Ilder Alvarado

Resumen Va pentosas Fosfato y NADPH. [Harvey, unidad 13]

Va de las pentosas fosfato y NADPH
I. VISION GENERAL
La va de las pentosa fosfato (tambin llamada va de la hexosa monofosfato o va del
6-fosfogluconato) tiene lugar en el citosol de la clula. En el ciclo no se consume ni se
produce directamente ATP. La va proporciona una porcin importante del NADPH
del organismo, que funciona como un reductor bioqumico. Tambin produce ribosa
5-fosfato, necesaria para la biosntesis de nucletidos.
II. REACCIONES OXIDATIVAS IRREVERSIBLES
La porcin oxidativa de la va de las pentosas fosfato est constituida por tres
reacciones que llevan a la formacin de ribulosa 5-fosfato, CO2 y dos molculas de
NADPH por cada molcula de glucosa 6-fosfato oxidada. (fig. 13-2). Esta porcin de la
va es importante en el hgado, las glndulas mamarias, tejido adiposo, testculos,
ovarios, placenta, corteza suprarrenal, y tambin en los eritrocitos.
A. Deshidrogenacin de la glucosa 6-fosfato
La glucosa 6-fosfato deshidrogenasa (G6PD) cataliza una oxidacin irreversible de la
glucosa 6-fosfato a 6-fosfogluconolactona, una reaccin que es especfica para el
NADP+ como coenzima. La va de las pentosas fosfato est regulada principalmente
en la reaccin de la G6PD.
B. Formacin de la ribulosa 5-fosfato
La 6-fosfogluconolactona hidrolasa hidroliza la 6-fosfogluconolactona. La reaccin
es irreversible. La descarboxilacin oxidativa del producto, el 6-fosfogluconato, est
catalizada por la 6-fosfogluconolactona deshidrogenasa. Esta reaccin irreversible
produce un azcar pentosa fosfato (la ribulosa 5-fosfato), CO2 y NADPH.






Glucosa 6-P
6 fosfoglucona
lactona
6
fosfogluconato
Ribulosa 5P
Glu-6PD
6-fosfoglucono-
lactona hidrolasa
6 fofogluconato
deshidrogenasa
NADP
NADP
NADPH NADPH
H2O
CO2
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III. REACCIONES NO OXIDATIVAS REVERSIBLES
Estas reacciones reversibles permiten que la ribulosa 5-fosfato se convierta en ribosa
5-fosfato o en productos intermedios de la gluclisis (fructosa 6-fosfato y
gliceraldehido 3-fosfato). La transcetolasa transfiere unidades de 2 carbonos y la
transaldolasa transfiere unidades de 3 carbonos.
Reacciones no Oxidativas (reversibles)










(Figura 13-2)








