Anda di halaman 1dari 41

Model Obesitas Pada Tikus sebagai Metode............

MODEL OBESITAS PADA TIKUS SEBAGAI METODE


UNTUK MENJELASKAN MEKANISME PENGARUH
BARIATRIC SURGERY TERHADAP
PENGENDALIAN OBESITAS
R S U
HAJI
SURABAYA
Oleh :
Dr.dr. Koernia Swa Oetomo, SpB. FINACS. FICS(K)Trauma
RUMA SAKIT UMUM A!I
SURABA"A
#$%&
DAFTAR ISI
Daftar Isi......................................................................................................... i
Daftar Singkatan & Istilah..............................................................................ii
Daftar Gambar................................................................................................iv
Daftar Tabel....................................................................................................v
Ringkasan.......................................................................................................vi
Summary........................................................................................................vii
Bab I. Pendahuluan........................................................................................ 1
1.1. LatarBelakang........................................................................ 1
Bab II. Pembahasan........................................................................................
!.1. Tikus "#del $besitas...........................................................................
!.1.1 Tikus "#del $besitas "#n#genik.............................................
!.1.!. Tikus "#del $besitas P#ligenik...............................................%
!.1. Diet-Induced Obesity&DI$'.......................................................(
!.!. Teknik $)erasi *d+ustable bariatric surgery )ada............................,
!.!.1. Pengamatan -asil $)erasi L*GB..........................................,
!. "et#de Pemeriksaan Bebera)a Parameter *di)#s#)ati.......................1.
!.% Parameter *di)#s#)ati..........................................................................1.
!.%.1 Le)tin.........................................................................................1.
!.%.! *di)#nektin...............................................................................1!
!.%. /as)in01.....................................................................................1%
!.%.% 1hemerin....................................................................................12
!.%.2 Teknik Immun#hist#kimia...........................................................1(
!.%.(. 3LIS* &Enzyme-Linked Immunosorbent ssay'.........................!
!.%.4. Identifikasi dengan met#de 5estern bl#t.................................. !(
!.%.6. "et#de 7l#89yt#metery.............................................................!(
B*B III. :esim)ulan..................................................................................... !6
Daftar Pustaka................................................................................................ !6
i
DAFTAR SIN'KATAN DAN ISTI(A
*1RP ; adi)#9yte 10rea9tive )r#tein
*DIP$R ; adi)#ne9tin re9e)t#r
D!" : di#ocyte !ecreted "actor
*GRP ; gouti-$elated Pe#tide
*GT ; *ngi#tensin#gen
*P01 ; *9tivat#r )r#tein01
aP! ; *di)#9yte )r#tein !
*T70( ;*9tivating trans9ri)ti#n fa9t#r0(*TP
*TP ; aden#sin tri)h#s)ate
B"I ; B#dy "ass Inde<
B"R ; basal metab#li9 rate
1=3BP ; 11**T=enhancer-binding #rotein
13TP ; 1h#lesteryl ester transfer )r#tein
%O& : cycloo'ygenase
1RP ; 10rea9tive )r#tein
D"- ; Dorsomedial (i#otalamic )ucleus
3R ; 3nd#)lasmi9 reti9ulum
E$* : E'tracellullar !ignal $egulated *inase
7*BP ; +atty acid binding #rotein
77* ; free fatty a9id
7I>> ; "ound in In+lammatory ,one
GL?T ; Glu9#se trans)#rter
-DL ; -igh density li)#)r#tein
-DL ; -igh0density li)#)r#tein
-SL ; hormone-sensiti-e li#ase
I:: ; Inhibit#r #f nu9lear fa9t#r .B kinase
IL ; interleukin
IGT ; Im)aired glu9#se t#leran9e
IRS ; insulin rece#tor substrat-/
@*: ; 0anus *inase
@A: ; 10@un A0terminal kinase
LDL ; l#8 density li)#)r#tein
LPL ; li)#)r#tein li)ase
LPS ; Li)#)#lysa99haride
LRb ; le)tin re9e)t#r b
MP* :Mitogen acti-ated Protein *inase
"1%R ; rese)t#r0melan#k#rtin%
"1P01 ; "#n#9yte 9hem#attra9tant )r#tein01
"I7 ; "igrati#n inhibit#ry fa9t#r
MIP : Macro#hage In+lammatory #rotein
mT$R ; "ammalian target #f ra)amy9in
A31P ; Aati#nal 9h#lester#l edu9ati#n )r#gram
A37* ; nonesteri+ied +atty acid
A7B ; nu9lear fa9t#r ka))a Beta
APB ; neur#)e)tide B
ii
P*I01 ; )lasmin#gen a9tivated inhibit#r
P3R: ; P:R0like eukary#ti9 initiati#n fa9t#r !a kinase
PG3 ; )r#staglandin
PI1* : #hos#hoinositol-1 kinase
P:B ; Pr#tein kinase B
P:1 ; Pr#tein kinase 1
P$"1 ; Pr#0#)i#melan#k#rtin
PP*R ; )er#<is#me )r#liferat#r a9tivated re9e)t#r
P/A ; Paraventri9ular Au9leus
PBB ; #e#tide 22
RBP% ; $etinol 3inding Protein
R301 ; In#sit#l0reCuiring enDyme01
ST*T ; !ignal Transducer and cti-ators o+ Transcri#tion
T33 ; t#tal energy e<)enditure
TG74 ; Transf#rming gr#8th fa9t#r 4
TLR ; T#ll0like re9e)t#r
TA7 ; tum#r ne9r#sis fa9t#r
T>D ; thiazolidinedione
?PR ; ?nf#lded )r#tein res)#nse
/S"1 ; vas9ular sm##th mus9le 9ell
/3G7 ; /as9ular end#thelial gr#8th fa9t#r
/LDL ; -ery lo5 density li#o#rotein
/A ; /entr#medial -y)#thalami9 Au9leus
5*T ; 6hite di#ose Tissue
iii
DAFTAR 'AMBAR
Gambar 1. Gambaran gastric banding )ada tikus. Gaster dibagi..........................,
Gambar !. 7#t#mikr#graf +aringan )aru +anin g#rilla )ada fase akhir gestasi.......1,
Gambar . Densitas rese)t#r le)tin )ada +aringan lemak.......................................1,
Gambar %. Densitas Rese)t#r Le)tin.....................................................................1,
iv
DAFTAR TAB)(
Tabel 1. Perbedaan fen#ti) antara m#del tikus #besitas dengan 9ara diet.............4
Tabel !. :#m)#sisi diet tinggi lemak yang digunakan )ada m#del......................6
Tabel . :#m)#sisi Larutan )ada 3LIS*............................................................!2
v
RIN'KASAN
$besitas didefinisikan sebagai k#ndisi abn#rmal atau kelebihan lemak
yang serius dalam +aringan adi)#se sehingga menyebabkan ketidakseimbangan
energi. Pengendalian asu)an makanan men+adi )enting dalam kaitannya dengan
#besitasE karena sebagian besar +aringan lemak ini ter)usat di )erut yang
selan+utnya men+adi #besitas viseral. *di)#s#)ati &Flemak sakitF' didefinisikan
sebagai )erubahan )at#genisitas anat#mi +aringan adi)#sa yang ter+adi karena
tidak ada keseimbangan kal#riE sehingga menghasilkan res)#n )at#fisi#l#gi
end#krin dan kekebalan yang da)at menyebabkan )enyakit metab#lik &Bays et al7
!..6'. Se9ara )at#fisi#l#giE #besitas dan k#nse) adi)#s#)ati ditandai dengan
hi)ertr#)i dan hi)er)lasi +aringan adi)#se melalui )r#ses diferensiasi dari
)readi)#sit men+adi adi)#sit matang &mature adi#ocyte'. Pemahaman mekanisme
#besitas dan hubungannya dengan fa9t#r resik# masih belum banyak diketahui.
:arena itu di)erlukan )engembangan m#del #besitas )ada he8an 9#ba. *da dua
tikus m#del #besitas yaitu tikus m#del dengan mutasi genetik dan dengan diet
untuk menginduksi #besitas. *da bebera)a tikus m#del #besitas dengan mutasi
genetik se)erti Lethal 2ello5 Mutant Mouse &*
y
'E Ob8ob dan db8db7 Tsumura
!uzuki Obese Diabetes 9T!OD: Mouse7 Tikus "1(E tikus :u# :#nd#E ,ucker
"atty $atE 6istar "atty $atE dan Diet0Indu9ed $besity &DI$'. Di Ind#nesia
)enggunaan tikus m#del mutasi genetik belum ada karena itu )ada )enelitian ini
akan digunakan tikus m#del #besitas dengan )emberian diet tinggi lemak.
Pentingnya )enatalaksanaan #besitas mend#r#ng untuk dilakukan )en9egahan
atau )eng#batan #besitas. Salah satu met#de yang sudah diketahui adalah met#de
teknik bariatric surgery )ada tikus. "ekanisme bariatric surgery dalam
)erbaikan fungsi adi)#sit masih belum diketahui sehingga )erlu dikembangkan
m#del he8an yang da)at menggambarkan )eranan bariatric surgery untuk
)enatalaksanaan #besitas. La#arosco#ic ad;ustable gastric banding &L*GB'
adalah )enem)atan sili9#n inflatable gastri9 band h#riD#ntal mengellingi bagian
atas gaster. :euntungan L*GB adalah gastri9 banding tidak mengganggu
)enyera)an makanan sehingga tidak ter+adi kekurangan vitamin. :arena itu
ad;ustable gastric banding )ada tikus meru)akan m#del yang sesuai untuk
menginvestigasi efek bariatric surgery )ada tikus m#del #besitas.
:ata :un9i ; tikus m#del #besitasE ad;ustable gastric banding7 adi)#s#)ati
vi
SUMMAR"
$besity is defined as a 9#nditi#n #f abn#rmal #r e<9ess fat in adi)#se tissue s#
seri#us 9ause #f energy imbalan9e. 1#ntr#lling f##d intake is im)#rtant in relati#n
t# #besityE be9ause m#st #f the fat tissue is 9#n9entrated in the st#ma9h 8hi9h
then be9#mes vis9eral #besity. *di)#s#)ati &Fsi9k fatF' is defined as the 9hange in
)ath#geni9ity #f the anat#my #f adi)#se tissue that #99ur be9ause there is n#
balan9e #f 9al#riesE resulting in the )ath#)hysi#l#gy #f end#9rine and immune
res)#nses that 9an lead t# metab#li9 diseases &Bays et alE !..6'. The
)ath#)hysi#l#gyE #besity and adi)#s#)ati 9#n9e)t 9hara9teriDed by hy)ertr#)hy
and hi)er)lasi adi)#se tissue thr#ugh a )r#9ess #f differentiati#n fr#m )readi)#sit
int# mature adi)#9ytes &mature adi)#9yte'. ?nderstanding the me9hanism #f
#besity and its relati#nshi) 8ith risk fa9t#rs is still n#t 8ell kn#8n. 5hat is
needed is the devel#)ment #f #besity in animal m#dels. There are t8# m#use
m#dels #f #besity that is m#use m#dels 8ith geneti9 mutati#ns and 8ith diet t#
indu9e #besity. There are several m#use m#dels #f #besity 8ith a geneti9 mutati#n
su9h as the "utant "#use Lethal Bell#8 &*y'E $b = #b and db = dbE Tsumura
SuDuki $bese Diabetes &TS$D' "#useE Rat "1(E rat :u# :#nd#E >u9ker 7atty
RatE 5istar 7atty RatE and Diet0Indu9ed $besity &DI$'. In Ind#nesia the use #f rat
m#dels #f geneti9 mutati#n has n#t been there be9ause it is in this resear9h 8ill be
used rat m#dels #f #besity 8ith the )r#visi#n #f high0fat diet. The im)#rtan9e #f
the management #f #besity en9#uraged t# d# the )reventi#n #r treatment #f
#besity. $ne meth#d that is kn#8n is a meth#d #f bariatri9 surgery te9hniCue in
rats. "e9hanism #f bariatri9 surgery in the re)air fun9ti#n #f adi)#9ytes is still
unkn#8n s# the need t# devel#) animal m#dels that 9an des9ribe the r#le #f
bariatri9 surgery f#r the treatment #f #besity. La)ar#s9#)i9 ad+ustable gastri9
banding &L*GB' is an inflatable sili9#ne gastri9 band )la9ement #f the h#riD#ntal
u))er gastri9 mengellingi. *dvantages L*GB is gastri9 banding d#es n#t interfere
8ith the abs#r)ti#n #f f##d s# there is n# sh#rtage #f vitamins. Be9ause it is
ad+ustable gastri9 banding in rats is a suitable m#del t# investigate the effe9ts #f
bariatri9 surgery #n rat m#del #f #besity.
:ey8#rds; #besity m#del #f ratE ad+ustable gastri9 bandingE adi)#s#)haty
vii
BAB I
*)NDAU(UAN
%.%. (atar Be+a,an-
$besitas didefinisikan sebagai k#ndisi abn#rmal atau kelebihan lemak
yang serius dalam +aringan adi)#se sehingga menyebabkan ketidakseimbangan
energi. "#rtalitas dan m#rbiditas #besitas semakin meningkat dan )eningkatan ini
terkait dengan fa9t#r resik# se)erti diabetes mellitus ti)e !E hi)ertensiE kankerE
gangguan )ernafasanE #ste#arthritisE hi)ertensi dan hi)ertrigliseritemia &"isra dan
:huranaE !..6'. $besitas disebabkan multifakt#rial se)erti dietE kebiasaan )#la
hidu)E geneti9E )#lutanE agen infeksi dan end#krin. ?ntuk itu )erlu di)ahami
mekanisme )at#fisi#l#gi #besitas terutama mekanisme yang men+elaskan
hubungan antara #besitas dengan fa9t#r resik# lainnya.
Pengendalian asu)an makanan men+adi )enting dalam kaitannya dengan
#besitasE karena sebagian besar +aringan lemak ini ter)usat di )erut yang
selan+utnya men+adi #besitas viseral. Pengendalian asu)an makanan melibatkan
)r#ses bi#kimia antara lain keterlibatan bebera)a h#rm#n dan sit#kin yang
menentukan rasa la)ar dan kenyang. Pengendalian asu)an makanan tersebut
melibatkan system syaraf )usat dan )erifer &PeGrusse et al.E !..1'. *)abila tidak
ter+adi keseimbangan energi dengan asu)an makanan maka akan menyebabkan
disfungsi adi)#sit sehingga inilah yang melatarbelakangi timbulnya adi)#s#)ati.
*di)#s#)ati &Flemak sakitF' didefinisikan sebagai )erubahan )at#genisitas
anat#mi +aringan adi)#sa yang ter+adi karena tidak ada keseimbangan kal#riE
sehingga menghasilkan res)#n )at#fisi#l#gi end#krin dan kekebalan yang da)at
menyebabkan )enyakit metab#lik &Bays et al7 !..6'.
Se9ara )at#fisi#l#giE #besitas dan k#nse) adi)#s#)ati ditandai dengan
hi)ertr#)i dan hi)er)lasi +aringan adi)#se melalui )r#ses diferensiasi dari
)readi)#sit men+adi adi)#sit matang &mature adi#ocyte'. Pada sel )readi)#saE
mekanisme diferensiasi melibatkan &tiga' fa9t#r transkri)si yaitu Pero'isome
#roli+erator acti-ated rece#tor &PP*R'0E 11**T0enhancer binding #rotein
&1=3BP' dan sterol regulated enhancer binding #rotein &SR3BP'01. :etiga
fa9t#r tersebut menginduksi gen untuk mensintesis bebera)a sit#kin
&adi)#sit#kin'. Bebera)a adi)#sit#kin yang dikeluarkan #leh +aringan adi)#se
adalah le)tinE adi)#nektinE resistinE tumor necrosis +actor &TA7'0E interleukin-<7
vas)in dan 9hemerin. Sit#kin inilah yang menentukan fa9t#r resik# yang terkait
dengan #besitas &G#ralski et al7 !..4H -a+er et alE !..6'. Pemahaman mekanisme
#besitas dan hubungannya dengan fa9t#r resik# masih belum banyak diketahui.
:arena itu di)erlukan )engembangan m#del #besitas )ada he8an 9#ba.
"enurut :anasaki et al &!.11' ada dua tikus m#del #besitas yaitu tikus
m#del dengan mutasi genetik dan dengan diet untuk menginduksi #besitas. *da
bebera)a tikus m#del #besitas dengan mutasi genetik se)erti Lethal 2ello5
Mutant Mouse &*
y
'E Ob/ob dan db/db, Tsumura !uzuki Obese Diabetes 9T!OD:
Mouse7 Tikus "1(E tikus :u# :#nd#E ,ucker "atty $atE 6istar "atty $atE dan
Diet0Indu9ed $besity &DI$'. Di Ind#nesia )enggunaan tikus m#del mutasi
genetik belum ada karena itu )ada )enelitian ini akan digunakan tikus m#del
1
#besitas dengan )emberian diet tinggi lemak. Pentingnya )enatalaksanaan
#besitas mend#r#ng untuk dilakukan )en9egahan atau )eng#batan #besitas. Salah
satu met#de yang sudah diketahui adalah met#de teknik bariatric surgery )ada
tikus.
Pr#sedur bariatric surgery sam)ai saat ini semakin baik dan meru)akan
satu0satunya )ilihan untuk menurunkan berat badan se9ara signifikan sehingga
da)at bertahan dalam 8aktu yang lama &*ills et al7 !..6H *hima dan $seiyE !..6H
*rias et al7 !..,'. :eberhasilan bariatric surgery dalam )enanganan #besitas
adalah da)at menurunkan berat badan sekitar !. I %. kg dari berat badan a8al
dan )engurangan B"I sekitar 1. I 12 kg=m
!
. "ekanisme bariatric surgery dalam
)erbaikan fungsi adi)#sit masih belum diketahui sehingga )erlu dikembangkan
m#del he8an yang da)at menggambarkan )eranan bariatric surgery untuk
)enatalaksanaan #besitas &*hima dan $seiyE !..6'. La#arosco#ic ad;ustable
gastric banding &L*GB' adalah )enem)atan sili9#n inflatable gastri9 banding
h#riD#ntal mengellingi bagian atas gaster. :euntungan L*GB adalah gastri9
banding tidak mengganggu )enyera)an makanan sehingga tidak ter+adi
kekurangan vitamin &1ars#n et al7 !..%H Bult et al7 !..6'. :arena itu ad;ustable
gastric banding )ada tikus meru)akan m#del yang sesuai untuk menginvestigasi
efek bariatric surgery )ada tikus m#del #besitas.
2
BAB II
*)MBAASAN
$besitasE didefinisikan sebagai indeks massa tubuh &B"I'J . kg=m!E
meru)akan masalah kesehatan yang signifikan. $besitas telah men9a)ai )r#)#rsi
e)idemi gl#balE dan 8#rld mem)erkirakan bah8a ada lebih dari 1 milyar #rang
de8asa mengalami kelebihan berat badan sedangkan .. +uta mengalami #besitas.
Perubahan "asyarakat dan transisi giDi di seluruh dunia telah mend#r#ng e)idemi
#besitas selama bebera)a dekade terakhir. Pertumbuhan ek#n#mi serta
m#dernisasiE urbanisasi dan gl#balisasi )asar makanan adalah bebera)a fakt#r
yang telah memberikan k#ntribusi terhada) e)idemi #besitas. Penurunan aktivitas
fisik +uga telah dikaitkan dengan )eningkatan kesem)atan untuk menggunakan
trans)#rtasi #t#matisE memiliki tekn#l#gi di rumahE dan terlibat di lebih
)enge+aran rekreasi )asif &:#)elmanE !..6'.
$besitas dikaitkan dengan kematian dini melalui )eningkatan risik#
)enyakit kr#nisE termasuk diabetes ti)e !E )enyakit +antungE dan kanker tertentu.
Selain ituE #besitas berhubungan dengan kesulitan )ernafasanE masalah
muskul#skeletal kr#nisE sakit )inggangE masalah kulitE dan infertilitas. -asil
)enelitian e)idemi#l#gi menyebutkan bah8a mekanisme m#lekuler dari masalah
kesehatan yang terkait dengan #besitas belum banyak diketahui &:anasakiE !.11'.
Sebagian besar bukti mengusulkan masalah kesehatan terkait #besitas telah
di)er#leh dari analisis e)idemi#l#gi dari subyek manusiaE mekanisme m#lekuler
yang te)at dari masalah kesehatan terkait. Dalam tulisan iniE kami akan meringkas
la)#ran yang berhubungan dengan )at#l#gi #besitas dengan menggunakan m#del
he8an.
#.%. Ti,u. Mode+ O/e.ita.
*da bebera)a m#del tikus #besitas yaitu;
#.%.% Ti,u. Mode+ O/e.ita. Mono-eni,
Lethal Yellow Mutant Mouse(A
0
)
Di antara bebera)a tikus #besitas yang biasa digunakan dalam )enelitian
)ertama kali dila)#rkan adalah tikus mutasi agouti&agouti knockout mice'. *g#uti
adalah gen bertanggung +a8ab terhada) f#likel melan#sit untuk mem)r#duksi
)igmen merah = )he#melanin )igmen kuning dan menghambat )igmen hitam =
)igmen 9#klat &"atsunaga et al7 !...'. Lethal 2ello5 Mutant Mouse &*
y
'
meru)akan salah satu dari lima mutasi d#minan ag#uti dan telah digunakan
sebagai tikus m#del #besitas yang sangat baik &:anasaki et al7 !.11'. "utasi *
y
di9irikan dengan delesi DA* gen#mik )ada urutan basa nukletida sekitar 1!.014.
kbE sehingga ter+adi gangguan eks)resi ag#uti &Trevaskis et al7 !..2'. Tikus
m#del *
y
menun+ukkan bebera)a fen#ti) se)erti 8arna bulu kuningE #besitas
de8asaE diabetes ti)e0IIE hy)erle)tinemiaE )eningkatan )ertumbuhan se9ara linier
suse)tibilitas tum#r yang lebih tinggiE dan infertilitas &:anasaki et al7 !.11'.
Tikus m#del ini menun+ukkan )ertumbuhan +aringan adi)#sa yang berlebih
3
dimana tidak ter+adi )erubahan asu)an makanan sehingga mengalami )eningkatan
lemak akibat )erubahan metab#lisme energi. "#del ag#uti yang berlebih )ada
+aringan adi)#sa relevan dengan #besitas manusia karena eks)resi gen ag#uti +uga
ditemukan dalam +aringan adi)#sa manusia dan meningkat )ada +aringan adi)#sa
ti)e !. :emungkinan eks)resi ekt#)ik dari ag#uti di )ankreas tikus merangsang
)ele)asan insulin #leh )ankreas0sel Ksehingga da)at meningkatkan li)#genesis.
3ks)resi ag#uti transgenik di kulit tidak menginduksi #besitas akan teta)i lebih
mengarah )ada )eran ag#uti dalam #bes#genik&Grays#n et al7 !.1.'.

