a la segunda u.e.a. del eje de biolgicos y lo antecede el mdulo de Prevencin y control de la
infeccin y la contaminacin microbiana y sus implicaciones en el mbito de la farmacia. En este mdulo el alumno relaciona los avances
cientficos y tecnolgicos del campo del conocimiento de la biotecnologa con la produccin de metabolitos para la salud de la sociedad.
Asimismo, dispone de una oportunidad valiosa de apropiarse de la comprensin de textos y del anlisis de contenidos tericos recientes de este
campo de la ciencia que les sern tiles para fundamentar sus conocimientos y transformar su visin del mundo.

El Objetivo General del mdulo es que el alumno se capacite para manipular los procesos bioqumicos y genticos de los microorganismos para la
produccin de metabolitos de inters para la salud. Al finalizar este mdulo, el alumno ser capaz de analizar y comprender procesos en los que
intervengan microorganismos y aplicarlos en su prctica profesional dentro de la industria qumica farmacutica y de alimentos, as como en las
reas ambientales de las industrias en general. Adems, le permitir al alumno intervenir en la planeacin de estrategias metodolgicas donde la
utilizacin de los microorganismos sean indispensables para la produccin de metabolitos, en el monitoreo y anlisis de fermentaciones, as como
en la degradacin biolgica de residuos industriales y urbanos que tienen un impacto directo en el medio ambiente, en el anlisis de factores de
riesgo del uso de microorganismos silvestres o nativos y de los microorganismos genticamente modificados (OGM). Por otro lado, el alumno
estar capacitado para integrarse en estudios de posgrado y en la enseanza de nivel medio y medio superior.

OBJETO DE TRANSFORMACIN:

El Objeto de Transformacin de este mdulo es la obtencin de metabolitos de inters industrial para la salud. Este objeto de transformacin
permite al estudiante adentrarse en la comprensin de un conjunto de procesos biolgicos relacionados con la manipulacin de los
microorganismos, ya sea en sus condiciones fisico-quimicas o en su genoma dentro del vastsimo campo de la biotecnologa. En trminos
5
generales, la biotecnologa se puede definir como el uso de organismos vivos o de compuestos obtenidos de organismos vivos para obtener
productos de valor para el hombre. La biotecnologa moderna est compuesta por una variedad de conocimientos y tcnicas derivadas de la
investigacin en microbiologa, bioqumica, gentica, ingeniera, biologa celular y molecular, as como las matemticas, las cuales pueden ser
utilizadas en cualquier industria que emplee microorganismos o clulas vegetales o animales. La aplicacin comercial de organismos vivos o sus
productos, involucra la manipulacin deliberada de sus genomas, de los procesos de regulacin y sntesis de protenas y de las vas metablicas
para la produccin de compuestos de inters industrial y el mejoramiento de procesos industriales

Por tanto, se puede decir que la biotecnologa abarca desde los procesos biotecnolgicos tradicionales, como por ejemplo la fermentacin de
alimentos, hasta la biotecnologa moderna, basada en la utilizacin de las nuevas tcnicas del DNA recombinante (ingeniera gentica), los
anticuerpos monoclonales y los nuevos mtodos de cultivo de clulas y tejidos.

En las ltimas dcadas, la biologa ha sufrido un cambio revolucionario. Muchos de los problemas que en el pasado slo podan estudiarse a nivel
descriptivo se pueden ahora analizar a nivel molecular, por lo que los sistemas vivos se pueden caracterizar en trminos moleculares. El
advenimiento de la tecnologa de DNA recombinante ha resultado en un aumento exponencial correspondiente del conocimiento de los procesos
celulares fundamentales. Por lo tanto, es muy importante que el QFB actual conozca y aplique estos conceptos de biologa molecular en la
resolucin de los problemas biolgicos que competen a su rea profesional.

Por otra parte, este mdulo pretende que el alumno sea capaz de comprender la literatura cientfica, as como de disear experimentos y realizar
investigaciones que utilicen tcnicas de cultivo y fermentacin de microorganismos para la produccin de biomasa celular y de metabolitos
derivados del metabolismo primario y secundario; tcnicas bioqumicas para determinar caractersticas fisiolgicas de las clulas en estudio, de
enzimas y tcnicas de biologa molecular para la tipificacin de microorganismos, el estudio de vas metablicas hasta el mejoramiento gentico.
Al final del mdulo, el alumno comprender la potencialidad de manipular a los microorganismos con un enfoque dinmico, donde todos los
6
procesos biolgicos internos se encuentran presentes al mismo tiempo, solo que regulados. Asimismo, el alumno aprender a comunicar los
resultados de su investigacin de manera escrita y oral, utilizando las formas y el lenguaje apropiados.

PROBLEMA EJE
Obtencin de metabolitos de origen microbiano

El diseo, anlisis, modificacin y control de procesos bioqumicos y genticos que realizan los microorganismos son herramientas que cada da
tienen ms importancia en una sociedad altamente tecnificada para la produccin de metabolitos de inters para la salud humana y animal. La
biotecnologa ha sido utilizada por el hombre desde los comienzos de la historia en actividades tales como la preparacin del pan y de bebidas
alcohlicas o el mejoramiento de cultivos y de animales domsticos. Aunque el concepto de biotecnologa es nuevo esta denominacin surge en
los aos sesentas del siglo XX- su primera expresin la encontramos hace 5000 aos en los alimentos fermentados por hongos inferiores en China
y en la elaboracin de pan y cerveza en Egipto y consideramos que esta primera etapa termina con los experimentos de Pasteur, quien junto con
Joubert observ que en un cultivo de la bacteria del clera, el crecimiento fue inhibido por una bacteria contaminante que llamaron bacilo comn,
probablemente E coli y postularon por primera ocasin la posibilidad teraputica de las bacterias. Este postulado se confirm con el
descubrimiento de la penicilina por Fleming en 1929. La segunda etapa de la biotecnologa se inicia con el descubrimiento del factor de
transformacin por Avery y colaboradores en 1944 y finaliza con Watson y Crick con el descubrimiento de la doble cadena de ADN en 1953. La
tercera etapa de la biotecnologa se inicia con la elaboracin de la primera molcula de ADN recombinante por Cohen en 1973, dando origen a un
crecimiento exponencial en esta rea de conocimiento (cuyo mayor impacto ha sido en la industria farmacutica) mostrando que el desarrollo de la
ciencia bsica y su aplicacin tienen un potencial econmico ilimitado.

Actualmente el impacto ms evidente de la biotecnologa se observa en cuatro sectores; biomedicina, agricultura, qumica y ambiental, siendo la
primera la que mayor crecimiento e influencia tiene en la sociedad. As, en 1981 se aprueba y sale al mercado el primer producto comercial de
7
diagnstico con anticuerpos monoclonales. Al ao siguiente se inici la comercializacin de la primera molcula recombinante, la insulina
humana. De 1982 a 1989, fueron aprobados por la Federal Drug Administration (FDA USA) 18 frmacos basados en procesos biotecnolgicos. En
la ltima dcada del S. XX, se aprobaron 125 productos nuevos (promedio de 10 por ao).

