Informe de Extaccion Subproductos

Procesamiento de subproductos de la pesca
Extraccin de Quitosano del exoesqueleto de crustceos

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UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

Facultad de Pesquera
Departamento Acadmico de Acuicultura e Industrias Pesqueras

CURSO : Procesamiento de Sub-productos de la Pesca
INFORME : Extraccin de Quitosano del exoesqueleto de
crustceos
PROFESOR : Cesar Meja Soria
MESA : 4
INTEGRANTES : Bulln Zamora, Yoana Cintia
Cardenas Barzola, Joanne
Correa Silva, Anthony
Fabin Llantoy, Gianella
Mamani Hilasaca, Joyce
FECHA DE ENTREGA: 03 de Junio del 2014

2014-I

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I. INTRODUCCIN
La quitina es el polmero natural ms abundante despus de la celulosa. Fue descubierta en 1811
por Bracconot, al aislar un material nitrogenado en sus estudios sobre la qumica de los hongos.
Rouget descubri en 1859 que el tratamiento de la quitina con una solucin concentrada de
hidrxido potsico a ebullicin la modificaba transformndola en un compuesto soluble en
soluciones de cidos diluidos, ms tarde designado como quitosano por Hoppe-Seiler. (Gasen,
1996)
Las industrias procesadoras de mariscos presentan dentro de sus principales problemas la
disposicin final de los desechos generados a partir de las conchas y caparazones de los diversos
tipos de crustceos (Acevedo, 2011).
A manera de solucin, la utilizacin de los exoesqueletos de cangrejo, langosta y camarn ha sido
planteada como fuente de materia prima para la obtencin de quitina y quitosano y como una
oportunidad concreta para mejorar las condiciones socioeconmicas y ambientales de estas
zonas. La obtencin de quitina y quitosano significara la solucin de un problema
medioambiental, reconversin de un residuo en un producto innovador con alto valor agregado,
un emprendimiento industrial con creacin de fuentes de trabajo y potenciales perspectivas para
la instalacin de otras industrias derivadas en base a sus distintas aplicaciones (Acevedo y Caprile
2011).
En el presente trabajo se realizara la extraccin del quitosano a partir del exoesqueleto de
cangrejo ensayando una metodologa para su obtencin.

II. REVISIN BIBLIOGRFICA

QUITOSANO

En lo que al quitosano se refiere, se sabe que es el derivado ms importante de la quitina, est
formado por molculas de N-acetil-glucosamina-co--glucosamina y puede ser obtenido
mediante un proceso qumico sencillo de des acetilacin eliminando al menos un 50% de los
grupos acetilo presentes en la quitina. Bajo este trmino se agrupa una familia de copolmeros
con diferencias en el nmero de unidades desacetiladas y en el peso molecular, debido a la
dificultad de controlar la distribucin de los grupos acetilo a lo largo de la cadena polimrica que
hace difcil conseguir reproducibles polmeros iniciales. El quitosano posee un comportamiento
marcadamente bsico debido al grupo amino libre en su estructura, lo cual adems le
proporciona ciertas caractersticas qumico-fsicas de gran inters industrial. (Acevedo, 2011).
A diferencia de la quitina, el quitosano es soluble en agua en un medio cido. La ventaja del
quitosano frente a otros polisacridos (celulosa, almidn galactomananos, etc.) es que su
estructura qumica permite modificaciones especficas sin demasiadas dificultades. Cabe destacar
que grupos especficos pueden ser introducidos en el diseo de polmeros para determinadas
aplicaciones, puesto que es un material fungicida, antiviral, biocompatible, biodegradable,
antimicrobiano, no txico, emulsionante, absorbente de grasas, absorbente de metales
contaminantes, filmognico, etc. (Acevedo, 2011).

