Lignin-blocking pengobatan biomassa dan menggunakan daripadanya

US 7604967 B2
ABSTRAK
Diungkapkan adalah metode untuk mengkonversi selulosa dalam biomassa lignoselulosa.
Metode ini memberikan untuk polipeptida lignin-blocking dan / atau perlakuan protein
padatan lignin tinggi. Pengobatan meningkatkan ketersediaan selulase dalam konversi
selulosa. Efisiensi selulase ditingkatkan oleh protein atau pengobatan polipeptida.
Pengobatan dapat digunakan dalam kombinasi dengan ledakan uap dan teknik hidrolisis awal
asam. Hasil hidrolisis dari lignin mengandung biomassa yang ditingkatkan 5-20%, dan
pemanfaatan enzim meningkat dari 10% menjadi 50%. Dengan demikian, metode yang lebih
efisien dan ekonomis pengolahan lignin mengandung bahan biomassa menggunakan langkah
pengobatan polipeptida / protein yang secara efektif blok lignin pengikatan selulase.
DESKRIPSI
BUNGA PEMERINTAHAN
Pemerintah Amerika Serikat mungkin memiliki hak-hak tertentu dalam penemuan ini sebagai
penelitian yang relevan dengan pengembangan didanai oleh United States Department of
Energy ( DOE ) nomor kontrak DE FC36 - 00GO010589 dan DE FC36 - 01GO11075 .

Latar Belakang Penemuan
1 . Bidang Teknik Penemuan

Penemuan ini berkaitan dengan bidang pengolahan biomassa untuk memproduksi bahan
bakar , bahan kimia dan produk lain yang berguna dan , lebih khusus , untuk saccharifying
bahan biomassa lignoselulosa untuk menghasilkan gula untuk konversi menjadi etanol dan
produk lainnya dengan meningkatkan efektivitas selulase melalui selektif mengikat atau
memblokir komponen lignin . Penggunaan mencuci protein meningkatkan efisiensi
biokonversi dengan meningkatkan ketersediaan selulase dan enzim lain untuk selulosa .

2 . Latar Belakang Penemuan Terkait

Biomassa selulosa berguna untuk menghasilkan etanol . Bahan-bahan tersebut secara khusus
dikenal sebagai bahan lignoselulosa , atau biomassa , ( misalnya, kayu dan limbah padat ) ,
telah digunakan sebagai bahan sumber untuk menghasilkan karbohidrat , yang pada
gilirannya dapat digunakan untuk memproduksi etanol , serta produk lainnya .
Biomassa lignoselulosa adalah struktur yang kompleks dari serat selulosa yang terbungkus
dalam lignin dan hemiselulosa selubung . Rasio tiga komponen bervariasi tergantung pada
jenis biomassa . Rasio khas adalah sebagai berikut :
Tabel 1 adalah hanya perkiraan . Misalnya, kayu berbeda dalam komposisi , tergantung pada
jenis tertentu dari kayu, di mana kayu lunak , ( gymnosperma ) umumnya memiliki lebih
glucommanans dan kurang glucuronoxylans daripada kayu keras .

Selulosa merupakan polimer dari monomer D - glukosa dengan - 1-4 - kaitan antara tiap
monomer membentuk rantai sekitar 500 sampai 10.000 unit D - glukosa . Hemiselulosa
merupakan polimer dari gula , terutama D - xylose dengan pentosa lain dan beberapa heksosa
, juga dengan - 1-4 - hubungan . Lignin adalah polimer acak polifenol kompleks . Biomassa
lignoselulosa merupakan substrat murah dan tersedia untuk persiapan gula . Gula ini dapat
digunakan sendiri , difermentasi untuk menghasilkan alkohol dan bahan kimia industri ,
kimia atau dikonversi ke senyawa lain .

Etanol adalah salah satu dari alkohol yang dapat diproduksi menggunakan karbohidrat
berasal dari biomassa lignoselulosa , dan memiliki sejumlah kegunaan industri dan bahan
bakar . Dari khususnya bunga adalah penggunaan etanol sebagai aditif bensin yang
meningkatkan oktan , mengurangi polusi , dan sebagian menggantikan bensin dalam
campuran bahan bakar. Formulasi bensin etanol dicampur - produk komersial terkenal yang
biasa disebut " gasohol " . Telah diusulkan untuk menghilangkan bensin hampir sepenuhnya
dari bahan bakar dan membakar ethanol dalam konsentrasi tinggi .

Konversi biomassa selulosa menjadi bahan bakar terbarukan dan bahan kimia sering
melibatkan kimia dan / atau perlakuan enzimatik dari biomassa dengan selulase atau enzim
lainnya . Secara khusus, enzim selulase menghidrolisis selulosa untuk D - glukosa , yang
merupakan gula sederhana . Dalam kadar lignin tinggi biomassa lignoselulosa , dosis tinggi
dari selulase yang diperlukan untuk menurunkan selulosa dengan hasil yang tinggi karena
lignin mengikat secara istimewa dengan selulase , sehingga mengurangi akses selulase
dengan selulosa . Akibatnya, saat memproses lignin bahan biomassa konten yang tinggi ,
kurang selulase tersedia untuk mendegradasi selulosa karena lapisan lignin dari serat selulosa
scavenges selulase . Dengan demikian , efektivitas proses untuk mencerna selulosa berkurang
.