OBJETIVO DEL MDULO
Manipular los procesos bioqumicos y genticos de los microorganismos para la produccin de metabolitos de inters para la
salud.

Para cumplir este objetivo, el presente mdulo se organiza en tres unidades. Las unidades y sus correspondientes objetivos son:

I. Metabolismo microbiano y su regulacin. Objetivo: Que el alumno integre los conocimientos bsicos de las vas metablicas primarias y
secundarias de los microorganismos a la luz de las perspectivas actuales y futuras de la produccin de metabolitos de inters industrial

II. Procesos de fermentacin. Objetivo: Que el alumno se capacite para realizar, describir y analizar procesos de fermentacin para la
produccin de metabolitos de inters para la salud y la industria.

III. Manipulacin gentica de los microorganismos. Objetivo: Que el alumno integre los conceptos bsicos de bioqumica microbiana, gentica
microbiana y de ingeniera gentica para manipular la produccin de metabolitos de los microorganismos que permitir un gran avance en
todas las ciencias biolgicas, incluyendo la biotecnologa.



8
LNEAS DE INVESTIGACIN

Para el desarrollo del proyecto de investigacin del mdulo se proponen las siguientes lneas de investigacin, que ofrecen posibilidades de
formacin para el manejo de las tcnicas implicadas en los procesos de produccin de metabolitos de origen microbiano.

1. Produccin de antibiticos a partir de cultivos de hongos filamentosos (Penicillium chrysogenun) y actinomicetos (Streptomyces ssp)
2. Produccin de metabolitos por fermentaciones sumergidas o por fermentaciones en estado slido
3. Produccin y caracterizacin de enzimas de inters para la salud o la industria qumica farmacutica
4. Aislamiento y seleccin de cepas productoras de metabolitos de inters para la salud o la industria qumica farmacutica

9
ESTRUCTURA DEL MDULO:
Corresponden tres unidades.
Unidad I. Metabolismo microbiano y su regulacin
Unidad II Procesos de fermentacin
Unidad III Manipulacin Gentica de los microorganismos
Las competencias que desarrollarn en el alumno sern:
Habilidades Destrezas Capacidades Actitudes
Para realizar diseos
experimentales
Para proponer las tcnicas
analticas para la determinacin de
parmetros establecidos
Para integrar los conceptos
tericos con los resultados
experimentales.
En la manipulacin adecuada de
microorganismos con las medidas
de seguridad pertinentes
En la utilizacin de tcnicas
analticas, instrumentos y equipo
del rea de la microbiologa
De anlisis de los resultados
obtenidos en los diseos
experimentales
De comprensin de los procesos
bioqumicos de las clulas y su
modificacin para la produccin
de metabolitos
Para comprender textos y artculos
cientficos referentes al campo de
la biotecnologa
Fomentar el trabajo colectivo
Comprensin del impacto en el
uso de organismos modificados en
el medio ambiente

UBICACIN DEL MDULO EN EL PLAN DE ESTUDIOS
El mdulo Obtencin de metabolitos de inters industrial para la salud (336020), se imparte de acuerdo con la Trayectoria A en el trimestre XI;
para la Trayectoria B en el trimestre IX y para la Trayectoria C en el trimestre VIII de la Licenciatura de Qumica Farmacutica Biolgica. Le
antecede el mdulo Prevencin y control de la propagacin microbiana y le son posteriores en la Trayectoria A, los mdulos Aseguramiento de la
10
calidad en la industria qumico farmacutica, o Tecnologas moleculares para el diagnstico y la teraputica, o Tratamiento de residuos
industriales, o Evaluacin biofarmacutica, o Anlisis instrumental aplicado; respecto a la Trayectoria B es posterior el mdulo Diseo y obtencin
de medicamentos de calidad y en la Trayectoria C es posterior el mdulo Los frmacos como modificadores de la funciones biolgicas
CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

Semana
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Sesiones
Tericas
Unidad I Unidad II Unidad III Evaluacin
Global
Modelos
experimentales
Modelos 1 y 2 Modelo 3 Modelo 4
Investigacin
Seleccin del tema
Elaboracin
del protocolo
Elaboracin del marco terico
y desarrollo experimental
Anlisis de resultados
Elaboracin
del informe
final
Entrega y
presentacin
del informe
Evaluacin de
la
investigacin
Evaluaciones X X X X
Semana 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

11
PRIMERA UNIDAD METABOLISMO MICROBIANO Y SU REGULACIN

OBJETIVO GENERAL DE LA UNIDAD. Que el alumno integre los conocimientos bsicos de las vas metablicas primarias y
secundarias de los microorganismos a la luz de las perspectivas actuales y futuras de la produccin de metabolitos de inters industrial.


Contenidos Objetivos de proceso Actividades Duracin en
sesiones
Bibliografa
1.1 Discusin y ubicacin del mdulo en
el programa de estudios y en el perfil
profesional


Lectura del mdulo. Discusin en clase con el
profesor sobre los objetivos, contenidos del mismo
y comparacin con los mdulos cursados
anteriormente. Organizacin de los alumnos por
equipos para presentaciones orales de los temas.
1

Mdulo

1.2 Importancia de los procesos de
fermentacin y biotransformacin en
la industria

Que el alumno comprenda la
importancia de los diferentes
procesos de fermentacin para la
produccin industrial
Localizacin de libros en la biblioteca sobre
biotecnologa, microbiologa industrial, ingeniera
bioqumica y biotecnologa de las fermentaciones.
Localizacin en nternet las principales pginas
de consulta acadmica tiles para bsqueda de
informacin en el mdulo. (Actividad en biblioteca
y Hemeroteca)
2

-Varias, sobre
los libros mas
recientes
sobre el tema

1.3 La biotecnologa en los procesos de
fermentacin para la produccin de
metabolitos
1.3.1 Ubicacin histrica de la
biotecnologa

Que el alumno comprenda, a
travs de la revisin cientfico
tcnica la diversidad de productos
de fermentacin, as como los
productos que se pueden obtener
a partir de los microorganismos

Discutir en clase las diferentes definiciones de
biotecnologa encontradas en la literatura y porque
se le denomina a la biotecnologa segn la
generacin. Presentacin de un equipo de alumnos
del tema. Discutir e integrar informacin, con la
coordinacin del docente.
1

Varias, sobre
los libros mas
recientes
sobre el tema
1.4 Principales productos metablicos
obtenidos por fermentacin
1.4.1 Metabolitos primarios y
secundarios
1.4.2 Biomasa
1.4.3 cidos orgnicos
Que el alumno se informe acerca
del potencial de produccin de
metabolitos de inters a travs del
estudio de la microbiota que
existe en la naturaleza

Presentacin de un equipo sobre principales
productos obtenidos por fermentaciones
microbianas. Discusin del tema en coordinacin
con el docente.
2

