INTRODUCCIN A LA MICROBIOLOGA.

CLULA
EUCARIOTA.PROCARIOTA. FLORA MICROBIANA AMBIENTAL Y
HUMANA. MORFOLOGA BACTERIANA, ESTRUCTURAS,, EL ADN
BACTERIANO, ESTRUCTURA Y FUNCIONES, REPRODUCCIN
Prof. Gloria Mara Saez flores
Qu es la microbiologa?
Estudio de los organismos microscpicos
3 palabras griegas: mikros (pequeo), bios (vida) y
logos (ciencia)
estudio de la vida microscpica
Surgi como ciencia tras el descubrimiento y
perfeccionamiento del microscopio.
Qu son los microorganismos?
Organismos que no pueden ser observados a simple
vista.
Organismos que viven como clulas aisladas o
entidades que contienen cidos nucleicos capaces
de replicarse, por lo menos en parte de su ciclo.
Son: algas, hongos, protozoarios, bacterias y virus.
Cmo afectan nuestra vida?
Muchos microorganismos causan enfermedades y
abundan casi en cualquier lugar por lo que siempre
estamos expuestos a un contagio.
Pueden afectarnos en el aspecto econmico ya que
le producen enfermedades a los animales y a las
plantas daando las cosechas y las clases de
ganados y otros animales domsticos que sirven
como fuente de alimento.
Qu utilidad brinda a la humanidad?
Ms de cien especies microbianas son usadas
en la produccin de sustancias que no
pueden ser obtenidas de forma ms fcil o
ms barata por otros medios.
Ventajas: tamao, alta tasa metablica,
posibilidad de cultivarse a gran escala,
estabilidad gentica, etc.
HISTORIA
Anton van Leeuwenhoek
(1632-1723)
Sus primeros dibujos fueron publicados en 1684
Robert Hooke (1635-1702)
Lazzaro Spallanzani (1729-1799)
Robert Koch (1843-1910)
Iniciador de la bacteriologa mdica moderna. Estudi
botnica, fsica y matemticas y MEDICINA.
Otros intereses: arqueologa, antropologa, las enfermedades
ocupacionales, como el envenenamiento por plomo, y la
bacteriologa.
Louis Pasteur (1822-1895)
Qumico y bilogo francs que fund la ciencia
de la microbiologa.
Comenz investigando los procesos de
fermentacin del vino y la cerveza y descubri la
existencia de las bacterias que interferan en
este proceso.
En 1861 introdujo los trminos de aerbico y
anaerbico, segn las caractersticas de
crecimiento de las levaduras.
Aplic sus conclusiones al estudio de la causa y
el desarrollo de las enfermedades y demostr la
teora de los grmenes como causantes de las
mismas.
Introdujo el trmino virus sin hacer distincin
y vacuna en honor a Jenner
Desarroll vacunas que consiguieron salvar
miles de vidas: clera aviar, antrax y rabia
Ferdinand Julius Cohn (1828-1898)
Considerado fundador de la
microbiologa moderna y padre de la
bacteriologa.
En 1872 propuso la clasificacin de las
bacterias: gnero, especie y
variedades.
Describi otros microorganismos
patgenos transmitidos por agua
contaminada, distintos al V. cholerae
Otros eventos importantes del siglo XIX
1878: Joseph Lister publica sus
estudios sobre la fermentacin de la
leche Bacterium lactis
1879: Albert Neisser identifica al
agente causal de la gonorrea
1880: Alphonse Laverin encuentra al
parsito de la malaria en glbulos
rojos.
1881: Paul Erlich utiliza el azul de
metileno
Siglo XX
Aerobiosis y anaerobiosis
En 1938 se observaron por primera vez los virus gracias a la
invencin del microscopio electrnico.
En las dcadas de 1960 y 1970 se descubrieron numerosos virus y
se determinaron sus caractersticas fsicas y qumicas.
Diversas tcnicas innovadoras: microscopio electrnico de barrido
o las tcnicas de secuenciacin del cido desoxirribonucleico
(ADN).