Biokonversi biomassa selulosa menjadi etanol telah dipelajari sejak 1940-an . Namun, proses
selulosa - to- ethanol belum ekonomis dibandingkan dengan memproduksi produk-produk
minyak bumi oleh teknologi yang ada . Hidrolisis enzimatik adalah proses yang cukup
lambat. Biaya selulase yang tinggi , dan jumlah yang diperlukan selulase juga tinggi , yang
meningkatkan biaya pengolahan . Pengurangan jumlah selulase yang diperlukan untuk
mendapatkan hasil yang memuaskan gula dapat memiliki dampak yang signifikan terhadap
proses ekonomi . Oleh karena itu, meningkatkan efisiensi penggunaan enzim merupakan
kebutuhan utama dalam proses biokonversi .

Mekanisme hidrolisis dan hubungan antara struktur dan fungsi berbagai selulase telah
dipelajari secara ekstensif . Beberapa faktor yang diduga mempengaruhi hidrolisis enzimatik
selulosa . Faktor-faktor ini meliputi kadar lignin , kadar hemiselulosa, isi asetil , luas
permukaan selulosa dan kristalinitas selulosa . Hal ini umumnya dipahami bahwa hadir lignin
dalam substrat yang kompleks , seperti kayu uap meledak , terutama kayu lunak , memiliki
efek negatif pada aktivitas selulase . Alasan yang tepat yang kurang dipahami karena
kompleksitas biomassa adalah sedemikian rupa sehingga mengurangi salah satu hambatan
untuk pencernaan dapat meningkatkan atau menyamarkan pentingnya orang lain . Misalnya,
hidrolisis selulosa telah ditunjukkan untuk meningkatkan dengan meningkatnya penghapusan
lignin , meskipun perbedaan dilaporkan dalam derajat penghapusan lignin diperlukan .

Berbagai faktor dapat dikaitkan dengan efek buruk dari lignin pada sakarifikasi . Rasio
syringyl bagian untuk guaiacyl bagian dalam lignin dapat mempengaruhi sakarifikasi .
Meskipun peran yang tepat dari lignin dalam membatasi hidrolisis telah sulit untuk
menentukan , besar kemungkinan bahwa salah satu keterbatasan yang paling signifikan
adalah efek dari lignin pada serat pembengkakan dan pengaruhnya dihasilkan aksesibilitas
selulosa . Penghapusan lignin meningkatkan aksesibilitas selulosa dan memungkinkan
aktivitas selulase lagi. Kompleks Lignin mungkin secara fisik dan tahan kimia untuk enzim
serangan . Sementara beberapa komponen lignin yang larut dalam air , yang lain tidak larut
dan dapat memicu dari solusi . Lignin kental memiliki kemampuan untuk menyerap protein
dari larutan air . Removal Lignin dapat membuka luas permukaan lebih untuk serangan
enzimatik dan mengurangi jumlah selulase yang non - spesifik teradsorpsi pada substrat
lignoselulosa . Studi yang melibatkan asam pretreated laporan kayu lunak korelasi positif
antara kecernaan dan tingkat delignifikasi , tetapi hasilnya rumit oleh adanya hemiselulosa .
Beberapa substrat membutuhkan suhu yang lebih tinggi untuk menghilangkan hemiselulosa
menjadi efektif , menunjukkan bahwa hemiselulosa bukan satu-satunya faktor yang
mempengaruhi kecernaan tambahan , dan bukti lain tidak mendukung peran untuk
hemiselulosa dalam mengubah kecernaan selulosa .

Meskipun kristalinitas selulosa umumnya beralasan untuk menghambat enzim , harga lambat
dengan meningkatnya kristalinitas dalam beberapa studi , namun peningkatan dalam
penelitian lain . Derajat kristalinitas mungkin tidak secara signifikan berubah dari waktu
hidrolisis diperpanjang . Kristalinitas tampaknya kurang penting daripada penghapusan lignin
dan berdampak tarif lebih dari hasil . Beberapa penelitian telah difokuskan pada menjelaskan
cerna selulosa oleh aksesibilitas selulosa untuk enzim . Korelasi telah dikembangkan untuk
berhubungan tarif untuk volume pori dan luas permukaan diakses . Namun, bentuk kompleks
selulase dapat menciptakan kesulitan dalam menembus pori-pori tersebut , dan kekhawatiran
telah dikemukakan tentang perubahan substrat selama pengukuran tersebut .

Selulase terdiri dari campuran enzim yang memiliki aktivitas yang berbeda , dan struktur
enzim berbeda antara mikroorganisme . Sementara mekanisme hidrolisis dan hubungan
antara struktur dan fungsi berbagai selulase telah dipelajari secara ekstensif , banyak rincian
aktivitas enzymic masih kurang dipahami . Enzimatik hidrolisis substrat selulosa sangat
dipengaruhi oleh inhibisi produk akhir dan fitur enzim . Low aktivitas selulase tertentu pada
selulosa merupakan faktor penting yang membatasi efektivitas hidrolisis . Salah satu cara
untuk menghindari aktivitas spesifik yang rendah ini adalah untuk mendaur ulang dan
menggunakan kembali enzim . Namun, selulase adsorpsi non - produktif memainkan peran
penting dalam pengembangan cara-cara untuk menggunakan kembali enzim dan
mempengaruhi efisiensi daur ulang .