3, Captulo 12
Microbiologa
Industrial

12
1.4.4 Aminocidos
1.4.5 Enzimas de uso industrial y
teraputico
1.4.6 Esteroides y hormonas
1.4.7 Polisacridos
1.4.8 Colorantes
1.4.9 Vitaminas
1.4.10 Antibiticos
1.5 Las enzimas como catalizadores
biolgicos
1.5.1 Estructura y funcin de las
enzimas
1.5.2 Enzimas como catalizadores
biolgicos
1.5.3 Concepto de Energa libre de
Gibbs
1.5.4 Reacciones de 1
er
orden y de
orden 0
1.5.5 Cintica enzimtica; Modelo
de Michaelis y Menten
1.5.6 Reacciones [S] --- > [P]
1.5.7 Inhibicin enzimtica;
modelos
Que el alumno comprenda la
funcin de las enzimas en las vas
metablicas
Que el alumno sea capaz de medir
y analizar la actividad de las
enzimas

Exposicin de Tema por equipo de alumnos,
discusin en clase en coordinacin con el docente.
Se resolver un cuestionario sobre el tema por
equipos y se discutirn las respuestas en
coordinacin con el docente. As mismo se
resolvern ejercicios para clculo de Vmax, y Km.
Tarea sobre los mismos ejercicios
5

4, Captulo de
Enzimas
1.6 Metabolismo
1.6.1 Regulacin y coordinacin del
metabolismo primario
1.6.2 Regulacin del metabolismo
secundario
1.6.3 Regulacin fisiolgica
1.6.3.1 Regulacin y
coordinacin del metabolismo
primario y secundario
1.6.3.2 Retroalimentacin por
Que el alumno adquiera y aplique
el conocimiento de las rutas
metablicas para la produccin de
metabolitos

Que el alumno entienda los
mecanismos de regulacin de las
enzimas que participan en una va
metablica o catablica a nivel
bioqumico y las diferencias de
regulacin entre vas primarias y
Anlisis de las vas primarias principales
(Gluclisis, Ciclo de los cidos tricarboxlicos y
Disimilacin del Piruvato) en Escherichia coli,
identificando las enzimas de control en cada una de
estas vas, as como las conexiones con otras vas.
As mismo se analizarn los genes que codifican
para cada una de estas enzimas y la informacin
sobre su regulacin, tanto a nivel actividad como a
nivel gentico. Se resolver un cuestionario sobre
el tema por equipos y se discutirn las respuestas
en coordinacin con el docente
2






5, Captulo
11.
6





13
producto final
1.6.3.3 Enzimas alostricas
1.6.3.4 Represin catablica
1.6.3.5 Activacin por
sustratos
1.6.4 Acceso de nutrientes a las
clulas procariontes
1.6.4.1 Difusin facilitada
1.6.4.2 Transporte facilitado o
mediado
1.6.4.3 Transporte activo
1.6.4.4 Translocacin de
grupos (Sistema de
fosfotransferasa PTS)
1.6.5 Anlisis de vas metablicas
1.6.5.1 Definicin de va
metablica
1.6.5.2 Anlisis de flujos
metablicos. Vas metablicas
centrales y conexin con vas
primarias y secundarias
1.6.5.3 Distribucin del flujo
de carbono en las vas
metablicas primarias
1.6.5.4 Sitios de control: nodos
de control rgidos y flexibles








secundarias



Que el alumno conozca los
diferentes mecanismos de ingreso
de nutrientes a la clula y como el
uso de alguno de estos va a
determinar la preferencia del
microorganismo por ciertos
sustratos


Que el alumno retome los
conocimientos de las principales
vas metablicas, profundizando
en el estudio de las reacciones
enzimticas que se presentan en
cada paso de las vas y que
determinan la produccin de
energa, y a su vez la velocidad de
crecimiento en la clula.

Que el alumno adquiera un
enfoque de estudio del
metabolismo celular de una forma
integrada al contrario del enfoque
que estudia las reacciones de
forma individual y as poder
estudiar las interacciones de las
reacciones bioqumicas que
participan en una red metablica.
Que el alumno aprenda a
identificar las enzimas
susceptibles de regulacin en las
vas en estudio y como esto va a











Exposicin del tema por equipo en clase.
Discusin con el profesor. Actividad extra-aula:.
Diagrama sobre la va de sntesis de un
aminocido, indicando las enzimas involucradas en
la va y que son reguladas por acumulacin del
producto final.
Conexin con el metabolismo secundario, Anlisis
de la va de un metabolito secundario,
identificando a su precursor generado en una va
metablica primaria.











1






3

























7, 8, 9
14


1.6.6 Metabolismo primario
1.6.6.1 Produccin de cidos
orgnicos
1.6.6.2 Produccin de
aminocidos
1.6.7 Metabolismo secundario
1.6.7.1 Produccin de
antibiticos
1.6.7.2 Produccin de
vitaminas
1.6.7.3 Produccin de
colorantes

determinar el flujo de carbono
hacia la produccin de
metabolitos
Que el alumno comprenda cmo
se distribuye el flujo de las vas
metablicas que participan en los
microorganismos para su
crecimiento y produccin de
metabolitos
Que el alumno se capacite para
manipular la biosntesis
microbiana de metabolitos
primarios y secundarios como
productos finales de una
fermentacin
Que el alumno entienda la
diferencia entre metabolismo
primario y secundario y su
importancia en la produccin de
metabolitos de inters industrial

.


3
Total de sesiones 20

15
SEGUNDA UNIDAD. PROCESOS DE FERMENTACIN

OBJETIVO GENERAL DE LA UNIDAD. Que el alumno se capacite para realizar, describir y analizar procesos de fermentacin
para la produccin de metabolitos de inters para la salud y la industria.

Contenido
Objetivos de proceso
Actividades
Duracin
en sesiones
Bibliogra
fa
2.1 Procesos de fermentacin para la
produccin industrial
2.1.1 Modelos de crecimiento
2.1.1.1 Crecimiento individual


2.1.1.2 Crecimiento
poblacional





2.1.1.3 Modelos matemticos
de crecimiento microbiano;
modelo de Monod y modelo
exponencial

2.1.1.4 Tasas de crecimiento
(), tiempo de duplicacin,
tiempo de generacin
Que el alumno comprenda las
diferentes formas de crecimiento
que presentan las bacterias,
hongos y levaduras,
microorganismos utilizados en
los proceso de fermentacin para
la produccin de metabolitos
Que el alumno estudie las
diferentes formas de medir el
crecimiento de microorganismos
(produccin de biomasa) durante
los procesos de fermentacin.
Mtodos directos y mtodos
indirectos


Que el alumno comprenda el uso
de modelos matemticos para
describir el crecimiento celular y
su uso para controlar el ambiente
qumico y fsico de los procesos
de fermentacin y su relacin con
el metabolismo microbiano
Discusin en el aula de lecturas y artculos
cientfico-tcnicos

Trabajo de laboratorio
Observacin al microscopio de los
microorganismos utilizados en su proyecto de
investigacin

Discusin en el aula de lecturas y artculos
cientfico-tcnicos. Discusin en el aula para medir
el crecimiento celular en medios de cultivo slidos,
lquidos y con sustratos insolubles

