FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

DEPARTAMENTO BIOMEDICO
UNIDAD BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR
CURSO FISIOLOGIA CELULAR II AO BIOTECNOLOGIA
GUIA TRABAJOS PRACTICOS DE METODOS DE ESTUDIO FISIOLOGIA CELULAR
INTRODUCCIN
La Fisiologa celular es aquella parte de la Biologa que estudia las diversas funciones que cumple la unidad
estructural y funcional de los seres vivos, como es la clula. Es decir, estudia los cambios que ocurren en
las diferentes estructuras de la clula, que finalmente producen cambios en el comportamiento de ella
(por ejemplo la incorporaci!n de ciertas molculas en la mitocondria le permite liberar energa". Estos
cambios constituyen procesos que pueden relacionar diversas estructuras de la clula entre s (por
ejemplo los cambios producidos en forma coordinada en los microt#bulos, los cromosomas, la envoltura
nuclear, permiten el proceso de mitosis" o relaciona estructuras de la clula con el medio ambiente (por
ejemplo los ribosomas, el $E$, los %$&m, %$&r, %$&t y el 'olgi, constituyen los procesos de sntesis y
secreci!n de protenas".
En el estudio de la clula para conocer todos estos procesos, debe utili(ar instrumentos y procedimientos
que le permitan observar y manipular los diversos componentes celulares. La diferenciaci!n de las clulas
para constituir los distintos tejidos, permite obtener clulas que sirven como modelo o sistema de estudio
de los procesos celulares. )or ejemplo, las raicillas de las pl!"#las, son clulas que sirven de modelo
perfecto para el estudio de la divisi!n celular o la mitosis.
*os elementos que sirven como modelos de la actividad celular son los cili$s % &la'el$s, que corresponden
a prolongaciones de algunas clulas. En el caso de los cilios, sirven para movili(ar el medio contiguo a la
clula (epitelio respiratorio o reproductor". El flagelo, sirve para movili(ar el cuerpo celular, como es el
caso de algunos proto(oos o el espermato(oide. La actividad de estas estructuras es el reflejo de la
reserva energtica de la clula a travs de una organi(aci!n estructural caracterstica denominada
a($!e)a.
La primera actividad del laboratorio corresponde a la observaci!n de cilios de clulas de branquias de un
molusco y su objetivo es demostrar la importancia de estos elementos como un modelo de estudio de la
actividad de la clula en general y de algunas estructuras citoplasm+ticas como el citoesqueleto, en
particular. Este modelo de estudio sirve ampliamente como un mtodo para estudiar no s!lo la funci!n de
los componentes estructurales y moleculares del citoesqueleto, sino tambin como un sistema para probar
el efecto de numerosos compuestos sobre la actividad metab!lica de la clula. ,on numerosos los estudios
de actividad de compuestos qumicos farmacuticos midiendo la mayor o menor frecuencia del
movimiento ciliar
Las clulas de epidermis de !rganos vegetales constituyen un modelo ampliamente usado para obtener
informaci!n de la permeabilidad de las sustancias que entran o salen de la clula. -no de los componentes
de gran importancia en el proceso de permeabilidad celular es la *ac#$la p#ls"il, que es un organelo
caracterstico de las clulas vegetales, rodeados por una membrana denominada tonoplasto, que controla
el transporte de solutos .acia adentro y .acia afuera de la vacuola/ regulando el potencial .drico de la
clula a travs de la osmosis. La vacuola contiene iones inorg+nicos, +cidos org+nicos, a(#cares, en(imas,
cristales de o0alato de calcio, y una variedad de metabolitos secundarios (alcaloides, taninos" que
frecuentemente juegan un papel en la defensa de las plantas. %lgunas vacuolas tienen altas
