Diagnstico microbiolgico del

gnero Streptococcus
TM Pedro Alarcn
Laboratorio de Referencia
Cocaceas Gram positivas
Mayo 2011
Dominio
Phylium
Clase
Orden
Familia
Genero
Bacterias
Firmicutes
Bacilli
Bacillales
Lactobacillales
Staphylococcaceae
Lactobacillaceae Aerococcaceae Carnobacteriaceae
Gemella
Enterococcaceae Leuconostocaceae Streptococcaceae
Taxonomia
Pediococcus Aerococcus
Abiotrophia
Dolosicoccus
Eremococcus
Flaklamia
Globicatella
Ignavigranum
Alloiococcus
Dolosigranulum
Granulicatella
Enterococcus
Melissococcus
Tetragenococcus
Vagococcus
Leuconostoc
Oenococcus
Weissella
Streptococcus
Lactococcus
Bergey's Manual (September 2009)
Gnero Streptococcus
-Hemolticos
-Hemolticos
-Hemolticos
Los Streptococcus son un gnero de Bacterias Gram positivas, esfricas de
menos de 2 um de tamao. Estas bacterias crecen en cadenas o pares,
donde cada divisin celular ocurre a lo largo de un eje. De all que su
nombre, del Griego streptos, significa que se dobla o retuerce con facilidad,
como una cadena.
Caractersticas Generales del genero
Streptococcus
Son bacterias anaerobias facultativas
La mayora de las especies crece en un ambiente con CO2
(5%), son capnofilos
Son homofermentativos, producen acido lctico a partir de
la fermentacin de la glucosa sin formacin de gas
Son catalasa negativo
Son oxidasa negativo
Forman cadenas cuando crecen en medios lquidos
Algunos poseen capsula, la cual los permite serotipificar
Pared Celular de Gram positivo
Tincin de Gram
Reaccin de Catalasa
Streptococcus hemolticos
Grupo viridans heterogneo e incluye
varios subgrupos
grupo mitis
grupo anginosus
grupo mutans
grupo salivarius
grupo bovis
grupo sanguis
Grupo mitis
Asociado a endocarditis y caries dentales
Streptococcus mitis : En prtesis y vlvulas
Streptococcus oligofermentans
Streptococcus oralis : En prtesis y vlvulas
Streptococcus gordonii
Streptococcus cristatus
Streptococcus infantis
Streptococcus peroris
Streptococcus australis
Streptococcus pneumoniae
Grupo anginosus
Asociado a abscesos subcutneos y rganos
Streptococcus anginosus : Tracto urogenital,
abscesos abdominales, tejidos blandos, cabeza
y cuello
Streptococcus constellatus : Tracto Respiratorio
subespecies constellatus y subespecie
pharyngis
Streptococcus intermedius : En absceso de
cerebro e hgado
Grupo mutans
Asociado a endocarditis y caries dentales
Streptococcus mutans : En placa bacteriana
(principal agente productor de caries y bacteremia)
Streptococcus sobrinus : En placa bacteriana
(dental)
Streptococcus criceti (animales)
Streptococcus ratti (animales)
Streptococcus downei (animales)
Streptococcus macacae (animales)
Streptococcus ferus (animales)
Grupo salivarius
Asociado a endocarditis y caries dentales
Streptococcus salivarius : En boca,
especialmente lengua, mucosa y saliva.
(bacteremia, endocarditis y meningitis)
Streptococcus vestibularis : En vestbulo oral
Streptococcus thermophilus : En lecheras
Streptococcus hyointestinalis: En tripas de cerdo
Grupo bovis
Infeccin del tracto biliar y urinario, endocarditis
Streptococcus infantarius II.1 (humanos)
*subsp. infantarius y subsp. coli
Streptococcus alactolyticus (animales)
Streptococcus equinus/bovis(animales)
Streptococcus gallolyticus
*Streptococcus gallolyticus subsp. gallolyticus (I)
(cancer gastrointestinal)
*Streptococcus gallolyticus subsp.pasteurianus II.2
(meningitis)
*Streptococcus gallolyticus subsp.macedonicus
Grupo sanguis/sanguinis
Asociado a bacteremias
Streptococcus sanguis biotipo 1
Streptococcus sanguis biotipo 2
Streptococcus sanguis biotipo 3
Streptococcus parasanguis
Streptococcus gordonii
Streptococcus sinensis
Aislados en humanos
Diferenciaci Diferenciaci n fenotipica de n fenotipica de Streptococcus Streptococcus grupo grupo viridans viridans
- - hem hem lisis, lisis, LAP +, PYR LAP +, PYR - - , Vancomicina S , Vancomicina S