Trabajo de laboratorio
Medicin del crecimiento por la metodologa
propuesta en su protocolo

Discusin en el aula de lecturas y artculos
cientfico-tcnicos. Discusin en el aula sobre las
metodologas reportadas la literatura para medir el
crecimiento celular en medios de cultivo slidos,
lquidos y con sustratos insolubles


Trabajo de laboratorio. Medicin del crecimiento
por la metodologa propuesta en su protocolo
1







1








2
1, 2, 11, 12
2.1.2 Parmetros cinticos de las
fermentaciones
2.1.2.1 Rendimientos
2.1.2.2 Tasas de produccin;
Que el alumno comprenda los
modelos matemticos simples
que permiten describir y
controlar un proceso de
Discusin en el aula de lecturas y artculos
cientfico-tcnicos para comprender como los
parmetros cinticos permiten relacionar el
metabolismo celular con el consumo de sustratos y
4

1, 2, 11, 12
16
volumtricas y especficas
2.1.2.3 Productividad
2.1.2.4 Tasas de consumo

fermentacin y su posible
optimizacin a partir de las
relaciones entre produccin de
biomasa, rendimientos, consumo
de sustrato y formacin de
producto y los patrones cinticos
que permiten describir la
formacin de metabolitos
primarios y secundarios
la formacin de productos


En discusin y trabajo grupal el alumno calcule los
rendimientos de biomasa por unidad de fuente de
carbono utilizada y las velocidades volumtricas y
especficas de biomasa y producto a partir del
consumo de la fuente de carbono
2.2 Transferencia de masa (K
L
a)
2.2.1 Cultivos aerobios
2.2.2 Cultivos anaerobios
2.2.3 Transferencia de masa;
concepto
2.2.4 Agitacin y aireacin
como limitantes de la
transferencia de oxgeno

Que el alumno comprenda cmo
se puede estudiar los procesos de
transferencia de masa utilizando
como modelo el oxgeno como
un sustrato poco soluble en el
medio de cultivo para las clulas
que necesitan de oxgeno. As
tambin, cmo se proporcionan
los requerimientos de oxgeno
necesarios para la produccin de
biomasa en condiciones de
trabajo experimental a nivel
matraz o fermentador
Discusin en el aula de lecturas y artculos
cientfico-tcnicos para comprender como los
parmetros cinticos permiten relacionar el
metabolismo celular con el consumo de sustratos y
la formacin de productos

En discusin y trabajo grupal el alumno calcule los
rendimientos de biomasa por unidad de fuente de
carbono utilizada y las velocidades volumtricas y
especficas de biomasa y producto a partir del
consumo de la fuente de carbono de los datos
generados durante su trabajo de investigacin

3

1, 2, 11, 12
2.3 Tipos de fermentaciones
2.3.1 Procesos en lote
2.3.2 Procesos en lote
alimentado
2.3.3 Procesos continuos

Que el alumno comprenda la
importancia de los diferentes
procesos de fermentacin para la
produccin industrial
Que el alumno comprenda, a
travs de la revisin cientfico
tcnica la diversidad de procesos
de fermentacin, as como los
sustratos y productos que se
pueden obtener a partir de los
microorganismos
Discusin en aula de lecturas y artculos cientfico-
tcnicos

Trabajo de laboratorio fermentacin en lote

2

1, 2, 11, 12
2.4 Formulacin de medios de cultivo
2.4.1 Relacin carbono nitrgeno
2.4.2 Medios de cultivo mnimos y
complejos; concepto y uso
2.4.3 Diseo de medios de cultivo
Que el alumno comprenda como
a partir del metabolismo
microbiano y de algunos
parmetros de cinticas de
fermentacin como los
rendimientos es posible calcular
En discusin y trabajo del grupo los alumnos
relaciones los requerimientos de sustratos para los
microorganismos en diferentes condiciones de
cultivo y por medio de problemas calculen los
requerimientos de carbono, nitrgeno y oxgeno
para la produccin de biomasa

2

1, 2, 11, 12
17
con base a la composicin celular y
a sus requerimientos
2.4.4 Diseo experimental para la
optimizacin de medios de cultivo.
Diseos factoriales

las necesidades de sustrato para
la obtencin de biomasa

Total de sesiones 15




18
UNIDAD III. MANIPULACIN GENTICA DE LOS MICROORGANISMOS.

OBJETIVO GENERAL DE LA UNIDAD, Que el alumno integre los conceptos bsicos de bioqumica microbiana, gentica
microbiana y de ingeniera gentica para manipular la produccin de metabolitos de los microorganismos


Contenidos Objetivos de proceso Actividades Duracin en
sesiones
Bibliografa
Aspectos bsicos de Gentica
Microbiana
Estructura y funcin de los
cidos nucleicos en procariontes
y eucariontes
Procesos de replicacin,
transcripcin y traduccin en
procariontes
Intercambio de material gentico
entre bacterias (transformacin,
conjugacin y transduccin)

Introducir al estudiante al campo
de la Gentica Molecular
Microbiana

Que el alumno se conozca las
bases qumicas y moleculares de
a vida
Que el estudiante conozca las
bases de la expresin gnica y de
protenas en organismos
procariotes
Que el estudiante conozca las
bases del intercambio de material
gentico entre los
microoganismos
En equipos de trabajo se discutir la importancia
de la Gentica molecular microbiana


En equipos de trabajo se analizar la importancia
de loa cidos nucleicos, de acuerdo a la
bibliografa recomendada
En grupos de trabajo se analizar y discutir los
procesos de replicacin, transcripcin y
traduccin en organismos procariontes, de
acuerdo a la bibliografa recomendada
En equipos de trabajo se analizar y discutir los
mecanismos de transferencia de material
gentico, de acuerdo a la bibliografa
recomendada
4

13, 14, Artculos
de Revistas
internacionales







14 (pags. 187-301)
3.1 Estrategias para el mejoramiento de
cepas para la produccin de metabolitos

Que el alumno conozca los
mecanismos para el mejoramiento
de cepas por alteracin gentica
como cepas autotrficas,
mutantes desregulados, mutantes
resistentes a la inhibicin por
producto final y mutantes
resistentes a la represin
En equipos de trabajo analizar las estrategias que
permitan mejorar la produccin de metabolitos,
utilizando como base el artculo Improvement of
microbial strains and fermentation processes y se
discutirn en clase
1

20

3.2 Mutagnesis. Concepto de
mutacin, y tipos de mutacin.
Que el alumno comprenda el efecto
en el cambio de nucletidos del
ADN genmico microbiano
En equipos de trabajo se analizar la bibliogrfica
de textos y artculos en revistas internacionales
3 13, 14 (pags. 115-
145)
-Artculos de
19
3.2.1 Agentes mutagnicos fsicos,
qumicos y biolgicos
3.2.2 Tipos de mutacin
3.2.2.1 Frameshift
3.2.2.2 Delecin
3.2.2.3 Inversin
3.2.2.4 Insercin
3.2.3 Mecanismo de reparacin de
ADN
3.2.4 Aislamiento de mutantes
auxotrficas de inters
industrial
revistas
internacionales-
3.3 Regulacin de la expresin del gen
3.3.1 Principios de la regulacin
del gen a nivel
transcripcinal
3.3.2 Regulacin negativa
(Opern lac, gal en E. coli,
regulacin de operones
biosintticos).
3.3.3 Regulacin positiva
(Opern ara, maltosa en E.
coli)
3.3.4 Regulacin por atenuacin
de la transcripcin en E.
coli
3.3.5 Anlisis gentico de la
regulacin catablica en E.
coli