Descubrimiento de los priones por Stanley Prusiner y su equipo
en 1982 ha abierto una va de estudio dentro de la microbiologa
(simples protenas desprovistas de material gentico)
En 1988 Kary Mullis utiliza la enzima de Thermus aquaticus para
estabilizar la PCR (premio Nobel en 1993)
Alexander Fleming (1881-1955)
Descubri que algunas
colonias crecidas de S.
aureus eran destruidas
por el crecimiento del
hongo Penicillium
Realiz la extraccin del
compuesto activo:
penicilina
Karl Woese (1928)
Por anlisis de rARN 16S
LA CLULA
Los organismos presentan
caractersticas muy importante
conocidas como Caract. de vida.
Estas son digestin, respiracin,
excrecin, reproduccin, etc.
La clula es la unidad funcional o
estructural de los organismos.
TIPOS DE CLULA
Pro = Antes, Karios = Ncleo) (Eu = Verdadero, Karios = Ncleo)
CLASIFICACIN
ANTES!!!
DOMINIO
Actualmente considerado el nivel
taxonmico ms alto.
Arquea
Halogeometricum borinquensis
Haloterrigena thermotolerans
PROTISTA
Son eucariticos unicelulares o
multiceliados simples
viven solitarios, aunque algunas especies
forman agrupaciones laxas de individuos
denominadas colonias.
FUNGI
Estos organismos actan como
desintegradores
(no llevan a cabo el proceso de fotosntesis).
HONGOS MICROSCOPICOS
LIQUENES
Son una asociacin simbiotica entre un hongo,
un alga o una cianobacteria.
En esta relacin el hongo encierra clulas
fotosintticas y depende de ellas para vivir.
VIRUS
FLORA MICROBIANA
AMBIENTAL Y HUMANA
MICROORGANISMOS Y EL MEDIO AMBIENTE
Los Microorganismos son componentes indispensables del ecosistema participan
en los Ciclo del Carbono, Oxgeno, Nitrgeno, Azufre y de todas las cadenas y redes
trficas ecolgicas.
La Biorremediacin utiliza microorganismos para eliminar los compuestos qumicos
y txicos del medio ambiente.
La Lixiviacin microbiana mejora la recuperacin de metales de los relaves
mineros
En biodegradacin del petrleo en derrames en aguas continentales.
* Metabolismos de los microorganismos frente a efecto de los plaguicidas que lo
metabolizan oxidndolo a CO2, otros son atacados parcialmente.
Inter accin Planta- Microorganismos formando ndulos radicales, favoreciendo
asimilacin de nutrientes a las plantas , protegiendo de patgenos del medio etc.
En mejoramiento gentico de los vegetales por transferencia de plsmidos a travs
de Agrobacterium.
FLORA MICROBIANA HUMANA
MORFOLOGA BACTERIANA,
ESTRUCTURAS, REPRODUCCIN,
EL ADN BACTERIANO,
ESTRUCTURA Y FUNCIONES
BACTERIA
Organismos unicelulares y microscpicos
Carecen de ncleo u organelos limitados por
membranas.
Pared celular a base de carbohidratos.
BACTERIA
Son muy pequeas,
1 y 10 micrmetros (m) de longitud
Modo variable de obtener la energa y el alimento.
Se encuentran en
el aire
el suelo
el agua
Se pueden encontrar en algunos alimentos o
viviendo en simbiosis con plantas, animales y otros
seres vivos.
MEMBRANA CITOPLASMTICA
Es muy delgada de 5-10 nm
observable con microscopio
electrnico.
La mayora de los lpidos son
Fosfolpidos, asimtricos con
extremos Polares: glicerol (con el
agua, hidrfilos) y no polares c.
grasos (internos hidrfobos),
Son anfipticos, permitiendo formar
una bicapa en la membrana.
Carecen de esteroles como colesterol, pero poseen molculas penta-
Cclicas denominadas Hepanoides, ubicadas dentro la bicapa.
Posee Protenas perifricas constituye el 20-30%, ubicadas poco Firme en
la membrana interna y Protenas Integrales, insoluble en agua, no se
extrae fcilmente con lpidos.