Grupo
viridans
Arginina
Dihidrolasa
Hidrlisis de la
Esculina
Acetoina
(VP)
Manitol Sorbitol Lactosa Actividad
Ureasa
Grupo
Sanguis
+ + - - - + -
Grupo
Mitis
- - - - - + -
Grupo
Mutans
- + + + + + -
Grupo
Salivarius
- + + - - + +
Grupo
Anginosus
+ + + - - + -
Grupo
Bovis
- + + v - + -
LAP: Leucina-aminopeptidasa PYR: Pirrolidonil-arilamidasa
Flujograma de diferenciacin de Streptococcus grupo viridans
LAP (+), PYR (-),Lactosa (+), Vancomicina sensible
Hidrlisis de Arginina
(+) (-)
grupo sanguis
grupo anginosus
grupo mitis
grupo bovis
grupo mutans
grupo salivarius
Produccin de Acetoina (VP)
(+) (-)
grupo anginosus
aroma dulce
grupo sanguis
Hidrlisis de la urea
(-) (+)
grupo salivarius
grupo bovis
grupo mutans
grupo mitis
Produccin de Acetoina
(+) (-)
grupo mitis grupo bovis
grupo mutans
Acidificacin de Sorbitol
(+) (-)
grupo bovis
grupo mutans
Latex D (+)
Bilis esculina (+)
Nacl (-)
GENERO LAP PYR SUSCEP.
VANCOMICINA
MOVILI
DAD
CALDO
SAL 6.5%
Enterococcus + + S/R V +
Abiotrophia + + S - -
Granulicatella + + S - -
Aerococcus V V S - +
Helcococcus - + S - +
Leuconostoc - - R - V
Weisella - - R - +
Pediococcus + - R - V
Tetragenococcus + - S - +
Gemella V + S - -
1- Caractersticas fenotipicas de otros Gneros
bacterianos
Que presentan - hemlisis, Catalasa negativa
GENERO LAP PYR SUSCEP.
VANCOMICINA
MOVILI
DAD
CALDO
SAL 6.5%
Vagococcus + + S + +
Alloiococcus + + S - +
Globicatella - + S - +
Facklamia + + S - +
Dolosigranulum + + S - +
Ignavigranum + + S - +
Dolosicoccus - + S - -
Eremococcus - - S - +
Lactococcus + + S - V
2- Caractersticas fenotpicas de otros Gneros
bacterianos
Que presentan - hemlisis, Catalasa negativa
G
r
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4
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1
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0
10
20
30
40
50
60
N
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r
o
Streptococcus grupo viridans (n:133)
Laboratorio de Referencia Cocaceas Gram positivas
Ao 2010
Streptococcus grupo mitis
Streptococcus pneumoniae
Kawamura et al. 1995 en estudio basado en
comparacin de secuencias de genes de
16S de rRNA encuentra una estrecha
relacin filogentica entre S. pneumoniae y
Streptococcus grupo viridans, sugiere
incluirlo como parte del grupo mitis
Streptococcus pneumoniae
Cocaceas gram Positivas
capsuladas con un tamao de 0.5
a 1.2 um de dimetro, dispuestas
en pares o diplos lanceolados
Son anaerobias facultativas
Para su crecimiento y desarrollo
necesitan de una atmosfera de 8 a
10 % de CO2
Presenta colonias redondas,
mucosas y no pigmentadas, de 1 a
3 mm de dimetro, las cuales
presentan un aspecto umbilicado,
con una depresin central
producida por una autolisis
progresiva.
Caractersticas generales:
Factores de virulencia
Streptococcus pneumoniae
Adherencia( pspA y psaA): Capacidad de
adherirse a celulas blanco
Cpsula polisacrida: hay alrededor de 90
tipos capsulares
Pneumolisina (gen ply): Citotoxina que
destruye la membrana de globulos rojos
Neuraminidasa:(NamA-NamB) hidroliza
glucoproteinas y glucolipidos celulares
Autolisina (gen lytA): hidroliza la capa de
peptidoglican, permite la division celular
Proteasa para IgA: inactiva la IgA1
presente en las mucosas, facilitando la
adherencia y colonizacin
Hialuronidasa: diseminacin de los
organismos en los tejidos
Pruebas Bioquimicas
de Laboratorio
Control
Negativo
Reaccin
positiva
Solubilidad en bilis
Desoxicolato de sodio 10%
Susceptibilidad a optoquina 5ug
(Ethil hydrocupreina hydrochloride)
Serotipificacin por tcnica de Quellung
Mtodo de Referencia
Se produce el aumento (hinchazn)
de la capsula al aadir antisueros
capsulares especficos lo que la
hace visible microscpicamente
(100x)
Serotipos de Streptococcus pneumoniae de muestras
invasivas aos 2008 a 2010
Instituto de Salud Publica de Chile
1
1
1
3
3
3
14
14
14
19F
