INSTITUTO TECNOLGICO SUPERIOR

DE TANTOYUCA


CARRERA: INGENIERA AMBIENTAL

INTEGRANTES DEL EQUIPO:
SAMARA YATZIRI PALMA ANDRADE
OLGA LIDIA ALEJANDRES FRANCO
JORGE ALBERTO CRUZ HERNANDEZ
JULIO CESAR ESTRADA ALARCON
JOHANNA BEATRIZ PREZ ANDRADE


MATERIA: TOXICOLOGIA AMBIENTAL

DOCENTE: DOC. YENNY LIZZETH CUOHO UICAB

TRABAJO: BIOENSAYO DE GERMINACION DE SEMILLAS DE
RABANO Raphanus sativus)

FECHA: 06 DE DICIEMBRE DE 2013




Introduccin
Las plantas son esenciales en los ecosistemas porque son las responsables de
transformar la energa solar en energa qumica, al tiempo que absorben
dixido de carbono. De esta manera proveen de alimento y oxgeno al resto de
los organismos. Adems, las plantas son uno de los componentes ms
importantes de los ecosistemas terrestres porque proporcionan refugio y sitio
de anidamiento para numerosos organismos, y participan de forma primordial
en el reciclaje de nutrientes y en la estabilizacin de los suelos (Wang y
Freemark, 1995).

Un agua clara y potable es una necesidad humana bsica, pero el acceso a
ella contina siendo una gran dificultad para algunas ciudades en pases en
desarrollo como el nuestro. En la actualidad se reconoce que la caracterizacin
y medicin de los txicos o componentes de los residuos peligrosos por
separado no es suficiente para asegurar la ausencia de efectos indeseables,
puesto que tanto la mezcla de los residuos como posibles transformaciones en
el ambiente pueden modificar su efecto nocivo.

De ah que el uso de ensayos biolgicos est siendo considerado cada vez con
mayor intensidad para la evaluacin de la toxicidad global de estos
contaminantes. El objetivo de este trabajo fue evaluar la toxicidad de las aguas
residuales del instituto tecnolgico superior de Tantoyuca, empleando los
bioensayos de la inhibicin de la semilla de rbano (Raphanus sativus).

El dao a las plantas por los contaminantes puede afectar directamente a la
estructura y la funcin de un ecosistema, al reducir la produccin primaria,
incrementar el lavado y erosin del suelo y degradar el hbitat de la vida
silvestre. Los efectos letales de los contaminantes sobre las plantas pueden
significar prdidas ecolgicas y econmicas muy importantes; incluso los
efectos sub letales tienen un impacto significativo sobre la produccin de
alimentos y el desarrollo de la vegetacin natural, e implicaciones adversas
para los organismos pertenecientes a niveles superiores en la cadena
alimenticia (Wang y Freemark, 1995).

En los bioensayos de toxicidad con semillas se evalan los efectos adversos de
los contaminantes en el proceso de germinacin y en el desarrollo de las
plntulas durante los primeros das de crecimiento. Como respuesta se
determina la inhibicin en la germinacin y de la elongacin de la radcula y del
hipocotleo.

Es importante destacar que durante la germinacin y los primeros das de
desarrollo ocurren numerosos procesos fisiolgicos en los que la presencia de
un compuesto toxico puede interferir y alterar la supervivencia y el desarrollo
normal de las plntulas. La divisin celular de los pices radiculares puede
afectarse, retardando el proceso de mitosis o alterando el proceso de
alargamiento radicular, por lo que la fitotoxicidad de un compuesto puede ser
determinada a travs de la medicin de dichas respuestas (Uribe, 2008).


Raphanus sativus

Raphanus sativus, el rbano, es una planta de la familia Brassicaceae que se
cultiva por sus races comestibles.
Hay ciertas subespecies que reciben nombres vulgares diferentes, por ejemplo,
R. sativus var. sativus es el rbano o rabanito y R. sativus var. longipinnatus se
conoce, entre otros nombres, como rbano blanco, rbano japons o daikon.