FUNCIONES
Acta como barrera selectiva.
Transporta nutrientes y residuos mediado por portadores
(permeasas =protenas d transporte)
Es lugar donde se realiza muchos procesos metablicos:
Respiracin, fotosntesis,.proceso de sntesis de pared celular y
cpsula.
Posee receptores especiales que detecta y responde a sustancias
qumicas del medio exterior.
Sitio de actividad de citocromos y de generacin de fuerza motriz
de protones (FMP).
Sede del centro de replicacin del ADN, Punto de anclaje de
plsmidos, flagelos.
Internamente posee los mesosomas laterales y septales,
invaginaciones de membrana, forma Vesculas, tbulos o lamelas,
interviene en divisin celular y procesos secretorios.
PARED BACTERIANA
Christian Gram. en 1884 comprob que las bacterias se clasifican
en Gram positivas y Gram negativas
LAS GRAM POSITIVAS tiene de 20-80nm de grosor de
peptidoglicano o mureina (formados por derivados de azcares:N
acetilglucosamina y N acetilmuamico y grupos de aa); poseen
cidos teicoicos (polmero de glicerol y ribitol unidos por grupos
fosfatos, pueden estar unidos aa. como D- alanina u glucosa) Al
peptidoglicano, son responsables de la carga negativa de la
bacteria.
LAS GRAM NEGATIVAS es de 2-7 nm de grosor y rodeada de una
membrana externa de 7-8nm. denominndole envoltura, posee
protenas de membrana como la protena de Braun o lipoprotena de
murena
compuesta por dos capas, una de glucopeptidos rodeada de una
bicapa fosfolipdica, lipoprotenas y glucolipdica..
Los LPS-Lipopolisacridos est constituido por Lpido A, polisacrido
central y la cadena lateral O. La membrana externa disminuye la
entrada de sales biliares, antibiticos y otras
Sustancias txicas.;Son ms resistentes a los antibiticos
TINCIN GRAM
Bacteria Gram + Bacteria Gram -
Pared celular simple Pared celular
compleja
Capa de
peptidoglucano
gruesa
Capa de
peptidoglucano fina
No capa externa de
lipopolisacridos
Capa externa de
lipopolisacridos
Retienen cristal
violeta/iodo-color
azul/violeta
Retienen safranina-
color rojo/rosado
PARED CELULAR DE LAS BACTERIAS CIDO
ALCOHOL RESISTENTES
Se tiin con fucsina + fenol
(forzando mediante calentamiento)
Tienen resistencia a decolorarse
por una mezcla de cido clorhdrico
al 3% en etanol de 96o. Por ello se
denominan como bacterias cido-
alcohol resistentes.
Esta propiedad depende
esencialmente de la presencia, en
su pared celular de unos lpidos
llamados cidos miclicos.
un peptidoglucano especial (la diferencia
ms importante es que en vez de N-
acetil murmico existe N-glucolil-
murmico);
un arabinogalactano de gran peso
molecular.
Ambos polmeros se encuentran
enlazados a travs de fosfodister
entre una unidad de murmico y una
de las arabinosas. Pero a su vez, este
esqueleto se une covalentemente a los
cidos miclicos
. Los cidos miclicos son -hidroxicidos grasos
ramificados en , cuya longitud de cadena
es grande (desde C78 a C91 en
Mycobacterium). Estn unidos al esqueleto
de la P.C. de forma uniforme, a travs de
enlaces con los -OH en 5 de las unidades de
arabinosa.
FUNCIONES
Resistencia para soportar altas presiones osmticas.
Protege las dos clulas hijas en la reproduccin bacteriana.
Sirve como filtro molecular, impidiendo el paso de macromolculas
y permite el paso de agua y metabolitos esenciales.
Es un factor determinante del poder patgeno bacteriano, pues en
las gram negativas la endotoxina se encuentra en la pared.
Contiene antgenos tipo y grupo especficos en la parte ms
externa de la pared, preferiblemente en el polisacrido superficial.
Es el sustrato sobre el que actan, entre otros, antimicrobianos de
amplio uso, como los beta lactmicos.