Selain kompleksitas berbagai jenis selulase , aktivitas di substrat juga rumit oleh karakteristik
substrat . Karena resistensi dari struktur yang kompleks dan komposisi biomassa selulosa
alami , substrat lignoselulosa harus pra-perawatan untuk menjadikannya sebagai rentan
mungkin untuk aksi enzim . Banyak metode pretreatment telah dikembangkan . Sebagai
contoh, peningkatan aksesibilitas substrat lignoselulosa dapat dicapai dengan pelarut
hemiselulosa dalam kondisi asam yang keras .

Adsorpsi selulase pada substrat lignoselulosa mengandung kandungan tinggi dari bahan alami
belum diteliti secara luas . Biasanya , substrat lignoselulosa mengandung konten yang jauh
lebih tinggi dibandingkan dengan lignin "model " substrat selulosa . Lignin dapat
menghambat hidrolisis enzimatik bahan lignoselulosa . Selulase tidak hanya terserap ke
bagian selulosa substrat , tetapi juga terserap untuk lignin . Lignin tidak hanya melindungi
selulosa tetapi juga bertindak sebagai adsorben kompetitif . Namun, lignin tidak muncul
untuk membatasi tingkat hidrolisis gugus karbohidrat jika selulase yang cukup hadir . Enzim
selulolitik mengikat kuat ke lignin . Ketika profil adsorpsi dibandingkan , protein enzim lebih
banyak dikaitkan dengan residu dihidrolisis bahan lignoselulosa dibandingkan model selulosa
. - glucosidase memiliki afinitas tinggi untuk berbagai fraksi lignin , sementara itu tidak
mengikat polisakarida . Adsorpsi ireversibel komponen selulase spesifik tidak diamati dalam
hidrolisis berkepanjangan dikukus kayu shirakamba mengandung lignin berlimpah . Tidak
jelas apakah adsorpsi selulase hasil lignin dari spesifik atau non - spesifik mengikat . Ketika
lignin yang diekstrak dari kayu aspen uap meledak dengan air dan alkali sebelum hidrolisis ,
selulase masih ditemukan terserap untuk lignin .

Lignin memainkan peran penting dalam hidrolisis enzimatik bahan lignoselulosa , seperti
yang dilaporkan dalam Sutcliffe & Saddler , Biotechnol . Bioeng . Gejala . 8th , 17:749-62 (
1986) . Profil adsorpsi perbandingan menunjukkan bahwa lebih banyak enzim dipertahankan
dengan residu dihidrolisis , dibandingkan dengan model selulosa murni , seperti yang
dilaporkan dalam Abdel & Saddler , Int . Conf . Biotechnol . Pulp Pap . Ind , 7 , C239 - C242
( 1998) . Dalam sebuah studi oleh Chemoglazov et . al . , enzim MicroB . Technol . , 10:503-
507 ( 1988) , endoglukanase yang teradsorpsi pada aktivitas lignin hilang . Efek
menonaktifkan lignin diamati juga dengan substrat uap meledak , tetapi tidak jika kedua
adalah yang diolah dengan asam , atau dengan kompleks lignocarbohydrate . Sutcliffe et al . ,
Biotechnol . Bioeng , 17 : . 749-762 ( 1986) melaporkan bahwa adsorpsi selulase pada
persiapan lignin berbeda dari kayu uap - diobati dipengaruhi oleh sifat dari lignin dan -
glucosidase yang paling terpengaruh oleh lignin . Dengan demikian , berbagai jenis lignin
dan bentuk lignin dapat mempengaruhi selulase adsorpsi . Juga , bentuk lignin , yang berisi
lignin dan lignocarbohydrate kompleks yang berbeda , tampaknya mempengaruhi selulase
berbeda . Hal ini umumnya sepakat bahwa bentuk dan posisi dari sebagian besar perubahan
lignin setelah uap ledakan , sehingga lignin terpisah dari selulosa untuk membentuk
aglomerat .

Beberapa proposal telah dibuat untuk memecahkan masalah tidak efektif dan / atau tidak
efisien degradasi enzim lignin tinggi yang mengandung bahan biomassa . Salah satunya
adalah langkah pretreatment yang mendegradasi atau menghilangkan setidaknya sebagian
dari hemiselulosa dan / atau lignin dari biomassa . Sebagai contoh, kombinasi dari panas dan
pra - perlakuan asam dari massa lignoselulosa untuk jangka waktu yang telah digunakan
untuk menghidrolisis hemiselulosa . Namun, proses ini menyediakan hanya sangat terbatas
penghapusan lignin , seperti yang dilaporkan dalam Grohmann et . al . Biotechnol . Bioeng .
Gejala . 17 , gejala . Biotechnol . Bahan Bakar Chem . , 8 , 135-151 ( 1986) dan Torget et al .
, Biokimia Terapan dan Bioteknologi , 34-35:115-123 ( 1992) .

Penghapusan lignin dari serat selulosa juga telah diusulkan meskipun menggunakan alkali
kaustik , seperti di Kraft pulping dan kertas keputusan. Namun, proses ini tidak menghasilkan
gula sederhana dan tidak memisahkan hemiselulosa dari selulosa .