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Figura no. ESTRUCTURA DEL QUITOSANO

FUENTES DE QUITINA Y QUITOSANO
La fuente industrial principal de quitina, actualmente es el exoesqueleto (caparazn) de muchos
crustceos (cangrejos, langostas, camarones y langostinos) debido a la facilidad de encontrar
estos materiales como desecho de las plantas procesadoras de estas especies (Tabla 1). En el
caso del camarn y el cangrejo, la quitina representa el 14-27% y 13-15%, respectivamente. En
cutculas de crustceos, la quitina est ntimamente asociada con las protenas, sales inorgnicas
tales como el carbonato de calcio y lpidos incluyendo los pigmentos, as el aislamiento abarca
varias etapas de purificacin.
Las cscaras de almeja y ostra contienen cantidades significativas de quitina. Sin embargo, las
producciones del polmero son bajas y el contenido mineral es muy alto en ambos. Contienen
quitina al 6 y 4% y cenizas al 90 y 85%, respectivamente. La pluma del calamar es en hecho la
nica fuente importante de p-quitina polimorfa, puesto que los crustceos contienen
exclusivamente -quitina. (Acevedo, 2011).
Por su parte, el quitosano se puede encontrar en forma natural en las paredes celulares de
algunas plantas y hongos, por ejemplo en el Mucor rouxi y Choanephora cucurbitarum con 30 y
28% de quitosano, respectivamente.
Tambin, dos diatomeas marinas, Cyclotella cryptica y Thalassiosira fluviatilis han demostrado ser
una fuente de quitosano puro que no se asocia a las protenas. Las propiedades de la quitina y el
quitosano dependen principalmente de la fuente de obtencin y el mtodo de preparacin. Estos
polmeros difieren entre s por su distribucin, masa molecular y grado de acetilacin. Adems se
ha reportado que el quitosano controla el crecimiento de bacterias, hongos y levaduras y ha sido
aplicado para suprimir estos organismos en tejidos de plantas y alimentos. Se ha establecido que
el quitosano no puede ser digerido por los seres humanos as que est considerado como una
fibra diettica con un contenido calrico cero. (Acevedo, 2011).

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Tabla 1. Composicin qumica de algunas fuentes de materia prima para la obtencin de
quitina/quitosano.

El exoesqueleto de crustceos:
Es una capa no celular secretada por la epidermis, el cual se encuentra formando una
organizacin jerrquica de varios niveles estructurales. En el nivel molecular se encuentra la
quitina, la cual mediante su alineamiento antiparalelo forma estructuras altamente cristalinas, el
siguiente nivel estructural es el arreglo entre las molculas que se encuentran ligadas en la
periferia a protenas globulares formando estrechas unidades llamadas nanofibrillas, el tipo de
protenas presentes contiene aminocidos como la glicina, tirosina, glicoprotenas conteniendo
residuos histidilo y aspartilo, acido asprtico, serina y glicina (Rudrapatnan y Tharanathan citado
por Colina et.al.2003)
Las nanofibrillas de quitinaprotena se agrupan formando racimos, que a su vez forman capaz
planas horizontales y paralelas de fibrillas que cambian de direccin de un plano a otro en
continua rotacin, Este complejo forma una red o lmina que agrupa a la quitina y protenas con
minerales que se encuentran por lo general en forma de cristales de CaCO3 y lpidos [5] (Figura 2).

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Fig.2. Estructura microfibrilar del exoesqueleto de crustceos
Dentro del complejo quitinaprotenaminerales se encuentran distintos tipos de carotenoides
como la lutena, caroteina, astaxantina y derivados que se encuentran formando conjugados
con las protenas, combinados con los grupos amino de la quitina mediante enlaces carbonilamino
(Rudrapatnan y Tharanathan citado por Colina et.als.2003).
El quitosano presenta una baja toxicidad, es inerte en el tracto intestinal de mamferos, es
biodegradable debido a la presencia de quitinasas distribuidas ampliamente en la naturaleza en
bacterias, hongos y plantas, as como en el sistema digestivo de diversos animales (Colina
et.als.2013).
Tabla n2 Composicin qumica proximal en porcentaje (v/v)% en base seca de exoesqueleto

Fuente: Colina et.als.2013

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OBTENCIN DEL QUITOSANO MEDIANTE EL MTODO QUMICO Y MTODO ENZIMTICO

La obtencin del quitosano se produce por des acetilacin de la quitina y se puede realizar
mediante procesos qumicos o enzimticos. Sin embargo, las condiciones especficas de la
reaccin dependern de diversos factores, tales como el material de partida, el tratamiento
previo, y el grado de des acetilacin deseado.

