TESTES PARA A IDENTIFICAO DE GLCIDOS

INTRODUO

Os glcidos constituem uma classe de compostos biolgicos que engloba os monossacridos e
molculas mais complexas obtidas por reaces de condensao de monossacridos, algumas delas
conduzindo a substncias polimricas.
Do ponto de vista estrutural os monossacridos ou oses so poli-hidroxialdedos ou poli-
hidroxicetonas, apresentando-se geralmente sob a forma de hemiacetais ou hemicetais. Estes
compostos diferem no nmero de tomos de carbono existentes nas suas molculas (trioses,
tetroses, pentoses, hexoses) e na natureza do grupo funcional principal (aldedo ou cetona,
hemiacetal ou hemicetal). Os restantes grupos funcionais so grupos lcool (grupos hidroxilo
ligados a todos os tomos de carbono que no fazem parte do grupo funcional aldedo ou cetona) e
as diferenas existentes entre as vrias oses com o mesmo nmero de tomos de carbono e o
mesmo grupo funcional principal dizam apenas respeito configurao (ordem pela qual se
dispem os grupos hidroxilo, tomos de hidrognio e outros grupos em torno de cada tomo de
carbono que seja um centro quiral na molcula).
possivel distinguir glcidos de outros tipos de compostos explorando a sua reactividade
qumica. Os cidos fortes (4 a 6 N a 100 C ou mais concentrados a temperaturas mais baixas)
causam a desidratao dos monossacridos e tambm de oligossacridos ou polissacridos devido
hidrlise cida das ligaes glicosdicas. As pentoses so convertidas em furfural por aco do
cido sulfrico concentrado e as hexoses, em hidroximetilfurfural. Estes aldedos cclicos podem
sofrer reaces de condensao com um elevado nmero de fenis e aminas aromticas originando
produtos corados. A velocidade de desidratao e a cor do produto formado depende da natureza
do acar, pelo que possvel usar este tipo de reaces para efectuar testes qualitativos para a
caracterizao de glcidos (testes de Molisch, do fenol-cido sulfrico, de Seliwanoff, de Bial).
Outro tipo de reaco qumica til para a caracterizao de glcidos a sua oxidao por certos
reagentes, o que permite classific-los em redutores ou no redutores (testes de Fehling, de
Benedict, do espelho de prata) e, tendo em conta a velocidade da reaco, em monossacridos ou
dissacridos redutores (teste de Barfoed). Nestas reaces o grupo aldedo das aldoses, ou o grupo
carbonilo das cetoses actuam como redutores. As aldoses so assim convertidas em cidos
aldnicos e as cetoses em -dicarbonilos.
ainda possvel a identificao de certos monossacridos recorrendo a testes enzimticos que
utilizem enzimas de elevada especificidade para esses monossacridos. Um exemplo a glucose
oxidase [E.C. 1.1.3.4], enzima que catalisa a oxidao da -D-glucose. O perxido de hidrognio
produzido como consequncia desta reaco pode ser detectado, por exemplo, pela sua capacidade
de oxidar o io iodeto a iodo. (Obs.: Ver o trabalho intitulado Cintica reaccional da glucose
oxidase e Separao de duas enzimas por cromatografia de permuta inica).

OBJECTIVO DO TRABALHO

O objectivo do trabalho consiste na realizao de um conjunto de testes qualitativos para a
caracterizao de alguns glcidos.
Para concretizar o trabalho ser feita a identificao de um conjunto de solues aquosas a 1
% (p/v) rotulados com as letras A, B, C, D, E, F, G, H e I e que correspondem aos seguintes
compostos biolgicos, no necessariamente pela ordem indicada: glicina, D-xilose, D-galactose,
D-glucose, metil--D-glucsido, D-frutose, lactose, sacarose e amido (suspenso com uma
concentrao de 0,2 % p/v).

