EXPERIMENTO DEL TUBO EN FORMA DE "U" llev al descubrimiento de la transduccin.

En la parte
inferior del tubo haba un filtro. En el lado izquierdo del filtro haba una cepa de la bacteria Salmonella
typhimurium; en el lado derecho, otra cepa. La cepa a la derecha albergaba un virus latente (pequeos

os virus primero hicieron su existencia
conocida especialmente como dimi-
nutos grmenes que causan enferme-
dad en animales y plantas. Luego se descubri
que un virus puede multiplicarse solamente en
el interior de la clula viva; los nuevos virus
son liberados, y la clula muere. Durante el
tiempo que est adentro, el virus desaparece en
el sistema bioqumico de su hospedero, de
modo que sus actividades all hayan sido en
gran parte ocultas. Poco a poco, sin embargo,
la historia de vida del virus est siendo recons-
truida. Mientras las piezas caen en lugar, el
virus est asumiendo una nueva identidad.
Desde el punto de vista biolgico el germen se
ha convertido en un valioso aliado en la explo-
racin de los procesos de la vida de la clula.
Los genetistas han encontrado virus parti-
cularmente tiles como medio para conseguir
el mecanismo de la herencia. El virus tpico es
un trozo del material gentico encapsulado en
una capa de protena. Como tal, puede afectar a
la gentica de su hospedero en formas impor-
tantes. Esto primero fue observada en el caso
de los virus que infectan bacterias. A veces
estos virus causan una infeccin latente; no
matan a su hospedero, pero se convierten en
una parte del aparato gentico. El virus latente
que acta como un trozo del material gentico
de las bacterias e induce nuevas caractersticas
en su hospedero. En este papel, puede reprodu-
cirse a lo largo de muchas generaciones con los
genes propios de las bacterias antes de que rea-
nude su existencia como virus separado. Es as
como una infeccin latente del virus al bacilo
normalmente inofensivo de la difteria, hacer su
toxina mortal.
Este artculo es concerniente con un descu-
brimiento que implica al virus an ms profun-
damente en los procesos genticos de su hos-
pedero. Ahora parece que un virus bacteriano
puede llevar los genes propios de las bacterias
de clula a clula. Como un portador de la
enfermedad, infecta una bacteria con el mate-
rial hereditario escogido de otra.
Esta transduccin de la herencia bacte-
riana fue descubierta por accidente y la buena
suerte en una investigacin, que al principio no
se refera a los virus en absoluto. El descubri-
miento ocurri durante un intento de inducir el
cruce sexual en las bacterias que causan una
enfermedad en los ratones que se asemeja a la
fiebre tifoidea en el hombre. El cruce es un
proceso raro en bacterias. Comnmente una
bacteria simplemente se multiplica dividin-
dose en dos clulas, cada cual, generalmente,
con la misma constitucin gentica que la otra.
En 1946, sin embargo, Joshua Lederberg y
Edward L. Tatum (entonces en la Universidad
L
8
Transduccin en bacterias

Por Norton D. Zinder
Noviembre 1958

Un virus puede transferir material gentico y, por ende,
los rasgos hereditarios, a partir de una bacteria a otra. El
fenmeno arroja luz sobre el comportamiento de los virus y
el mecanismo de la herencia.



cuadrados negros en el cromosoma esquematizado). Ocasionalmente una de estas bacterias lanz virus vivos (objetos en forma de renacuajos) que pasaron a travs del
filtro (primer dibujo). En la cepa a la izquierda los virus se multiplicaron rpidamente (segundo dibujo). Algunos de los virus (coloreados) llevaron trozos del material
gentico de la cepa de la parte lateral izquierda a travs del filtro, para convertirse en parte de material gentico de la cepa de la derecha (tercer dibujo).
de Yale) encontraron que una bacteria en una
cepa del bacilo Escherichia coli podra cruzar-
se bajo ciertas condiciones con una bacteria en
otra cepa de la misma especie, y por tanto, dar
lugar a bacterias con algunas caractersticas de
ambas cepas. No pareca haber razn por que
solamente entre bacterias E. coli exista la
capacidad de cruzarse, entonces en 1949
Lederberg y yo (entonces en la universidad de
Wisconsin) comenzamos a inducir el cruce en
otras especies.