Mtodo Qumico: se puede llevar a cabo de dos formas, homogneo y heterogneo.
a) La des acetilacin homognea.
Mima y et al., citado por Garca y Roca (2008) explican que esta consiste en que la quitina es
suspendida en el lcali y la suspensin es refrigerada con hielo para disolver la quitina en la
solucin. Luego se somete a des acetilacin a temperaturas cercanas a la del ambiente durante
periodos largos de tiempo. Esto permite que la reaccin no se localice en determinados lugares de
la cadena y que el ataque a los grupos amidas sea ms uniforme.

b) La des acetilacin heterognea.
Consiste en que las molculas de quitina son dispersadas en una solucin alcalina caliente,
generalmente de hidrxido de sodio. Las condiciones en las que se lleva a cabo la des acetilacin
heterognea pueden reducir la longitud de la cadena, por este motivo es conveniente repetir
varias veces el tratamiento alcalino por cortos periodos de tiempo y aislando el producto en cada
etapa. Para disminuir la prdida de peso molecular del polmero es conveniente la ausencia de
oxigeno o la presencia de un antioxidante para evitar su despolimerizacin. Se ha demostrado que
mientras que el quitosano obtenido en el proceso heterogneo presenta poli dispersin del grado
de acetilacin de sus cadenas, mientras que el obtenido por va homognea tienen la misma
composicin.

Mtodo Enzimtico:
Goycochea, citado por Garca y Roca (2008) nos habla que la ventaja de este mtodo respecto al
qumico es la obtencin de un material uniforme en sus propiedades fsicas y qumicas, hecho
muy apreciado para aplicaciones biomdicas.
La quitina desacetilasa es la enzima que cataliza la conversin de quitina a quitosano por la des
acetilacin de los residuos N-acetil-D-glucosamina. La limitacin de este mtodo es que la enzima
no es muy efectiva en la des acetilacin de quitina insoluble, y por lo tanto es necesario un pre
tratamiento.
En la actualidad, se exploran otros mtodos ms novedosos para desacetilar la quitina que hace
uso de la radiacin con microondas o de tratamientos termo-mecnicos, entre otros.

EXTRACCIN DE QUITINA A PARTIR DE CAPARAZONES DE CRUSTCEOS Y TRANSFORMACIN A
QUITOSANO

El trabajo realizado por Ayeln et al. (2012) para la obtencin de quitosano, muestra que el
proceso inicial se basa en la extraccin de minerales y luego, la protena aunque esta secuencia
puede invertirse en algunos casos. El procedimiento realizado para la obtencin de quitosano por
los autores mencionados, consiste en:

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1. Aislamiento de la quitina

a) Preparacin de la materia prima: Se pesan y lavan con agua potable y se separaran las colas y
restos de pulpa de las cscaras y se separan de otros residuos orgnicos e impurezas que
contiene el exoesqueleto. Se secan y se trituran en morteros con el piln hasta obtener un
polvo rosado que se tamiza con un tamiz de 20 - 30 unidades mesh.

b) Desmineralizacin: El contenido mineral de los residuos de los crustceos oscila entre 30% y
55%, y est constituido, principalmente, por carbonato de calcio y en menor proporcin
(10%), por fosfato de calcio. La re-mocin del carbonato de calcio se realiza por tratamiento
acido. Para ello, se utiliz cido clorhdrico (HCl) a una concentracin de 1,3 N, a temperatura
ambiente (25C) durante una hora.
Al concluir la operacin se produce el lavado de la quitina con abundante agua destilada
hasta pH neutro. Se filtra con papel de filtro y se obtiene el slido seco para la prxima etapa.
c) Desproteinizacin: En el proceso qumico para separar la protena presente en el material
biolgico, los exoesqueletos de crustceos son tratados usualmente con soluciones de NaOH
0,8 Na 80C durante un periodo de 4 horas. Desproteinizacin NaOH 0.8 30 80 240

Al concluir la etapa se lava nuevamente la quitina con abundante agua destilada hasta pH
neutro, se filtra con papel de filtro y se obtiene el slido seco para la prxima etapa. A esta
etapa debera seguirle una decoloracin con agentes decolorantes del tipo del agua
oxigenada al 0,5 3 % pero como el pigmento es escaso y no afecta el producto final, en este
caso este paso se omiti.

