COLORIMETRIA E

ESPECTROFOTOMETRIA
1. Consideraes Gerais
Anlise colorimtrica o nome
que se d anlise da variao da cor
de um sistema, devido modificao
da concentrao de um certo componente presente na mesma. Esta tcnica visa determinar a
concentrao de uma substncia pela medida da absoro relativa de luz, tomando como
referncia a absoro da substncia numa concentrao conhecida. ode!se utilizar uma fonte
natural e"ou artificial de luz branca # temos a colorimetria visual # ou uma clula fotoeltrica #
colorimetria fotoeltrica. $o se%undo caso, temos a eliminao, em %rande parte, dos erros
devidos s caracter&sticas pessoais de cada observador.
$a anlise espectrofotomtrica a fonte de radiao emite at a re%io ultravioleta do
espectro. 'essa radiao selecionam!se comprimentos de onda definidos que constituem
bandas, com lar%ura menor que ( nm. )parelhos espec&ficos para esta anlise so chamados
de espectrofotmetros.
) principal vanta%em dos mtodos colorimtricos e espectrofotomtricos a de
proporcionarem um meio simples para determinar quantidades diminutas de substncias. *
limite superior dos mtodos colorimtricos , em %eral, a determinao dos constituintes em
quantidades relativas inferiores a ( ou +,.
)s ondas eletroma%nticas so usualmente descritas em termos de-
! comprimento de onda distncia entre picos sucessivos, em cm.
! n/mero de onda
~

n/mero de ondas por cm.

! freq0ncia n/mero de ondas por se%undo.
)s trs %randezas esto relacionadas como se%ue-
luz da velocidade
onda de nmero
onda de o compriment
1 freqncia
= =
c
1
~

= =
)s unidades em uso comum so-
! (
ngstrm A
0
1 (
0
A
1 (2
!(2
m 1 (2
!3
cm
! ( nan4metro 1 ( nm 1 (2
!5
m 1 (2
0
A
1 (2
!6
cm
! ( micr4metro 1 ( m 1 (2
7

0
A
1 (2
!7
cm
! velocidade da luz 1 c 1 +,55658 . (2
3
m . s
!(
! n/mero de onda 1
~

1 (" ondas por cm

! freq0ncia 1 c" 8 . (2
(2
" ondas por se%undo
2.Teoria da Espectrofotometria e da Colorimetria
9uando a luz :monocromtica ou hetero%nea; incide sobre um meio homo%neo, uma
parcela da luz incidente refletida, uma outra parcela absorvida e o restante transmitido.
<e a intensidade da radiao da luz incidente for representada por I
0
, e a luz absorvida por I
a
, a
da transmitida por I
t
, e a da refletida por I
r
, ento-
I
0
1 I
a
= I
t
= I
r
$uma interface ar!vidro, sempre presente quando se usam clulas de vidro, pode!se
admitir que cerca de 7, da luz incidente se>am refletidos. ) parcela I
r
, usualmente eliminada
%raas ao uso de um controle, como uma clula de comparao, e ento a e?presso anterior
fica-
I
0
1 I
a
= I
t
:(;
3. ei de !eer"am#ert
* crdito sobre a investi%ao da absoro da luz em funo da espessura de um meio
atribu&do, freq0entemente, a @ambert. Aeer, posteriormente, efetuou e?perincias
semelhantes com soluBes de concentrao diferentes. )s duas leis separadas que re%em a
absoro so conhecidas como lei de @ambert e lei de Aeer. $a forma combinada so
conhecidas como a Lei de Beer-Lambert.
ei de am#ert- quando a luz monocromtica passa atravs de um meio transparente, a
ta?a de diminuio da intensidade com a espessura do meio proporcional intensidade
da luz. Csto equivalente a afirmar que a intensidade da luz emitida diminui
e?ponencialmente com a espessura do meio absorvedor, ou que qualquer camada do meio
com uma certa espessura absorve sempre a mesma frao da luz incidente sobre ela.
odemos e?primir a lei pela equao diferencial-
kI
dl
dI
=
:+;
onde I a intensidade da luz incidente de comprimento de onda . l a espessura do meio e k
um fator de proporcionalidade. Cnte%rando a equao :+; e fazendo I = I
0
quando l 1 2, temos-
kl
I
I
t
=
0
ln
ou, em outros termos,
kl
t
e I I