ara nuestro pri mer experi mento
elegi mos dos cepas de la bacte-
ria ti foidea del ratn, Salmonella
typhimurium. Cada cepa careca de la capa-
cidad de sintetizar un aminocido particular
necesario para su crecimiento, pero poda sin-
tetizar el aminocido que la otra cepa no poda
producir. Si el cruce se produca, alguno de los
descendientes debera poder sintetizar ambos
factores; podran entonces ser aislados y trans-
feridos a un medio con agar, que tampoco con-
tiene los dos aminocidos. En tal medio, las
cepas parentales no podran proliferar, pero las
nuevas clulas formaran colonias visibles en
pocas horas. En consecuencia, mezclamos las
clulas de las dos cepas parentales y las exten-
dimos en el agar selectivo. Colonias del nuevo
tipo de clulas aparecieron; aparentemente he-
mos tenido xito en el cruce de Salmonella.
Para estar seguros que las nuevas clulas
eran el producto del cruce, intentamos aparear
cepas que se distinguen unas de otras por ms
de un rasgo. La descendencia del apareamiento
bacteriano puede combinar genes de sus dos
padres en cualquier proporcin. Podramos,
por lo tanto, esperar encontrar una variedad de
nuevas clulas, algunas ms parecidas a un
padre y algunas ms parecidas al otro. Estba-
mos sorprendidos de encontrar la manera que
la descendencia de estos acoplamientos se ase-
mej totalmente a uno de los padres, a excep-
cin del rasgo por el que fueron aisladas y que
fue suministrado por el otro progenitor. La
transferencia de slo un rasgo a la vez no era
compatible con la idea de un proceso de aco-
plamiento. Adems, una de las dos cepas actu-
aba siempre como donante y el otro como rece-
ptor, de los rasgos genticos.
Consideramos en primer lugar la
alternativa simple: el cambio era meramente
una mutacin al azar. Sin embargo, esta posibi-
lidad tuvo que ser rechazada, puesto que el
cambio apareci mucho ms frecuentemente
en los cultivos mixtos de las cepas parentales
que en los cultivos no mixtos. Ni podra ser un
aumento en la tasa de mutacin en los cultivos
mixtos, porque el nuevo rasgo de la cepa
receptora fue relacionado siempre con los
rasgos de la cepa donante. Nosotros conclui-
mos que habamos tropezado con un caso de
transformacin bacteriana. En este proceso
los rasgos genticos de una cepa de bacteria
son transformados por contacto con el material
gentico de otra cepa. No es necesario el con-
tacto entre las clulas. En casos conocidos de
transformacin, de hecho, las clulas de la
cepa donante estn muertas, y su material
gentico el cido desoxirribonucleico, o
ADN, contenido en sus cromosomas es libe-
rado en el medio de cultivo. La cepa receptora
incorpora algo de este ADN libre en sus
cromosomas, y adquiere as rasgos de la cepa
muerta [vea bacteria transformada, por
P
PARTICULAS DE VIRUS usadas para transduccin de Salmonella aumentada unos 60,000 dimetros en esta
microfotografa electrnica hecha por Keith R. Porter del Instituto Rockefeller.
Rolling D. Hotchkiss y Esther A. Weiss,
comenzando en la pgina 42]. Aunque estaba
bien establecido en ciertas especies de bacte-
rias, la transformacin nunca se haba obser-
vado en Salmonella.
Para probar la hiptesis de la transforma-
cin, cultivamos nuestras dos cepas de Salmo-
nella en un tubo en forma de "U" especial-
mente construido. Una cepa fue cultivada en
un brazo del tubo; la otra cepa, en el otro
brazo. Entre los dos brazos haba un filtro que
evit el apareamiento por contacto entre las
dos cepas [ver ilustracin en pginas 78 y 79].
Para promover el intercambio de sustancias
secretadas por las dos cepas, vaciamos cuida-
dosamente el caldo de cultivo desde un lado
del tubo hacia el otro. Cuando las dos cepas
fueron transferidas a un medio selectivo, algu-
nos descendientes de la cepa receptora mostra-
ron un nuevo rasgo tomado de la cepa donante.
La transformacin pareca ser la respuesta.