Que el alumno comprenda e
integre los procesos de
regulacin que intervienen en el
metabolismo celular

Que el alumno conozca las bases
de la regulacin gentica en
microorganismos procariotes

Que el alumno conozca los
mecanismos de regulacin del
opern de la lactosa, y galactosa
en E .coli

Que el alumno conozca los
mecanismos de regulacin del
opern de arabinosa y maltosa
en E. coli

Que el alumno conozca los
En equipos se discutir y analizar la regulacin del
gen a nivel transcripcional en la bibliogrfica
correspondiente de textos y artculos en revistas
internacionales


Anlisis y discusin de la bibliografa en textos y
artculos en revistas internacionales



5 13, 14 (pags 404-
442)
-Artculos de
revistas
internacionales
20
diferentes mecanismos de
regulacin del opern del
triptofano en E. coli

Que el alumno conozca algunas
protenas regulatorias en el
control de algunos operones en
E. coli
3.4 Tecnologa del ADN recombinante
3.4.1 Aislamiento y purificacin
de cidos nucleicos
3.4.2 Enzimas de restriccin
3.4.3 Vectores de clonacin
molecular
3.4.4 Construccin de genotecas
3.4.5 Estrategias de clonacin en
procariontes. Discusin

Que el estudiante se capacite para
clonar segmentos de ADN que
lleven un inters industrial

Que el estudiante conozca
diferentes mecanismos para aislar y
purificar ADN genmico

El alumno conocer la aplicacin de
las enzimas de restriccin en la
clonacin

El alumno conocer la aplicacin y
los diferentes vectores de clonacin

El alumno conocer la importancia
en la construccin de una genoteca
microbiana
Anlisis y discusin de la bibliografa en manuales
y artculos en revistas internacionales
3 13, 15
-Artculos de
revistas
internacionales
3.5 Tcnicas de Biologa molecular en
Biotecnologa
3.5.1 Reaccin en cadena de la
polimerasa (PCR), RT
PCR secuenciacin,
Southern blot, Northern
blot, Western blot,
mutagnesis dirigida,
microarreglos, etc.
3.5.2 Organismos
genticamente
modificados. Clonacin en
Que el alumno comprenda las
tcnicas moleculares que se
aplican en la ingeniera gentica,
en diversos organismos para la
obtencin de producto de inters
industrial y de la salud.

El alumno conocer la aplicacin
de la PCR, RT-PCR, RT-PCR en
tiempo real, secuenciacin
Southern blot, Northern blot,
Western blot, mutagnesis
Anlisis y discusin de la bibliografa en manuales
y artculos en revistas internacionales

En grupos de trabajo el alumno discutir y analizar
la importancia de los microorganismos eucariotes,
genticamente modificados por ingeniera gentica

En equipos, el grupo discutir y analizar la
expresin homloga y heterologa

En grupos de trabajo el alumno discutir y analizar
la produccin de protenas recombinantes en
procariotes
4 13, 15, 16, 17,
18, 19

21
eucariontes. Transferencia
nuclear.
3.5.3 Sistemas de expresin
homloga y heterloga,
3.5.4 Produccin de protenas
recombinantes en clulas
procariontes (E. coli,
Bacillus)
3.5.5 Produccin de protenas
recombinantes en
eucariontes
(Saccharomyces
cerevisiae)

dirigida, microarreglos, etc en la
fisiologa de un microorganismo

Que el estudiante se capacite para
proponer su propia estrategia en
la clonacin de algunos
organismos y tener perspectivas
de las aplicaciones en la
ingeniera gentica.

Que el alumno comprenda los
diferentes sistemas de expresin
homloga y heterloga de los
microorganismos

Que el estudiante analice la
importancia de la produccin de
protenas recombinantes en
bacterias


Total de sesiones 20



22
SESIONES EXPERIMENTALES

MODELOS EXPERIMENTALES PROGRAMADOS:

A lo largo del mdulo y de forma paralela a la discusin de los contenidos tericos y del proyecto de investigacin, los alumnos desarrollarn los
modelos experimentales que les permitirn familiarizarse con la metodologa bsica para el manejo de microorganismos y evaluar su
comportamiento durante un proceso de fermentacin y de mejoramiento gentico. Los modelos seleccionados son:

1. Cintica enzimtica: Este modelo permitir al alumno desarrollar las habilidades y competencias necesarias para evaluar algunas de las
propiedades y caractersticas que definen a las enzimas. Para esto, el alumno deber determinar qu puede medir, la desaparicin de
sustratos o la aparicin de productos, que medirn a partir de elaboracin de curvas estndar de sustratos o de productos de reaccin
2. Cintica de crecimiento: Este modelo permitir al alumno desarrollar las habilidades y competencias necesarias para analizar el
crecimiento de microorganismos bajo condiciones controladas del laboratorio y cuantificar el consumo de sustratos y/o la aparicin de
productos
3. Transformacin y conjugacin bacteriana: Con este modelo, el alumno desarrollar las habilidades y competencias necesarias para
conocer la metodologa de transformacin gentica en clulas procariontes y sus potenciales aplicaciones.
4. Funcionamiento y regulacin del opern de lactosa en Escherichia coli: Este modelo permitir al alumno comprender las distintas fases
de regulacin de la enzima ! galactosidasa, como ejemplo de la regulacin gentica en procariontes y en eucariontes.

CARTA DESCRIPTIVA: PROPUESTA DE FORMATO SESIN EXPERIMENTAL

Nombre de la Sesin experimental: Estudio del crecimiento de Kluyveromyces marxianus y de la induccin de diferentes actividades
enzimticas por sustratos especficos
23
Introduccin: Uno de los principales productos biotecnolgicos obtenidos para el servicio del ser humano son las enzimas, que tienen utilidad
en procesos industriales, en medicina, en la industria farmacutica, etc son las enzimas. Sin embargo, su produccin est controlada por los
sustratos que se quieren utilizar o transformar, la comprensin de la regulacin de su expresin mejorara la productividad de este metabolito.

El consumo de fuentes de energa por los microorganismos est regulado genticamente por mecanismos de induccin-represin, que en las
bacterias esta dado por un sistema simple, en cambio en levaduras es de una alta complejidad. De este modo, la clula se adapta a medios
ambientes con determinadas fuentes de carbono, al inducir la expresin de enzimas que ayuden a la utilizacin de los azcares que se
encuentren y por tanto, pueden ser tambin reprimidas estas enzimas cuando el microorganismo encuentra fuentes de carbono de fcil
asimilacin o con alta capacidad de producir energa (ATP).