= .
0
:8;
onde I
0
a intensidade da luz incidente sobre o meio absorvedor de espessura l, I
t
a
intensidade da luz transmitida e k uma constante que depende do comprimento de onda da
luz e da natureza do meio. Donvertendo a e?presso para a base (2 na e?ponencial,
Kl kl
t
I I I

= = 10 . 10 .
0
4343 , 0
0
:7;
onde K 1 k"+,82+E e usualmente denominado o coeficiente de a#sor$o. * coeficiente de
absoro e?prime!se, em %eral, como o inverso da espessura :l cm; necessria para reduzir a
luz a ("(2 da sua intensidade.
) razo I/ I
0
a frao da luz incidente que transmitida por uma espessura l do meio
chamada a transmit%ncia. * inverso desta razo I/I
0
a opacidade do meio. a a#sor#%ncia
A do meio :denominada no passado de densidade &tica D ou e'tin$o E; dada por-
t
I
I
A
0
log =
:F;
)ssim, um meio com a absorbncia (, num dado comprimento de onda, transmite (2,
da luz incidente que tenha o comprimento de onda a que se refere o parmetro.
ei de !eer- em anlise quantitativa, estamos interessados em soluo. Aeer estudou o
efeito da concentrao do constituinte corado, numa soluo, sobre a transmisso ou a
absoro da luz e descobriu a mesma relao entre a transmisso e a concentrao que
@ambert havia descoberto entre a transmisso e a , a intensidade de um fei?e de luz
monocromtica diminui e?ponencialmente com a concentrao da substncia absorvedora. Csto
pode escrever!se sob as formas-
c K c k c k
t
I I e I I
'
0
' 4343 , 0
0
'
0
10 . 10 . .

= = =
onde c a concentrao e k' e K' so constantes. Dombinando!se as equaBes :7; e :F; temos-
acl
t
I I

= 10 .
0
:6;
ou
log I
0
/I = acl :3;
Esta a equao fundamental da colorimetria e da espectrofotometria e muitas vezes
chamada de lei de !eer"am#ert. * valor de a depende das unidades de concentrao. <e c
for e?pressa em mol . @
!(
e l em cent&metros, a recebe o s&mbolo e denomina!se o coeficiente
de a#sor$o molar ou absortividade molar.
9uando o peso molecular de uma substncia no for conhecido, no poss&vel calcular
o coeficiente de absoro molar. nesse caso comum usar a unidade de concentrao
adotada como um &ndice superior e a unidade de comprimento como um &ndice inferior. )ssim-
30 nm 325
% 1
1
=
cm
E
si%nifica que a substncia em questo, no comprimento de onda de 8+F nm, com um
comprimento de camada de soluo de ( cm e com a concentrao de ( , tem log I
0
/I = 82.
E?iste uma relao entre a absorbncia A, a transmitncia T e o coeficiente de absoro
molar-
T
T I
I
cl A
t
log
1
log log
0
= = = =
(. Aplica$o da lei de !eer"am#ert
Donsideremos o caso de duas soluBes de substncia corada com as concentraBes c
1
e c
2
. )s duas so colocadas num aparelho no qual as espessuras das camadas podem ser
alteradas e medidas com facilidade e que permite tambm a comparao entre a luz
transmitida pelas soluBes. 9uando as duas camadas transmitem a luz com a mesma
intensidade-
2 2
2
1 1
10 . 10 .
0 0
l c
t
l c
t
I I I I