REAGENTES

Reagente de Molisch (dissoluo de 5 g de -naftol em 100 mL de etanol)
cido sulfrico concentrado
Soluo aquosa de fenol a 5% (p/v)
Reagente de Seliwanoff (dissoluo de 0,5 g de resorcinol em 330 mL de cido clordrico
concentrado e diluio a 1 L com gua)
Reagente de Bial (dissoluo de 3 g de orcinol em 1 l de cido clordrico concentrado e adio
de 3mL de uma soluo de FeCl
3
a 1 % p/v)
Soluo de Fehling A (dissoluo de 34,65 g de CuSO
4
.5H
2
O em gua e diluio a 500 mL)
Soluo de Fehling B (dissoluo de 125 g de KOH e 173 g de NaKC
4
H
4
O
6
.4H
2
O tartarato
duplo de sdio e potssio, sal de Rochelle em gua e diluio a 500 mL)
Reagente de Benedict (dissoluo de 173 g de Na
3
C
6
H
5
O
7
.2H
2
O citrato de sdio e 100 g de
carbonato de sdio anidro em gua e diluio a cerca de 850 ml, adio a esta soluo de uma
outra soluo preparada por dissoluo de 17,4 g de CuSO
4
.5H
2
O em 100 ml de gua e diluio
a 1 L)
Soluo aquosa de nitrato de prata a 5% (p/v)
Amnia diluda (1:2)
Reagente de Barfoed (dissoluo de 66 g de CuC
4
H
6
O
4
acetato de cobre (II) em 10 mL de
cido actico glacial e em gua e diluio a 1 L)
Soluo 0,01 M em iodo e a 3 % (p/v) em iodeto de potssio
Soluo aquosa de glucose oxidase (~0.5 mg/mL)
Soluo aquosa concentrada de iodeto de potssio (IK) contendo uma pequena quantidade de
molibdato de sdio.

MATERIAL
tubos de ensaio Diversas pipetas
banho de gua a 100 C banho de gua a 70 C
cronmetro

TCNICA

1) Escrever as frmulas qumicas estruturais (de Fischer e de Haworth para monossacridos e de
Haworth para dissacridos e derivados de monossacridos) para os glcidos D-xilose, D-
galactose, D-glucose, metil--D-glucsido, D-frutose, lactose e sacarose.

2) Classificar os glcidos indicados em 1) em: aldose ou cetose ou derivado de aldose ou de
cetose; pentose ou hexose ou derivado de pentose ou de hexose; monossacrido ou dissacrido
ou derivado de monossacrido ou de dissacrido; redutor ou no redutor. Para os dissacridos
indicar apenas se so redutores ou no redutores.
3) Elaborar um diagrama do tipo indicado, onde seja apresentada uma ordem de realizao dos
ensaios descritos a seguir, a indicao das amostras a ensaiar em cada caso e as concluses que
seja possvel obter (pela observao dos resultados para cada ensaio) para a identificao das
amostras.

Amostras:

Ensaio:


+

Amostras: Amostras:

Ensaio: Ensaio:



+

Amostras: Amostras: Amostras: Amostras:


4) Realizar os ensaios descritos a seguir para as amostras A, B, , I. Logo que identificar
inequivocamente uma amostra, no realizar mais ensaios para essa amostra.
5) Preencher uma tabela com os resultados dos ensaios.
6) Concluir sobre a identidade de cada uma das amostras A, B, ,I.

ENSAIOS
I TESTE DE MOLISCH
O teste de Molisch permite fazer a distino entre um glcido e um
outro tipo de composto. O H
2
SO
4
concentrado, por uma aco de
desidratao sobre os hidratos de carbono, produz compostos que
condensam com o -naftol para formar produtos corados. Um teste
negativo uma muito boa indicao da ausncia de um hidrato de
carbono. Um teste positivo apenas indica a presena provvel de um
hidrato de carbono.

-naftol
1) Colocar 1 mL da soluo amostra num tubo de ensaio.
2) Adicionar 1 mL de gua e agitar.
3) Adicionar 2 gotas do reagente de Molisch e misturar bem.
4) Adicionar lenta e cuidadosamente cerca de 1 mL de cido sulfrico concentrado (com
pipeta de Pasteur ou outra do mesmo tipo), deixando-o escorrer pela parede interna do
tubo (que dever estar inclinado a 45), de modo a que este forme uma camada por baixo
da soluo aquosa.
5) Tomar nota do eventual aparecimento de uma cor na zona de juno dos dois lquidos.
POSITIVO: Cor roxa-vermelha.