19F
7F
7F
7F
19F
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
200
Ao 2008 Ao 2009 Ao 2010
c
1
3
4
5
8
13
14
29
34
38
10A
11A
12F
15A
15B
15C
15F
16F
18A
18C
18F
19A
19F
22F
23A
23B
23F
24F
28A
33F
35F
6A
6B
7F
9A
9L
9N
9V
Otros
Susceptibilidad de Streptococcus pneumoniae aislados de
cuadros invasivos aos 2008-2010
Instituto de Salud Publica de Chile
Penicilina Meningitis (CIM)
Resistente Sensibles
Ao Total casos n % n %
2008 120 30 25 90 75
2009 113 37 32,7 76 67,3
2010 109 35 32,1 74 67,9
Penicilina No Meningitis (CIM)
Resistente Sensibles Intermedia
Ao Total casos n % n % n %
2008 796 0 0 780 97,9 16 2
2009 827 2 0,24 801 96,8 24 2,9
2010 677 3 0,44 659 97,3 15 2,2
Grupo de edad n
Ceftriaxona meningitis (CIM)
n
Ceftriaxona no meningitis (CIM)
Sensibles Intermedia Resistente Sensibles Intermedia Resistente
n % n % n % n % n % n %
< 12 meses 21 17 81,0 1 4,8 3 14,3 72 64 88,9 7 9,7 1 1,4
12-23 meses 13 11 84,6 1 7,7 1 7,7 90 79 87,8 11 12,2 0 0,0
24-59 meses 8 5 62,5 0 0,0 3 37,5 78 66 84,6 11 14,1 1 1,3
5 a 14 aos 9 9 100,0 0 0,0 0 0,0 41 41 100,0 0 0,0 0 0,0
15 a < 60 aos 37 34 91,9 2 5,4 1 2,7 171 164 95,9 6 3,5 1 0,6
60 aos 17 17 100,0 0 0,0 0 0,0 172 160 93,0 8 4,7 4 2,3
Sin edad 4 4 100,0 0 0,0 0 0,0 53 50 94,3 2 3,8 1 1,9
Total 109 97 89,0 4 3,7 8 7,3 677 624 92,2 45 6,6 8 1,2
Grupo de edad n
Eritromicina (KB o CIM)
n
SXT (KB o CIM)
Sensibles Intermedia Resistente Sensibles Intermedia Resistente
n % n % n % n % n % n %
< 12 meses 93 46 49,5 0 0,0 47 50,5 93 29 31,2 12 12,9 52 55,9
12-23 meses 103 45 43,7 0 0,0 58 56,3 103 39 37,9 15 14,6 49 47,6
24-59 meses 86 47 54,7 1 1,2 38 44,2 86 22 25,6 19 22,1 45 52,3
5 a 14 aos 50 46 92,0 0 0,0 4 8,0 50 18 36,0 18 36,0 14 28,0
15 a < 60 aos 208 171 82,2 0 0,0 37 17,8 208 105 50,5 46 22,1 57 27,4
60 aos 189 143 75,7 1 0,5 45 23,8 189 100 52,9 30 15,9 59 31,2
Sin edad 57 42 73,7 2 3,5 13 22,8 57 26 45,6 15 26,3 16 28,1
Total 786 540 68,7 4 0,5 242 30,8 786 339 43,1 155 19,7 292 37,2
Grupo de edad n
Cloranfenicol (KB o CIM)
Sensibles Resistente
n % n %
< 12 meses 93 91 97,8 2 2,2
12-23 meses 103 101 98,1 2 1,9
24-59 meses 86 84 97,7 2 2,3
5 a 14 aos 50 50 100,0 0 0,0
15 a < 60 aos 208 205 98,6 3 1,4
60 aos 189 187 98,9 2 1,1
Sin edad 57 57 100,0 0 0,0
Total 786 775 98,6 11 1,4
Susceptibilidad de Streptococcus pneumoniae aislados de
cuadros invasivos (n786)
Instituto de Salud Publica de Chile, ao 2010
Mtodos de Concentracin Inhibitoria
Mnima
Streptococcus beta hemoltico
Grupo Piognico
Streptococcus pyogenes
Streptococcus agalactiae
Streptococcus equi subespecie equi
Streptococcus equi subespecie zooepidermicus
Streptococcus dysgalactiae subespecie dysgalactiae
Streptococcus dysgalactiae subespecie equisimilis
Streptococcus canis
Streptococcus iniae
Streptococcus porcinus
Streptococcus phoacae
Streptococcus didelphis
Streptococcus urinalis
Streptococcus pyogenes
Caracteristicas:
Cocaceas gram positivas dispuestas en cadenas
Son colonias blancas de 1-2 mm de diametro con
una marcada zona beta hemlisis
Anaerobios facultativos
Inmoviles no formadores de esporas, capsulados
Son catalasa negativa
Rango de temperatura de crecimiento es de 25-45C
(optimo 37 C)
Streptococcus pyogenes
Pruebas de laboratorio:
Colonias beta-hemolticas con dimetro mayor a 0.5 mm
Catalasa -
PYR +
LAP +
Grupo de Lancefield A (ao 1933)
VP -
Bacitracina 0,04U Sensible
Cotrimoxazol Resistente
DNAsa Positiva
+ -
PYR
Streptococcus pyogenes
Factores de Virulencia
Protena M: principal factor de virulencia, confiere
resistencia a la fagocitosis por los polimorfonucleares,
en base a esta protena podemos serotipificar a
S.pyogenes, existen mas de 124 serotipos ( emm-
gene sequence typing)
Protena F:adherencia y evasin del sistema inmune
Acido Lipoteicoico: unin a fibronectina
Enzimas: estreptoquinasas, DNAsas, amilasas,
esterasas y hialuronidasas