Planta anual o bienal de raz axonomorfa. Tallo de 20-100 cm, erecto, poco
ramificado, glabro o algo hispido en la base. Hojas basales de hasta 30cm,
pecioladas, en rosetas, lirado-pinnatisectas, con 2-3 pares de segmentos
laterales y uno terminal de mayor tamao, sub-orbicular; las superiores, de
ovadas a oblongo-lanceoladas. Racimos de 10-50 flores con pedicelos de 5-15
mm en la antesis, 10-30 en la fortificacin.

Spalos de 6-11 mm y ptalos 15-20 mm, blanco-rosados o violetas ms o
menos veteados. Los frutos son silicuas indehiscentes de 30-60 por 6-12 mm,
erecto-patentes con artejo valvar residual de 1,5-2,5 mm,sin semilla], raramente
monospermo y el superior de 25-70 por 8-15 mm, cilndrico, longitudinalmente
estriado, con 2-10 semillas y terminado en un pico cnico de 10-15 mm. Dichas
semillas, de 3-4 mm, de contorno elipsoidal truncado, reticulada-estriadas y de
color verde cuando son inmaduras y que se tornan pardas en la madurez,
estn inmersas en un tupido tejido esponjoso blanco que se desarrolla durante
esta maduracin.

Composicin qumica del rbano:
Agua 95%
Hidratos de carbono 3% (fibra 1%)
Protenas 1%
Lpidos 0, 2%
Vitamina C 20 mg/100 g
Potasio 240 mg/100 g
Sodio 40 mg/100 g
Calcio 34 mg/100 g
Fsforo 27 mg/100 g

Plagas y enfermedades del rbano:

- Oruga de la col.
- Pulgones.
- Rosquilla negra.
- Mildiu.
- Acorchado.




El proceso de germinacin est constituido por varias fases: i) Absorcin de
agua por la semilla o imbibicin; ii) Activacin del metabolismo y proceso de
respiracin, sntesis de protenas y movilizacin de sustancias de reserva; iii)
Elongacin del embrin y ruptura de la testa a travs de la cual se observa
salida de la radcula.

El proceso de germinacin est influenciado tanto por factores internos como
externos. Dentro de los factores internos estn la viabilidad del embrin, la
cantidad y calidad del tejido de reserva y los diferentes tipos de dormancia.
Algunos de los factores externos que regulan el proceso son el grosor de la
testa, disponibilidad de agua, temperatura y tipos de luz. El estudio de la
biologa y fisiologa de las semillas es de vital importancia para el hombre, ya
que la mayora de las especies cultivadas como los cereales son propagadas a
partir de semillas sexuales (Russo et l. 2010).

Imbibicin: es el proceso de absorcin de agua por la semilla. Se da por las
diferencias de potencial hdrico (mtrico) entre la semilla y la solucin de
imbibicin.

Este proceso consta de tres fases: i) incremento rpido en la absorcin de
agua; ii) fase de estabilizacin y movilizacin de nutrientes; iii) absorcin de
agua que generalmente coincide con el proceso de germinacin (Figura 2)


Figura 2. Fases del proceso de germinacin en Phaseolus vulgaris. (Fuente:
Laboratorio de fisiologa y bioqumica vegetal, Departamento de Biologa, Universidad
Nacional de Colombia)

Objetivo
Determinar la calidad del agua de dos fuentes del ITSTA mediante bioensayos
de germinacin de semillas de rbano (Raphanus sativus) y para evaluar el efecto
que pueden producir en este.


Materiales y mtodos
.

REA DE ESTUDIO

Imagen1. Instituto Tecnolgico Superior de Tantoyuca

El muestreo se realiz el mismo da del ensayo en dos diferentes puntos del ITSTA

MATERIALES
Muestra de agua de las piletas del tecnolgico y de las y aguas residual de la
misma as como agua destilada y semillas de Raphanus sativus.

Se usaron 9 placas Petri con papel filtro



Ensayo de la toxicidad con semillas de Raphanus sativus

Es una prueba esttica de toxicidad aguda (168 horas de exposicin) en la que
se evalan los efectos citotxicos de compuestos puros o de mezclas
complejas en el proceso de germinacin de las semillas y en el desarrollo de
plntulas durante los primeros das de crecimiento.
Las semillas de Raphanus sativus fueron adquiridas en una sumillera local.