II TESTE DO FENOL CIDO SULFRICO

O teste do fenol - cido sulfrico permite fazer a distino entre um glcido ou um composto que
contenha uma parte glicdica e um outro tipo de composto.

1) Colocar 10 L da soluo amostra num tubo de ensaio.
2) Adicionar 1 mL de gua e agitar.
3) Adicionar 1 mL da soluo de fenol e agitar bem.
4) Adicionar cerca de 5 mL de cido sulfrico concentrado e misturar bem. TOMAR CUIDADO
COM O AUMENTO DA TEMPERATURA PARA EVITAR PROJECES!
6) Tomar nota do eventual aparecimento de uma cor.
POSITIVO: Cor alaranjada.

III TESTE DE SELIWANOFF

O teste de Seliwanoff um teste para cetoses. A sacarose, que contm uma cetose na sua
estrutura, d um teste positivo.
1) Colocar 2 mL do reagente de Seliwanoff num tubo de ensaio.
2) Adicionar 0,3 mL da soluo amostra e agitar.
3) Aquecer fervura num banho de gua durante 1 minuto.
4) Tomar nota do eventual aparecimento de uma cor.
POSITIVO: Cor laranja ou vermelha (ou intermdia). A sacarose pode dar um teste positivo
se sofrer hidrlise parcial (em glucose e frutose). Para outro tipo de acares, um
aquecimento prolongado pode dar uma cor vermelha.

IV TESTE DE BIAL
um teste para pentoses.
1) Colocar 3 mL do reagente de Bial num tubo de ensaio. Cuidado que este reagente tem HCl
bastante concentrado.
2) Adicionar 0,15 mL da soluo amostra e agitar.
3) Aquecer fervura num banho de gua durante 30 segundos.
4) Tomar nota do eventual aparecimento de uma cor.
POSITIVO: Cor verde ou azul (ou intermdia) para pentoses ou nucletidos contendo
pentoses. Hexoses ou dissacridos do uma cor amarela esverdeada.

V TESTE DE FEHLING

um teste para accares redutores. O grupo carbonilo oxidado a carboxilo. O io metlico
reduzido. Os glcidos que contenham um grupo aldedo ou cetona potencialmente livre existem em
soluo aquosa em equilbrio com uma forma enodiol, que um agente redutor activo. Em meio
ligeiramente alcalino esta forma favorecida e a sua presena assegura a reduo de ies cobre (II)
a cobre (I) com a formao de hidrxido cuproso que, por aquecimento, se converte em xido
cuproso, um composto insolvel de cor vermelha que precipita. Para manter os ies cobre (II) em
soluo em meio alcalino o reagente de Fehling contm um agente complexante, o io tartarato.

1) Misturar 1 mL da soluo de Fehling A com 1 mL da soluo de Fehling B num tubo de
ensaio.
2) Adicionar 0,5 mL da soluo amostra e agitar.
3) Aquecer fervura num banho de gua durante 5 minutos.
4) Tomar nota do eventual aparecimento de um precipitado avermelhado.
POSITIVO: Formao de um precipitado avermelhado.

VI TESTE DE BENEDICT

um teste semelhante ao teste de Fehling. Para manter os ies cobre (II) em soluo em meio
alcalino o reagente de Benedict contm um agente complexante, o io citrato. uma soluo que
no se deteriora com tanta facilidadse como as de Fehling.

1) Colocar 3 mL do reagente de Benedict num tubo de ensaio.
2) Adicionar 0,5 mL da soluo amostra e agitar.
3) Aquecer fervura num banho de gua durante 5 minutos.
5) Tomar nota do eventual aparecimento de um precipitado avermelhado.
POSITIVO: Formao de um precipitado avermelhado.