Ribulosa 5P Ribosa 5P
Ribulosa 5 P
isomerasa
Isomerizacin
Ribulosa 5P xilulosa 5P
Ribulosa 5 P
epimerasa
epimerizacin
Ribosa 5P
xilulosa 5P
Sedoheptulosa 7P
Gliceraldehido 3P
Eritrosa 4P
Fructosa 6P
Transetolasa
Transaldolasa
Transetolasa
Fructosa 6P
Gliceraldehido 3P
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IV. USOS DEL NADPH
La coenzima NAP+ solo se diferencia del NAD+ por la presencia de un grupo fosfato en
una de las unidades de ribosa (fig. 13-4). Este cambio aparentemente pequeo en la
estructura permite al NADP+ interactuar con enzimas especficas de NADP+ que
tienen funciones nicas en la clula.
A. Biosntesis reductora
El NADPH puede considerarse una molcula de alta energa, muy parecida al NADH,
sin embargo, los electrones del NADPH estn destinados a la biosntesis reductora,
ms que a su transferencia al oxgeno, como es el caso del NADH. Entonces se dice que
parte de la energa de la glucosa 6-fosfato se conserva en el NADPH, una molcula
reductora que puede usarse como dador de electrones.
B. Reduccin del perxido de hidrgeno
El perxido de hidrgeno forma parte de una familia de especies reactivas de oxgeno
ROS que se forman a partir de una reduccin parcial de oxgeno molecular (fig. 13-5A)
Estos compuestos pueden causar graves daos qumicos al ADN, a las protenas y a los
lpidos insaturados y pueden inducir la muerte celular.
1. Enzimas que catalizan las reacciones antioxidantes
El Glutatin reducido presente en la mayora de las clulas, puede bioinactivar
qumicamente al perxido de hidrogeno (fig. 13-5B), se forma el glutatin oxidado el
cual ya no tiene propiedades protectoras y posteriormente la clula lo regenera a
glutatin reducido por medio de la glutatin reductasa, utilizando NADPH como
fuente de equivalentes reductores. Por lo tanto, el NADPH proporciona
indirectamente electrones para la reduccin del perxido de hidrgeno. (fig. 13-6).
2. Compuestos qumicos antioxidantes
Una serie de agentes reductores intracelulares, como el ascorbato, la vitamina E, y el
B-Caroteno, son capaces de reducir y, por consiguiente, bioinactivar productor
intermedios del oxgeno en el laboratorio.
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C. Sistema monooxigenasa del citocromo P450
Las monooxigenasas (oxidasas de funcin mixta) incorporan un tomo de oxgeno
molecular en un sustrato (creando un grupo hidroxilo) y reducen el otro tomo a
agua. En este sistema el NADPH proporciona los equivalentes reductores necesarios
para esta serie de reacciones (fig. 13-7). Este sistema realiza diferentes funciones en
dos lugares distintos de la clula.
1. Sistema mitocondrial:
La funcin del sistema monooxigenasa del citocromo P450 mitocondrial
relacionado con la membrana mitocondrial interna es la biosntesis de
hormonas esteroideas.
2. Sistema microsmico:
Una funcin extremadamente importante del sistema monooxigenasa del
citocromo P450 microsmico que se encuentra asociado con las membranas de
retculo endoplsmico liso es la bioinactivacin de compuestos extraos
(xenobiticos), entre los que se encuentran numerosos frmacos y diversos
txicos. Este sistema puede hidroxilar estas toxinas, una vez ms usando el
NADPH como fuente de equivalentes reductores.
D. Fagocitosis leucocitaria
La fagocitosis es la ingestin de microorganismos, partculas extraas y residuos
celulares mediante endocitosis mediada por receptor que realizan clulas como los
neutrfilos y los macrfagos que estn armados con mecanismos bactericidas
dependientes e independientes de oxgeno. La fagocitosis leucocitaria es un
mecanismo importante de defensa del organismo, en particular en las infecciones
bacterianas
1. Mecanismos independientes del oxgeno:
Los mecanismos independientes del oxgeno aprovechan los cambios de pH en los
fagolisosomas y las enzimas lisosmicas para destruir patgenos.
2. Sistemas dependientes del oxgeno
Los mecanismos dependientes de oxgeno incluyen las enzimas NADPH oxidasa y
mieloperoxidasa (MPO), que trabajan juntas en la destruccin de bacterias (fig. 13-8).
En general, el sistema de la MPO es el ms potente de los mecanismos bactericidas.
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Destruccin del microorganismo
1. La bacteria invasora es reconocida por el sistema inmunitario y atacada por los
anticuerpos que la unen a un receptor en una clula fagoctica.
2. Tras la internalizacin del microorganismo, la NAPH oxidasa se activa y reduce
oxgeno molecular del tejido circundante en superxido (O2). El rpido
consumo de oxgeno molecular que acompaa a la formacin de superxido se
conoce como: Estallido respiratorio.
3. A continuacin, el superxido se convierte en perxido de hidrgeno (una
ROS), ya sea de manera espontnea o catalizada por superxido dismutasa
(SOD).
4. El perxido ms iones cloruro se convierten en cido hipocloroso (HOCl), que
mata las bacterias.
5. El perxido tambin puede ser reducido parcialmente al radical hidroxilo (OH),
una ROS, o reducirse completamente a agua por accin de catalasa o glutatin
peroxidasa.

E. Sntesis del xido ntrico (NO)
El NO es el factor relajante derivado del endotelio, que causa vasodilatacin por
relajacin del msculo liso vascular. El NO tambin acta como un neurotransmisor,
evita la agregacin plaquetaria y desempea un papen esencial en la funcin de los
macrfagos.
1. Sntesis del NO
La arginina, el O2 y el NADPH son sustratos de la NO sintasa citoslica (fig. 13-9). El
mononucletido de flavina (FMN), el FAD, el hemo y la tetrahidrobiopterina son
coenzimas de la enzima, y el NO y la citrulina son productos de la reaccin. Se han
identificado tres NO sintasas (NOS). Dos son constitutivas y las enzimas dependientes
de Ca
2+
-Calmodulina. Se encuentran principalmente en el endotelio (NOSe) y en el
tejido neuronal (NOSn) y producen constantemente niveles bajos de NO. Una enzima
inducible, independiente del Ca
2+
(NOSi) puede expresarse en muchas clulas, entre
ellas los hepatocitos, los macrfagos, los monocitos y los neutrfilos.
2. Acciones del NO en el endotelio vascular
El NO es un importante mediador en el control del tono del msculo liso vascular. El
NO es sintetizado por la NOSe en las clulas endoteliales y difunde al msculo liso
vascular, donde activa la forma citoslica de la guanilato ciclasa para formar GMPc. El
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aumento resultante del GMPc causa la activacin de la proteincinasa G, que fosforila
los canales de Ca
2+
y provoca una disminucin de la entrada de Ca2+ de las clulas del
msculo liso. Esto reduce la activacin de la calcio-calmodulina disminuyendo la
contraccin del msculo liso y favoreciendo la relajacin.