Paten AS No. No 4.668.340 yang dikeluarkan untuk Sherman berkaitan dengan biomassa
pengolahan hidrolisis yang menghasilkan hampir secara eksklusif gula hemiselulosa . Asam
diperkenalkan kepada biomassa , dan akan dihapus dari setiap tahap yang akan diumpankan
ke berikutnya dalam urutan tersebut . Hidrolisis selulosa diminimalkan dalam proses, dan
hasil dalam pulp selulosa yang mengandung lebih dari 90 % dari pakan - selulosa .

Paten AS No. No 4.708.746 yang dikeluarkan untuk Hinger berkaitan dengan hidrolisis
tertentu selulosa diikuti oleh pengobatan dengan tekanan tinggi uap . Namun, penggunaan
uap yang tinggi saja tidak menyediakan untuk hidrolisis lengkap dari substrat selulosa .

Paten AS No. No 5.125.977 yang dikeluarkan untuk Grohmann et al . , Dan US Pat . No
5.424.417 yang dikeluarkan untuk Torget et al . , Berkaitan dengan hidrolisis awal dari
biomassa lignoselulosa untuk melarutkan gula hemicellulosic dengan rilis bersamaan dari
beberapa lignin larut . Hidrolisis awal membuat selulosa yang tersisa lebih mudah dicerna
dengan enzim atau cara kimia lainnya . Paten AS No. No 5.424.417 menjelaskan suatu proses
dimana lignoselulosa dikenai langkah hidrolisis awal dengan melewatkan larutan asam atau
basa melalui partikel padat atau lignoselulosa , dengan penghapusan terus menerus produk
reaksi larut . Teknik ini memungkinkan kombinasi lebih ringan dari pH , suhu , dan waktu
dari hidrolisis awal konvensional . Ekstraksi hemiselulosa dan lignin terjadi secara bersamaan
dalam reaktor yang sama dan dalam kondisi yang sama .

Paten AS No. No 6.022.419 yang dikeluarkan untuk Torget et al . berhubungan dengan
proses di mana biomassa lignoselulosa difraksinasi dengan menggunakan asam encer ,
misalnya , asam sulfat encer pada 0,07 % berat , untuk mengkonversi selulosa menjadi gula
monomer dalam hasil yang relatif tinggi . Namun, hidrolisis selulosa menggunakan katalis
asam mahal dan membutuhkan peralatan khusus . Selain itu, gula yang diinginkan adalah
labil dengan kondisi yang keras , dan sejumlah besar tidak diinginkan dan beracun oleh
produk biasanya terbentuk. Jika terkena terlalu lama , glukosa yang berasal dari selulosa
degradasi ke hydroxymethylfurfarol , yang selanjutnya menurunkan menjadi produk
degradasi yang tidak diinginkan termasuk asam levulinic dan asam format . Kondisi asam
sama menurunkan xylose , yang terbentuk dari hemiselulosa .

WO 9429474 dikeluarkan untuk Hinman berhubungan dengan proses di mana pengobatan
lignoselulosa meminimalkan mengikat selulase . Sebuah substrat terbentuk dari selulosa ,
hemiselulosa , dan pati . Suatu asam agen pretreatment hidrolitik ditambahkan ke substrat ,
sebagai adalah peroksidase lignin untuk memblokir situs mengikat lignin dalam biomassa .
Selulase ditambahkan ke substrat menggunakan Simultan Sakarifikasi dan Fermentasi ( SSF )
kondisi proses yang menguntungkan bagi kelangsungan hidup sel dan konversi etanol .

. Kadal et al , 53 : 277-284 ( 1999) berkaitan dengan penggunaan perawatan peroksida untuk
menghilangkan lignin dalam kondisi basa selama pemutihan pulp . Dalam kondisi alkali ,
hidrogen peroksida bereaksi dengan struktur baik alifatik dan aromatik dari lignin ,
menyebabkan depolimerisasi dan penghapusan berikutnya dengan mencuci air . Gould,
Biotechnol . Bioeng . , 26:46-52 ( 1984) , melaporkan penggunaan peroksida alkali untuk
menghilangkan lignin dan meningkatkan hydrolyzability enzimatik residu herba . Ramos et al
. , Holzforschung 46:149-154 ( 1992) , melaporkan penggunaan peroksida alkali uap meledak
kayu . . Yang et al , Bioteknologi dan Bioengineering 77 ( 6 ) : 678-684 ( 2002) , melaporkan
penggunaan pengobatan peroksida alkali untuk meningkatkan daya cerna enzimatik uap
meledak substrat kayu lunak .

Umumnya , kayu lunak telah dianggap sebagai skenario terburuk sebagai bahan baku untuk
proses biokonversi karena lignin sangat bandel mereka mengurangi efisiensi hidrolisis
enzimatik . Schwald et al . , Enzim Systems untuk Degradasi Lignocelluosic , Goughlan , MP
, Elsivier , NY , hlm 231-242 ( 1989) , dan Wu et al . , Appl . Biochem . Biotechnol . , 77-79 ,
47-54 ( 1998 ) , melaporkan bahwa kompromi dalam kondisi pra-perawatan kemungkinan
akan diperlukan , jika residu kayu lunak harus dianggap sebagai bahan baku potensial untuk
pengolahan biomassa , yaitu , proses keparahan menengah diperlukan antara mereka
dioptimalkan untuk pemulihan hemiselulosa tinggi dan hidrolisis selulosa efisien .