Pada tahun 1,%,E )eneliti menemukan tikus #besitas yang dihasilkan dari
mutasi gen #besitas &#b'. "utasi #b = #b adalah resesif dimana ter+adi mutasi )ada
gen le)tin. :arakterisasi mutasi ini adalah ter+adi delesi se)asang basa tunggal di
daerah )engk#de le)tin. Pr#tein le)tin ber)eran )enting dalam mengendalikan
nafsu makan. $leh karena itu )ada tikus #b = #b ter+adi keinginan makan tak
terkendali sehingga ter+adi #besitasE diabetes ti)e !E resistensi insulin dan
hy)erinsulinemia &Prasad et al7 !.1.'.
Tikus db = db diidentifikasi a8alnya )ada tahun 1,(( sebagai tikus m#del
#besitas. "utasi db &singkatan dari FdiabetesF' adalah mutasi yang ter+adi )ada
gen resesif aut#s#mal dimana ter+adi mutasi basa nukle#tida G men+adi T
sehingga sinyal le)tin terganggu. Gangguan sinyal le)tin di hi)#talamus
menyebabkan hy)er)hagia dengan hy)erle)tinemiaE resistensi insulinE dan
meningkatnya kadar insulin &:#dera et al7 !.11'.
#.%.#. Ti,u. Mode+ O/e.ita. *o+i-eni,
"eski)un m#del m#n#genik memberikan inf#rmasi )enting tentang
bi#l#gi #besitasE #besitas manusia kemungkinan besar dimediasi #leh bebera)a
gen. $leh karena ituE m#del )#ligenik lebih relevan )ada #besitas manusia. Strain
tikus #besitas Selandia Baru &A>$' adalah m#del tikus #besitas )#ligenik yang
menun+ukkan diabetes ti)e ! hanya )ada +antan. Tikus A>$ berat badan
meningkat dengan 9e)at selama ! bulan )ertama karena ter+adi hi)er)hagia yang
terkait dengan resistensi le)tinE meski)un memiliki gen le)tin dan rese)t#r le)tin
yang n#rmal. Di antara m#del tikus #besitas )#ligenikE fen#ti)e tikus A>$ yang
)aling +elek dengan +umlah lemak lebih dari %.L dari t#tal berat badan umur (
bulan. Selain ituE tikus A>$ menun+ukkan )enurunan aktivitas latihan
dibandingkan dengan k#ntr#l&@##stE !.1.'.
Tsumura Suzuki Obese Diabetes (TSOD) Mouse
Tikus #besitas TS$D +antan menun+ukkan hi)erglikemia dan
hy)erinsulinemia. Ailai rata0rata k#nsentrasi gluk#sa darah )ada tikus TS$D
meningkat !! mg = dl )ada 1 mingguE !(, mg = dl )ada 1( mingguE dan %(
mg = dl )ada !% minggu.Diabetes berat tidak berkembang karena TS$D tikus
menun+ukkan )eningkatan +umlahsel K dan melindungi sekresi insulin untuk
meng#ntr#l gluk#sa darah &IiDuka et al7 !..2'.
Ti,u. Mode+ M%1
4
Tikus "1(E sebuah m#del tikus #besitas )#ligenik yang dikembangkan
melalui seleksi +angka )an+ang selama sam)ai ( minggu. Tikus m#del "1(
menun+ukkan hi)er)hagiaE hi)erinsulinemiaE dan hi)erle)tinemia dibandingkan
dengan k#ntr#l. Tikus "1( +antan dan betina hi)erglikemia sedang dibandingkan
dengan k#ntr#l. :adar gluk#sa )ada tikus "1( adalah sekitar 2(L dan !!L lebih
tinggi )ada usia 6 minggu &*llan et alE !..%'.
Ti,u. Kuo Kondo (KK)
Tikus :: adalah m#del #besitas )#ligenik yang +uga menun+ukkan
diabetes ti)e !. Tikus :: ini dikembangkan di @e)ang dengan ukuran tubuh besar.
Tikus :: menun+ukkan fen#ti) hi)er)hagiaE hi)erinsulinemiaE resistensi insulin
dan #besitas m#derat )ada umur ! bulan. Strain tikus :: telah dim#difikasi
dengan mentransfer gen #besitas &*
y
'H tikus ::*
y
banyak digunakan untuk
)enelitian #besitas dan diabetes )ada )engu+ian tera)i eks)erimental &$kaDaki et
al7 !..!'.
Zucker att! "at (Z")

,ucker "atty $at adalah tikus m#del #besitas yang mengalami mutasi gen
lemak &fa' resesif aut#s#mal )ada kr#m#s#m 2. Gen fa meru)akan gen rese)t#r
le)tin.Tikus ini ditandai dengan hi)er)hagia dan #besitas yang mun9ul usia 2
minggu akibat akumulasi lemak subkutan. >7R +uga ditandai dengan resistensi
insulin teta)i kadar gula darah n#rmal &"artin01#rder# et al7 !.11'.
#istar att! "at (2FR)
Pada tahun 1,61E Ikeda et al7&1,61'mela)#rkan m#del lain tikus #besitasE
lemak tikus 5istar &57R'. Strain 57R di)er#leh dengan mentransfer gen fa dari
>7R &1 " strain' )ada tikus 5istar :y#t# yang mem)erlihatkan t#leransi rendah
gluk#sa. Tikus #besitas 57R umur minggu menun+ukkan )enyakit yang terkait
#besitas se)erti diabetes ti)e !E hy)erinsulinemiaE hi)erli)idemia. :elainan
metab#lik yang men#n+#l )ada 57R +antanE teta)i tidak )ada 57R betinaE yang
hanya menam)ilkan resistensi insulin ringan dan int#leransi gluk#sa. Ter+adi
diabetes )ada 57R teta)i tidak )ada >7RE meski)un ada mutasi fa &le)tin
rese)t#r' di kedua strainE hal ini da)at di+elaskan karena adanya fakt#r genetik
lainnya di 57R. Strain 57R banyak digunakan untuk )enelitian )ada diabetes
ti)e ! karena 57R menam)ilkan k#m)likasi diabetes se)erti nefr#)ati dan
neur#)ati &Imai et al7 !..'.
6istar "atty $at &57R' bisa di)akai untuk diet Induced Obesity sehingga bisa
di)akai untuk melihat )arameter adi)#s#)ati se)erti le#tin7 adi#onectin7 -as#in7
dan chemerin setelah dilakukan ad;ustable gastric banding. &Buka $n#aE!..(E'
#.%.3 Diet$%nduced Obesit!(DIO)
5
(igh-"at Diet. 7akt#r genetik dan lingkungan ber)eranan dalam
)erkembangan #besitas dan diet adalah salah satu fakt#r lingkungan utama yang
berk#ntribusi terhada) #besitas. Diet tinggi lemak &-7D' sering digunakan dalam
)enelitian #besitas sebagai m#del kekurangan n#n0le)tin. *da )erbedaan s)esifik
strain tikus dan -7D dalam karakteristik tikus m#del #besitas &Tabel 1'. Di antara
berbagai strainE tikus 124BL=(@ adalah yang )aling banyak digunakan untuk
-7D. Pada strain tikus 124E ada )erbedaan yang signifikan antara substrains
dalam meres)#n -7D. Tikus DI$ strain 124BL=(@E hy)erinsulinemiaE dan
resistensi insulin yang sama dengan )erkembangan )enyakit manusiaE teta)i tikus
124BL=:s@ menun+ukkan fen#ti)e yang kurang &Srinivasan dan Ramara#E !..4'.