Kluyveromyces marxianus es una levadura anaerobia facultativa, de inters industrial por las actividades enzimticas que posee (Fonseca et al.
2008) y por ser una cepa considerada segura (GRASS). Es la fuente para la obtencin de la enzima !-galactosidasa (Bansal et al., 2008);
excreta una !-fructofuranosidasa constitutiva con la cual se puede hidrolizar y fermentar polifructanos, sacarosa, xilosa, galactosa, entre otras
(de Paula et al., 2008). Durante su crecimiento aerobio puede fermentar la glucosa hasta su completa oxidacin a CO
2
, con una alta
productividad celular. El objetivo de este proyecto de investigacin es el estudio del crecimiento de clulas en diferentes sustratos, utilizando
como control la glucosa y comparar la induccin y/o la represin de las enzimas !-galactosidasa y !-fructofuranosidasa con lactosa y sacarosa
como fuentes de carbono.

Objetivo: Utilizar como modelo de investigacin experimental una cepa de K. marxianus para la produccin de biomasa en tres fuentes de
carbono, as como determinar los mecanismos de induccin y represin de las actividades enzimticas de !-galactosidasa y !-
fructofuranosidasa. Tambin, cada equipo propondr un modelo experimental en el que se utilicen desechos agroindustriales o de otras
industrias que le permita observar y estudiar los fenmenos de induccin represin (Squarezi et al., 2009).


Objetivos de enseanza aprendizaje:

! Que los equipos de investigacin comprendan que los experimentos control en un proceso de investigacin son importantes para distinguir
si las respuestas a las preguntas que hacen a su objeto de estudio son significativas.
! Que los equipos de investigacin sean capaces de proponer un sistema de induccin/represin de actividades enzimticas.y
! Que el equipo de investigacin sea capaz de presentar sus resultados en un documento escrito y en seminario de grupo.

Aprendizajes esperados de los alumnos:

! Analice la propuesta y la importancia de realizar experimentos diseados como controles
24
! Proponga en base al modelo y a los contenidos tericos del mdulo, un objetivo de estudio de regulacin de la actividad enzimtica
! Seleccione la metodologa adecuada para su proyecto
! Comprenda el fundamento de las tcnicas analticas que va a utilizar
! Utilice las tcnicas usuales en sistemas de fermentacin simples que se proponen en este documento
! Analice y presente los resultados por su relevancia
! Elabore un documento tipo artculo cientfico los resultados de su investigacin

Materiales, equipo y reactivos
Materiales Equipo Reactivos
Cajas Petri
Matraces Erlenmeyer de 250 ml y de 100 ml
Pipetas de 1, 5 y 10 ml
Termmetro de Laboratorio
Algodn
Gasa
Tubos de ensaye (Conforme a las
necesidades)
Tubos Eppendorf (Conforme a las
necesidades)
Tubos cnicos de 15 ml para centrfuga

Autoclave
Potencimetro
Incubadora Orbital
Espectrofotmetro
Centrifugadora refrigerada
Estufa de 30 C
Balanza Granataria
Balanza Analtica
Micropipetas de 1000 y 100 !l
Refrigerador 4 C
Congelador -4C

Extracto de Levadura
Glucosa
Lactosa
Hidrxido de Sodio
cido Clorhdrico
3-5 DNS, cido dinitrosaliclico
Tartrato de Na y K
Fenol
Metabisulfito de Na
Sulfato de cobre pentahidratado
Carbonato de sdio
Fenoil-Folin


Procedimiento experimental:
La metodologa que se les presenta, es general y servir de igual manera para que cada equipo de investigacin proponga el modelo que crea
conveniente. Cada equipo de investigacin deber proponer un modelo o experimento que le permita estudiar los procesos de induccin o de
represin de las actividades anteriores o bien, de algn otra actividad enzimtica que bibliogrficamente seale que lo tiene el modelo de
estudio. Tambin, deber seguir toda la cintica de fermentacin y la determinacin de los parmetros cinticos aprendidos en el mdulo.

25
Microorganismo
Microorganismos de trabajo: Kluyveromyces marxianus, el alumno debe definir las condiciones ambientales de crecimiento.

Activacin de las clulas
En un matraz de 100 ml de volumen con 50 ml de medio de cultivo que contiene 0.5% de extracto de levadura como fuente de nitrgeno y
(1%) de glucosa, ajustar el pH a 5.5. Inocular un vial de la cepa seleccionada y dejar crecer por 24 hr a 28C. Este ser el cultivo de donde se
partir para los sistemas propuestos por el equipo de investigacin.

Inculo
Del matraz con clulas activadas, transferir 5 ml a un matraz de 100 ml con 50 ml del mismo medio de cultivo, al final utilizar un volumen de
fermentacin que sea con un tamao de inculo del 5%. Dejar incubar bajo las mismas condiciones por toda la noche

Fermentacin
Preparar un matraz de 250 ml con 100 ml de medio para cada uno de los siguientes medio de cultivo:

Medio de cultivo control (Manera y col., 2008)
Extracto de levadura 0.5%
Glucosa 1%
pH 5.5

Medio de cultivo para inducir la actividad enzimtica
Extracto de levadura 0.5%
Lactosa o sacarosa o la fuente alterna 1%
pH 5.5

Ambos medios esterilizarlos en autoclave a 10lb/plg
2
por 10 minutos
Los matraces de medio de cultivo deben contener un tapn de algodn para el intercambio de gases.

Para facilitar la comprensin del diseo experimental se presenta la siguiente tabla, con la propuesta de 5 tipos de medio de cultivo para el
trabajo de investigacin:




26
Medio
No
Extracto de
levadura ( %)
Glucosa
(%)
Lactosa
(%)
Sacarosa
(%)
Problema
1 2(%)
pH
1
2
3
4
5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
1
1


1









5.5
5.5
5.5
5.5
5.5
A los matraces 4 y/o 5 se les agregar el inductor y/o represor que el equipo plantee en su investigacin

Inocular en los matraces de fermentacin previamente esterilizados. El tamao de inculo ser del 5% (v/v), como se mencion anteriormente.
Tomar muestras a partir del tiempo cero y posteriormente cada dos horas durante 8 horas.

Cada muestra ser de un mnimo de 6 ml. Un ml se coloca en un tubo Eppendorf y se congela para medir posteriormente la concentracin de
azcares reductores y la concentracin de protena; 2 ml para medir el pH (inmediatamente); Un ml para medir el crecimiento por DO a 660
nm y 2 ml que se centrifugan a 5000 rpm por 15 minutos para separar la biomasa del medio de cultivo, que servir para cuantificar la actividad
enzimtica en las clulas y en el sobrenadante.