Se coloc en cada placa Petri un disco de papel de filtro. Se satur el papel de
filtro con 3 o 4 mL de la dilucin evitando la formacin de bolsas de aire
(Imagen 2). De forma manual y utilizando guantes cuidadosamente se
colocaron 20 semillas en cada una de las placas Petri (Imagen 3), dejando
espacio suficiente entre ellas para permitir la elongacin de las races (Imagen
4).
Se taparon las placas y se colocaron en bolsas plsticas para evitar la prdida
de humedad. Se incub durante 168 horas (7 das) a una temperatura de 24
2 C.

Terminado el periodo de exposicin (420 horas), se procedi a cuantificar el
efecto de la germinacin y en la elongacin de la radcula y del hipocotleo.

Se registr el nmero de semillas que germinaron normalmente, teniendo como
criterio de germinacin la aparicin visible de la radcula.

Utilizando una regla o papel milimetrado se midi cuidadosamente la longitud
de la radcula y del hipocotleo de cada una de las plntulas correspondientes a
cada concentracin de txico o dilucin de muestra y a los controles. La
medida de elongacin de la radcula se consider desde el nudo hasta el pice
radicular. La medida de elongacin del hipocotleo se consider desde el nudo
hasta el sitio de insercin de los dos cotiledones.

Para la toma de resultados se observaron cada una de las placas Petri cada 24
hrs durante los 7 das
Da 1 (Martes 26 de noviembre del 2013)














Imagen 2. Imagen 3. Imagen 4.

Se colocaron de 3 a 4 ml de
la muestra en el papel
filtro.
Colocacin de las semillas, 5 filas de 4
semillas.
Se sella la caja petri.
Resultados
Da 2 (Mircoles 27 de noviembre del 2013)
Muestra Caractersticas
Blanco Se nota que el crecimiento comenz y se distingue el de dos semillas
Blanco R
1

Blanco R
2

M1 Todas las semillas empezaron a germinar
MR
1

MR
2

M2 Todas las semillas tiene un crecimiento mayor a todas
MR
1

MR
2


Imagen 5. Muestras de agua destilada
Imagen 6. Muestra agua del grifo
Imagen 7. Muestra agua residual


Da 3 (Jueves 28 de noviembre del 2013)
Muestra Caractersticas
Blanco La raz de todas las semillas creci considerablemente, los pelos
radiculares empiezan a notarse.
Blanco R
1
10 de las semillas cuentan con una raz pequea, las dems miden
aproximadamente 2 cm.
Blanco R
2
No se registr ningn cambio.
M1 Solo crecieron las races de la mitad de las semillas considerablemente, las
dems no presentan cambio alguno.
MR
1
Todas las races tienen la parte inferior la presencia de pelos radiculares,
las races han crecido 0.2 cm.
MR
2
10 de las semillas tuvieron un incremento en su raz, las dems no
registraron algn cambio.
M2 Todas las races crecieron aproximadamente 0.5 cm, los pelos radiculares
empiezan a notarse en la parte inferior.
MR
1
En todas las races empiezan a notarse los pelitos radiculares en la parte
inferior.
MR
2
En estas semillas las races han crecido considerablemente a comparacin
de las dems muestras, aqu tambin empiezan a notarse las pelos
radiculares.

Imagen 8. Muestras de agua destilada Imagen 9. Muestra agua del grifo
Imagen 10. Muestra agua residual



Da 4 (Viernes 29 de noviembre del 2013)
Muestra Caractersticas
Blanco Todas abrieron con una raz mediana
Blanco R
1
Solo dos semillas no abrieron y tiene una raz pequea
Blanco R
2
Todas las semillas abrieron y cinco tiene una raz pequea
M1 Todas las semillas germinaron con una raz larga
MR
1
Dos semillas no abrieron completamente, las dems con raz pequea
MR
2
Todas las semillas germinaron dos con raz larga y las dems pequeas
M2 Todas las semillas abrieron con una raz larga observndose pelitos
MR
1
Todas germinaron con raz larga y con pelitos blancos cerca de la semilla
MR
2
Todas abrieron, tienen una raz ms larga que las dems
Observaciones:
Raz larga 3.5cm
Raz mediana 2.5cm
Raz pequea 1cm
Imagen 11. Muestras de agua destilada
Imagen 12. Muestra agua del grifo
Imagen 13. Muestra agua residual