Diet tinggi lemak menginduksi tikus men+adi #besitas dengan
memani)ulasi melalui asu)an makanan yang tinggi lemak. 5atanabe et al &!..('
mela)#rkan menemukan )eran anti#besit#geni9 asam em)edu &B*' )ada tikus.
B* telah diakui sebagai s#lubiliDers li)id sederhanaE yang ber)eranan )enting
dalam regulasi metab#lik yang k#m)leks. 5atanabe et al. menemukan bah8a diet
tinggi lemak ditambah dengan asam k#lat .E2LE menyebabkan B* ditemukan
dalam +umlah terbesarE men9egah berat badan dan adi)#sity tan)a )erubahan
+umlah asu)an makanan. -asil )enelitian tersebut menemukan bah8a B*
mengaktifkan =-#rotein-cou#ledT=$> rese#tor dan menginduksi dei#dinase ti)e
!. *ktivasi dei#dinase ti)e ! menghasilkan k#nversi tir#ksin &T%' untuk
trii#d#thyr#nine &T'E yang meningkatkan )engeluaran energi. Selan+utnyaE
senya8a TGR2E IAT0444E meniru efek metab#lik se)erti B* da)at menghambat
ter+adinya steat#sis )ada tikus diet tinggi lemak. Selan+utnyaE IAT0444
menginduksi efek in9retin melalui sekresi glukag#n )e)tida se)erti &GLP' 01 dan
t#leransi gluk#sa. Penelitian ini mengungka)kan )entingnya )#tensi B* untuk
)en9egahan diinduksi diet #besitas dan masalah kesehatan yang terkait &>hang et
al7 !..4'.
"et#de lain intervensi giDiE da)at men9egah kelainan metab#lisme yaitu
diet dengan asam amin# esensial ket#geni9 &:**' tinggi se)erti leusinE is#leusinE
valinE lisinE dan tre#nin. >hang et al. telah mela)#rkan bah8a makan tinggi leusin
)ada tikus men9egah #besitas yang diinduksi #leh diet tinggi lemak. Pemberian
diet 9am)uran :** tinggi akan term#dulasi +alur sintetis li)id dan )en9egahan
steat#sis hati dan resistensi insulin dengan )enurunan berat badan. "enariknya
se)erti tinggi0:** telah menun+ukkan )eningkatan sensitivitas insulin )ada
diabetesti)e !&A#gu9hi et al7 !.1.'. La)#ran0la)#ran ini menun+ukkan bah8a diet
tinggi lemak0he8an yang disebabkan #besitas bisa men+adi 9#nt#h yang baik
untuk tera)i eks)erimental dan )enelitian translasi untuk menemukan strategi baru
tera)i untuk e)idemi #besitas.
Ta/e+ %. *er/edaan 4enotip antara mode+ ti,u. o/e.ita. den-an 5ara diet dan
-eneti, (Srini6a.an dan Ramarao, #$$78Spea,man et al, #$$78 C+ee dan
Attie, #$$78 Buettner et al, ).
Strain :arakteristik
6
Diet Genetik
124BL=(@ Diet tinggi lemak da)at menginduksi
#besitas dan diabetes
Le)
#b=#b
menyebabkan
#besitas teta)i tidak
diabetes
124BL:S=@ "enginduksi #besitas dan diabetes teta)i
lebih lemah dari)ada 124BL=(@
Le)
#b=#b
menyebabkan
#besitas dengan diabetes
berat
DB*=! Lebih t#leran gluk#sa dibandingkan
124BL=(@
Le)
#b=#b
menyebabkan
#besitas dengan diabetes
berat
1!,sv Insulin rendahE lebih t#leran gluk#sa
dibandingkan strain lainnya
-#m#Dig#t alel db
menun+ukkan
hi)erglikemia ringan
BTBR $besitas abd#minal )erifer teta)i bukan
resisten insulin di he)ar
Le)
#b=#b
menyebabkan
#besitas dengan diabetes
berat
*=@ :adar gluk#sa rendahE resistensi #besitas
dan diabetes
Tidak ada la)#ran
B*LB=9 Sama dengan *=@E t#leransi gluk#sa Le)
#b=#b
menyebabkan
)enurunan adi)#sit dan
)eningkatan
term#genesis
1- T#leransi gluk#sa tinggi Tidak ada la)#ran
*:R Sensitif terhada) DI$ dengan
hi)erinsulinemia dan resistensi insulin
Tidak ada la)#ran
1*ST=3i :urus )ada umur 1! minggu karena -7D Tidak ada la)#ran
A#n#bese
diabeti9
%2L +at diet menginduksi hi)erglikemia
ringan dengan #besitas berat
Tidak ada la)#ran
Ae8 >ealand
$bese
Ter+adi sindr#ma metab#lik yang
menyeru)ai manusiaE da)at menginduksi
#besitas dan hi)erglikemi
Tidak ada la)#ran
"1( "eningkatkan berat badanE lemak dan
intake makananH baik +antan mau)un
betina ter+adi hi)erinsulinemia dan
khususnya )ada +antan ter+adi
hi)erglikemia sedang
Tidak ada la)#ran
5istar -7D da)at menginduksi #besitas dan
resistensi insulin Tidak ada la)#ran
Diet tinggi lemak yang digunakan dalam )enelitian adalah diet lemak yang
mengandung ! sam)ai dengan (.L kal#ri. -asil )enelitian menyebutkan bah8a
(. kkalL lemak digunakan untuk menginduksi #besitas )ada tikus. Bebera)a diet
tinggi lemak yang digunakan adalah diet yang mengandung lemak +enuh se)erti
7
minyak kela)aE lard7 bee+ talla5. Berikut ini adalah tabel yang menun+ukkan
k#m)#sisi diet yang digunakan untuk m#del tikus #besitas dengan high +at diet.
Ta/e+ #. Kompo.i.i diet tin--i +ema, 0an- di-una,an pada mode+ ti,u.
o/e.ita. ('a9da, #$$:'
8
#.#. Te,ni, Opera.i Ad9u.ta/+e bariatric sur&er! pada ti,u. mode+ o/e.ita.
Gambar 1. Gambaran gastric banding pada tikus. Gaster dibagi menjadi 2 kantong yaitu kardia dan
fundus dengan menempatkan adjustable silicone band dibawah gastroesophagealjunction
sehingga terbentuk kantong atas dengan volume kurang lebih 15 mL (Kanno et al, 2!"
-e8an 9#ba dibius dengan ..1ml=1.. gram berat badan ketamine se9ara
intra)erit#neal = intramuskuler. Pada bagian garis tengah atas abd#men diinsisi
dengan surgical blade )isau bedah ukuran 12 sam)ai dengan )erit#neum terbuka
kemudian di)asang retrakt#r. Gaster dikeluarkan kemudian dilakukan teknik
gastric banding dengan menem)atkan band karet diameter ( mm )an+ang dan !
mm lebarnya dan ditem)atkan melilingi bagian antara fundus dan kardia diba8ah
eso#hageal gastric ;unction sehingga gaster terbagi men+adi kant#ng atas dan
ba8ah &Gambar 1'. Band karet diusahakan tidak mengalami disl#kasi dengan
+alan men+ahit )ada dinding anteri#r gaster di dekat kurvatura min#r yang lainnya
dekat kurvatura may#r. Dinding abd#men ditutu) dengan +ahitan dua la)is
memakai chromic cat gut %. dan kulit memakai silk ?@. Berat badan dim#nit#r
setia) hari sam)ai hari ke01% &#ost o#erati-e day=P$D'. *ir masuk dan urin
diukur setia) hari sam)ai hari ke04 P$D &:ann# et al7 !..6'.
#.#.%. *en-amatan a.i+ Opera.i (A'B
L*GB menurunkan berat badan dibandingkan dengan k#ntr#l. Penurunan
berat badan ini diba8ah fase )ertumbuhan dari tikus. Tikus 5istar di)ilih sebagai
m#del eks)erimental bariatric surgery karena metab#lisme telah di)eriksa se9ara
detail. Pembentukan tikus m#del gastri9 banding di)erlukan eks)erimen dengan
berbagai teknik karena )erbedaan anat#mi antara )erut manusia dan tikus.
Penelitian ini meru)akan u)aya untuk membentuk m#del tikus baru. =astro#lasty
Aertikal banded &/BG' adalah membatasi )r#sedur yang tidak memungkinkan
band yang akan diikat. Ini membatasi v#lume lambung dengan men9i)takan
kant#ng lambung vertikal di se)an+ang lengkung dan membungkus sebuah band
dengan mesh )#ly)r#)ylene sekitar akhir kant#ng vertikal untuk men9egah st#ma
dan dari )eregangan. /BG telah ham)ir ditinggalkan karena ter+adi #)erasi ulang
dari #utlet sten#sis dan refluks serta rendahnya )enurunan berat badan. Salah satu
masalah utama dengan band lambung terbuka karena ukuran kant#ng lambung
9
tidak disesuaikan. @ika st#ma terlalu lebarE )enurunan berat badan terganggu. @ika
st#ma terlalu ketatE ada risik# int#leransi makanan )as9a #)erasi. Penyem)urnaan
)erangkat telah menghasilkan sebuah band ad+ustable yang da)at ditem)atkan
la)ar#sk#)i. $leh karena itu untuk men9egah muntah )ada )as9a #)erasiE
sebagian besar ahli bedah sekarang menunda )enyesuaian band &"#nteir# et al7
!..('.
Tikus mengk#nsumsi )akan n#rmal )aling selama satu +am )ertama
sebelum dan saat malam dan tidak ada )erbedaan yang signifikan dalam berat
badan atau asu)an makanan yang ditemukan antara tikus yang makan dua kali
sehari &3nd# et al7 !..4'.
Gambar 2. #erubahan berat badan tikus dan intake pakan setiap hari setelah gastric banding
#ada penelitian akan dikembangkan investigasi tentang pengaruh
adjustable gastric banding terhadap regulasi homeostasis energy dan parameter
adiposopati pada tikus model diet-induce obesity ($%&" dengan pemberian diet
tinggi lemak.
#.3. Metode *emeri,.aan Be/erapa *arameter Adipo.opati
"enurut G#ralski et al7 &!..4'H Bay et al7 &!..6'H :anasaki et al7 &!.11'
bah8a masih belum diketahui )engaruh bariatric surgery terhada) regulasi
h#me#stasis energi dan bebera)a )arameter terkait dengan adi)#s#)ati se)erti
le)tinE adi)#nektinE vas)in dan 9hemerin. :arena itulah )arameter ini meru)akan
#risinalitas dari )enelitian yang akan kami lakukan. )arameter adi)#s#)ati yang
akan diteliti adalah le)tinE adi)#nektinE vas)in dan 9hemerin dalam darah.
Pengukuran bebera)a )arameter adi)#s#)ati da)at dilakukan dengan bebera)a
teknik )engukuran se)erti teknik Imun#hist#kimiaE 3LIS* &Enzyme-Linked
Immunosorbent ssay'E 8estern bl#t dan fl#89yt#metry. Berikut ini bebera)a
met#de teknik )engukuran adi)#s#)ati.
#.&. *ARAM)T)R ADI*OSO*ATI
#.&.% (eptin
Le)tin di)r#duksi se9ara )r#)#rsi#nal untuk menyim)an lemak
&"unDberg & "yers !..2'. Le)tin meru)akan )r#tein dengan 1(4 asam amin#
yang ditranskri)sikan #leh gen #b. Aama le)tin diambil dari bahasa Bunani yang
artinya kurus. Gen le)tin )ada manusia terletak di kr#m#s#m 4C1H DA*0nya
memiliki lebih dari 12.... )asang basa dan ada eks#n yang meru)akan tem)at
10
utama )engk#dean sintesis )r#tein. Le)tin terutama di )r#duksi di +aringan lemak
)utih dan sangat sedikit ditemukan di +aringan lemak 9#klat. Banyak )enelitian
mengungka) hubungan yang kuat antara le)tin dengan ke+adian #bes dan
resistensi insulin )ada anak dan de8asa &:em)f et al !..('. "eski)un )eran
utama le)tin adalah dalam )engaturan berat badan dan metab#lisme energiE
bebera)a )enelitian menun+ukkan bah8a h#rm#n ini da)at terlibat dalam
mekanisme )at#fisi#l#gi lainnya. Le)tin dila)#rkan ikut mengatur fungsi imunE
angi#genesisE )embentukan tulang dan fertilitas. Selain itu le)tin ternyata +uga
ikut terlibat dalam )r#ses agregasi )latelet &1#rs#nell# et al !..'.
Le)tin beker+a se9ara langsung menghambat k#nsentrasi li)id intrasel
dengan mereduksi sintesis asam lemak dan triasilgliser#l &TG' dan meningkatkan
li)id #ksidasi. 3fek terhada) metab#lisme li)id mungkin dimediasi #leh efek
hambatan le)tin terhada) aktivitas asetil01#* karb#ksilase yaitu enDim yang
membatasi ke9e)atan sintesis asam lemak. -ambatan enDim ini memi9u reduksi
mal#nil01#*E yaitu suatu inhibit#r karnitiltransferase I dan )r#ses K0#ksidasi di
mit#k#drial. -ambatan terhada) asetil0k#* karb#ksilase akan membl#k sintesis
asam lemak serta ambilan dan #ksidasi asam lemak di mit#k#ndria. Le)tin
dengan memutarbalikan akumulasinya di +aringan )erifer akan memiliki efek
menguntungkan terhada) resistensi insulin dan fungsi sel betaE yang akhirnya
meningkatkan h#me#stasis gluk#sa. Le)tin +uga se9ara signifikan menurunkan
sekresi insulin #leh sel beta )ankreas &:im & "#ussa !...'.
:etika le)tin kurang atau rese)t#r le)tin tidak berfungsiE kandungan
triasilgliser#l di +aringan n#nadi)#sa misalnya )ankreasE +antung dan #t#t skelet
da)at meningkat 1.02. kali. -al ini menun+ukkan bah8a le)tin meng#ntr#l sistem
h#me#statis triasilgliser#l intraseluler. :enyataan bah8a fungsi dan viabilitas
+aringan n#n adi)#sa beker+a sama ketika kandungan TG meningkat di atas
n#rmal mengim)likasikan bah8a h#me#stasis n#rmal asam lemak intraseluler
men+adi titik )enting untuk men9egah k#m)likasi #besitas. :elebihan asam lemak
)ada #t#t skeletE my#9ardium dan )ankreas menyebabkan resistensi insulinE
li#oto'ic hearth disease dan diabetes ti)e ! adi)#genik. Pada #bes akibat dietE
sinyaling le)tin a8alnya n#rmal dan )erubahan akibat li)#t#ksik da)at di9egahE
namun kemudian ter+adi resistensi le)tin )#st rese)t#r yang memi9u disfungsi dan
li)#a)#)t#sis +aringan n#nadi)#saE suatu k#m)likasi yang sering ter+adi )ada
#besitas &?nger dan $r9i !...'.
Le)tin berfungsi mengatur sensitivitas insulin dan h#me#stasis gluk#sa
melalui ! mekanisme yakni &1' dengan meng#ntr#l keseimbangan energi dan
lemak tubuh yaitu meningkatkan sel adi)#sit untuk memi9u resistensi insulinH &!'
melalui +alur adi#osity-inde#endent yang dimediasi #leh k#ntr#l sistem saraf )usat
terhada) #ut)ut gluk#sa he)atik. *kan teta)iE fakta menun+ukkan bah8a kadar
le)tin yang tinggi dalam sirkulasi ternyata gagal untuk meningkatkan kehilangan
berat badan )ada individu #besE sehingga menimbulkan hi)#tesis adanya
resistensi le)tin yaitu terbatasnya ker+a le)tin )ada keadaan #bes &"unDberg &
"yers !..2'.
11
Pemberian le)tin )ada individu #bes yang se9ara genetik kekurangan
le)tinE da)at menurunkan nafsu makan dan memi9u )enurunan berat badannya
serta mem)erbaiki hi)erfagi dan abn#rmalitas end#krin yang berhubungan dengan
kandungan lemak tubuh yang rendah karena se+umlah li)#distr#)ik dan gangguan
makan &"unDberg & "yers !..2'.
:ebanyakan individu #bes memiliki kadar le)tin di sirkulasi yang
meningkat sebagai k#nsekuensi dari massa lemak yang besarE teta)i tidak adekuat
meres)#n )eningkatan kadar le)tin tersebut dengan menurunkan nafsu makan.
-i)#talamus tidak mam)u untuk mentransduksi sinyal le)tin tersebut untuk
mengurangi berat badanE sehingga dikenal dengan istilah resistensi le)tin &Lustig
et al !..%E "unDberg & "yers !..2E :em)f et al !..('. Resistensi le)tin +uga
men9egah )emberian le)tin eks#gen untuk meningkatkan )engurangan berat
badan. Resistensi le)tin men9egah transduksi sinyal le)tin yang n#rmal )ada
ventr#medial hy)#thalamus &/"-'E sehingga ter+adi asu)an kal#ri terus menerus
dan berkembang men+adi #besitas &Lustig et al !..%'.
*da ! hi)#tesa yang telah diterima dalam mekanisme yang mendasari