Nosotros luego realizamos un experimento
ms convencional de transformacin, tratando
el cultivo receptor con el ADN puro extrado
de la cepa donante. Esto, inesperadamente, no
tuvo ningn efecto en absoluto. Con nuestra
hiptesis ahora destruida, volvimos al tubo en
forma de "U". Esta vez, con la idea de eliminar
la posibilidad de la transformacin, agregamos
una enzima que destruye el ADN libre. A pesar
de la presencia de la enzima, los cambios gen-
ticos aparecieron como antes. Estuvimos obli-
gados a descartar la transformacin, adems
del apareamiento, y a buscar otra explicacin.
u pudo haber ocurrido en el tubo
en forma de "U"? La bacteria
donante pas su material gentico al
receptor en pedazos lo suficientemente peque-
os para pasar a travs del filtro, pero los peda-
zos no fueron daados por la enzima de
destruccin de ADN. Ambos progenitores
tuvieron que estar presentes para que la trans-
ferencia ocurriera, pero no tuvieron que estar
en contacto directo. Nos preguntbamos si el
donante quizs emiti algo distinto al ADN
que podra afectar a la herencia del receptor.
Para probar esta idea, agregamos caldo filtrado
de un cultivo de clulas donantes a un cultivo
de clulas receptoras. No resultaron cambios
hereditarios. Sin embargo, cuando cultivamos
las dos cepas juntas y filtramos el caldo, este
lquido produjo cambios en una cepa fresca de
clulas receptoras. En este punto nos dimos
cuenta que haba dos pasos en el proceso:
primero, el receptor tuvo que producir algo
para estimular al donante, y luego el donante
podra enviar el material gentico activo de
vuelta al receptor.
Ahora hemos hecho un nuevo descubri-
miento: una vez que un cultivo de clulas
donantes fue estimulada por la exposicin a los
fluidos de la cepa receptora, el fluido de este
cultivo puede estimular otras clulas donantes.
El material estimulante fue reproducido de
alguna manera en las bacterias donante. Esta
capacidad de reproduccin nos hizo pensar en
virus bacterianos. Los virus son lo suficiente-
mente pequeos para pasar con facilidad a
travs del filtro en el tubo en U, y la capa
proteica del virus protege su ADN de la enzi-
ma que destruye el ADN libre.
Los virus bacterianos ms conocidos son
tan destructivos, que un cultivo infectado
prcticamente desaparece ante sus ojos. Obvia-
mente, habramos notado un virus de este tipo
inmediatamente. El moderado virus que
causa una infeccin latente es ms difcil de
detectar. Matando slo una pequea fraccin
de las clulas, una infeccin latente puede
cambiar escasamente la densidad de un cultivo.
Pero ocasionalmente uno de los virus latentes
recupera su forma original, se multiplica en la
clula y sale precipitadamente para invadir
otros. Como resultado, un pequeo virus libre
siempre est presente en un cultivo de bacte-
rias, albergando una infeccin latente.
Efectivamente, cuando nosotros buscamos
virus en los cultivos de Salmonella donante
que haban sido tratados con fluidos
estimulantes, encontramos un gran nmero de
partculas del virus. Experimentos ms a fondo
indicaron que la actividad del virus y la activi-
dad estimulante van de la mano y confirm el
hecho de que el virus era el agente estimulante.
No era ms que un paso a la teora que los
virus tambin actan como transportadores del
material gentico desde el donante hasta las
bacterias receptoras. Dudamos en tomar este
paso, porque la teora implica demasiado.
Sugiere, por ejemplo, que los virus de enfer-
medades humanas puedan transportar el
material gentico desde una clula husped a
otra. Sin embargo, ninguna otra teora podra
Q

LA TRANDUCCIN requiere en primer lugar (A) un cultivo de clulas donantes infectadas con el virus. El lquido filtrado de este cultivo contiene virus (B),
algunos de los cuales llevan el material gentico de las bacterias (coloreadas). Otra cepa de bacterias pueden infectarse con este virus (C). Luego algunas de ellas
(D) producen ms virus (arriba), algunos adquirir genes de la bacteria donante (cuadrado de color), algunos adquieren genes de los virus latentes (cuadrado negro),
y algunos reciben ambos. De vez en cuando una clula bacteriana adquiere un gen, pero no lo incorpora en su cromosoma (parte superior derecha); el gen no es
duplicado cuando las clula se divide, de modo que slo una clula hija lo recibe.