Menurut proses pretreatment tersebut , substrat selulosa yang dihasilkan oleh pretreatment
pada keparahan sedang (sekitar log R0 = 3.76 ) mengandung kadar lignin tinggi yang
membatasi aksesibilitas selulase dengan selulosa . Istilah " R0 " digunakan dalam industri
sebagai indikator keparahan relatif dari metode pengobatan untuk pengolahan biomassa .
Secara khusus , di bidang lignocellulosics dan fraksinasi komponen kayu , " R0 " telah
digunakan untuk mendefinisikan " parameter keparahan . " Persamaan ini dijelaskan dalam
Overend , RP & Chornet , E. (1987 Fraksinasi lignocellulosics oleh pretreatments uap - cair .
. . Phil Trans R. Soc Lond , 523-36 ) . . . :
R 0 = t exp [ ( T - 100 ) / 14,75 ] ( 1 )
dimana RO adalah faktor keparahan dan dioptimalkan pada 3,8 untuk hidrolisis awal dari
hemiselulosa , t adalah waktu pemaparan dalam hitungan menit , dan T adalah temperatur
dalam derajat Celcius .

Ringkasan Penemuan
Penemuan ini kemajuan seni dan mengatasi masalah-masalah yang diuraikan di atas dengan
menyediakan metode yang lebih baik dan lebih efisien untuk enzimatik hidrolisis biomassa
lignin - konten yang tinggi . Keuntungan ini diperoleh tanpa harus menundukkan biomassa
untuk kondisi reaksi yang keras atau lain dan , lebih lanjut , dengan proses yang menghindari
produksi yang signifikan degradasi beracun dan tidak diinginkan oleh - produk .

Dalam salah satu perwujudan , metode memanfaatkan protein dan / atau polipeptida yang
istimewa mengikat dengan lignin lebih mudah daripada selulosa . Sebuah biomassa lignin -
konten yang tinggi diperlakukan dengan liginin menghalangi protein dan / atau polipeptida ,
misalnya dengan mencuci biomassa dengan komposisi yang terdiri dari protein lignin -
blocking dan / atau polipeptida atau dengan menambahkan bahan-bahan tersebut untuk kaldu
sakarifikasi . The lignin -blocking polipeptida dan / atau protein istimewa mengikat dan
dengan demikian menghambat lignin dari mengikat lanjut . Selulosa - hidrolisis enzim ,
seperti cellobiohydrolase dan - glucosidase , maka dapat menghidrolisis selulosa lebih
efisien dan cepat . Tanpa pengobatan biomassa mengandung-lignin dengan polipeptida lignin
-blocking dan / atau protein , lignin dalam biomassa ireversibel mengikat sebagian dari
selulosa hidrolisis enzim , membuat mereka tidak dapat menghidrolisis selulosa . Protein dan
/ atau efektivitas pengobatan polipeptida melalui lignin yang mengikat , sehingga mengurangi
dan / atau menghilangkan adsorpsi non - produktif dari enzim . Pengobatan biomassa dengan
protein lignin -blocking dan / atau polipeptida dengan demikian meningkatkan pengolahan
substrat lignin relatif tinggi dengan menghindari afinitas lignin untuk enzim . The polipeptida
mencuci mengurangi penggunaan enzim dan / atau meningkatkan kinerja karena enzim tidak
menjadi terikat lignin , dan tetap tersedia untuk menghidrolisis biomassa .

Dalam satu aspek , metode ini mengurangi enzim pemuatan di hidrolisis biomassa kadar
lignin tinggi . Jumlah enzim , seperti selulase , yang diperlukan untuk memberikan hidrolisis
berkurang secara signifikan melalui mengobati biomassa dengan protein lignin -blocking dan
/ atau polipeptida . Keuntungan ini mengurangi biaya keseluruhan proses konversi biomassa .

Menurut salah satu perwujudan , metode meningkatkan daya cerna enzimatik selulosa .
Metode ini meliputi langkah-langkah mengobati biomassa lignin tinggi dengan polipeptida
lignin -blocking dan / atau protein untuk memberikan biomassa diperlakukan memiliki
komponen lignin diblokir , dan mengekspos biomassa disuguhi sejumlah efektif enzim
hidrolisis . Sebagai contoh , enzim hidrolisis terdiri dari - glucosidase , cellobiohydrolase ,
endoglukanase , atau kombinasi keduanya .

Lignin -blocking polipeptida dan / atau protein yang berguna untuk tujuan ini mencakup
polipeptida dan / atau protein , atau lignin -blocking fragmen daripadanya , memiliki afinitas
untuk lignin , dan terutama , misalnya , albumin serum bovine ( BSA ) , protein kedelai ,
amilase , albumin telur ayam , dan kombinasinya. Lignin -blocking polipeptida dan / atau
protein dapat berupa polipeptida atau protein yang tidak memiliki afinitas pengikatan yang
cukup untuk selulosa . Dengan cara contoh , lignin -blocking polipeptida dan / atau protein
mungkin memiliki berat molekul berkisar dari 2.000 menjadi 300.000 Dalton Dalton . Dalam
beberapa perwujudan , kisaran mungkin bahwa dengan berat molekul relatif tinggi , mulai
dari 55.000 sampai 80.000 Dalton Dalton , misalnya , bahwa dari albumin . Namun, lignin -
blocking polipeptida dan / atau protein yang memiliki berat molekul rendah juga dibayangkan
sebagai berguna dalam praktek metode ini . Ini lignin -blocking polipeptida yang lebih kecil ,
misalnya , dapat terdiri dari fragmen peptida yang terdiri dari asam amino yang mampu
secara efektif menghalangi atau mengganggu situs mengikat lignin .