resistensi le)tin yaitu kegagalan le)tin di sirkulasi untuk men9a)ai targetnya di
#tak dan )enghambatan 9as9ade sinyaling LRb intraseluler. Le)tin men9a)ai #tak
melalui se+umlah mekanismeE meli)uti mekanisme trans)#r s)esifik menembus
sa8ar darah #takE berdifusi dari #rgan 9ir9um ventri9ular dan langsung
menyeberang dari darah ke neur#end#krin. Le)tin se9ara +elas dihantar melintasi
sa8ar darah #tak dengan sistem trans)#r +enuh. *ktivitas trans)#r ini terlihat
menurun )ada tikus #bese yang diinduksi makanan. Aamun demikian )en+elasan
terhada) se+auh mana le)tin menembus sa8ar darah #tak berk#ntribusi terhada)
ker+a le)tin masih belum +elasE khususnya nukleus ar9uatus &"unDberg & "yers
!..2'.
-i)#tesa kedua yaitu )enghambatan kaskade sinyaling LRb intraseluler.
Tidak aktifnya trans)#r le)tin berk#ntribusi terhada) resistensi le)tin. -al ini +elas
ditun+ukkan bah8a kemam)uan le)tin untuk mengaktivasi sinyaling hi)#talamus
menurun )ada #besitas yang diinduksi diet. Se+umlah )enelitian mendukung )eran
)#tensial ! m#lekul inhibit#r yakni S$1S dan )r#tein tyr#sine )h#s)hatase
PTP1B dalam regulasi LRb sinyaling in vitr# dan in viv# &"unDberg & "yers
!..2'. Pada tikus #bes yang diinduksi #leh diet tinggi lemak menun+ukkan res)#n
ST*T terhada) )emberian le)tin intra9erebr#vas9ular dilemahkanE meyakinkan
adanya defek )ada transduksi sinyal le)tin neur#nal &Lustig et al !..%'.
#.&.# Adipone,tin
*di)#nektin adalah h#rm#n yang terutama di)r#duksi #leh +aringan
adi)#sa. Penelitian0)enelitian mengungka)kan )eran adi)#kin )ada )at#fisi#l#gi
resistensi insulin dan sindr#m metab#lik &"endeD0San9heD et al !..('.
*di)#nektin meru)akan )r#tein dengan !%% asam amin# yang miri) dengan
k#lagen ti)e /III dan ti)e M dan )r#tein k#m)lemen 11C. Struktur tiga dimensi
)ada d#main gl#bular 10terminal h#m#l#g dengan tum#r ne9r#sis fa9t#r0N &TA70
N'. *kan teta)iE efek fisi#l#gis adi)#nektin dan TA70N sangat berbeda dan
12
bebera)a berla8anan. Lebih +auhE adi)#nektin menghambat sekresi TA70N &TOre
!..4'.
*di)#nektin ditemukan dengan kadar t#tal yang tinggi dalam darah n#rmal
berkisar 2 0 . Pg=ml &Sharma et al !..6'. *di)#nektin disekresikan dari +aringan
adi)#sa dan beredar dalam bentuk multimerik mulai dari trimersE heksamer &berat
m#lekul rendahE Q16.kDa' sam)ai #lig#mer dengan berat m#lekul tinggi yang
mengandung 1!016 subunit k#m)leks &berat m#lekul tinggiE Q%.. kDa' &"endeD0
San9heD !..(E Sharma et al !..6'. "#n#mer0m#n#mer adi)#nektin dihubungkan
dengan ikatan disulfida yang bergantung )ada 9ystein0, di regi# variabel amin#0
terminal. P#lim#rfisme single0nu9le#tide &G6%RE G,.SE B111- dan I1(%T'
mem#difikasi )embentukan ikatan disulfida iniE dan da)at mengubah kemam)uan
adi)#nektin men+adi bentuk multimer yang lebih besar dari )ada trimerE
mem)engaruhi aktivitas bi#l#gisnya. -al )enting lainnya terkait dengan struktur
adi)#nektin dihubungkan dengan m#difikasi )#st0translati#nalE terutama
glik#silasi hidr#ksilisil )ada em)at residu lysin dalam d#main k#lagen#sa yang
kritis untuk aktivitas insulin0sensitiDing berkenaan dengan )enghambatan
)r#duksi gluk#sa he)atik &"endeD0San9heD !..('.
Rese)t#r adi)#nektin terdiri atas *di)#R1 dan *di)#R! &"endeD0San9heD
!..(E Sharma !..4' dan T09adherin telah dila)#rkan &TOre !..4'. Rese)t#r0
rese)t#r ini banyak diteliti sebagai target farmak#tera)i. *di)#R1 terletak )ada
kr#m#s#m 1)(.10C%1E sedangkan *di)#R! terletak )ada kr#m#s#m 1!)1.1.
*di)#R1 mengk#de )r#tein dengan 42 asam amin#E massa m#lekul %!E% kDaE
dan *di)#R! mengk#de )r#tein dengan 11 asam amin#E massa m#lekul 2E%
kDa. *di)#R1 dan adi)#R! se9ara struktural berhubungan memiliki kesamaan
((E4L. "ereka menggunakan *"P0kinase sebagai second messenger teta)i tidak
terlihat bergabung dengan )r#tein G. *di)#R! +uga mengaktivasi PP*RN dan )6
mit#gen0 a9tivated )r#tein kinase. *di)#R1 dieks)resikan terutama di #t#t skeletE
sementara adi)#R! dieks)resikan di he)ar. *di)#R1 dan *di)#R! meru)akan
rese)t#r yang memiliki tu+uh d#main transmembran &"endeD0san9heD !..('.
*di)#nektin meningkatkan sensitivitas insulinE menstimulasi #ksidasi asam
lemakE ambilan gluk#sa dan )r#duksi laktat di sel0sel #t#t &rhabd#my#9ytes'. Di
he)ar adi)#nektin menstimulasi #ksidasi asam lemak dan mengurangi
gluk#ne#genesis &"endeD0san9heDE !..('. Sam)ai saat ini adi)#nektin
meru)akan salah satu adi)#kin terbaik dengan )#tensi besar untuk )engembangan
tera)i bebera)a )enyakit. Selain sebagai insulin0sensitiDingE adi)#nektin +uga
sebagai anti0inflamasiE anti0ater#genikE anti0diabetikE anti0#besitasE anti0fibr#tik
dan anti kanker &TOre !..4'. -asil )enelitian T#rig#e et al &!..4' dila)#rkan
bah8a kadar adi)#nektin )lasma da)at mem)rediksi disfungsi end#tel sebelum
ter+adi )enyakit vaskular yang lebih +auh. *di)#nektin dengan berat m#lekul
tinggi lebih baik digunakan sebagai marker disfungsi end#tel dari)ada
adi)#nektin t#tal.
3fek adi)#nektin terhada) sensitisasi insulin disertai #leh anti0inflamasi.
*di)#nektin )an+ang menghambat eks)resi bebera)a m#lekul adesi )ada
)ermukaan sel end#tel yang diinduksi #leh TA70NE antara lain -ascular cell
13
adhesion molecule-/ &/1*"01'E 30sele9tinE dan intercellular adhesion molecule
&I1*"'. *di)#nektin )an+ang +uga menekan )erubahan inflamasi )ada sel
end#tel yang diinduksi TA70N dengan membl#k aktivasi nuclear +actor-.3 tan)a
mem)engaruhi aktivasi 90+un A0terminal kinase yang dimediasi TA70NE )6 dan
)r#tein kinase B &*kt'. Selain ituE efek anti0inflamasi adi)#nektin meli)uti
)enekanan terhada) )embentukan k#l#ni leuk#sitE mereduksi aktivitas fag#sit#sis
dan mereduksi sekresi TA70N dari makr#fag. *di)#nektin +uga se9ara 9e)at
melakukan u)0regulasi IL01. dan se9ara selektif meningkatkan eks)resi +aringan
)enghambat metall#)r#teinases01 )ada level mRA* mau)un )r#teinE sedangkan
mRA*E kadar )r#tein dan aktivitas ""P0, tidak berubah )ada makr#fag derivat
m#n#sit. -al ini menun+ukkan bah8a adi)#nektin mem#dulasi res)#n inflamasi
melalui IL01. &"endeD0san9heD !..('. Penelitian ?n#ki et al &!..6'
menyim)ulkan bah8a makr#fag da)at menyebabkan rangkaian )at#l#gis dengan
adi)#sit melalui sekresi metall#)r#teinase0 &""P0' diikuti #leh eks)resi TA70
N )ada adi)#sit di +aringan lemak viseral. *di)#nektin ber)artisi)asi )ada
angi#genesis melalui kemam)uannya untuk menstimulasi sinyal *"P:0
de)endentE yang da)at memi9u sintesis fakt#r angi#genik di #t#t skeletal dan
angi#genesis yang diinduksi hi)#ksia dan res)#n antia#o#totic cellular )ada sel
end#tel &"endeD0san9heD !..('.
-ung et al &!..6' berdasarkan hasil )enelitiannya menyim)ulkan hal berkaitan
dengan kadar adi)#nektin dalam sirkulasi yaitu ;
1. k#nsentrasi adi)#nektin )lasma berhubungan terbalik dengan marker0
marker inflamasi yang ada di sirkulasi
!. kadar adi)#nektin )lasma berhubungan terbalik dengan sk#r resistensi
insulin yang tidak bergantung )ada #besitas
. k#nsentrasi adi)#nektin yang lebih tinggi berhubungan dengan
menurunnya )revalensi sindr#m metab#likE dan hubungan ini tidak
bergantung )ada tingkat #besitasE resistensi insulin dan marker0marker
inflamasi
-asil )enelitian +uga menun+ukkan tingkat indeks massa tubuh &B"I' dan rasi#
)inggang0)inggulE adi)#sit t#tal dan viseral berhubungan dengan menurunnya
k#nsentrasi adi)#nektin )lasma. -al ini sesuai dengan hasil )enelitian lain yaitu
kadar mRA* adi)#nektin di +aringan adi)#sa )ada )enderita #bes lebih rendah
dibandingkan dengan subyek kurusE dan lebih rendah )ada +aringan adi)#sa
viseral dibandingkan dengan subkutaneus &-ung et al !..6'
#.&.3 ;a.pin<%
Aisceral adi#ose tissueB deri-ed ser#in &/as)in' diidentifikasi sebagai
angg#ta kel#m)#k serin yang terda)at dalam +aringan adi)#sa viseral )ada tikus
#besitas dengan k#nsentrasi insulin )lasma meningkat &-ida et al7 !..2'. 3ks)resi
vas)in tam)ak )ada k#ndisi diabetes yang berat dan )enurunan berat badan.
Sedangkan serum vas)in bisa din#rmalisasi a)abila diberikan )eng#batan insulin
atau )i#glitaD#ne. Pemberian vas)in )ada tikus #bes mem)erbaiki t#leransi
gluk#saE sensitivitas insulinE dan )erubahan eks)resi gen )ada resistensi insulin.
3ks)resi mRA* vas)in dalam +aringan adi)#sa manusia #besitas adalah lemak
14
teta)i tidak terdeteksi )ada individu kurus yang mengalami glu9#se t#lerant
&:l#ting et al7 !..('. Induksi mRA* vas)in di +aringan adi)#sa manusia
meru)akan mekanisme k#m)ensasi yang terkait dengan #besitasE resistensi insulin
yang beratE dan diabetes ti)e ! &:l#ting et al7 !..(H >v#ni9 et al7 !..4'.
#.&.& C=emerin
1hemerin &R*RR3S! atau TIG!' adalah )r#tein kem#atraktan yang
berfungsi sebagai ligan untuk rese)t#r )r#tein Gn 1":LR1 &1hemR! atau
D3>' dan memiliki )eran dalam imunitas ada)tif &R#h et al7 !..4'. 1hemerin
disekresikan sebagai )r#tein tidak aktif dengan ukuran 160kDa dan mengalami
)embelahan ekstraseluler serin )r#tease bagian 10terminal untuk menghasilkan
9hemerin aktif 1(0kDa &5ittamer et al7 !..H G#ralski et al7 !..4'. :#nsentrasi
9hemerin aktif dalam )lasma dan serumE masing0masing adalah )ada manusia E.
dan %E% n" dan .E( dan )ada tikus .E2 n" &G#ralski et al7 !..4'.
3ks)resi 9hemerin dan 1":LR1 dalam +aringan adi)#sa )utih dan 9#klat
tikus ber)eran dalam )r#liferasi dan diferensiasi +aringan adi)#sit )utih.
Sedangkan )eningkatan eks)resi 9hemerin dan 1":LR1 dalam lemak 9#klat
men9it #b=#b dibandingkan dengan k#ntr#l adalah ber)eran dalam diferensiasi
+aringan adi)#sa 9#klat untuk fen#ti)e adi)#sa )utih &B#Da#glu et al7 !..4H
"a9D#uglad et al7 !..4'.
:#nsentrasi 9hemerin dida)atkan dalam )lasmaE serumE dan 9airan
inflamasi manusia &B#Da#glu et al7 !..,'. @umlah sekresi fisi#l#gis 9hemerin aktif
ter+adi )ada a8al diferensiasi adi)#sit. Dan ditemukan 1":LR1 dalam +aringan
adi)#sa tikus dan kultur sel adi)#se baik murin mau)un manusia. 3ks)resi
1":LR1 dan sekresi 9hemerinE meru)akan aut#krin yang ber)eran dalam
)engaturan +alur mekanisme adi)#genesis. Selama 4! +am )ertama dari
diferensiasi adi)#9yte 9hemerin sudah da)at diketahui. Setelah )emberian fa9t#r
diferensiasi se)erti IB"ME deksametas#nE dan insulin selama !% +am )ada sel
T0L1E sel mengalami kl#nal eks)ansi yang terdiri dari 10! )utaran )embelahan
sel &Tan et al7 !..,'.
1":LR1 memiliki efek s)esifik )ada rese)t#r )ermukaan yang
mem)engaruhi diferensiasi adi)#sitE eks)resi genE dan metab#lisme. Peningkatan
sekresi adi)#kines &misalnya le)tinE TA7E dan 11L!' serta asam lemak bebas
merangsang infiltrasi dan aktivasi makr#fag dari inflamasi l#kal. Sehingga
makr#fag mele)askan m#lekul )r#0inflamasi dan ter+adi menganggu sensitifitas
adi)#sity terhada) insulin &1ash et al7 !..6'.
Sel L1.!. dan makr#fag tikus mengeks)resikan 1":LR1 yang mengikat
9hemerinE dan bermigrasi ke ligan &B#shimura dan $))enheimE !..6'. :arena itu
9hemerin ber)eran sebagai regulat#r )arakrin untuk mengaktifkan sel imunitas
sehingga +aringan adi)#sa )utih meru)akan +aringan yang ber)eran dalam res)#n
inflamasi l#kal dan berhubungan dalam )erkembangan #besitas.
15
"engingat tingginya tingkat eks)resi 9hemerin di adi)#9ytes dan
)eningkatan sekresi 9hemerin dalam maturasi adi)#9yteE maka adi)#sa meru)akan
sumber sekresi 9hemerin yang berhubungan dengan )erubahan dengan massa
+aringan adi)#sa. Sehingga da)at menggambarkan ter+adinya sistemik inflamasi
9hemerin )ada fungsi metab#lisme dalam +aringan yang lainnya. %hemerin
memiliki )eran regulasi adi)#genesis dan metab#lisme adi)#9yte dalam bi#l#gi
+aringan adi)#sa. Dengan demikianE karakterisasi fungsi 9hemerin dan sinyal
1":LR1 di adi)#sit memiliki )#tensi )endekatan tera)i terbaru untuk
)eng#batan #besitasE ti)e! diabetesE dan )enyakit kardi#vaskuler.
#.&.> Te,ni, Immuno=i.to,imia
Imun#hist#kimia &I-1' adalah teknik yang menggabungkan anat#mi
hist#l#giE teknik imun#l#gi dan bi#kimia untuk mengidentifikasi k#m)#nen
+aringan melalui interaksi antigen dengan antib#di s)esifik target ditandai dengan
label tertentu. I-1 memungkinkan untuk memvisualisasikan distribusi dan
l#kalisasi k#m)#nen seluler tertentu dalam sel dan dalam k#nteks +aringan yang
te)at &5alker dan Ra)leyE !..2H 5estermeier dan "ar#ugaE !..2'.
Prinsi) dasar immun#flu#res9en9e adalah flu#res9ent untuk melihat
antigen yang terletak di dalam intraseluler sel tertentu &misalnyaE nukleusE #rganelE
sit#)lasmaE membran' atau di ekstraselular &1regger " et al. !..('. Pada teknik
ini )engukuran yang akan dilakukan adalah dengan mengidentifikasi eks)resi
adi)#s#)ati se)erti le)tinE adi)#nektinE vas)in dan 9hemerin dengan teknik
Imun#hist#kimia ham)ir sama dengan met#de Imun#sit#kimiaE teta)i )ada
imun#hist#kimia yang dideteksi adalah antigen )ada #rgan yang telah difiksasi
&-ida :. !..2E G#raslki !..4E Sharma !.1.'. Pr#sedur imun#hist#kimia adalah
sebagai berikut &5alker dan Ra)leyE !..2';
Ba=an ?
0 $rgan
0 Slide
0 1#verglass staining +ar
0 1#ver slide
0 % L &v=v' )araf#rmaldehid dalam PBS
0 *lk#h#l 4.L
0 *lk#h#l bertingkat &4.LE 6.LE 62LE ,.LE ,2LE 1..L'
0 Myl#l
0 Parafin
0 Gliser#l
0 PBS )- 4.%
Q 6 m" Aa
!
-P$
%
Q 1.% m" :-
!
P$
%
Q 1%. m" Aa1l
Q !.4 m" :1l
*d+ust )- sam)ai 4.% dengan Aa$-
0 ...!L S#dium aDida &AaA