concentraciones de pigmentos .idrosolubles, que le dan la coloraci!n a muc.as flores, .ojas y a la ra( de
remolac.a. Los colorantes vacuolares, de .ojas y flores sirven para atraer los insectos que transportan el
polen y, en parte funcionan como pigmentos protectores del e0ceso de radiaci!n. Las vacuolas pueden
almacenar protenas, especialmente en legumbres y cereales, es importante se1alar los granos de
aleurona, en las clulas de la capa de aleurona de los cereales (trigo, cebada" o en los cotiledones de
semillas de leguminosas (caraota, arveja, lenteja". %l germinar las semillas, las protenas son .idroli(adas
y los amino+cidos transferidos al embri!n en crecimiento. %lgunas vacuolas almacenan grasas como
oleosomas o cuerpos grasos, p.ej. el endosperma del $icinus communis (.iguerilla". Las vacuolas son ricas
en en(imas .idrolticas, como proteasas, ribonucleasas, y glicosidasas, que cuando se liberan en el citosol,
participan en la degradaci!n celular durante la senescencia. Las vacuolas tienen un p2 m+s +cido que el
citosol, cualquier e0ceso de iones de .idr!geno en el citosol es bombeado .acia la vacuola, mantenindose
la constancia del p2 citos!lico. En vista de la cantidad de sustancias que se acumulan en la vacuola, se .a
pensado de ellas por muc.o tiempo, que son como el botadero de productos de desec.os celulares
(sustancias erg+sticas". Las vacuolas se originan a partir de peque1as vacuolas en clulas j!venes,
meristem+ticas del +pice del tallo o de la ra(, las que crecen con la clula, absorbiendo agua por osmosis
y unindose unas con otras, .asta que se forman grandes vacuolas. Las peque1as vacuolas o provacuolas
parecen formarse a partir del aparato de 'olgi o del retculo endoplasm+tico.
SISTEMA NER+IOSO PERIF,RICO- ESTUDIO DEL SISTEMA NER+IOSO SOM.TICO.
El ,istema &ervioso ,om+tico (,&," es responsable de la respuesta motora, ya sea esta debida a
mecanismos de coordinaci!n conscientes o inconscientes.
En este caso el efector es el m#sculo esqueltico y la va nerviosa est+ formada por una #nica neurona
conocida como motoneurona. La unidad b+sica de contracci!n de un m#sculo esqueltico es la contracci!n
del grupo de fibras musculares que componen una unidad motora aislada consistente en una sola
motoneurona y todas las fibras musculares que reciben cone0iones sin+pticas de dic.a neurona. Estas
motoneuronas tienen sus somas en la mdula espinal e inervan las fibras musculares esquelticas. El
neurotransmisor liberado en la sinapsis neuromuscular es la %cetilcolina (%c." y en este caso tiene
siempre una acci!n e0citadora.
3ada unidad motora funciona seg#n el principio del 4todo o nada4, es decir, se activa solamente cuando la
intensidad del estmulo que le llega es suficiente para alcan(ar el umbral de disparo de su potencial de
acci!n. 3uando la motoneurona dispara un potencial de acci!n, todas las fibras musculares de dic.a
motoneurona se contraen simult+neamente. La %c. se libera en la sinapsis neuromuscular y las clulas
musculares se contraen. 53!mo entonces se producen en un m#sculo contracciones graduales6
2ay dos procesos neuronales que e0plican el efecto gradual de la contracci!n La s#)aci/! espacial y la
s#)aci/! "e)p$ral.
3onforme aumenta la intensidad de la corriente a lo largo del nervio aumenta el n#mero de unidades
motoras activadas de ese nervio, o lo que es lo mismo, se recluta un n#mero creciente de motoneuronas/
puesto que stas descargan al unsono, la cantidad total de %c. liberada aumenta y con ello se contrae un
n#mero de fibras musculares mayor, logrando as una gradaci!n en la contracci!n muscular. ,e llega al
lmite cuando se alcan(a el estmulo supram+0imo en el cual est+n todas las unidades motoras activadas.