Otras estructuras
Mesosomas: Prolongaciones internas de la membrana plasmtica
que contienen enzimas respiratorios y colaboran en el proceso de
la divisin celular.
Citoplasma: Medio celular limitado por las membranas, muy
semejante al de la clula eucariota. En el se realizan la mayora de
las reacciones metablicas de la bacteria.
Ribosomas 70 S: Son orgnulos globulares, formado por dos
subunidades la 50 S y la 30 S, visibles nicamente al microscopio
electrnico, pueden estar libres o asociados. Intervienen en la
sntesis proteica.
Inclusiones: Son grnulos de reserva, en poca de abundancia, o
bien son residuos de su metabolismo. Estn formadas de
polisacridos o gotitas de grasa.
ESTRUCTURAS ASOCIADAS
Los flagelos
estn compuestos por cerca de 20 protenas, con aproximadamente
otras 30 protenas para su regulacin y coordinacin.
El filamento es un tubo hueco helicoidal de 20 nmde espesor.
El filamento tiene una fuerte curva justo a la salida de la membrana
externa; este "codo" permite convertir el movimiento giratorio del
eje en helicoidal.
A-Monotricas;
ej.Pseudomona
Fluorsecens
B-Loforicas;
C-Amfitricas;
D-Peritrica;Ej Proteus
mirabilis E.coli
Fimbrias o Pili
Son apndices finos, semejantes a pelos, de 1 a
20 micrones de longitud y que a menudo se
presentan en grandes nmeros sobre las
bacterias Gramnegativas en particular las
Enterobacteriaceas y Neisserias.
A diferencia de los flagelos no poseen movilidad,
pero por ser de naturaleza proteica (pilina),
poseen propiedades antignicas y
hemoaglutinantes.
Tienen importancia mdica porque algunas
fmbrias median la ligadura de bacterias a las
clulas a travs de las adhesinas (adhesinas
bacterianas). El trmino fimbria bacteriana se
refiere a los pelos comunes, lo que se debe
distinguir del uso preferido de "pelos", que se
utiliza para designar a los pelos sexuales (pili
sexual).
Cpsula
Endospora
Estrucutra de supervivenvia.
Resistente a:
Calor
Disecacin
Radiacin
cidos
Desinfectantes
Qumicos fuertes
Presente en bacterias del suelo
Su descubrimiento ayud al desarollo
de mtodos y tcnicas adecuadas de
esterilizacin
ESTRUCTURAS ASOCIADAS
Inclusiones celulares
Lugares de almacenaje
Vacuola
Granulos de almidn
La clula los utiliza como fuente de energa
Grnulo metacromtico.- frecuentemente esta ubicado cerca de
los polos, contiene cido polifosfrico (cuerpos de Babes-Ernst o
grnulos metacromticos ) se tien intensamente con los
colorantes de anilina como el azul de metileno alcalino de Loffler,
dando al bacilo una apariencia de rosario.
CLASIFICACIN
Mrfologa
MORFOLOGIA DE LAS BACTERIAS
Crecimiento de las colonias
La morfologa y tamao de la colonia se
utilizan para identificar las especies de
bacterias.
EL ADN BACTERIANO, ESTRUCTURA Y
FUNCIONES, REPRODUCCIN
GEN
unidad bsica de herencia contiene
la informacin para sntetizar una
macromolcula con funcin celular
especfica ejm: Protenas, ARNm,
ARN ribosmico, ARN de
transferencia y ARN pequeos
Se disponen, a lo largo de cada uno
de los cromosomas. ocupando una
posicin determinada (locus). El
conjunto de cromosomas de una
especie se denomina genoma
Mostrando el gen y las regiones
codificables y no codificables
NMERO DE GENES EN ALGUNOS
ORGANISMOS
Cuadro 1: mostrando el num de genes y pares de bases de algunos organismos
En el microscopa electrnica
muestra un cromosoma
bacteriano altamente
condensado y ordenado
("supercoiled" o
superenrrollado), y que se
encuentra anclado
parcialmente a la membrana
bacteriana (mesosoma)
Presenta protenas y
poliaminas de bajo
peso molecular y de
iones magnesio
remplazando a las
histonas
Esta compuesto de
alrededor de 80% de
DNA, 10% de RNA y
10% de protenas (RNA
polimerasa).