' dalam PBS


0 *Cuades
0 L -
!
$
!
dalam PBS
16
0 1L &v=v' BS* dalam PBS
0 *ntib#di Primer
0 *ntib#di Sekunder &*nti Rabbit IgG Berlabel Bi#tin'
0 D*B
0 "ayerGs -emat#<ilen
0 3ntellan
A+at ?
0 Inkubat#r 220(R1
0 -#t )late
0 Pinset
0 Pi)et tetes
0 :#tak )re)arat
0 5aterbath suhu ,2R1
0 Pembuat bl#k
0 "ikr#t#m
0 Pisau mikr#t#m
0 Bunsen
0 "ikr#sk#)
M)TOD)
)m/eddin-
1. $rgan direndam dalam larutan fiksatif beru)a 7#rmalin=P7* &104 hari'.
!. Direndam dalam etan#l 4.L selama minimal !% +amE dan dilan+utkan
dengan etan#l 6.L selama ! +am. Direndam dalam etan#l ,.L dan ,2L
se9ara berurutan selama masing0masing . menit. Dilan+utkan
)erendaman sebanyak kali dalam etan#l abs#lut selama . menit
masing0masing dalam b#t#l yang berbeda.
. Direndam dalam <yl#l sebanyak ! kali masing0masing selama . menit.
a. Pr#ses selan+utnya diker+akan dalam inkubat#r dengan suhu 2(0
261.
%. Direndam dalam <yl#lE kemudian ke dalam )arafin sebanyak kali.
2. Dilan+utkan dengan embedding dengan men9elu)kan #rgan dalam )arafin
9air yang telah dituang dalam 8adah. Setelah bebera)a saatE )arafin akan
memadat dan #rgan berada dalam bl#k )arafin.
Coatin- O/0e, 'e+a.
1. $byek gelas &baru' ditandai dengan kikir dan direndam dalam alk#h#l
4.L selama minimal semalam. Dikeringkan dan dihindarkan dari debu.
!. Di9elu)kan selama . detik dalam .E2 L gelatin hangat yang dilarutkan
dalam aCuabides. Gelatin .E2L sebanyak 1.. ml digunakan untuk 1..
#byek gelas. P#ly0lisin lebih bagus digunakan dalam coating dari)ada
gelatin.
. Dikeringkan dalam ruang tertutu). $byek gelas da)at digunakan dalam !
hari.
17
*em/uatan *reparat Or-an
1. $rgan )ada bl#k )arafin hasil embedding dimasukkan ke )en+e)it &block
holder: mikr#t#m dan diatur kese+a+aran )ermukaan )#t#ng dengan mata
)isau mikr#t#m.
!. Pem#t#ngan dia8ali dengan mengatur ketebalan irisan diatas 1. m untuk
mem)er9e)at )en9a)aian bidang )#t#ng +aringan.
. $rgan diiris dengan ukuran % m. Pem#t#ngan yang bagus akan
menghasilkan bentuk )#t#ngan se)erti )ita.
%. Irisan diambil dengan )inset dan dimasukkan air &suhu ruang' untuk
membuka li)atan yang mungkin ter+adi )ada )re)arat.
2. -asil irisan di)indahkan dengan +arum bertangkai ke dalam air hangat &60
%.1' untuk meluruskan kerutan halus yang ada.
(. Irisan yang terentang sem)urna diambil dengan gelas #b+ek.
4. P#t#ngan ter)ilih dikeringkan dan diletakkan di atas hot#late &60%.1'
sam)ai kering.
6. Pre)arat disim)an dalam inkubat#r suhu 60%.1 selama !% +am.
Depara4ini.a.i dan Re=idra.i
Pre)arat di9elu) dalam <yl#l sebanyak ! kaliE alk#h#l bertingkat &1..LE
,.LE 6.LE 4.LE .L'E dan aCuades se9ara berurutan.
Di9u9i dalam PBS )- 4E% selama < 2 menit.
*ermea/i+i.a.i Se+
1u9i sel 1 kali dengan PBS.
Inkubasi sel )ada L -
!
$
!
dalam PBS selama 1. menit suhu ruang.
1u9i sel kali dengan PBS.
B+o,in- Se+
Inkubasi sel )ada 1L BS* &3o-ine !erum lbumin: selama 1 +am )ada suhu
ruang.
1u9i kali dengan PBS.
In,u/a.i Se+ pada Anti/odi *rimer
3n9erkan *ntib#di )rimer dalam G#at serum=7BS=BS* hingga k#nsentrasi
dan v#lume yang diinginkan &*ntib#di le)tin 1;2.. dalam G#at serum atau
7BS'.
Inkubasi sel )ada antib#di )rimer )ada suhu %R1 selama 1! +am atau )ada
suhu ruang selama ! +am.
1u9i sel dalam PBS selama < 2 menit.
In,u/a.i Se+ pada Anti/odi Se,under
3n9erkan antib#di sekunder berlabel bi#tin dalam PBS sam)ai k#nsentrasi
dan v#lume yang diinginkan &*nti Rabbit IgG 0Bi#tin1 ; 2.. dalam PBS'
18
Gambar 2. 'otomikrograf jaringan paru
janin gorilla pada fase akhir gestasi
yang menunjukkan ( (A" #enge)atan
hemato*ylin+eosin, (B" surfac tant
protein - , (C" LEP receptor protein
pada pulmo nary epithelial cells. Kontrol
negative imunohistokimia (tanpa
antibodi primer" reseptor L.# (D".
/anda panah menunjukkan pulmonary
type II cells ( 0enson et al. 21"
Gambar 2. $ensitas reseptor leptin pada jaringan
lemak (kelompok kontrol"
Gambar 1. $ensitas 3eseptor Leptin
(restri)ted diet 14 group"
Inkubasi sel dengan antib#di sekunder selama 1 +am )ada suhu ruang.
1u9i sel )ada PBS selama < 2 menit.
Tetesi dengan S*0-RP &!tre#t a-idin horseradish #ero'idase' 1;2.. dalam
PBS selama %. menit.
1u9i sel dengan PBS selama kali 2 menit.
Tetesi dengan D*B &Diaminobenzidine' selama 1. menit.
1u9i sel dengan aCuades < 2 menit.
Lakukan counterstain dengan "ayerGs hemat#<ilen selama 1. menit.
1u9i = tetesi dengan air kran
1u9i dengan aCuades selama 1. menit. Biarkan )ada suhu kamar.
Mountin-
Setia) slide diberi label. Satu tetes medium m#unting &3ntellan' di+atuhkan ke
atas )re)arat. 1#ver glass ditutu)kan ke atas )re)arat yang telah diberi m#unting
medium.
Visualisasi sel dengan menggunaan mi!"s"# $a%a&a
19
Fi,.a.i dan )m/eddin- Or-an
20
&rgan
Direndam dalam paraformaldehida (PFA) 4%
dalam PBS, suhu 4 C selama 1+5 hari
Xylol, 3 meni!, "#"3C
Parafin 3$3 meni! (%"#%&C)
Dehidrasi e!anol 'er!in()a!
(*!hanol +% ,4 -am. &% , -am. /% , meni!. /%% ,
meni!. e!anol a'solu! 3$, meni!), suhu ruan(
Xylol , suhu ruan(, , $ 3 meni!
*0B*DD123
(4r(an dimasu))an dan di!a!a posisinya dalam parafin han(a! dalam
'lo) hin((a mendin(in, 'a(ian or(an y( a)an diiris men(hadap 'a5ah)
Blo) parafin disimpan pada 4 C
Pem'ua(an #!e#a!a( "!gan
21
%risan dipindah ke air hangat (2!+16"
$iambil dengan gelas objek
$ikeringkan diatas hot plate (2!+16"
#reparat disimpan di suhu 2!+16, 21 jam
4r(an diiris u)uran 4 m
4r(an dalam 'lo) parafin
#reparat &rgan
(yg masih mengandung parafin"
$i)u)i #78 p0 5,1
5 menit, 2 *
$i)u)i #78 p0 5,1
5 menit, 2 *
$i)u)i #78 p0 5,1
5 menit, 2 *
24 hidrogen peroksida (dalam $% water", 2 menit
$.#-3-'%9%8-8% : 3.0%$3-8%
$imasukkan dalam ;ylol %, ;ylol %%, -lkohol bertingkat (14,
<4, !4, 54", -=uadest, > 2+5 menit
14 9G8 atau 78- dalam #78, 2 menit, suhu ruang
22
$i)u)i #78 p0 5,1
5 menit, 2 *
$i)u)i a=uades
5 menit, 2 *
$i)u)i air kran
5 menit, 2 *
$i)u)i #78 p0 5,1
5 menit, 2 *
6ounterstain (0emato*ilen", 2 menit, suhu
ruang
6romogen $-7 (2,2+diaminobenzidine
tetrahydrochloride", 1+ 2 menit, suhu ruang
8-+03# (8terp -vidin+ 0oseradish #ero*idase", 2+? menit, suhu
ruang
-ntibodi 8ekunder berlabel biotin
(Anti Rabbit Ig !iotinLabelled", 1 jam suhu ruang
#engamatan dengan mikroskop
@ounting dengan
.ntellan
$i)u)i #78 p0 5,1
5 menit, 2 *
-ntibodi #rimer (Rabbit Anti "uman
Leptin" semalam, suhu dingin 16
#.&.1. )(ISA ()n@0me<(in,ed Immuno.or/ent A..a0)
Prinsi) dasar 3LIS* adalah mendeteksi )engikatan antigen &*g' antib#di
&*b' dengan menggunakan enDim. 3nDim mengubah substrat ber8arna
&9hr#m#gen' untuk menghasilkan 8arnaE yang mengindikasikan keberadaan
ikatan *g; *b. Sebuah 3LIS* da)at digunakan untuk mendeteksi keberadaan
antigen atau abs#rbansi dalam sam)elE tergantung )ada bagaimana tes diran9ang
&5alker dan Ra)leyE !..2'.
Pengukuran Le)tinE Rese)t#r Le)tinE *di)#nektinE vas)in dan 9hemerin
dalam serum darah tikus DI$ "elalui "et#de Indirect 3LIS* &:eller !..2E
G#ralski !..4E Seeger !..6E -alberg !..,'
*enentuan Kondi.i Optima+ Te. *ada U9i )(ISA