Bahan lignin -blocking , seperti polipeptida , protein , dan fragmen daripadanya , bukan
molekul yang dinyatakan intrinsik tersedia untuk biomassa lignin mengandung . Bahan lignin
-blocking biasanya disediakan dalam persiapan yang relatif murni dan terisolasi dari bahan
tersebut, dan dalam konsentrasi yang tidak hadir di alam . Dengan demikian , kehadiran
insidental protein dan / atau peptida , misalnya , dalam sakarifikasi atau fermentasi media,
tidak akan memberikan tindakan lignin -blocking dari persiapan terdefinisikan . The lignin -
blocking polipeptida , protein dan / atau fragmen lignin -blocking daripadanya disediakan
untuk biomassa sebagai sumber eksternal dipasok bahan tidak melekat pada lingkungan
pribumi biomassa yang dalam keadaan biasa , tidak ada intervensi oleh tangan manusia .

The polipeptida lignin -blocking dan protein dapat dibuat dalam komposisi dengan air ,
misalnya. The lignin -blocking polipeptida atau protein yang digunakan pada langkah
mengobati mungkin termasuk konsentrasi yang relatif rendah lignin -blocking polipeptida
dan / atau protein , misalnya , 1 % dari lignin -blocking polipeptida dan / atau protein dengan
berat komposisi , atau dari 1 % sampai 5% berat komposisi .

Metodologi ini mempekerjakan komposisi polipeptida lignin -blocking dan / atau protein ,
serta komposisi enzim hidrolisis selulosa , seperti selulase . Seperti digunakan di sini ,
komposisi didefinisikan sebagai termasuk suspensi koloid , fase cair kabut , cair / suspensi
padat kabut , uap campuran , dan / atau solusi yang mencakup protein lignin -blocking dan /
atau polipeptida atau lignin -blocking fragmen daripadanya .

Lignin adalah polimer fenolik yang dapat diperoleh dengan polimerisasi dehydrogenative dari
coniferyl alkohol dan / atau sinapyl alkohol . Lignin memiliki bentuk larut yang larut dalam
air dan non - air . Kedua lignin tidak larut air dan larut dalam air menyerap polipeptida dan
protein . Lignin menyajikan situs adsorpsi non - spesifik untuk polipeptida dan protein
mengikat dengan , misalnya , lignin - mengobati polipeptida dan protein seperti albumin
bovine serum albumin dan telur ayam . Lignin kental memiliki kemampuan untuk menyerap
polipeptida dan protein dari larutan air . Kelompok dihydroxyphenyl dan gugus hidroksil
fenolik dari bentuk molekul lignin situs yang dapat digunakan untuk mengikat dengan dan /
atau endapan protein yang mengikat . Banyak protein yang berbeda bisa, karena itu , dapat
digunakan untuk mengikat lignin dan meningkatkan akses enzim selulosa dalam biomassa .

Dengan cara contoh, biomassa lignoselulosa memiliki kandungan lignin tinggi didefinisikan
sebagai biomassa yang terdiri dari setidaknya 5% lignin berat , setidaknya 10% lignin berat ,
setidaknya 20% lignin berat , setidaknya 40% lignin berat , dari 5% sampai 50 % lignin , atau
dari 10 % sampai 50% lignin berat . Proses kondisi untuk hidrolisis selulosa , umumnya ,
suhu berkisar antara 120 C sampai 240 C, tekanan mulai dari sekitar 12 psig sampai
sekitar 470 psig , dan konsentrasi asam berkisar dari 0 sampai 5% berat .

Dalam berbagai perwujudan , biomassa lignoselulosa terdiri dari kayu , residu pertanian dan
kehutanan , rumput , limbah kota ( pabrik kertas limbah , koran , kardus , dll ) , atau
kombinasinya . Misalnya, bahan lignoselulosa dapat meliputi birch , cemara Douglas ,
brangkasan jagung , jerami , atau kombinasi keduanya . Bahan-bahan ini dapat dikenakan
untuk preprocessing lain yang menurunkan atau meningkatkan kadar lignin mereka, misalnya
, limbah dari pabrik kertas . Dengan demikian , metode ini berlaku untuk proses rehabilitasi
lingkungan , serta mereka dimaksudkan untuk menghasilkan etanol dari bahan bakar. The
lignin -blocking polipeptida dan / atau perlakuan protein biomassa dapat terjadi bersamaan
dengan penambahan enzim selulosa - hidrolisis untuk biomassa . Sebuah keuntungan lebih
rendah dalam efisiensi konversi dapat diberikan . Hal ini membayangkan Namun , yang
pertama kali mengobati biomassa dengan polipeptida lignin -blocking dan / atau protein , atau
lignin -blocking fragmen daripadanya , dan kemudian menambahkan enzim hidrolisis
selulosa memberikan efisiensi yang paling dalam konversi selulosa .