Etapas de la Replicacin
1. Helicasa Desenrolla hlice con ayuda de Topoisomerasa (DNA girasa).
esta ltima corta el DNA que esta sper enrollado para liberar tensin y
volver a unir
2. DNA Polimerasa III.- Papel principal en la replicacin, replica
continuamente su copia de cadena conductora, las Polimerasas I y II .
repasan, corrigen el diseo del DNA. Necesitan de ATP, GTP. La
replicacin de cadena rezagada es discontinua.
3. La RNA polimerasa.- (Primasa) sintetiza un Cebador complementario del
DNA. es necesario ayuda de otras protenas llmdose Primosa.se
sintetiza por fragmentos llamados Fragmentos de Okazaki. La DNA
polimerasa I, elimina al cebador ARN y sintetiza complementario
apropiado.
4. La DNA ligasa.- Une los fragmentos contiguos complementarios al
patrn
Estas enzimas tanto la topoisomerasas, como
la ADN girasa, son blanco de accin para los
antibiticos del grupo de las quinolonas, como
el cido nalidxico.
MUTACIONES
El DNA contiene informacin en la secuencia de los nucletidos de los
genes no se altera sustancialmente de lo contrario hay alteracin del
fenotipo o genera
nuevas variedades por lo que se consideran:
Mutaciones morfolgicas, mutaciones letales y mutaciones
condicionales. Sin embargo hay mutaciones que no
Alteran el fenotipo, afecta solo una localizacin determinada
(mutaciones puntuales).
Las mutaciones pueden ser:
Espontneas. Ocasionado por algn factor externo, ej. radiacin natural
(rayos csmicos). pueden ocurrir durante la replicacin del DNA como
errores en el apareamiento de las bases; en este caso la frecuencia
puede ser de 1 x 10-7 - 10-11 por pares de bases.
Inducidas. Se pueden inducir en forma artificial, ej. luz UV
Son agentes que pueden producir mutaciones. se pueden distinguir:
Mutgenos qumicos anlogos de las bases. Ej. 5-Bromouracilo es anlogo
de la Timina o la 2-aminopurina es anlogo de la Adenina.
Mutgenos qumicos que reaccionan con el DNA. Ej. cido Nitroso puede
transformar la base Adenina de tal manera que se aparee con la Citosina.
Agentes alquilantes. Ej. la Mostaza Nitrogenada y Mitomicina reaccionan
con bases del DNA alterndolas qumicamente.
Radiaciones. Ej. Luz UV (250 nm) provoca un dmero de bases pirimidinas.
Ionizantes (rayos X) producen radicales libres que atacan quebrando la
cadena de DNA.
Biolgicos. Ej. bacterifagos en el fenmeno de recombinacin gentica
de Transduccin.
MUTGENOS.
intercambio gentico producido cuando una bacteria es capaz de
captar fragmentos de ADN, de otra bacteria que se encuentran
dispersos en el medio donde vive.
REPRODUCCIN
TRANSDUCCIN:
En este caso la transferencia de ADN de una bacteria a otra, se
realiza a travs de un virus bacterifago, que se comporta como
un vector intermediario entre las dos bacterias.
transduccion
.Transduccin Generalizada: mecanismo por el cual potencialmente cualquier
gene bacteriano de la donadora
puede ser transferido a la clula receptora
El mecanismo de la transduccin generalizada
TIPOS DE TRANSDUCCION
CONJUGACIN: una bacteria donadora F+ transmite a travs de
un puente o pili, un fragmento de ADN, a otra bacteria receptora
F-. La bacteria que se llama F+ posee un plsmido, adems del
cromosoma bacteriano.