Toxinas: Estreptolisinas son hemolisinas (S y O)
capaces de lisar eritrocitos, leucocitos y plaquetas;
Exotoxinas pirognicas A, B y C (SpeA ,SpeB y SpeC)
Streptococcus pyogenes
Cuadros clnicos en orden de frecuencia:
Enfermedades supurativas
Faringitis
Escarlatina
Imptigo
Erisipela
Celulitis
Fascitis necrosante (gangrena estreptoccica)
Sindrome del shock txico estreptoccico
Otras: sepsis puerperal, linfangitis, neumona,
bacteriemia, endocarditis, meningitis y artritis.
Enfermedades no supurativas
Fiebre reumtica
Glomerulonefritis postestreptoccica
emm typing
Secuenciamiento del gen emm que codifica a protena M
Reemplaza el convencional mtodo serologico (1943)
Se analiza la secuencia nucleotidica NH2-terminal (regin
hipervariable)
La definicin de un nuevo tipo emm se basa en la
identificacin de mas de 160 bases nucleotidicas (mayor
a 95% de similitud con el gen emm de referencia)
La secuencia de emm types puede ser encontrada online
en:
http://www.cdc.gov/ncidod/biotech/strep/strepblast.htm.
Los tipos emm mas frecuentemente encontrados son:
emm1, emm3, emm4, emm6, emm12, emm28 y emm89.
e
m
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1
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1
2
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8
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4
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0
10
9
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2
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1
1
1
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
C
a
n
t
i
d
a
d
emm types
emm types encontrados en cepas de Streptococcus
pyogenes (N62)
Laboratorio de Referencia ao 2010
SEROTIPO M SANGRE
LIQ.
ARTICULAR TEJIDOS
LIQ.
PERITONEAL SECRECIONES TOTAL
1 4 6 10
3 3 1 4
4 3 3
6 3 1 1 5
11 1 1
12 8 1 9
22 1 1
28 3 1 4
33 2 1 3
44 1 1
48 1 1
80 1 2 3 6
81 1 1 2
82 1 1
87 3 3
89 4 2 1 7
90 1 1
TOTAL 34 8 2 2 15 62
Distribucin de Serotipo M de S. pyogenes por muestra
Laboratorio de Referencia de Cocaceas gram positivas
Ao 2010
Streptococcus agalactiae
Caracteristicas:
Cocaceas gram positivas dispuestas en cadenas
Catalasa negativas
Colonias de color blanco con tamao >0.5mm de
diametro, presentando una pequea beta hemolisis
Anaerobio facultativo
Crece mejor en presencia de 5% CO2 (capnofilos)
Streptococcus agalactiae
Factores de virulencia
Capsula: Antifagocitaria, especificidad tipo, 10
antigenos capsulares
Beta hemolisina/citolisina: Lisis de clulas de
epitelio pulmonar
Acido Lipoteicoico: adherencia celular como
primer paso en la infeccin
Enzima hialuronato liasa (gen hylB): Participa
en la diseminacin rompiendo el acido hialuronico
de la matriz extracelular, tejido de placenta, tejido
fetal y liquido amnitico.
Patologas asociadas
*Es un importante patgeno en neonatos y
mujeres embarazadas produciendo cuadros de
bacteremia, meningitis, neumona, shock sptico
y neutropenia.
*Causante de bacteriuria en mujeres embarazadas
*Causa cistitis, pielonefritis, uretritis en hombres,
mujeres no embarazadas y nios
*Infeccin de heridas, artritis.
Streptococcus agalactiae
Pruebas bioquimicas :
- Catalasa -
- Ltex (C. Lancefield ) B
- Test de CAMP + (>98%)
- Hidrlisis de Hipurato de sodio +
- LAP +
- PYR -
Hidrlisis de Hipurato
+ -
+
-
Test CAMP
Prueba de CAMP
Streptococcus agalactiae (CAMP test positivo)
Staphylococcus aureus (ATCC 25923)
Arcanobacterium haemolyticum (CAMP reverso positivo)
Christie, Atkins, and Munch-Peterson, fue descrito en 1944.
Streptococcus agalactiae
Serotipificacin
La clasificacin serolgica est basada en la
identificacin de polisacridos ( Ia, Ib, II, III, IV,
V, VI, VII, VIII y IX) y protenas antignicas (C, R
y X)
Los serotipos mas comnmente aislados en
pases americanos son Ia, Ib, II y III
Serotipos VI y VIII han sido aislados en Japn