Determinacin del crecimiento: En un tubo cnico de 15 ml poner 1 ml de medio de cultivo. Se centrifuga a 5000 rpm durante 5 minutos. Se
desecha el sobrenadante y al paquete celular se le agrega 5 ml de agua destilada, se resuspenden las clulas y se vuelve a centrifugar. Despus
de la ltima lavada, se desecha el sobrenadante y se resuspenden las clulas en el mismo volumen que se tomo como muestra inicial. Se lee la
observancia a una longitud de onda de 660 nm. El peso seco se determina con base a la curva siguiente de peso seco vs densidad ptica

a = 0.9551 b = 0.0255 r
2
= 0.9987




Medicin de la actividad enzimtica

Para medir la actividad enzimtica, es necesario determinar la concentracin de azcares reductores y de protenas en la muestra a analizar.
Posteriormente se puede medir la actividad. En seguida se muestran los procedimientos para ambas tcnicas.



27
Determinacin de azcares reductores
Miller GL (1959)
Reactivos
NaOH 1.4 %
3-5 DNS 0.75 %
Tartrato de Na y K 21.6 %
Fenol 0.54 %
Metabisulfito de Na 0.59 %

Se disuelven los ingredientes en el orden arriba mencionado, en agua destilada, hasta completar la disolucin de cada uno. Se agrega el
volumen necesario de agua. Guardar en frasco mbar y se deja reposar a temperatura ambiente por 24 h.

Se prepara una solucin de glucosa (10mg/10 ml) para la realizacin de la curva estndar

Curva estndar de azcares reductores
La curva estndar contempla concentraciones de 0 g hasta 1000 g de glucosa por ml
Preparar una mezcla de reaccin con un volumen final de 1.5 ml en agua destilada
3 ml del reactivo de DNS
Hervir las muestras por 5 minutos
Dejar enfriar a temperatura ambiente
Llevar a volumen final de 20 ml con agua destilada
Agitar y leer a 550 nm


Sol Std.
Glucosa
(ml)
Conc. Final
glucosa
(g/ml)
H
2
O
(ml)
DNS
(ml)
H
2
O
(ml)
0.0
0.1
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
0
100
200
400
600
800
1000
1
0.9
0.8
0.6
0.4
0.2
0
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
7.5
7.5
7.5
7.5
7.5
7.5
7.5
28
Tenga presente que la concentracin mxima de azcar reductor que es lineal en esta curva es de 1000 g/ml y que el medio de cultivo puede
tener un exceso de azcar, contemple las diluciones que crea convenientes y prepare sus muestras problemas siguiendo el mismo
procedimiento de un punto de la curva estndar.

Determinacin de Protenas
Lowry, O.H. et al. (1951).

Reactivos
Reactivo A: CuSO
4
.5H
2
O al 1% en agua
Reactivo B: tartrato doble de sodio y potasio al 2% en agua
Reactivo C: Na
2
CO
3
al 2% en NaOH 0.1N (4g NaOH + 20 g Na
2
CO
3
en agua cb 1000)
Reactivo D: 1A + 1B = 1D
Reactivo E: 1D + 50C (0.5A + 0.5B + 50C)
Reactivo fenol folin dil 1:1
Sol std. Albmina 1mg/ml. Pesar 10 mg para 10 ml de agua destilada. Tomar 0.3 ml de esta solucin y agregar 2.7 ml de agua destilada para
una solucin de 100g/ml
Proceso
Colocar en un tubo alcuota de estndar de protena
Llevar a 1 ml con agua destilada
Agregar 3 ml reactivo E y agitar vigorosamente
Dejar reposar 10 min. a T. ambiente
Agregar o.3 ml reactivo fenol 1:1, agitar
Dejar reposar a T. amb.
Leer a 540 nm

Std albmina
(ml)
Conc. Final
albmina
(g/ml)
H
2
O Reactivo E
(ml)
Folin 1:1
(ml)
0
0.125
0.250
0.500
0.750
1.0
0
12.5
25
50
75
100
1
0.875
0.750
0.500
0.250
0
3
3
3
3
3
3
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
29
Determinacin de la concentracin de protenas y azcares en las muestras de fermentacin por muestra

Azcares reductores:

Muestra
(ml)
H
2
O
(ml)
DNS
(ml)
Hervir 5 min
Dejar a T.
amb
H
2
O
(ml)
0.1 0.9 1.5 7.5

Leer a 550 nm. Calcular en base a los datos de la curva estandar la concentracin de azcares reductores

Protenas

Muestra
(ml)
H
2
O
(ml)
Reactivo E
(ml)
Reposar
a T. amb
(min)
Reac Fenol
folin
(ml)
Reposar
a T. amb
(min)
0.1 0.9 3 10 0.3 30

Leer a 540 nm. Calcular en base a los datos de la curva estndar de proteinas
Con los datos de la curva estndar y la ecuacin de la recta Y=mX + b, despejar el valor de X (concentracin de problema) y multiplicar por el
factor de dilucin

Actividad enzimtica
El objetivo de esta parte es analizar como se induce la actividad enzimtica de K. marxianus en el caldo de fermentacin.

Se partir de una solucin estndar de lactosa o sacarosa (10mg/ml). De acuerdo al ejemplo de la siguiente tabla

Tubo
#
Sol.
std
(ml)
Caldo de
fermentac
in
(ml)
Muestra del
tiempo 0 min
(ml)
Muestra del tiempo
15min
(ml)
1
2
1.0
1.0
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1

30
A cada muestra, agregar lo necesario para medir los azcares reductores al tiempo cero minutos y al tiempo 15 minutos. Esto se debe hacer
rpidamente para evitar errores.

Cada equipo debe contemplar el material necesario que va a utilizar.

Mecanismo de eliminacin de residuos: actividades de desecho de materiales (pertinentes con la nocin de sustentabilidad)
Para los desechos biolgicos:
a) Microorganismo y material de vidrio, esterilizacin y limpieza
Para los desechos qumicos:
a) Recoleccin en recipiente de plstico con tapa los desechos del reactivo del DNS y de Lowry
Forma de presentacin y discusin de resultados
A travs de tres seminarios:
En el primero presentan un protocolo de trabajo que contenga su propuesta de trabajo en el laboratorio, consistente en una introduccin, una
hiptesis, los objetivos, la metodologa, un diagrama de flujo, la calendarizacin y la bibliografa.
En el segundo se presentan avances conteniendo los resultados con las propuestas de formato de los resultados para que se discuta en grupo
En el tercero la presentacin final del trabajo, consistente en una introduccin, los objetivos, la metodologa, los resultados, su discusin,
conclusiones y la bibliografa.