PLASMIDOS
son elementos genticos extra-cromosomales que pueden
llevar a cabo una replicacin autnoma. Un episoma es un
plsmido que adems es capaz de integrarse al cromosoma
bacteriano.
plasmido a mayor aumento
a) Plsmidos Conjugativos. Tienen genes responsables de su transferencia a
otra clula y de la transferencia del cromosoma bacteriano a otras clulas.
b) Plsmidos Disimilatorios. Codifican la sntesis de enzimas que catalizan el
catabolismo de azcares poco comunes y de hidrocarburos.
c) Plsmidos Bacteriocinognicos. Poseen genes de sntesis de bacteriocinas
(protenas txicas bactericidas).
d) Plsmidos de Resistencia (Factor R). Portan genes que otorgan resistencia
a las clulas que los llevan, ej. resistencia a antibiticos, metales pesados,
toxinas, etc.
TIPOS DE PLSMIDOS
Procedimientos sofisticados para la separacin , manipulacin y
expresin del material gentico.
En ingeniera gentica hay dos tipos de investigacin:
1.INVESTIGACION BASICA que significa estudiar los
mecanismos de la replicacin y de la expresin gnica en virus,
procariotes y eucariotes.
2. INVESTIGACION APLICADA, desarrollo de cultivo microbiano
capaz de sintetizar productos valiosos como :
INSULINA HUMANA
HORMONA DEL CRECIMIENTO
INTERFE
VACUNAS
ENZIMAS INDUSTRIALES
INGENIERIA GENETICA
BIOTECNOLOGA
Aplicacin de organismos, sistemas y procesos
biolgicos en la industria
Sustrato + Ser vivo --- Producto
Desde hace muchos aos el hombre ha usado sin
saberlo Ejm.
Pan con levadura,
Bebidas alcohlicas, vinagre, cerveza.
Penicilina y otros antibiticos
OBTENCIN ECONMICA DE PRODUCTOS YA EXISTENTES
ADN SINTETICO
El ADN sinttico u oligonucletidos de DNA son pequeos segmentos
de ADN monohelicoidales.
FERMENTACIONES MICROBIANAS
Un numero de importantes productos son hechos usando
microorganismos de los cuales los antibiticos son los
mas importantes.
VACUNAS
Una vacuna es un material que puede inducir inmunidad
a un agente infeccioso.
Por ingeniera gentica los genes virales de la protena
de la cubierta pueden ser clonados y expresados en
bacteria haciendo posible el desarrollo seguro de
vacunas.
APLICACIONES PRACTICAS DE INGENIERIA GENETICA
OBTENCIN DE VACUNAS RECOMBINANTES
PROTEINAS ANIMALES
Un numero de protenas animales son de gran inters
comercial y medica.
El clonamiento de genes para una protena humana en
bacteria para su produccin comercial.
PLANTAS Y ANIMALES TRANSGENICOS
A travs de estos se puede llegar a aumentar la
productividad, alterar la calidad nutricional, producir
ciertas protenas. Por introduccin del DNA clonado en
los huevos fertilizados de animales, o directamente en la
clulas vegetales crecidas en cultivo de tejidos, es ahora
posible obtener organismos superiores modificados.
PLANTA TRANSGENICA
Algunas bacterias poseen genes que codifican para
protenas que degradan contaminantes ambientales.
Algunos ejemplos: genes para la biodegradacin de
pesticidas clorados como clorobenzenos.
Algunos plasmidos han sido construidos conteniendo
genes para la biodegradacin de varios qumicos
txicos.
BIOTECNOLOGIA DEL MEDIO AMBIENTE
TERAPIA GENICA
preguntas
-Marque con (x) la respuesta correcta
( ) Robert Koch fue el primero en aislar y propagar a bacillus anthracis
( ) la bacteria representativa de la piel es Streptococcus epidermidis
( ) Los hongos son eucariota, forman filamentos llamados micelios
( ) las M.o son tiles solo porque ocasionan enfermedad
-Relacione la columna, segn convenga
a) Fimbrias ( )le da forma a la bacteria
b) Esporas ( )sirven para la adherencia
c) Cpsula ( ) son formas de resistencia
d) Pared celular ( )impide la fagocitosis
Referencia bibliogrfica
Jawers 1994 Microbiologa Mdica.
V.Ausena Ruiz 1996 Introduccin a las
enfermedades infecciosas.