?ntuk men9i)takan u+i fase )adat yang n#n k#m)etitifE baik kadar antib#di
atau antigen )ela)is mau)un )engen9eran k#n+ugat )erlu ditentukan. Titrasi
cheCuerboard meru)akan 9ara yang )aling mudah untuk dilaksanakanE sebab
melalui 9ara ini tiga t#l#k ukur dari u+i da)at divariasi se9ara bersamaan dengan
menggunakan as)ek0as)ek yang berbeda dari )late &5alker dan Ra)leyE !..2'.
Titra.i che'uerboard di+a,u,an den-an 5ara .e/a-ai /eri,ut ?
Plate untuk 3LIS* dila)isi se9ara h#ris#ntal )ada baris * sam)ai -
se)erti tam)ak )ada gambar (. 3m)at ma9am kadar atau )engen9eran antigen atau
antib#di da)at diu+i dalam satu seri )emeriksaanE dimana masing0masing kadar =
)engen9eran dilakukan du#lo &)engulangan dua kali' ke dalam se)asang baris
h#ris#ntal dari )late &* dan B atau 1 dan D atau 3 dan 7 atau G dan -'.
Sesudah coatingE 9elah09elah )ada sumuran )late dibl#k dengan )r#tein
n#n0s)esifik se)erti BS*E gelatin atau non +at dry milk. ?ntuk sam)el di)akai satu
serum k#ntr#l )#sitif kuatE satu serum k#ntr#l negatif dan hanya PBS sa+a.
:etiga +enis k#ntr#l sam)el tersebut dimasukkan se9ara vertikal ke dalam
sumuran )late dalam % +alur & %< ' se)erti tam)ak )ada gambar (. Setelah
inkubasi dan )en9u9ian dengan PBSE antib#di k#n+ugat +uga ditambahkan se9ara
vertikal &5alker dan Ra)leyE !..2'.
23
Gambar (. Titrasi cheCuerboard
Pilihan #)timal untuk suatu assay yaitu k#mbinasi *g dan k#n+ugat yang
memberi ;
nilai PBS ............... S .E.2
nilai k#ntr#l negatif S .E!
nilai k#ntr#l )#sitif J 1E.
Metode )(ISA
*ntigen &serum' dilarutkan dalam coating bu++er &1;2.'. *ntigen di0
coating )ada #late 3LIS* selama semalam )ada suhu %1. Di9u9i dalam PBS0
T8een < menit. Dibl#k dengan blocking bu++er &BS* 1L dalam PBS' 2. l =
5ell. Diinkubasi selama ! +am suhu ruang. Di9u9i dalam PBS0T8een < menit
&Ma et alE !..('.
%oating antib#di )rimer &2. l = 5ell' dengan inkubasi selama ! +am )ada
suhu ruang. Di9u9i dalam PBS0T8een < menit. %oating antib#di sekunder nti
(uman Ig= P %on;ugated &1;!2..' dalam TBS melalui inkubasi selama ! +am
)ada suhu ruang. Di9u9i dalam PBS0T8een < menit. Ditambahkan substrat
)APP dalam dietan#lamin 1.L &2. l = 5ell'. Diinkubasi . menitE suhu ruang
&tidak di9u9iE yang diba9a adalah )APP yang terikat *b sekunder'. Ditambahkan
24
A
B
C
D
E
F
G
H
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
12
Ag pelapis
Pengenceran 1
Pengenceran 2
Pengenceran 3
Pengenceran 4
Pengenceran 1
Pengenceran 2
Pengenceran 3
Pengenceran 4
Ab konjga!
" #$B%" #$B%" #$B%" #$B%
%a&pel Pengenceran 1: 100
Aa$- " &2. l= 5ell' sebagai sto# reaction. Setelah 12 menitE diba9a dengan
3LIS* reader )ada TU%.2 nm.
*ro.edur Metode )(ISA &"a et al7 !..('
Sia)kan )late 3LIS* dan )late lay#ut.
%oating *ntigen
*ntigen &serum' dilarutkan dalam coating bu++er &coating *g 1; 2.'.
Plate 3LIS* dibungkus dengan aluminium f#il dan diberi label.
Diinkubasi )ada suhu %1 semalam.
Di9u9i dalam PBS0T8een <E V menit.
%oating *b )rimer dalam BS* 1L &2. l = 5ell'
Diinkubasi selama 1 +amE suhu ruang.
Di9u9i dalam PBS0T8een <E V menit.
%oating *b sekunder &1;!2..' dalam TBS
*b sekunder yang digunakan ; nti $abbit Ig= P %on;ugated
Inkubasi selama 1 +am )ada suhu ruang.
Di9u9i dalam PBS0T8een <E V menit.
Ditambahkan substrat )APP dalam Dietan#lamin 1.L &2. l = 5ell'.
Diinkubasi . menitE suhu ruang.
&Tidak di9u9iE yang diba9a adalah )APP yang terikat *b sekunder'
Ditambahkan Aa$- " &2. l= 5ell' sebagai sto# reaction.
Setelah 1. menit dan 12 menitE diba9a dengan 3LIS* reader )ada TU%.2 nm
Kompo.i.i (arutan
Tabel . :#m)#sisi Larutan )ada 3LIS*
Nama (arutan Kompo.i.i Ba=an !um+a=
1#ating buffer
PBS0T
Bl#9king Buffer
&BS* 1L dalam PBS'
Diethan#lamin 1.L
)- ,E6
PAPP dalam
Aa
!
1$

Aa-1$

AaA

dd -
!
$
&9ek )- ,E(W'
PBS
T8een0!.
BS*
PBS
Dietan#lamin
dd -
!
$
AaA

"g1l
!
. ( -
!
$
&9ek )- ,E6W'
PAPP
.E12, g
.E!, g
.E.! g
sam)ai 1.. ml
1.. ml
2. l
.E1 g
1. ml
!E%!2 ml
!. ml
.E..2 g
.E..!2 g
1 tablet
25
Dietan#lamin Dietan#lamin 2 ml
#.&.7. Identi4i,a.i den-an metode #estern blott
Pengukuran Le)tinE Rese)t#r Le)tinE *di)#nektinE vas)in dan 9hemerin
dalam serum darah tikus DI$ "elalui "et#de 8estern bl#t &G#ralski !..4E Bee :
!..6E -alberg !..,E "aeeda !..,'. Prinsi) met#de ini adalah met#de analisis
sam)el )r#tein dimana dielektr#f#resis )ada SDS0P*G3 dan di)indahkan ke
membran nitr#selul#sa. Pr#tein ditransfer dideteksi menggunakan antib#dy )esifik
dan sekunder berlabel enDim dan substrat antib#di. 1#nt#h )r#tein dikenakan
)#liakrilamid elektr#f#resis gel. Setelah ini gel ditem)atkan di atas lembar nitr#
selul#se dan )r#tein dalam gel adalah elektr#f#resis ditransfer ke nitr# selul#sa
tersebut. Aitr# selul#sa tersebut kemudian direndam dalam buffer bl#9ker &L
skim' untuk Fbl#kF yang s)esifik mengikat )r#tein. Aitr# selul#sa tersebut
kemudian diinkubasi dengan antib#di s)esifik untuk )r#tein. Aitr# selul#sa
tersebut kemudian diinkubasi dengan antib#di keduaE yang s)esifik untuk )ertama
antib#di. "et#de 5estern bl#t digunakan untuk mengetahui eks)resi )arameter
adi)#s#)ati )ada +aringan setelah di)erlakukan dengan )erlakuan &5alker dan
Ra)leyE !..2H "aE !..('.
"et#de 5estern bl#t adalah sebagai berikut masing0masing sam)el +aringan
disus)ensi dengan buffer yang mengandung !.m" Tris-1lE 1m" 3DT* dan .E1
m" P"S7. Sus)ensi sel di)utar 1!.... r)m selama 2 menitE %
$
1 kemudian
di)utar lagi 12.... r)mE 1 +amE %
$
1 Sam)el dise)arasi dengan 12 L gel SDS0
P*G3. Gel hasil elektr#f#resis di9u9i dengan aCuades dan direndam dalam buffer
bl#tting. "embran A1 &nitr#selul#se' di)#t#ngE selan+utnya dibasahi dengan PBS
selama 1. menit )ada suhu kamar. "embran direndam dalam buffer bl#tting
sebelum dilakukan )r#ses bl#tting. Selan+utnya transfer dilakukan selama 1! +am
)ada !2 /#lt )ada suhu %1. Setelah selesai transferE membran di0blocking dalam
PBS0T Skim milk 2L selama 1 +am sambil dig#yang. Di9u9i <2 menit dalam
PBS0T. Inkubasi dengan antib#di )rimer PI: yang telah dien9erkan dalam PBS0
26
T Skim 2L &1;!..' semalam )ada suhu %1. Di9u9i <2 menit dengan TBS.
Diinkubasi dengan antib#di sekunder *P %on;ugated &1;!2.. dalam TBS' selama
1 +am )ada suhu ruang. Di9u9i dengan PBS0T selama %<2 menit. Selan+utnya
dideteksi )ita )r#tein atau antigen dengan )enambahan substrat 6estern 3lue
&dalam ruang gela)' ke membran selama semalam atau sam)ai terlihat 8arna
band. Reaksi dihentikan dengan )en9u9ian membran dalam akuades &5alker dan
Ra)leyE !..2H "aE !..('.
#.&.:. Metode F+ow50tometer0
Teknik fl#89yt#metry digunakan untuk mengukur )r#sentase vas)in dan
9hemerin dalam darah. 7l#89yt#metery menggunakan )rinsi)0)rinsi) hamburan
9ahayaE eksitasi 9ahayaE dan emisi m#lekul flu#r#9hr#me untuk menghasilkan
data multi0)arameter khusus dari )artikel dan sel0sel dalam kisaran ukuran
diameter ..2um sam)ai dengan %.um. Sel adalah hydr#0dinamis tersus)ensi
dalam PBS sebelum menangka) sumber 9ahaya se9ara #)timal. Laser yang )aling
sering digunakan sebagai sumber 9ahaya di fl#89yt#meter. 3nergi ini dirilis
sebagai f#t# dan 9ahaya dengan sifat s)ektral tertentu yang unik untuk setia)
flu#r#9hr#mes. Salah satu fitur unik dari fl#89yt#meter bah8a )engukuran
flu#resensi )er sel atau )artikel. -al ini k#ntras dengan s)ektr#f#t#metri dimana
)enyera)annya )er )an+ang gel#mbang &5alker dan Ra)leyE !..2'.
Sel di)anen dan di)utar dengan ke9e)atan !2.. r)m selama 2 menit
dengan suhu %
#
1. 3nda)an sel di9u9i dengan )h#s)hate buffer saline &PBS'
kemudian dik#9#k se9ara )erlahan. 1u9i sel sam)ai ! kali. 3nda)an terakhir
ditambah dengan 1.. PL PBS dan ditambah anti01D1%(07IT1 &1;1..' dan anti0
1D%20P3 &1;1..'. Sel diinkubasi dengan antib#dy selama . menit )ada suhu
ruang. Sam)el dien9erkan sam)ai 1 mL dan diba9a dengan fl#89yt#metry &7*1S
1alliburE BD'.
*lat 9yt#meters yang m#dern mam)u menganalisis bebera)a ribu )artikel setia)
detikE saat itu +uga. 1ara ker+a 9yt#meter miri) dengan mikr#sk#)E teta)i bukan
menghasilkan gambar sel melainkan menghasilkan gambar untuk se+umlah besar
sel sesuai )arameter diteta)kan se9ara #t#matis 91an#ni9#E !.1.H "as#ulehE
!.1.' .
Bahan0bahan yang bisa di)eriksa dengan fl#8 9yt#metry adalah
1. Darah )erifer
!. *s)irasi sumsum tulang
. 1airan cerebros#inal 9%!":
%. "luida n#n01S7E7A* &7ine Aeedle *s)irati#n'= Bi#)si @aringan