TRES MTODOS de transferencia de material gentico de una clula bacteriana a otra se conocen. En la
transformacin (A) las clulas se rompen para liberar el material gentico (coloreado), una pequeo propor-
cin de los cuales pueden entrar en otra clula. En la transduccin (B) los virus que pueden infectar a las
clulas llevan el material gentico de una a otra. En el cruce (C) el material se transmite por contacto directo
de las clulas, y una mayor cantidad puede ser transferida simultneamente
explicar la evidencia concluyente de que el
virus bacteriano y el transporte del material
gentico del donante a las bacterias receptoras
fueran idnticos en caractersticas fsicas,
qumicas y biolgicas.
El misterio de Salmonella ahora sera fcil-
mente resuelto. Una de nuestras dos cepas (el
receptor) llevaba un virus moderado como una
infeccin latente. La segunda cepa (el donante)
era especialmente susceptible a este virus.
Cuando las dos fueron mezcladas, un virus
infeccioso ocasional que se desarroll en la
cepa receptora e invadi una clula de la cepa
donante. Cuando los descendientes del virus
erupcionaron de la clula moribunda, muchos
de ellos tenan ncleos genticos de ADN de
virus sintetizados a partir de la sustancia de la
clula bacteriana. Pero algunas de ellas incor-
poraron partculas de ADN de Salmonella sin
cambios en sus ncleos genticos. El virus
normal provoc infecciones en otras clulas
bacterianas, activa o latente, dependiendo de la
cepa de la bacteria. Los que llevaron el ADN
bacteriano e invadieron las bacterias de la cepa
receptora trajeron consecuencias totalmente
diferentes. En lugar de matar a su anfitrin,
simplemente desaparecieron. El ADN que
trajeron con ellos tom su lugar en los cromo-
somas de las clulas receptoras y modific las
caractersticas nutricionales u otras caracters-
ticas de la clula descendientes.
Es pura casualidad que una de las cepas
elegidas para nuestros estudios contena un
virus latente, y que otro fuese susceptible a
este virus. No esperbamos ciertamente encon-
trar un nuevo mecanismo gentico, y, teniendo
en cuenta los muchos factores que tienen que
estar en armona, el descubrimiento fue extre-
madamente fortuito.
n cierto modo la transduccin de ras-
gos genticos por un virus se asemeja
de cerca a la infeccin latente por un
virus. La diferencia entre los dos procesos radi-
ca en la naturaleza del material gentico trans-
portado por el virus, si es ADN tomado de un
cromosoma bacteriano o verdadero ADN vri-
co. El ADN de un virus de una cepa dada, tiene
la misma composicin que el ADN en los otros
virus de la misma cepa. En infecciones laten-
tes, este ADN podr tomar siempre la misma
estacin en la clula husped, el cromosoma, e
inducir el mismo cambio en las caractersticas
de la clula hospedera. Los rasgos asociados al
virus latente -una nueva capacidad de sntesis o
un cambio en la pared celular- aparecen en
cada una de las clulas que albergan el virus.
Si las clulas bacterianas pierden el material
gentico del virus, como lo demuestra la desa-
paricin del virus libre del cultivo, pierden
simultneamente el rasgo asociado al virus.
Por otra parte, el ADN bacteriano transpor-
tado por el virus, pueden variar en su composi-
cin, y cada tipo de ADN puede ser capaz de
producir un rasgo diferente. Las caractersticas
de este ADN no dependen en absoluto del
virus, sino solamente de la bacteria de proce-
dencia. En el nuevo husped del virus, el ADN
bacteriano toma una estacin en el cromosoma
que corresponde a la posicin que haba ocupa-
do en el cromosoma del hospedero anterior.
Slo un nmero muy reducido de las clulas en
un cultivo ganarn rasgos debido a la transduc-
cin, pero una vez incorporados esos rasgos
permanecern, incluso despus de que la cepa
pierde el ADN del virus.
En realidad la transduccin de un nuevo
rasgo a una bacteria, no es siempre acompa-
ada de una infeccin latente. A la inversa, un
virus puede tomar la forma latente en una bac-
teria sin establecer una transduccin. Es incier-
to si una partcula del virus puede producir
ambos efectos; una clula determinada suele
ser invadida por ms de un virus. Es absoluta-
mente posible que un virus pierda parte de su
propio ADN con el fin de adquirir ADN bacte-
riano, y, como consecuencia, puede no ser
capaz de producir una infeccin activa.
a pieza de ADN que es captada por el
virus debe ser realmente muy pequea.