El serotipo III se asla con mayor frecuencia de
casos de sepsis neonatal y meningitis.
Serotipos SAG Sangre LCR
Liquido
Articular Secreciones Total
Ia 23 4 0 0 27
Ib 6 0 0 0 6
II 11 1 1 4 17
III 61 11 0 4 76
IV 4 0 0 1 5
V 8 0 0 0 8
VI 0 0 0 0 0
VII 2 0 1 0 3
VIII 0 0 0 0 0
NT 2 2 0 0 4
Total 117 18 2 9 146
Serotipos de Streptococcus agalactiae segn muestra
Resistencia de Eritromicina y Clindamicina en
Streptococcus pyogenes / Streptococcus agalactiae
Eritromicina y Clindamicina :S
Eritromicina : R y Clindamicina:S
Fenotipo M gen mef (macrolide efflux)
E
E
E
Cl
Cl
Cl
Eritromicina y Clindamicina :R
Fenotipo MLSc gen erm (erythromycin ribosomal
methylase)
Eritromicina y Clindamicina :R inducida
Fenotipo MLSi
E Cl
E
Cl
P
e
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40
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80
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120
C
a
n
t
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a
d
Antibioticos
Susceptibilidad Streptococcus pyogenes
ao 2009 n: 103
Laboratorio de Referencia
Sensible
Resistente
0
136
10
126
11
125
0
136
0
20
40
60
80
100
120
140
Cantidad
P
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V
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n
c
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m
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n
a
Antibioticos
Susceptibilidad de Streptococcus agalactiae
ao 2009 n:136
Laboratorio de Referencia
Sensible
Resistente
Fenotipos encontrados
M 1
MLSc 1
Resistencia a eritromicina 1.94%
Resistencia a clindamicina 0.97%
Fenotipos encontrados
M 1
MLSc 8
MLSi 2
Resistencia a eritromicina 8.08%
Resistencia a clindamicina 7.35%
Susceptibilidad de Streptococcus pyogenes
ao 2010 n:62
Laboratorio de Referencia
0
4
2
0 0
62
58
60
62 62
0
10
20
30
40
50
60
70
P
e
n
i
c
i
l
i
n
a
E
r
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t
r
o
m
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c
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C
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f
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t
a
x
i
m
a
V
a
n
c
o
m
i
c
i
n
a
Antibioticos
C
a
n
t
i
d
a
d
Sensible
Resistente
Susceptibilidad de Streptococcus agalactiae
ao 2010 n:147
Laboratorio de Referencia
0
9 7
0 0
146
137 139
146 146
0
20
40
60
80
100
120
140
160
P
e
n
i
c
i
l
i
n
a
E
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t
r
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V
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m
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c
i
n
a
Antibioticos
C
a
n
t
i
d
a
d
Sensible
Resistente
Fenotipos encontrados
M 3
MLSc 5
MLSi 2
Resistencia a eritromicina 6.16%
Resistencia a clindamicina 4.79%
Fenotipos encontrados
M 2
MLSc 2
Resistencia a eritromicina 6.45%
Resistencia a clindamicina 3.22%
Streptococcus - hemolticos
Grupos A,C, G con dimetro de colonia mayor a 0,5 mm
Streptococcus dysgalactiae
subespecie equisimilis :
- Catalasa -
- PYR -
- Ltex (Grupo Lancefield) A,C,G
- VP -
- Bacitracina 0.04u Resistente
Streptococcus - hemolticos no piogenico
Grupos A, C, G con dimetro de colonias menor a 0,5 mm
Streptococcus anginosus (A, C, G, F, )
Streptococcus constellatus ( A,C, F, )
Streptococcus intermedius (F)
- Catalasa -
- PYR -
- VP +
- Trehalosa +
- Sorbitol -
- +
Voges-Proskauer
Identificacin Streptococcus
- hemolticos
Grupo
Lancefield
Tamao
de
colonia
Especies PYR VP Hidrlisis
almidn
Sorbitol CAMP
A Grande S. pyogenes + - - - -
A,C,G,F Pequea
<5mm
Streptococcus
grupo anginosus
- + - -
A,C,G Grande S. dysgalactiae
subesp
equisimilis
- - - - -
B Grande S. agalactiae - - - - +
C Grande S. dysgalactiae
subesp
disgalactiae
- - - + -
C Grande S. equi subesp
equi
- - + - -
C Grande S. equi subesp
zooepidermicus
- - + + -
Control de Calidad
Staphylococcus aureus ATCC