27
BAB III
K)SIM*U(AN
"#del he8an #besitas da)at digunakan untuk mem)ela+ari )enyakit terkait
#besitas manusia. "#del he8an yang 9#9#k adalah )enting untuk mengu+i strategi
tera)i baru terhada) )enyakit. "#del tikus #besitas yang sesuai adalah dengan
diet induce obesity melalui )emberian diet tinggi lemak. Tikus m#del baraitric
surgery dengan met#de gastri9 banding lebih efektif dari)ada met#de lainnya
untuk menurunkan berat badan.
Bebera)a met#de yang da)at digunakan untuk mengetahui dan
mem)ela+ari )arameter adi)#s#)ati yang akan diteliti se)erti le)tinE adi)#nektinE
vas)in dan 9hemerin dalam darah memakai met#de ELI!7 6estern blot7
Imun#hist#kimia dan "lo5cytometry.
Berdasarkan hasil )enelitian menun+ukkan bah8a tikus m#del #besitas
dengan diet tinggi lemak lebih baik dan sesuai dibandingkan dengan tikus m#del
mutasi genetik.
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
DAFTAR *USTAKA
Y1Z. *hima RSE $sei SB. Adipo,ine. in o/e.it0. "ront (orm $es !..6.
(;16!0,4.
Y!Z. *ngela ". Ga+daE "SE "i9hael *. PelliDD#nE Ph.D.E"atthe8 R. Ri99iE
Ph.D. and 3d8ard *. ?lmanE Ph.D. Diet<Indu5ed Meta/o+i5 S0ndrome
in Rodent Mode+. Resear9h DietsE In9. !. @ules LaneE )e53runs5ick
!..4E A@ .6,.1.
YZ. *ills LE Blankenshi) @E Buffingt#n 1E 7urtad# "E Parr#tt @. ASMBS
-uide+ine.? ASMBS A++ied ea+t= nutritiona+ -uide+ine. 4or t=e
.ur-i5a+ wei-=t +o.. patient. !urg Obes $elat Dis !..6H%&2 Su))l';S40
1.6. 3)ub !..6 "ay 1,.
Y%Z. *llan ". 7.E 3. @. 3isenE and D. P#m)E AT=e M%1 mou.e? an out/red
anima+ mode+ o4 ear+0 on.et po+0-eni5 o/e.it0 and dia/e.it0,B Obesity
$esearch !..%.E v#l. 1!E n#. ,E )). 1,4I1%.4.
Y2Z. *rias 3E "art[neD PRE :a "ing Li /E SD#mstein SE R#senthal R@. Mid<
term 4o++owup a4ter .+ee6e -a.tre5tom0 a. a 4ina+ approa5= 4or mor/id
o/e.it0. Obes !urg. !..,.E1,&2';2%%06. 3)ub "ar 1!.
Y(Z. *rslan ?E Turk#glu SE Bal9i#glu SE Tavil BE :arakan TE 1engel *.
A..o5iation /etween nona+5o=o+i5 4att0 +i6er di.ea.e and 5oronar0
arter0 di.ea.e. %oron rtery Dis. !..4.E16;%I %(
Y4Z. Bays -E La8ren9e Bl#nde and R#bert R#sens#n. Adipo.opat=0? =ow do
diet, eCer5i.e and wei-=t +o.. dru- t=erapie. impro6e meta/o+i5
di.ea.e in o6erwei-=t patient.D E'#ert $e-ie5 o+ %ardio-ascular
Thera#y. !..6.E/#l. %E A#. (E Pages 64106,2
Y6Z. Br#8n 5. /.E :. 7u+i#kaE P. 5. 5ils#nE and :. *. 5##d8#rthE
AO/e.it0? w=0 /e 5on5ernedDB The merican 0ournal o+ Medicine !..,E
v#l. 1!!E n#. %E )). S%IS11E.
28
Y,Z. Buettner RE Parh#fer :GE 5#en9khaus "E 5rede 13E :unD0S9hughart
L*E S9hOlmeri9h @E B#llheimer L1. De4inin- =i-=<4at<diet rat mode+.?
meta/o+i5 and mo+e5u+ar e44e5t. o4 di44erent 4at t0pe.. 0 Mol
Endocrinol !..(. (&';%6202.1
Y1.Z. Bult "@E Thi+s /an dan "uller *7. Sur-i5a+ treatment o4 o/e.it0.
Euro#ean 0ournal o+ Endocrinology !..6E. 126. 1201%2
Y11Z. B#Da#glu :E B#lt#n :E "9"illan @E >immet PE @#8ett @E 1#llier GE et al.
C=emerin i. a no6e+ adipo,ine a..o5iated wit= o/e.it0 and meta/o+i5
.0ndrome. Endocrinology !..4.E 1%6;%(640,%.
Y1!Z. Ca.= !(E C=ri.tian ARE 'rea6e. DR. C=emerin peptide. promote
p=a-o50to.i. in a C=emR#3< and S0,<dependent manner !.1..
Y1Z. 1ars#n @LE Ruddy "3E Duff *3E -#lmes A@E 1#dy RPE Br#lin R3. T=e
e44e5t o4 -a.tri5 /0pa.. .ur-er0 on =0perten.ion in mor/id+0 o/e.e
patient.. rch Intern Med !..%.E12%&!';1,0!...
Y1%Z. 1ash @LE -art RE Russ *E Di<#n @PE 1#lledge 5-E D#ran @E -endri9k *GE
1arlt#n "B & Greaves DR. S0nt=eti5 5=emerinderi6ed peptide.
.uppre.. in4+ammation t=rou-= C=emR#3. 0ournal o+ E'#erimental
Medicine !..6 !.2 4(4I442.
Y12Z. %anonico 37 3etti M7 Luchetti "7 3attistelli M7 "alcieri E7 "erri P7 ,amai
L7 3arnett D7 Pa#a !. F+ow 50tometri5 pro4i+e., /iomo+e5u+ar and
morp=o+o-i5a+ a.pe5t. o4 tran.4iCed +eu,o50te. and red 5e++.(%ytometry
3 %linical %ytometry !.1..E 46&%'; !(4046
Y1(Z. 1#rs#nell# *E Perti9#ne 7E "alara *E De D#meni9# DE L#dd# SE Buemi
"E et al. (eptin<dependent p+ate+et a--re-ation in =ea+t=0, o6erwei-=t
and o/e.e .u/9e5t., Int 0 Obes !...E!4; 2((024
Y14Z. %=at@antoni
Y16Z. :o,ona, *ana-ioti. *apat=ana..opou+o., )ut=0mia 'our@ou+idou,
At=ana.ia Mou@a,i. (eptin and it. .o+u/+e re5eptor in p+a.ma o4
patient. .u44erin- 4rom remittin-Ere+ap.in- mu+tip+e .5+ero.i. (MS)?
In 6itro e44e5t. o4 +eptin on t0pe<% and t0pe<# 50to,ine .e5retion by
#eri#heral blood mononuclear cells7 T-cells and monocytes o+ M! #atients
!..%.
Y1,Z. 1lee S. ". dan *. D. *ttie. T=e -eneti5 +and.5ape o4 t0pe # dia/ete. in
mi5e,B Endocrine $e-ie5s !..4E v#l. !6E n#. 1E )). %6I6
Y!.Z. 3nd# BE $hta "E :ai SE et al.; An o/e.e rat mode+ o4 /ariatri5 .ur-er0
wit= -a.tri5 /andin-. Obes !urg !..4H 14; 612\61,.
Y!1Z. Ga+da *.". i-= 4at diet to indu5e o/e.it0 mode+. Obesity re-ie5 !..6.
Y!!Z. G#ralski :BE "91arthy T1E -anniman 3*E >abel B*E But9her 31E Parlee
SDE et al. C=emerin, a no6e+ adipo,ine t=at re-u+ate. adipo-ene.i. and
adipo50te meta/o+i.m. The 0 o+ 3iol %hemistry !..4.E!6!;!6142066
Y!Z. Greg#ry B. LesinskiE Sri /idya :#ndadasulaE Tim 1res)inE Lei ShenE
:ari:endraE "i9hael 5alkerE 5illiam 3. 1ars#n III. Mu+tiparametri5
F+ow C0tometri5 Ana+0.i. o4 Inter *atient ;ariation in STAT%
*=o.p=or0+ation Fo++owin-Inter4eron A+4a Immunot=erap0. 0ournal o+
the )ational %ancer Institute !..%E /#l. ,(E A#. 14E Se)tember 1
Y!%Z. Grays#n B3E Levasseur PRE 5illiams S"E Smith "SE "arks DLE Gr#ve
:L. C=an-e. in me+ano5ortin eCpre..ion and in4+ammator0 pat=wa0.
29
in 4eta+ o44.prin- o4 non=uman primate. 4ed a =i-=<4at diet.
Endocrinology !.1..121&%';1(!!0!.
Y!2Z. Guh D. P.E 5. >hangE A. Bansba9kE >. *marsiE 1. L. BirminghamE and *.
-. *nisE AT=e in5iden5e o4 5o<mor/iditie. re+ated to o/e.it0 and
o6erwei-=t? a .0.temati5 re6iew and meta<ana+0.i.,B 3M% Public
(ealth !..,E v#l. ,E arti9le 66E.
Y!(Z. -. IkedaE *. Shin#E T. "atsu#E -. I8atsukaE and >. SuDu#kiE A new
-eneti5a++0 o/e.e<=0per-+05emi5 rat (2i.tar 4att0)EDiabetes /DE/E v#l.
.E n#. 1!E )). 1.%2I1.2.E.
Y!4Z. -ung @E "9]uillan B"E Th#m)s#n PLE Beilby @P. Cir5u+atin-
adipone5tin +e6e+. a..o5iate wit= in4a+mator0 mar,er., in.u+in
re.i.tan5e and meta/o+i. .0ndrome independent o4 o/e.it0, Int 0 Obes
!..6.E!;44!044,
Y!6Z. -a+erE Gide#n R.E Tim#n 5. van -aeftenE and 7rank L.@. /isseren1.
Adipo.e ti..ue d0.4un5tion in o/e.it0, dia/ete., and 6a.5u+ar di.ea.e..
Euro#ean (eart 0ournal !..6. !,E !,2,I!,41
Y!,Z. a+/er- Ni+. ,
,
Todd D. S5=rawE F=ao ;. 2an-E !a<"oun- KimE !ame.
"iE Mar, *. ami+tonE Kate (u/0<*=e+p.and *=i+ipp ). S5=erer.
S0.temi5 Fate o4 t=e Adipo50te<Deri6ed Fa5tor Adipone5tin. merican
Diabetes ssociation !..,.E
Y.Z. IiDuka SE SuDuki 5E Tabu9hi "E Aagata "E Imamura SE :#bayashi BE
:anitani "E Banagisa8a TE :ase BE Takeda SE *burada "E Takahashi
:5. Dia/eti5 5omp+i5ation. in a new anima+ mode+ (TSOD mou.e) o4
.pontaneou. NIDDM wit= o/e.it0. E'# nim !..2. 2%&1';4106.
Y1Z. IiDuka SE 5. SuDukiE ". Tabu9hi et al.E ADia/eti5 5omp+i5ation. in a new
anima+ mode+ (TSOD mou.e) o4 .pontaneou. NIDDM wit= o/e.it0,B
E'#erimental nimals !..2E v#l. 2%E n#. 1E )). 41I6E.
Y!Z. Imai :E A. :ud#E ". :#yamaE and B. :a8ashimaE. )44e5t. o4
de=0droepiandro.terone on o+ei5 a5id a55umu+ation in rat +i6er.
3iochemical Pharmacology !..E v#l. (2E n#. 1.E )). 126I12,1E
YZ. @##st -G. T=e -eneti5 /a.i. o4 o/e.it0 and t0pe # dia/ete.? +e..on.
4rom t=e new @ea+and o/e.e mou.e, a po+0-eni5 mode+ o4 t=e meta/o+i5
.0ndrome. Probl %ell Di++er !.1.. 2!;1011.
Y%Z. :anasaki -E dan Daisuke :. Bio+o-0 o4 o/e.it0? +e..on. 4rom anima+
mode+ o4 o/e.it0. 0ournal o+ 3iomedicine and 3iotechnology !.11.
Y2Z. :ann# -E Teru# :E Itsu# 7E Shun+i :E T#shir# B dan Takashi T. A rat
-a.tri5 /andin- mode+ 4or /ariatri5 .ur-er0. 0 )i##on Med !ch.!..6.E
42&%'.)!.!0!.(
Y(Z. :aDuyuki -idaE @un 5adaE @un 3gu9hiE -#ng >hangE "asak# BabaE *ya
SeidaE IDumi -ashim#t#E Tatsu# $kadaE *kihir# BasuharaE *tsuk#
AakatsukaE :eni9hi ShikataE Shin+i -#uraiE @uni9hir# 7utamiE 3i+ir#
5atanabeE Basushi "atsukiE Ryu+i -iramatsuE Shigeru *kagiE -ir#fumi
"akin#E and Bash)al S. :an8ar.E. ;i.5era+ adipo.eti..ue<deri6ed .erine
protea.ein=i/itor? A uniGue in.u+in .en.iti@in- adipo50to,ine in
o/e.it0 %ommunicated by =eorge E. Palade7 Fni-ersity o+ %ali+ornia at
!an Diego !..2.7 La @#llaE 1*E @une ( &re9eived f#r revie8 A#vember !%E
!..%'
30
Y4Z. :em)ft *"E "yra LSE 1ha#ying LiE -ars#hena :E Terry T:E -uang.
(eptin a. a mar,er o4 /od0 4at and =0perin.u+inemia in 5o++e-e
.tudent., 0 o+ %( !..(.E22; 142016.
Y6Z. :eller PernilleE :eller 1harl#tteE *dam SteensbergE Lindsay 3. R#bins#nE
and Bente :. Pedersen . (eptin -ene eCpre..ion and .0.temi5 +e6e+. in
=ea+t=0 men? e44e5t o4 eCer5i.e, 5ar/o=0drate, inter+eu,in<1, and
epinep=rine. 0 ##l Physiol !..2.E ,6;16.20161!. 7irst )ublished 4
@anuary.
Y,Z. :erry B. G#ralskiE Tanya 1. "91arthyE 3lyisha *. -annimanE Brian *.
>abelE 3ugene 1. But9herE Sebastian D. Parlee E Shanmugam
"uruganandan