Se pens por un momento que este
fragmento podra corresponder a una sola uni-
dad del gen, puesto que una partcula del virus,
al parecer, slo poda transferir un rasgo bacte-
riano a la vez. En el curso de nuestro trabajo,
sin embargo, hemos descubierto varios rasgos
que el virus transfiere en pares. La pieza de
ADN transportado por un virus, por lo tanto,
debe ser lo suficientemente grande como para
a lo menos dos genes, presumiblemente los dos
adyacentes o situados estrechamente cerca en
el cromosoma.
Los estudios de la capacidad de natacin
de Salmonella nos llevaron a los primeros
pares de genes vinculados. Algunas cepas de
Salmonella tienen colas en forma de ltigo
(flagelos), con el que pueden nadar a travs de
lquidos o gelatinas semislidas; otras no
tienen cola y no puede moverse. Las bacterias
E
L
sin cola pueden quedarse y crecer en las colo-
nias donde se siten, pero las otras nadan y se
propagan formando una nube turbia en todo el
medio de cultivo. Las cepas nadadora son de
diferentes tipos, distinguidas por las protenas
de las que sus colas son hachas. Encontramos
que la habilidad para nadar depende de dos
genes, uno para determinar tanto si la cola se
forma o no, y el otro para determinar la prote-
na especfica de la que se formar. Una clula
sin cola puede tener ya un gen inactivo para
una especie de protena de cola; si esta adqui-
ere un gen para formar la cola por medio de la
transduccin, se formar una cola a partir del
tipo de protena determinada por su propio gen.
Casi con frecuencia, encontramos que una
clula sin cola puede tomar un nuevo gen de la
protena de cola junto con el gen para la forma-
cin de la cola; como resultado formar una
cola de protenas del tipo donante en lugar de
la propia. Los nuevos genes introducidos por
transduccin eliminan los genes correspon-
dientes en el cromosoma bacteriano y toman su
lugar.
El vnculo entre los rasgos genticos reve-
lados por la transduccin, ofrece una pista
sobre la vinculacin de los genes en la estruc-
tura de los cromosomas. Por lo tanto, la trans-
duccin promete ser una herramienta til en la
importante labor de mapear los cromosomas.
Bruce Stocker, un bacterilogo britnico,
ha demostrado un modo frustrado de transduc-
cin. El ADN transducido, en este caso, no
sustituye un gen en el cromosoma de la clula
receptora, sino que por su propia presencia
induce un nuevo rasgo. Cuando la clula se
divide, sin embargo, el nuevo gen no es dupli-
cado, y slo una de las clulas hijas exhibe el
rasgo. Stocker hizo este interesante descubri-
miento en una investigacin del rasgo de la
natacin, cuando la clula receptora produjo un
rastro de colonias en lugar de la propagacin
en nube. Las colonias a lo largo del rastro con-
sistieron totalmente en clulas sin cola. Pero el
rastro haba sido puesto por la clula hija con
natacin, que se traslad al sitio siguiente des-
pus de cada divisin.
Parece ser posible mover cualquier rasgo
hereditario de una clula a otra por transduc-
cin. Hemos tenido xito en transducir casi
todos los rasgos que podemos detectar de
manera confiablemente por el experimento,
incluyendo la resistencia a drogas, factores de
la movilidad y factores antignicos. La trans-
duccin se ha demostrado en muchas clases de
Salmonella, en las especies relacionadas y
apareamiento de cepas de E. coli. Pero irnica-
mente nadie ha tenido xito en el apareamiento
de Salmonella.
TRANSDUCCIN A LA MOVILIDAD revel que dos genes, presumiblemente ubicados en el cromo-
soma bacteriano, pueden ser transportados juntos en un virus. El virus (A) de un cultivo de clulas con
cola (arriba) se utiliza para la transduccin de clulas sin cola. Dos tipos de clulas mviles resultantes:
algunas (centro derecha) recibieron slo el gen para fabricar la cola del tipo de protena para las que ya
tenan un gen latente; un nmero igual (centro izquierda) tena colas como el donante, porque tambin
haba recibido un gen para las protenas de la cola. Las transducciones de clulas sin cola se repitieron
con el virus de cada uno de los nuevos tipos de clulas. Uno (B) dio lugar a dos tipos de clulas con cola,
y el otro (C) fabricando slo un tipo de clulas con cola.