Mengobati biomassa dengan polipeptida lignin -blocking dan / atau protein , misalnya dengan
mencuci dengan larutan protein , dapat diikuti dengan menambahkan selulase , atau enzim
aktivitas hidrolisis selulosa yang sama . Langkah mengobati ini menghasilkan hasil hidrolisis
dari selulosa yang dapat diukur sebagai peningkatan persentase efisiensi konversi selulase .
Dengan cara contoh , sebuah peningkatan 20 % pada konversi persentase dari total selulosa
untuk karbohidrat dapat diperoleh dibandingkan dengan hasil hidrolisis dari selulosa dari
biomassa yang tidak diobati dengan polipeptida lignin -blocking dan / atau protein . Seperti
digunakan disini, istilah " polipeptida lignin -blocking dan / atau protein " berarti setiap
protein mampu memberikan peningkatan komparatif dalam efisiensi konversi selulase
dengan mengikat dengan lignin untuk meningkatkan ketersediaan hidrolisis enzim .
Sakarifikasi substrat kadar lignin yang tinggi sering menguntungkan oleh setidaknya
peningkatan 5 % dalam efisiensi konversi .

Masih perwujudan lain berkaitan dengan proses-proses untuk memproduksi senyawa organik
dari biomassa lignoselulosa lignin mengandung tinggi . The mencuci atau lignin -blocking
polipeptida dan / atau protein mengobati langkah bisa didahului , misalnya, dengan langkah
hidrolisis menghubungi biomassa lignoselulosa dengan asam dan uap untuk memberikan
biomassa padat diobati dengan komponen lignin yang lebih besar . Biomassa terhidrolisis
kemudian dicuci dan diobati dengan polipeptida lignin -blocking dan / atau protein .
Pengobatan lignin -blocking Ini diikuti dengan menambahkan sejumlah efektif enzim
hidrolisis dalam kondisi yang cocok untuk hidrolisis selulosa untuk menghasilkan karbohidrat
pada tingkat tinggi yang efisien . Jumlah efektif hidrolisis enzim untuk polipeptida lignin -
blocking dan / atau biomassa protein yang diobati , misalnya , setidaknya 25 % kurang dari
jumlah efektif hidrolisis enzim yang diperlukan untuk hasil konversi serupa dari biomassa
lignoselulosa yang tidak diobati dengan lignin -blocking polipeptida dan / atau protein .

Proses langkah-langkah di samping langkah hidrolisis atau langkah-langkah mungkin
termasuk mengekstraksi karbohidrat , fermentasi karbohidrat dalam kehadiran
mikroorganisme etanol -converting untuk jangka waktu dan dalam kondisi yang sesuai dalam
campuran reaksi untuk memproduksi etanol dan penggalian etanol dari campuran reaksi .
Ekstraksi dapat terjadi , misalnya, dengan ultrafiltrasi dan / atau distilasi fraksional . Kinerja
selulase diukur sebagai konsentrasi selulase minimum yang diperlukan untuk mencapai
konversi selulosa time-to - target yang ditingkatkan dari 5 % menjadi 75 % , atau dari 20 %
menjadi 75 % , yang diukur sebagai perbedaan persentase dibandingkan dengan proses
lainnya yang tidak memberikan untuk protein lignin -blocking dan / atau perlakuan
polipeptida dari biomassa .

Perwujudan lain dari metode ini terdiri dari pencampuran partikel biomassa yang memiliki
kadar lignin yang tinggi dengan jumlah yang cukup dari asam encer untuk menghasilkan
makanan basah biomassa lignoselulosa , pemanasan biomassa untuk menghapus hemiselulosa
, pendinginan dan mencuci solid, memperkenalkan jumlah yang cukup dari lignin -blocking
polipeptida dan / atau protein untuk padatan sisa untuk menghasilkan biomassa diobati
dengan komponen lignin diblokir , dan menambahkan sejumlah efektif enzim hidrolisis
terhadap biomassa diperlakukan untuk menyediakan karbohidrat .

Substrat pra-perawatan di bawah keparahan yang lebih tinggi lebih mudah diakses oleh enzim
selulase , tetapi memiliki pemulihan yang lebih rendah dari gula hemiselulosa diturunkan .
Sebaliknya , pretreatment pada kondisi keparahan yang lebih rendah umumnya membebaskan
gula hemiselulosa yang diturunkan , tapi menghasilkan residu padat yang tidak mudah setuju
untuk hidrolisis selulosa .

Terutama , menambahkan protein dalam larutan selulase dapat meningkatkan stabilitas dan
mencegah denaturasi selulase . Efek ini dalam hidrolisis lignoselulosa dijelaskan oleh
kemampuan protein untuk memblokir situs adsorpsi non - spesifik fraksi non - selulosa
substrat dan meningkatkan jumlah selulase yang tersedia untuk menyerap pada fraksi selulosa
. Lignin afinitas untuk selulase mungkin diblokir oleh protein dalam tiga cara :