and 1hrist#)her @. Sinal. C=emerin, a No6e+ Adipo,ine
That $egulates di#ogenesis and di#ocyte Metabolism !..4E.
Y%.Z. :im SE Aaima "". Se9ret#ryE endo5rine and auto5rineHpara5rine
4un5tion o4 t=e adipo50te, 0 )utr !....E1.; 11.S0112S
Y%1Z. :#dera RE Shikata :E :ata#ka -?E Takatsuka TE "iyam#t# SE Sasaki "E
:a+itani AE Aishishita SE Sarai :E -ir#ta DE Sat# 1E $ga8a DE "akin# -.
'+u5a-on<+i,e peptide<% re5eptor a-oni.t ame+iorate. rena+ in9ur0
t=rou-= it. anti<in4+ammator0 a5tion wit=out +owerin- /+ood -+u5o.e
+e6e+ in a rat mode+ o4 t0pe % dia/ete.. Diabetologia !.11.
Y%!Z. :#)elman PE Aea+t= ri.,. a..o5iated wit= o6erwei-=t and o/e.it0,B
Obesity $e-ie5s !..4E. v#l. 6E n#. 1E )). 1I14E.
Y%Z. Lustig R-E SenE S#berman @3E /elasCueD0"ieyerE. O/e.it0, +eptin
re.i.tan5e, and t=e e44e5t. o4 in.u+in redu5tion, Int 0l o+ Obes !..%.E!6;
1%%01%6
Y%%Z. ". 5atanabeE S. ". -#utenE 1. "ataki et al.E ABi+e a5id. indu5e ener-0
eCpenditure /0 promotin- intra5e++u+ar t=0roid
Y%2Z. "a -E :uan0@iunn SE Sheau0L#ng L. Stud0 o4 )(ISA Te5=niGue. )ature
and !cience !..(E %&!'E)(04
Y%(Z. "a -. 2e.tern B+ottin- Met=od. The 0ournal o+ merican !cience
!..(.E !&!'E );!0!4
Y%4Z. "as#uleh B"E Baraniskin *E S9hmiegel 6. Iuanti4i5ation o4 5ir5u+atin-
endot=e+ia+ pro-enitor 5e++. in =uman perip=era+ /+ood? 3stablishing a
reliable fl#8 9yt#metry )r#t#9#l 0ournal o+ Immunological Methods
!.1..E24; 60%!
Y%6Z. "aedaa Takehik#E E A#rikaDu :igu9hiaE Buka :#bayashiaE T#shihik#
IkutaaE "asan#bu $DakibE and Shir#h :ishi#kaa. (eptin deri6ed 4rom
adipo50te. in in9ured perip=era+ner6e. 4a5i+itate. de6e+opment o4
neuropat=i5 pain6ia ma5rop=a-e .timu+ation. aDe#artment o+
Pharmacology7 6akayama Medical Fni-ersity7 6akayama <?/-@@/G7
0a#anH and De#artment o+ To'icology7 )iigata Fni-ersity o+
Pharmacyand ##lied Li+e !cience !..,E Aiigata ,2.0!.!6E @a)an
Y%,Z. "art[n01#rder# LE Gar9[a @@E -in9had# "DE B#te 3E "ans# RE $rtega 3.
a/itua+ p=0.i5a+ eCer5i.e impro6e. ma5rop=a-e I(<1 and TNF<J
dere-u+ated re+ea.e in t=e o/e.e @u5,er rat mode+ o4 t=e meta/o+i5
.0ndrome. )euroimmunomodulation !.11. 16&!';1!0..
Y2.Z. "atsunaga AE /irad#r /E Santis 1. et al.E AIn .itu +o5a+i@ation o4 a-outi
.i-na+ protein in murine .,in u.in- immuno=i.to5=emi.tr0 wit= an
31
AS*<.pe5i4i5 anti/od0,B 3iochemical and 3io#hysical $esearch
%ommunications !...E v#l. !4.E n#. 1E )). 14(I16!E.
Y21Z. "#nteir# "PE "#nteir# @DE *guas *PE et al.; A rat mode+ o4 re.tri5ti6e
/ariatri5 .ur-er0 wit= -a.tri5 /andin-. Obes !urg !..(H 1(; %6\21.
Y2!Z. "#nteir# "PE "#nteir# @DE *guas *PE et al.; Rat. .u/mitted to -a.tri5
/andin- are +eaner and .=ow di.tin5ti6e 4eedin- pattern.. Obes !urg
!..(H 1(; 2,4\(.!.
Y2Z. "unDberg -E "artin G". Mo+e5u+ar and anatomi5a+ determinant. o4
5entra+ +eptin re.i.tan5e, )at )eurosci !..2.E6; 2((024.
Y2%Z. A#gu9hi B. A. AishikataE A. Shikata et al. Keto-eni5 e..entia+ amino
a5id. modu+ate +ipid .0nt=eti5 pat=wa0. and pre6ent =epati5 .teato.i.
in mi5e,B PLo! One !.1.E v#l. 2E n#. 6E *rti9le ID e1!.24E
Y22Z. $hta "E Shir#miDu *E 3nd# BE et al.; Intra-a.tri5 /a++oon and
+aparo.5opi5 ad9u.ta/+e -a.tri5 /andin-? treatment. 4or patient. wit=
mor/id o/e.it0 in !apan (in !apane.e). 0 0#n !oc Endosc !urg !..(H 11;
(1\(6
Y2(Z. $kaDaki ". B. Sait#E B. ?daka et al.E Dia/eti5 nep=ropat=0 in KK and
KK<A mi9eE E'#erimental nimals !..!E v#l. 21E n#. !E )). 1,1I1,(E
Y24Z. PeGrusseE L.E 1hagn#nE B1.E 5eisnagelE @. T=e =uman o/e.it0 -ene map?
t=e #$$$ updateE Obes $es !..1.E,;1201(,
Y26Z. Prasad SSE Prashanth *E :umar 1PE Reddy S@E Giridharan A/E /a+res8ari
*. A no6e+ -eneti5a++0<o/e.e rat mode+ wit= e+e6ated %% /eta<
=0droC0.teroid de=0dro-ena.e t0pe % a5ti6it0 in .u/5utaneou. adipo.e
ti..ue. Li#ids (ealth Dis !.1.. 14H,;1!.
Y2,Z. R#h SE S#ng S-E 1h#i :1E :at#h :E 5ittamer /E Parmentier "E et al.
C=emerin E A new adipo,ine t=at modu+ate. adipo-ene.i. 6ia it. own
re5eptor. 3iochem and 3io#hys $esearch %omm !..4.E(!;1.1016.
Y(.Z. Seeger @eannetteE "i9haela >iegelmeierE *nette Ba9hmannE ?lrike L#^
ssnerE @u^ rgen :ratDs9hE"atthias Blu^ herE "i9hael Stumv#llE and "athias
7asshauer. Serum (e6e+. o4 t=e Adipo,ine ;a.pin in Re+ation to
Meta/o+i5 and Rena+ *arameter.. 0 %lin Endocrinol Metab !..67
@anuaryE ,&1';!%4I!21
Y(1Z. Shahab ?ddinE R#ng BuE "aCb##l *hmedE @ehad *bubakerE 7#uad *l0
DayelE Prashant Bavi and :ha8la S *l0:uraya. O6ereCpre..ion o4 +eptin
re5eptor predi5t. an un4a6ora/+e out5ome in Midd+e )a.tern o6arian
5an5er Molecular %ancer !..,.E!E 6;4%.
Y(!Z. S=arma DE 2an- !E Fu **E S=arma SE Na-a+in-am AE Me++. !E and0
!E *a-e A!E Co=en CE Anania FAE SaCena NK. Adipone5tin
anta-oni@e. t=e on5o-eni5 a5tion. o4 +eptin in =epato5e++u+ar
5ar5ino-ene.i.. )e*atolo&!( A#vH2!&2';1410!!.
Y(Z. S)eakman @. 1. -amblyE S. "it9hellE and 3. :r _#l. Anima+ mode+. o4
o/e.it0. Obesity $e-ie5s !..4. 6&1'. )). 22I(1E
Y(%Z. Srinivasan : dan P. Ramara#. Anima+ mode+. in t0pe # dia/ete.
re.ear5=? an o6er6iew,B Indian 0ournal o+ Medical $esearch !..4E v#l.
1!2E n#. E )). %21I%4!
Y(2Z. Tan B:E 1hen @E 7arhatullah SE *dya RE :aur @E et al. In.u+in and
met4ormin re-u+ate 5ir5u+atin- and adipo.e ti..ue 5=emerin. Diabetes
!..,.E 26&,';1,41I1,44.
32
Y((Z. Tan Bee :.E Dennis -eutlingE @ing 1henE S. 7arhatullahE Raghu *dyaE
Ste)hen D. :eayE1 1. Ri9hard :ennedyE -endrik LehnertE and -ar)al S.
Randeva. Met4ormin De5rea.e. t=e Adipo,ine ;a.pin in O6erwei-=t
2omen 2it= *o+050.ti5 O6ar0 S0ndrome Con5omitant 2it=
Impro6ement in In.u+in Sen.iti6it0 and a De5rea.e in In.u+in
Re.i.tan5e. Diabetes !..6E v#l. 24E +une .
Y(4Z. Trevaskis @E 5alder :E 7#letta /E :err0Bayles LE "9"illan @E 1##)er *E
Lee SE B#lt#n :E Pri#r "E 7ahey RE 5hite9r#ss :E "#rt#n G@E S9h8artD
"5E 1#llier GR. Sr5 =omo+o-0 3<domain -rowt= 4a5tor re5eptor<
/ound #<+i,e (endop=i+in) intera5tin- protein %, a no6e+ neurona+
protein t=at re-u+ate. ener-0 /a+an5e. Endocrinology. 1%(&,';4240(%.
Y(6Z. /ivian Berg1 E Baldur Sveinb+Ornss#n !E E Signy Bendiksen% E @an
Br#<1E2 E :haled "eknas( and Bngve 7igens9hau1E2E. uman arti5u+ar
5=ondro50te. eCpre.. C=emR#3 and 5=emerin8 C=emR#3 promote.
in4+ammator0 .i-na++in- upon /indin- t=e +i-and 5=emerin#%<%>7,
rthritis $esearch I Thera#y !.1.E 1!;R!!6.
Y(,Z. 5alker @." dan Ra)ley Ral)h. Medi5a+ /iomet=od. =and/oo,. (umana
Press. Toronto !..2.
Y4.Z. 5estermeier RE "ar#uga R. *rotein dete5tion met=od. in proteomi5.
re.ear5=. 3iosci $e# !..2. !2&10!';1,0!
Y41Z. 5#rld -ealth $rganiDati#nE `Fa5t .=eet? O/e.it0 and o6erwei-=t,B
htt);==888.8h#.int=h)r=gs.fs.#besity.shtml.
Y4!Z. B#shimura T & $))enheim @@. C=emerin re6ea+. it. 5=imeri5 nature.
0ournal o+ E'#erimental Medicine !..6.E!.2 !164I!1,..
Y4Z. Buka $n#aE 3ri -att#ri aE Bukitaka 7ukaya aE Sh#+i Imai aE Basushi
$hiDumi b7. Anti<o/e.it0 e44e5t o4 +elumbo nuci,era +ea6e. eCtra5t in
mi5e and rat.. 0ournal o+ Ethno#harmacology !..(.E 1.( E !6I!%%
Y4%Z. >hang B.E :. Gu#E R. 3. LeBlan9E D. L#hE G. @. S9h8artDE and B. -. BuE.
In5rea.in- dietar0 +eu5ine inta,e edu5e. diet<indu5ed o/e.it0 and
impro6e. -+u5o.e and 5=o+e.tero+ meta/o+i.m in mi5e 6ia
mu+time5=ani.m.,B Diabetes !..4. v#l. 2(E n#. (E )). 1(%4I1(2%E
33