Da 5 (Sabado 30 de noviembre del 2013)
Muestra Caractersticas
Blanco No se registr ningn cambio en las semillas.
Blanco R
1
En 5 semillas creci la raz, aproximadamente 0.1cm. En las cuales
empezaba a notarse la flor.
Blanco R
2
Solo 3 semillas empezaron a florear, las dems no tienen ningn cambio.
M1 Todas las races tuvieron un crecimiento de 0.5 cm. Las flores amarillas
empiezan a brotar.
MR
1
En 3 semillas empieza a notarse el brote de la flor, las dems solo creci
la raz envueltas de pelos radiculares.
MR
2
Todas las semillas estn floreando notndose un poco solamente, se
encuentran envueltas de pelos radiculares.
M2 La mitad de las semillas empezaron a florear, las pelos radiculares se
encuentran en todas las races
MR
1
10 de las semillas empiezan a florear. Solo se observa un pequeo
crecimiento de las races.
MR
2
Todas las semillas empiezan a florear. Teniendo un crecimiento de la raz
notable, todas envueltas de pelos radiculares.





Imagen 14. Muestras de agua destilada Imagen 15. Muestra agua del grifo

Imagen 16. Muestra agua residual

Da 6 (Domingo 01 de diciembre del 2013)
Muestra Caractersticas
Blanco Las semillas empiezan a florear, las races se encuentran cubiertas de
pelos radiculares.
Blanco R
1
Las semillas que empezaron a florear se encuentran ms grandes,
cubiertas de pelos radiculares.
Blanco R
2
Las 3 semillas que haban floreado se encuentran ms grandes, las
dems empiezan a brotar.
M1 Las semillas florearon tiendo un mayor crecimiento, las races tambin
crecieron y se encuentran envueltas de pelos radiculares.
MR
1
Las 3 semillas que brotaron la flor esta ms grande, en las dems se nota
el crecimiento menor.
MR
2
Ya se encuentran todas las semillas floreadas, notndose el crecimiento
mayor en la mitad de ellas, todas con pelos radiculares.
M2 Todas las semillas tienen un crecimiento de las flores notable, las races
crecieron 0.5 cm.
MR
1
En todas las races abri la flor, tienen un crecimiento mayor.
MR
2
Todas las races se encuentran ms largas, las semillas cuentan con un
brote ms grande.


Imagen 17. Muestras de agua destilada Imagen 18. Muestra agua del grifo

Imagen 19. Muestra agua residual

Da 7 (Lunes 02 de diciembre de 2013)
Muestra Caractersticas
blanco Todas las semillas florearon ms, los pelos radiculares son ms largos.
Blanco R
1
La mayora de las semillas florearon, todos los pelos radiculares son
pequeos
Blanco R
2
No hay gran diferencia en la flor, los pelos radiculares empiezan a crecer.
M1 Las races han crecido aproximadamente 2 cm ms, los pelos radiculares
tambin.
MR
1
El tamao de la flor es el mismo, solo la raz creci 3 cm
MR
2
Cinco de las races crecieron 2 cm ms, las dems siguen igual, los pelos
radiculares empiezan a crecer.
M2 Los pelos radiculares han crecido 1 cm, las races aproximadamente 2 cm
en cada semilla, el tamao de la flor es el mismo.
MR
1
La flor ha crecido considerablemente, las races al menos 3 cm ms, los
pelos radiculares crecieron 1 cm, todas las semillas se encuentran unidas
por las races.
MR
2
El tamao de la flor es el mismo, la raz creci aproximadamente 2 cm y
los pelos radiculares entre 0.5 y 1 cm. Tres de las races tienen una
tonalidad rosa y tres con tonalidad azul en la parte inferior.