25923
Streptococcus pneumoniae ATCC

49619
Staphylococcus aureus ATCC

BAA-976 (Test D Negativo)

Staphylococcus aureus ATCC

BAA-977 (Test D Positivo)

Streptococcus pyogenes ATCC

21547 (Latex A)
Streptococcus agalactiae ATCC

13813 (Latex B)
Streptococcus dysgalactiae sp dysgalactiae ATCC

27957 (Latex C)
Streptococcus dysgalactiae sp equisimilis ATCC

12394 (Latex G)
Comentarios generales
Streptococcus grupo viridans aislados de sangre
u otros sitios estriles (LCR) se debe hacer
estudio de susceptibilidad a PEN o AMP solo
por mtodo Concentracin Inhibitoria Mnima.
Streptococcus beta hemolticos del grupo
anginosus se les debe hacer antibiograma de
grupo viridans.
Los test de susceptibilidad a penicilina y otros -
lactmicos aprobados por la FDA para el
tratamiento de Streptococcus pyogenes o
Streptococcus agalactiae no es necesario
realizarlo de rutina, como tambin para
vancomicina, ya que no se han reconocido
cepas resistentes. Cualquier cepa considerada
no susceptible DEBE enviarse al laboratorio de
referencia para su confirmacin.
MUCHAS GRACIAS
palarcon@ispch.cl