2. Obtencin del quitosano
La principal reaccin de des acetilacin de la quitina es la hidrlisis de los grupos acetamida
para generar el polmero desacetilado, quitosano aunque las amidas, en principio, pueden
hidrolizarse bajo condiciones acidas o alcalinas, se excluye el uso de hidrlisis acida debido
a la susceptibilidad a la misma de los enlaces glicosidicos de la quitina. Esta reaccin se
conduce bajo condiciones alcalinas muy severas, con hidrxido de sodio 13 N y una
temperatura de 100C durante 15 horas.
Una prueba rpida para saber si el producto obtenido es quitosano es ver la cantidad que
se solubiliza en ci-do actico al 5%, si solo queda retenido luego del filtrado del mismo una
proporcin menor al 20% estamos en presencia de un buen producto.

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APLICACIONES DE LA QUITINA Y QUTOSANO
Las propiedades especficas de la quitina, el quitosano y derivados, los hacen tilesa nivel
industrial: En la agricultura puede funcionar como inductor de mecanismos de defensa en las
plantas y como recubrimiento de frutos postcosecha, en tratamiento de aguas residuales como
agente floculante, en la industria alimenticia como aditivo, en cosmticos como agente hidratante
y recientemente en farmacutica como agente en biomedicina (Rabea et al., 2003; Synowiecki et
al., 2003 citado por Pacheco, 2010). El quitosano al ser el nico biopolmero catinico presenta
diferentes aplicaciones, en soluciones como gel, formacin de recubrimientos y fibras. En el
esquema presentado a continuacin, se muestran algunas de las aplicaciones del quitosano con
base al rea de aplicacin. (Pacheco, 2010)
La quitina presenta una baja toxicidad, es inerte en el tracto intestinal de mamferos, es
biodegradable debido a la presencia de quitinasas distribuidas ampliamente en la naturaleza en
bacterias, hongos y plantas, as como en el sistema digestivo de diversos animales, la quitina se ha
usado para preparar columnas de cromatografa por afinidad, para inmovilizacin de enzimas
como absorbente de compuestos contaminantes como complejos de tioulfato de plata como
fibras en farmacutica, (Kumar et al., 2000, Rinaudo, 2006 citado por Pacheco, 2010).
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Aplicaciones de la quitina y el quitosano de acuerdo al rea (Synowiecki et al., 2003; Rinaudo
2006 ; Prashanth and Tharanathan 2007 citado por Pacheco, 2010).

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III. MATERIALES Y MTODOS
Vaso beacker
Piceta
Balanza
Probeta
Estufa
El proceso consiste en 3 etapas las cuales se describen a continuacin:

Descripcin de la primera etapa
Se tuvo como muestra el exosqueleto de cangrejo el cual fue lavado para la
eliminacin de materia adherida en el, con abundante agua , luego esta fue
colocada en la estufa a una temperatura de 80C por un periodo de 2 horas para
proceder al molido ,materia molida fue tamizada de esta forma se logra separa
partculas de 0.8-1.5 mn .

ETAPA I
Preparacion de la
materia prima
lavado y secado
molido
tamizado
T=80C
TIempo 2 hrs
Partculas de
0.8-1.5 mn
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Descripcin de segunda etapa
El exoesqueleto de del cangrejo molido y tamizado fue pesado, luego se le aadi
NaOH 3.5% en una relacin de 1:10 a una T=40, con este se logra romper la
matriz del caparazn y hacer solubles la protenas ,luego con el lavado se logra el
arrastre de algunos pigmentos.

La adicion de HCL 2N por un tiempo de 90 min a una temperatura de de
ambiente, con este proceso se logra la solubilizacion de componentes como el
Ca
+2
,luego del tiempo transcurrido se procede al lavado para elimar resto de acido
, por ultimo se pone a secar en una estufa a una temperatura de 80C porun
tiempo de 30 min,lograndose de esta manera la extracion de la quitina.