Imagen 20. Muestras de agua destilada Imagen 21. Muestra agua del grifo

Imagen 22. Muestra agua residual.

Notacin:
BLANCO----------- MUESTRA AGUA DESTILADA
BLANCO R
1
--------MUESTRA REPETICION 1
BLANCO R
2
----------------- MUESTRA REPETICION 2
M1------------------- MUESTRA AGUA DEL GRIFO
MR
1
----------------- MUESTRA REPETICION 1
MR
2
-----------------MUESTRA REPETICION 2
M2------------------- MUESTRA AGUA RESIDUAL
MR
1
----------------- MUESTRA REPETICION 1
MR
2
-----------------MUESTRA REPETICION 2
Muestra Tiempo en horas
24 48 72 96 120 144
Blanco 0.1 2 2.5 2.5 3 4.5
Blanco R
1
0.2 0.5 1 1.3 2.2 3.3
Blanco R
2
0.1 0.4 1 1.3 1.9 2.4
promedio 0.133 0.967 1.5 1.7 2.367 3.4
inhibicin 2 10 % de inhibicin
M1 0.1 2 3.5 4 4.5 5
MR
1
0.2 0.2 1 1.5 2.5 3.6
MR
2
0.2 1.6 2.5 3 3.9 5
promedio 0.167 1.267 2.333 2.833 3.633 4.533
inhibicin 2 10 % de inhibicin
M2 0.2 0.5 3.5 3.7 4.5 5.7
MR
1
0.3 1.3 3.5 3.6 4.3 6.6
MR
2
0.2 1.2 3.5 3.7 4.6 5.7
promedio 0.233 1 3.5 3.667 4.467 6
inhibicin 0 0 % de inhibicin
Cuadro A. Resultados de la prueba de toxicidad del agua e inhibicin de la
germinacin utilizando Raphanus sativus


Grafica 1. Comparacin del crecimiento promedio de las semillas de Raphanus sativus



Conclusiones
De acuerdo a lo obtenido en la presente prctica, concluimos que el porcentaje
de germinacin de los tratamientos y el testigo fue cercano al 90% indicando
que no presentaron toxicidad alguna que pudiera inhibir el proceso de
germinacin.
Las aguas de las piletas utilizadas en los bioensayos con Raphanus sativus
presentaron altos valores del ndice de germinacin, lo cual indicara que no
son Fito txicas y resulta de buena calidad para ser utilizadas con fines de
riego en las parcelas de la institucin.
As como la recomendacin de la especie Raphanus sativus por su rpido
crecimiento y resistencia aguas residuales, el bajo costo de los anlisis y la
buena respuesta a situaciones de contaminacin atmosfrica. Raphanus
adems aguanta las bajas temperaturas de invierno, as que es apta para
mediciones durante todo al ao.

0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
4
4.5
5
5.5
6
0 24 48 72 96 120 144 168
c
r
c
i
m
i
e
n
t
o

d
e

l
a

r
a
i
z

e
n

c
m

tiempo hrs

blanco (agua
destilada)
Muestra grifo
Muestra agua
residual
Bibliografa

Uribe, R. 2008. Ensayo de inhibicin de la germinacin y del alargamiento radicular en
semillas de cebolla Allium cepa y soya Glycine max. 2008.

Ramrez-Romero, P., Mendoza-Cant, A. (compiladoras). Ensayos toxicolgicos para
la evaluacin de sustancias qumicas en agua y suelo. La experiencia en Mxico.
Instituto Nacional de Ecologa, Secretaria de Medio Ambiente y Recursos Naturales.
Mxico

Wang, W., Freemark, K. 1995. Use of plants for environmental monitoring and
assessment. Ecotoxicology and Environmental Safety. 30, 289-301.

Taiz L. Y Zeiger E. Fisiologa vegetal Volumen 10 de Cinces experimentals,
Universitat Jaume I, 2006.

Raphanus sativus en Flora Ibrica, RJB/CSIC, Madrid, p. p.
(http://www.floraiberica.es/floraiberica/texto/pdfs/04_072_74_Raphanus.pdf).

Raphanus sativus en The Plant List (http://www.theplantlist.org/tpl/record/kew-
2422375).