3. Funcin del NO en la mediacin de la actividad bactericida de los
macrfagos
En los macrfagos, la actividad de la NOSi es normalmente baja. Los macrfagos
activados forman radicales superxido, que se combinan con el NO para formar
productos intermedios que se descomponen y forman el radical OH con gran
capacidad bactericida.
4. Otras funciones del NO
El NO es un potente inhibidor de la agregacin plaquetaria (al activar la va del GMPc).
Tambin est caracterizado como neurotransmisor en el cerebro.

V. CARENCIA DE GLUCOSA 6-FOSFATO DESHIDROGENASA
La carencia de glucosa 6-fosfato deshidrogenasa (G6PD) es una enfermedad
hereditaria caracterizada por la anemia hemoltica causada por la incapacidad de
bioinactivacin de los agentes oxidantes. La carencia de G6PD est ligada al
cromosoma X y constituye, de hecho, una familia de deficiencias causadas por ms de
400 mutaciones diferentes en el gen que codifica la G6PD. La esperanza de vida de las
personas con una forma grave de carencia de G6PD se acorta en cierto modo como
consecuencia d las complicaciones que surgen de la hemlisis crnica.

A. Funcin de la G6PD en los eritrocitos
La disminucin de actividad de la G6PD deteriora la capacidad de la clula para
formar el NADPH que es esencial para el mantenimiento de las reservas de glutatin
reducido. Esto provoca una disminucin de la capacidad de bioinactivacin de los
radicales libres y los perxidos formados dentro de la clula. (fig. 13-10). El glutatin
tambin ayuda a mantener el estado reducido de los grupos sulfhidrilo de las
protenas, entre ellas la hemoglobina. La oxidacin de esos grupos sulfhidrilo llevan a
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la formacin de protenas desnaturalizadas que forman masas insolubles (llamadas
cuerpos de Heinz) que se unen a las membranas de los glbulos rojos.
Aunque la carencia de G6PD se presenta en todas las clulas del individuo afecto, es
ms grave en los eritrocitos, donde la va de las pentosas fosfato proporciona el ncio
medio para generar NADPH.

B. Factores desencadenantes en la carencia de G6PD
1. Frmacos oxidantes: los frmacos habitualmente empleados que producen
anemia hemoltica en pacientes con deficiencia de G6PD se recuerdan mejor con la
regla nemotcnica AAA: antibiticos, antipaldicos y antipirticos.
2. Favismo: Es el efecto hemoltico de la ingestin de habas, no se observa en todos
los individuos con dficit de G6PD, pero todos los pacientes con favismo tienen dficit
de G6PD.
3. Infeccin: la infeccin es el factor ms comn que desencadena la hemlisis en
la carencia de G6PD. La respuesta inflamatoria a la infeccin da como resultado la
generacin de radicales libres en los macrfagos, que pueden difundir al interior de
los glbulos rojos y causar dao oxidativo.
C. Propiedades de las variantes de la enzima
Casi todas las variantes de la G6PD estn causadas por mutaciones puntuales en el gen
de la G6PD. Algunas mutaciones no alteran la estructura del sitio activo y por lo tanto
no afectan a la actividad enzimtica, ms sin embargo, muchas enzimas mutantes
muestran propiedades cinticas alteradas. Las variantes de la enzima pueden mostrar
una menor actividad cataltica, una menor estabilidad o una alteracin en su afinidad
de unin al NADP+, NADPH o la glucosa 6-fosfato. La gravedad de esta enfermedad
suele mostrar relacin con la cantidad de actividad enzimtica residual en los glbulos
rojos de los pacientes, por esta razn las variantes pueden clasificarse como se
muestra en la fig. 13-12.
Las mutaciones de clase I (poco frecuentes) son las ms graves y estn
asociadas a la anemia no esferoctica crnica.
La G6PD mediterrnea es el prototipo de una carencia ms grave (clase II)
La G6PD A- es el prototipo de la forma moderada (clase III) de la enfermedad.
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D. Biologa molecular de la G6PD
La clonacin del gen de la G6PD y la secuenciacin de su ADN, permitieron identificar
mutaciones que causan el dficit de G6PD. La mayora de las mutaciones que dan por
resultado deficiencia enzimtica son mutaciones puntuales de un aminocido en la
regin codificadora. No se han identificado grandes deleciones ni mutaciones del
marco de lectura, lo que sugiere que la ausencia completa de actividad de la G6PD es
probablemente letal.