= = =
:(2;
$essas e?pressBes, l
1
e l
2
so os comprimentos das colunas das soluBes com as
concentraBes c
1
e c
2
respectivamente, quando o sistema estiver oticamente equilibrado. 'a&,
nessas circunstncias, e com a validade da lei de Aeer-
l
1
c
1
= l
2
c
2
:((;
Gm color&metro pode ser usado, portanto, com uma dupla capacidade-
a; investi%ar a validade da lei de Aeer pela variao de c
1
e c
2
e observar se a i%ualdade :((;
se verifica.
b; determinar a concentrao desconhecida c
2
de uma soluo corante mediante a
comparao com uma soluo de concentrao conhecida c
1
.
'eve!se acentuar que a equao :((; sH verdadeira se a lei de Aeer for obedecida
sobre o intervalo de concentrao utilizado e se o instrumento no tiver defeitos Hticos.
9uando se usa um espectrofot4metro desnecessrio fazer a comparao com
soluBes de concentraBes conhecidas. $este instrumento, a intensidade da luz transmitida, ou
melhor, a razo I
t
/I
0
:a transmitncia; determinada diretamente numa espessura l. Iediante a
variao de l e de c a validade da lei de Aeer!@ambert, equao :5;, pode ser verificada e o
valor de pode ser estimado. 9uando se conhece este valor, a concentrao c
x
de uma
soluo desconhecida pode ser calculada pela fHrmula-
l
I
I
x
t
c

0
log
=
J preciso chamar a ateno para a dependncia entre o coeficiente de absoro molar
e o comprimento de onda da luz incidente, a temperatura e o solvente da soluo. Em %eral
mais conveniente trabalhar com luz de comprimento de onda prH?imo daquele em que a
soluo e?ibe uma absoro seletiva m?ima :ou uma transmitncia seletiva m&nima;.
conse%ue!se assim a sensibilidade maior poss&vel.
$o caso de clulas emparelhadas :isto , com l constante;, a lei de Aeer!@ambert pode
ser escrita como-
A c
T
c
I
I
c
t
o