Este proceso se denomina s#)aci/! espacial0
,e produce s#)aci/! "e)p$ral cuando en una unidad motora aumenta la frecuencia del estmulo. *e esta
manera, cuando los estmulos se suceden r+pidamente, cada contracci!n empie(a antes de que .aya
terminado la contracci!n precedente y el m#sculo se acorta progresivamente. Llega un momento en que se
produce una contracci!n sostenida de todo el m#sculo cuando todas sus unidades motoras .an sido
activadas por un tren de impulsos de una determinada frecuencia. La frecuencia mnima de estimulaci!n
necesaria para producir una contracci!n sostenida de todo el m#sculo es la frecuencia de tetani(aci!n y
su valor vara seg#n el tipo de m#sculos.
OBJETI+OS-
a. 3onocer los cilios y las clulas que los contienen e inferir la funci!n que cumplen
b. 3onocer algunos factores que modifican la actividad celular
c. 3onocer algunas clulas vegetales e inferir la funci!n e importancia de las vacuolas
d. 3onocer la preparaci!n neuromuscular como modelo de estudio de la actividad elctrica de las
clulas nerviosa y muscular.
CUESTIONARIO-
a. 57u son los cilios y flagelos6 57u funci!n cumplen en las clulas que los poseen6.
b. 57u son las vacuolas de las clulas vegetales6 53u+l es la funci!n que cumplen6
c. 57u es una preparaci!n neuromuscular6 5)ara qu se usa6 57u importancia tiene en el estudio de
la fisiologa de la clula muscular y nerviosa6
ACTI+IDADES-
a0 O1ser*aci/! de cili$s e! 1ra!2#ias de c3$ri"$0
Las branquias se e0traen de un c.orito, cort+ndolas con una tijera. ,e observan como una capa fina
transparente. -na ve( cortadas p!ngalas en agua de mar filtrada y corte trocitos peque1os para poner
sobre el portaobjeto. 3ubre cuidadosa y r+pidamente y observe. . 57u aspecto presenta la orilla de las
branquias6 5)uede observar las estructuras en forma individual6 57u velocidad presentan los elementos
m!viles6 53!mo vara esa velocidad6 5*e qu depende la variaci!n de la velocidad del movimiento6
.%gregue una gota de a(ul de metileno en el borde del cubreobjetos y observe nuevamente. *escriba su
observaci!n.
10 O1ser*aci/! de *ac#$la de las c4l#las *e'e"ales
8ome una .oja de Elodea sp. y prepare un montaje .#medo. 9bserve bajo microscopio. *ibuje una clula
observada y coloque los nombres correspondientes
3oloque una gota de soluci!n de &a3l al :; < en el borde del cubreobjetos.
3ada => segundos, agregue otra gota de la soluci!n .asta observar alg#n cambio en las clulas.
Esquematice.
53u+ntas gotas de &a3l agreg! .asta observar alg#n cambio6 *escrbalo e interprete los resultados.
3oloque a.ora un papel de filtro en el borde del cubreobjetos y absorba la mayor cantidad posible de
soluci!n salina. %gregue agua destilada el borde del cubreobjetos, gota tras gota. 9bserve
cuidadosamente las clulas. Elabore las conclusiones de esta actividad por escrito.
)uede repetir el e0perimento utili(ando una fina porci!n de epidermis de .oja de repollo colorado, o con
epidermis de ptalos de colores anaranjado?roji(os. La presencia de pigmentos antoci+nicos (o carotenos,
0ant!filas" contenidos en vacuolas en las clulas vegetales, permitir+ una mejor observaci!n de los
cambios de volumen de dic.as vacuolas en respuesta a los cambios en tonicidad del medio e0tracelular
c0 O1ser*aci/! de #! )$!"a5e de preparaci/! !e#r$)#sc#lar
)rotocolo e0perimental
? *isecar el m#sculo correspondiente
? Locali(ar el nervio correspondiente
? ,eparar dic.o nervio de la mdula
? ,eparar los paquetes musculares que rodean el fmur y atar una .ebra de .ilo en el ci+tico para la
manipulaci!n del mismo.
? Liberar el nervio tirando del .ilo
? 2umedecer el nervio continuamente con buffer $inger
? %tar un .ilo largo a dic.o tend!n.
3onectar adecuadamente el sistema elctrico para la estimulaci!n y registro de la actividad.
9bserve cuidadosamente la preparaci!n y .aga un esquema de ella.