VII TESTE DO ESPELHO DE PRATA

um teste para acares redutores, tal como os testes de Fehling e de Benedict. Neste teste so os
ies prata (I) que sofrem reduo a prata metlica. Os ies prata so mantidos em soluo em
meio alcalino (amoniacal) sob a forma do complexo diaminoprata (I).

1) Colocar 1 mL da soluo de nitrato de prata num tubo de ensaio bem lavado.
2) Adicionar amnia diluda gota a gota com agitao at se dissolver o precipitado formado aps
a adio das primeiras gotas.
3) Adicionar 0,5 mL da soluo amostra e agitar.
4) Aquecer num banho de gua temperatura de 70 C durante 5 minutos.
5) Retirar o tubo de ensaio do banho aps os 5 minutos e tomar nota do eventual aparecimento de
um espelho de prata na parede interna. LAVAR IMEDIATAMENTE O TUBO DE ENSAIO
APS A REALIZAO DESTE TESTE!
POSITIVO: Formao de um espelho de prata. Nota: este mtodo era () usado para fazer
espelhos.

VIII TESTE DE BARFOED

Este teste permite distinguir entre monossacridos redutores e dissacridos redutores. Os
dissacridos so redutores mais fracos e reagem mais lentamente. No reagente de Barfoed os ies
cobre (II) que vo sofrer a reduo a cobre (I) encontram-se em meio ligeiramente cido.

1) Colocar 2 mL do reagente de Barfoed num tubo de ensaio.
2) Adicionar 0,5 mL da soluo amostra e agitar.
3) Aquecer fervura num banho de gua durante 1 minuto.
4) Tomar nota do eventual aparecimento de uma turvao ou precipitado avermelhados.
POSITIVO: Turvao ou precipitado avermelhados para monossacridos redutores. A
hidrlise de dissacridos pode originar algum precipitado.

IX TESTE DO IODO

um teste para alguns polissacridos baseado na formao de um complexo fortemente corado
resultante da interaco entre o iodo e o polissacrido.

1) Colocar 0,5 mL da soluo amostra num tubo de ensaio.
2) Adicionar 1,5 mL de gua e agitar.
3) Adicionar 2 gotas da soluo de iodo.
4) Tomar nota do eventual aparecimento de uma cor.
POSITIVO: Cor azul para amido ou cor vermelha muito escura para glicognio.

X TESTE ENZIMTICO COM GLUCOSE OXIDASE

um teste especfico para a -D-glucose.
1) Colocar 2 mL da soluo amostra num tubo de ensaio.
2) Adicionar uma gota da soluo de glucose oxidase e agitar suavemente.
3) Adicionar 3 gotas da soluo de iodeto de potssio.
4) Tomar nota do eventual aparecimento de uma cor.
POSITIVO: Cor amarela.

TESTES PARA A IDENTIFICAO DE GLCIDOS

FOLHA DE RESULTADOS

GRUPO: DATA: .............................. TURMA: ....................

Nome .................................................................................... N ...............................

Nome .................................................................................... N ...............................

Nome .................................................................................... N ...............................


1) Escrever as frmulas qumicas estruturais (de Fischer e de Haworth para monossacridos e de
Haworth para dissacridos e derivados de monossacridos) para os glcidos D-xilose, D-
galactose, D-glucose, metil--D-glucsido, D-frutose, lactose e sacarose.
2) Classificar os glcidos indicados em 1) em: monossacrido ou dissacrido ou derivado de
monossacrido ou de dissacrido; aldose ou cetose ou derivado de aldose ou de cetose; pentose
ou hexose ou derivado de pentose ou de hexose; redutor ou no redutor. Para os dissacridos
indicar apenas se so redutores ou no redutores.


D-xilose







D-galactose
D-glucose







Metil--D-glucsido
D-frutose







lactose




Sacarose



RESULTADOS DOS ENSAIOS





A


B

C

D

E

F

G

H

I

I



II



III



IV



V



VI



VII



VIII



IX



X



Observaes:








CONCLUSES





Amostra


Identificao

A



B



C



D



E



F



G



H



I