Etapa II
Obtencion de quitina
Inmersion en sol.
NaOH
Lavado y secado
Inmersion en HCL
Lavado y secado
T =40C
Tiempo=2h
Temperatura de
ambiente
Tiempo =90 min
T=80C
Durante 30 min
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Descripcin de terceras etapa
La quitina extraida en la etapa anterior es desacetilizada para la obtencion del
quitosano mediante una inmersion de esta en NaOH al 50%, en una relacion de
1:10..

Etapa III obtencion
de quitosano
Inmrsion en so.
NaOH
LAVADO
SECADO
T=80C
Tiempo 30 min
NaOH 50%
Tiempo 2 hr
T=100C

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La inmersion de la quitina en la solucion de NaOH al 50% tiene que ser movida
contantemente por dos horas a una tempertura de 100C, luego esta es filtrada y
lavada con abundante agua para eliminar resto de base que pudiera quedar en el
contenido del producto final , posteriormete es secada a temperatura de 80C
por 30 min, obteniendose como producto final quitosano .

IV. RESULTADOS

Despus de la segunda etapa, se obtuvo 15 gr de quitina.
Despus de la tercera etapa se obtuvo 10 gr de quitosano.

V. DISCUSIONES

Segn, Acevedo los cangrejos tienen un rendimiento de 15 % en la obtencin de quitina.
En el experimento obtuvimos 15 gr de quitina de un total de 42 gr de caparazn de
cangrejo. Entonces obtuvimos un rendimiento de 35, 7 %, obtuvimos un rendimiento
mucho mayor del esperado respecto a la quitina. Esto no necesariamente es que el
experimento fue exitoso, sino que puede ser que el proceso de desmineralizacin y el de
desproteinizacin no fue efectivo, por lo que muchos restos de minerales y protenas
estn contenidas en la quitina obtenida. Habra que mandar a realizar un anlisis de la
quitina obtenida para ver la cantidad de minerales y protenas que contienen. De
quitosano se obtuvo 10 gr, la disminucin de peso se puede deber que gracias a la
inmersin en solucin de NaOH al 50%, adems de la polimerizacin de quitina a
quitosano se disolvieron algunos restos de minerales, protenas o pigmentos.

VI. CONCLUCIONES

Se extrajo quitosano de caparazones de cangrejos.

VII. BIBLIOGRAFA

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Acevedo M. 2011.Diseo de un proceso econmico y competitivo para la extraccin de quitina y
produccin de quitosano a partir de exoesqueleto de crustceos. Ttulo de Ingeniero Qumico.
CO. Universidad de Cartagena. Pg. 17-26. Consultado 1/5/14

Ayeln et al. 2012. Obtencin de Quitosano (en lnea).Santa Cruz, AR. Consultado 1/5/14.
Disponible en http://www.produccion-animal.com.ar/produccion_peces/piscicultura/173-
Quitosano.pdf

Colina M., Ayala A., Rincn D., Molina J., Medina J.Ynciarte Ruben,Vargas J. y Montilla M.2013.
Evaluacin de los procesos para la obtencin qumica de quitina y quitosano a partir de
desechos de cangrejos. Escala piloto e industrial .Revista Iberoamericana de Polmeros. Volumen
15(1).21-43 pag. Revisado 31/5/14

Garca T; Roca J. 2008. Industrializacin de los crustceos para la obtencin de Quitosano en
ungento con efecto cicatrizante (en lnea).PE. Industrial Data, vol. 11, nm. 2. Consultado 1
/5/14. Disponible en http://www.redalyc.org/pdf/816/81619829004.pdf

Caprile, D. Obtencin y Utilizacin de Quitina y Quitosano a partir de desechos de crustceos (en
lnea). Buenos Aires, AR. Consultado 1/5/14. Disponible en
http://www.ceiso.com.ar/documentos/caprilequitina.pdf

PACHECO, Neith.1997. Extraccin biotecnolgica de quitina para la produccin de quitosanos:
caracterizacin y aplicacin. Tesis doctoral. Mexico DF, Mexivo. Universidad Autnoma
Metroplitana. 125p.

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