1
log
log
)ssim, plotando!se A :ou lo% ("T; nas ordenadas contra a concentrao nas abscissas,
obtm!se uma reta que passa pelo ponto c 1 2, A 1 2 :T 1 (22,;. Esta reta de calibrao pode
ento ser usada para determinar as concentraBes desconhecidas das soluBes de um mesmo
material depois das medidas das absorbncias.
Desvios da lei de Beer # Em %eral, a lei de Aeer vale sobre um intervalo dilatado da
concentrao quando a estrutura do &on corado, ou do no!eletrHlito corado, no estado
dissolvido, no se altera com a concentrao. equenas quantidades de eletrHlitos, que no
rea%em quimicamente com os componentes corados, no afetam, nos casos correntes, a
absoro de luz. %randes quantidades dos eletrHlitos podem provocar um deslocamento do
m?imo de absoro e tambm alterar o valor do coeficiente de e?tino. Encontram!se
discrepncias quando o soluto corado sofre ionizao, ou dissociao, ou associao em
soluo, pois a natureza das espcies em soluo varia com a concentrao. ) lei no vale
quando o soluto corado forma comple?os, cu>a composio depende da concentrao. odem
tambm ocorrer discrepncias quando no se usa luz monocromtica. * comportamento de
uma substncia pode ser sempre ensaiado pelo %rfico de lo% I
o
/I
t
, ou lo% ("T, contra a
concentrao. a lei fica confirmada quando uma reta passa pelos pontos e?perimentais e pela
ori%em.
$o caso de soluBes que no obedecem lei de Aeer, mais conveniente preparar uma
curva de calibrao mediante uma srie de padrBes com as concentraBes conhecidas. )s
leituras instrumentais so plotadas em ordenadas contra as concentraBes, por e?emplo em
mili%ramas por (22 m@ ou por (222 m@, nas abscissas. $o caso de trabalho com maior
preciso, cada curva de calibrao dever cobrir o intervalo de diluio que possivelmente ser
encontrado nas mediBes da anlise das amostras.
). Classifica$o dos mtodos de medida ou de compara$o da *cor+
*s mtodos aqui relacionados podem depender ou no da viso humana.
Evidentemente que os mtodos visuais no possuem a preciso e?i%ida nos dias de ho>e, mas
ainda podem ser usados caso a utilizao de equipamentos se>a muito dispendiosa.
); Itodo da srie padro- ) soluo!problema, num tubo de $essler, dilu&da a um volume
definido, homo%eneizada, e compara!se a sua cor com uma seq0ncia de padrBes preparados
da mesma forma que a amostra. ) e?atido do mtodo depender das concentraBes da
seq0ncia de padrBes e o erro provvel de 8,, mas pode che%ar a 3,.
A; Itodo da duplicao- coloca!se num tubo de $essler um volume conhecido da soluo!
problema :' m@; e acrescenta!se um volume medido :, m@; de um rea%ente apropriado, de
modo que ocorra o desenvolvimento de uma cor. 'epois, coloca!se %ua destilada :' m@; num
se%undo tubo de $essler, >untamente com , m@ do rea%ente. )crescenta!se a este tubo uma
soluo padro da substncia analisada, mediante uma microbureta, at que ha>a o
desenvolvimento de uma cor e?atamente i%ual cor desenvolvida no primeiro tubo. pode!se
ento calcular a concentrao da soluo!problema.
D; Itodo da diluio- a amostra e a soluo padro so colocadas em tubos de vidro com o
mesmo dimetro e observadas horizontalmente atravs da coluna l&quida. ) soluo mais
concentrada dilu&da at que as duas cores se>am idnticas e com a mesma intensidade
quando so observadas da mesma espessura da soluo.
'; Itodo do balanceamento- a comparao se faz em dois tubos, e a altura do l&quido em um
deles a>ustada de modo que, quando os dois tubos so observados verticalmente, atravs
das soluBes, a intensidade da cor em ambos a mesma. ) concentrao em um dos tubos
sendo conhecida, a concentrao no outro tubo pode ser calculada a partir dos respectivos
comprimentos das duas colunas de l&quido, mediante equao-
c
1
l
1
= c
2
l
2
E; Itodo do fot4metro fotoeltrico- neste mtodo, a viso humana fica substitu&da por uma
clula fotoeltrica apropriada. esta clula empre%ada para dar uma medida direta da
intensidade da luz, e assim, da absoro. *s instrumentos que incorporam clulas fotoeltricas
medem a absoro da luz e no a cor da substncia. por isto, a denominao Kcolor&metro
fotoeltricoL uma denominao err4nea. Gma denominao melhor seria a de comparador
fotoeltrico, ou fot4metro fotoeltrico ou, melhor ainda, a#sorcimetro fotoeltrico.
M; Itodo espectrofotomtrico- o mtodo mais e?ato para determinar a concentrao de
substncias em soluo, mas os instrumentos so, sem d/vida, mais dispendiosos. Gm
espectrofot4metro pode ser encarado como um fot4metro fotoeltrico de filtro que permite o
uso de fai?as de luz bastante monocromticas e que podem variar continuamente. )s partes
essenciais de um espectrofot4metro so- :(; uma fonte de ener%ia radiante. :+; um
monocromador, ou se>a, um dispositivo que isola um fei?e de luz monocromtica, ou, mais
e?atamente, uma fai?a estreita de radiao da luz proveniente da fonte. :8; clulas de vidro, ou
de quartzo, para o solvente e a soluo problema. e :7; dispositivo para receber ou medir o
fei?e, ou os fei?es, de ener%ia radiante que passam pelo solvente e pela soluo.