Bibliografa de la propuesta experimental
Bansal S, Oberoi HS, Dhillon GS y Patil RT (2008). Production of beta-galactosidase by Kluyveromyces marxianus MTCC 1388 using whey
and effect of four different methods of enzyme extraction on beta-galactosidase activity. Indian Journal of Microbiology. 48: 337-341
31
de Paula FC, Cazetta ML, Monti R y Contiero J (2008). Sucrose hydrolysis by gelatin-immobilized inulinase from Kluyveromyces marxianus
var. bulgaricus. Food Chemistry 111: 691-695
Fonseca GG, Heinzle E, Wittmann C y Gombert AK (2008). The yeast Kluyveromyces marxianus and its biotechnological potential. Applied
Microbiology and Biotechnology 79: 339-354
Manera AP, Ores JD, Ribeiro VA, Andre C, Burkert V y Kalil SJ (2008). Optimization of the culture medium for the production of beta-
galactosidase from Kluyveromyces marxianus CCT 7082.
Miller, G.L. (1959). Use of Dinitrosalicylic acid reagent for determination of reducing sugar. Annalytical Chemistry 31: 426-428
Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL. y Randall RJ (1951). Protein measurement with the folin phenol reagent. Journal Biological Chemistry
193: 265-273
Squarezi C, Longo C, Ceni G, Boni G, Silva MF, Di Luccio M, Mazutti MA, Maugeri F, Rodrigues MI y Treichel H. (2009). Inulinase
Production by Agro-Industrial Residues: Optimization of Pretreatment of Substrates and Production Medium. Food and Bioprocess
Technology 2: 409-414



32
BIBLIOGRAFA DEL MDULO
Bsica

1. Aiba S A, Humphrey A y Mills NF (1973). Biochemical Engineering,.. 2nd. Ed. Academic Press, New York
2. Bailey JE y Ollis DF (1986) Biochemical Engineering Fundamentals. 2nd. Ed. Mc Graw Hill, Boston
3. Madigan M, Martinko J y Parker J (2003) Brock. Biologa de los Microorganismos. 10 Edicin Edit. Pearson. Madrid. Espaa
4. Lehninger A L (1997) Bioquimica. Editorial Omega. Barcelona, Espaa
5. Neidhart FC, Ingraham JL y Schaechter M (1999). Physiology of the Bacterial Cell: A molecular approach. Primera Edicin. Editorial Sinauer Associates
Incorporated. Portland, USA
6. Neidhardt FC (1987) Escherichia Coli and Salmonella Typhimurium Cellular and Molecular Biology (Vol. 2). ASM Press. Ohio USA
7. Stephanopoulos G (1999). Metabolic Fluxes and Metabolic Engineering. Metabolic Engineering. 1:1-10
8. Stephanopoulos G, Alper H y Moxley J (2004). Exploiting biology complexity for strain improvement through systems biology. Nature Biotechnology
22(10):1261-1267)
9. Olano C, Lombo F, Mndez C y JA Salas (2008). Improving product of bioactive secondary metabolites in actinomycetes by metabolic engineering.
Metabolic Engineering 10:281-292
10. Segel IH (1975) Enzyme Kinetics,. John Wiley, N.Y.
11. Wang DI, Cooney CL, Demian AL, Dunnil P, Humphrey A.E. y M.D. Lilly (1979) Fermentation and Enzyme Technology. John Wiley & Sons. New York
12. Demain A.L. y N.A. Solomon (1986) Manual of Industrial Microbiology and Biotechnology. American Society for Microbiology, USA
13. Lodish H, Berk A, Zipursky SL, Matsudaira P, Baltimore D y J Darnell (2005). Molecular Cell Biology, Scientific American Book, USA
14. Snyder L y W Champness, (2003). Molecular Genetics of Bacteria. ASM Press
15. Sambrook J y col, (2002). Molecular cloning a laboratory manual. Cold Spring Harbor L Press
16. Genngross T.U. (2004). Advances in the production of human therapeutic proteins in yeast and filamentous fungi. Nature Biotechnology 22:1049-1414
33
17. Schmid FR (2004). Recombinant expresin systems in the pharmaceutical industry . Applied Microbiology Biotechnology 64:363-372
18. Siddavattam D, Raju ER y PE Merrick M. (2006). Overexpression of hydrolase in E. coli stimulates the syntesis of outer membrane porin OmpF. Pesticide Biochemistry and
Physiology 86:146-150
19. Figler RA Omote H, Nakamoto RK y Al Shawi M. K. (2000). Use of chemical chaperones in the yeast Sacharomyces cereviceae to enhance heterologous protein expresin.
Archives of Biochemistry and Biophysics 376: 34-46
20. Parekh S, Vinci AE y Strobel RJ. (2000) Improvement of microbial strains and fermentation processes. Applied Microbiology Biotechnology 54:287-301
21. Benjamin L. (2000) Genes VII. Oxford University Press. USA.
22. Alberts B, Johnson A, Lewis J, Raff M, Roberts K y P Walter (2002) Molecular biology of the cell. 4th. Edition Garland Science, New York. USA
23. Glick BR y Pasternack J (2002) Molecular Biotechnology.Principles and applications of recombinant DNA. 2nd Ed. ASM Press. USA. pp 683
24. Champness, S (2003) Molecular genetic of bacteria. 2 ed.. ASM Press, EUA,
25. Old RW y SB Primrose (1987) Principios de la manipulacin gentica. Editorial Acribia, Espaa
26. Revistas cientficas hemeroteca UAM-X. Se pueden consultar el lnea: http://amoxcalli.uam.mx/csd_uami/htm/revistas-frm.htm
26.1. Enzyme Microb. Technol.
26.2. Nature
26.3. Science
26.4. Biotechnology Letters
26.5. Applied and Environmental Microbiology
26.6. Microbiology
26.7. Trends in Biotechnology
26.8. Trends in Genetics
26.9. Trends in Microbiology

34
Complementaria
27. Strayer L, Berg JM y JL Tymoczko. (2003) Bioqumica,. 5
a
Ed. Reverte, Espaa.
28. Klug WS, Cummings MR. (1996) Essentials of Genetics.. Prentice Hall, Inc. 2nd Ed. USA. pp 560
29. Colwell RW (2002). Fullfilling the promise of Biotechnology. Biotechnology Advances 20, 215-228
30. Brown TA. (2003) Genomes 2
nd
.. Ed. Bios Scientific Publishers Ltd. UK. pp 472.
31. Edwards J.S. Ramakrishna R. Schilling C.H. Palsson B. (1999) Metabolic flux balance analysis. In Metabolic engineering. Sang Yup Lee, E.T.
Papoustakies. Ed Marcel Dekker, Inc. New York pp 13-58
32. Cooper, G (2002) The cell: a molecular approach. 2 ed.. ASM Press, EUA
33. Doelle, H.W., Mitchell, D.A. & C.E. Rolz (1992) Solid Substrate Cultivation. Elsevier Applied Sci. London
34. Snustad PD, Simmons MJ. (2000) Principles of Genetics. 2
nd
ed. John Wiley and Sons, Inc

MODALIDADES DE EVALUACIN Global


1. Evaluacin objetiva 40%
2. Participacin 20%
4. Trabajo de investigacin 40%

Para ser considerados todos los rubros, deber tener calificacin aprobatoria en cada uno de ellos.

La calificacin final ser el promedio de los tres rubros anteriores, siempre y cuando sean aprobatorias. Si alguna de ellas es inferior a 6, la calificacin final ser
NA.

MODALIDADES DE EVALUACIN DE RECUPERACION
Slo podr tener derecho a examen si el alumno ha aprobado el trabajo de investigacin. El examen terico se basar en los contenidos del mdulo