( 1 ) hubungan fisik yang erat dengan lignin ;
( 2 ) kelompok hidrofobik adsorpsi untuk lignin ; dan
( 3 ) curah hujan yang melibatkan kelompok dihydroxyphenyl dan gugus hidroksil fenolik
lignin
Adapun mekanisme yang terakhir , lignin adalah fenolik polimer kompleks yang mungkin
timbul dari polimerisasi dehydrogenative dari coniferyl alkohol dan / atau sinapyl alkohol .
Protein menyerap lignin Kedua tidak larut air dan larut dalam air . Kapasitas adsorpsi
bervariasi tergantung pada metode pretreatment yang berbeda dan bahan baku . Selain itu ,
hasil menunjukkan bahwa protein ditambahkan pada konsentrasi rendah tidak mempengaruhi
laju hidrolisis , yang menunjukkan bahwa protein tidak berpengaruh pada mekanisme
katalitik enzim selulolitik . Oleh karena itu, ada kemungkinan bahwa protein blok situs
adsorpsi non - spesifik pada lignin untuk mencegah tidak produktif mengikat selulase pada
lignin . Perbaikan mengakibatkan hidrolisis dapat terjadi dengan memperkenalkan muatan
negatif ke permukaan lignin karena adsorpsi protein . Pada gilirannya , muatan negatif
mencegah pengikatan bermuatan negatif enzim hidrolisis . Tanpa terikat oleh teori , diyakini
bahwa nonspesifik mengikat protein untuk menurunkan lignin tidak produktif mengikat
selulase pada permukaan lignin . Penggunaan pengobatan protein dalam proses untuk
konversi lignoselulosa menguntungkan memfasilitasi penurunan tingkat selulase pembebanan
untuk mencapai persentase konversi target yang sama . Sebagai contoh, dalam studi yang
dilaporkan di bawah , adalah mungkin untuk menurunkan beban enzim sebesar 50 % untuk
mencapai tingkat yang sama konversi selulosa hidrolitik dengan penambahan protein pada 2
g / L untuk pra-perawatan substrat lignoselulosa .


Uraian Singkat Gambar
Gambar . 1 adalah diagram skematik peralatan proses menunjukkan yang dapat digunakan
sesuai dengan salah satu perwujudan yang menggunakan BSA protein cuci untuk konversi
lignoselulosa .

Gambar . 2 menunjukkan solusi perubahan konsentrasi yang dihasilkan dari hidrolisis -
selulosa , dibandingkan dengan dan tanpa protein ( BSA ) Selain itu .

Gambar . 3 menunjukkan menyaring aktivitas kertas ( FPA ) yang terdiri dari perubahan
selama hidrolisis brangkasan jagung dengan dan tanpa penambahan protein .

Gambar . 4 menunjukkan berjumlah protein dalam supernatan selama hidrolisis - selulosa
dengan dan tanpa penambahan protein .

Gambar . 5 menunjukkan protein dalam supernatan selama hidrolisis brangkasan jagung
dengan dan tanpa penambahan protein .

Uraian Lengkap Penemuan
Ada sekarang akan ditampilkan dan dijelaskan proses untuk meningkatkan efisiensi proses
dalam membuat produk yang berguna dari kadar lignin tinggi biomassa lignoselulosa .
Efisiensi ditingkatkan dengan memperlakukan biomassa dengan protein lignin - mengikat dan
/ atau polipeptida . Dalam beberapa perwujudan , ini dicapai dengan mencuci protein dari
biomassa . Protein mengikat lignin membuat lignin kurang tersedia untuk mengikat selulase
atau enzim selulosa - hidrolisis lainnya . Dengan demikian , lebih selulase tersedia untuk
menghidrolisis selulosa dalam biomassa protein yang diobati , dan kurang selulase pada
akhirnya diperlukan untuk memberikan hasil yang lebih tinggi dari gula komponen dari
biomassa . Proses ini sehingga jauh lebih efisien dibandingkan dengan penemuan sebelumnya
. Selain itu, aktivitas hidrolitik terjadi dengan kecepatan yang lebih besar .

Pembahasan berikut ini memberikan contoh-contoh spesifik dari proses ini menunjukkan
sarana-sarana sesuai dengan berbagai perwujudan melalui contoh , dan bukan oleh
keterbatasan .

Gambar . 1 menunjukkan salah satu perwujudan dari sistem reaktor 100 yang dapat
digunakan untuk konversi biomassa . Setumpuk bahan lignoselulosa 102 disampaikan kepada
chopper pabrik 104 oleh aksi lift 106 . Pabrik chopper 104 daging dan / atau grinds bahan
biomassa lignoselulosa tumpukan 102 untuk ukuran yang telah ditentukan yang cocok untuk
pengolahan hilir . Sebuah screw extruder 108 transfer bahan lignoselulosa cincang dari pabrik
helikopter 104 . Steam 110 dapat ditambahkan untuk sekrup extruder 108 , yang dapat
dikonfigurasi untuk menghasilkan ledakan uap dalam bahan lignoselulosa 102 , misalnya ,
dengan mengolah bahan lignoselulosa pada tekanan tinggi cukup untuk mencegah mendidih
dan suhu 120 C sampai 240 C selama waktu mulai dari satu menit sampai enam puluh
menit atau lebih . The screw extruder 108 opsional bubur bahan lignoselulosa cincang dengan
solusi pengasaman 112 yang berisi , misalnya, dari 1 % sampai 5 % berat asam sulfat
dicampur dengan homogenitas dalam air , misalnya , untuk menghasilkan pH 1,2-1,4 .
Pembuangan dari screw extruder 108 berkelebat ke tangki tinggal 114 , yang dipertahankan
pada suhu di bawah 100 C untuk mendinginkan bahan dan menghentikan reaksi selanjutnya
.

Tangki tinggal 114 discharge menjadi sekrup conveyor 116 , yang pada pertama tiga cara
stasiun pencampuran 118 mencampur bubur dengan larutan kapur 120 , misalnya , satu
dengan kapur cukup untuk memberikan pH yang telah ditentukan dari 10 sampai 11 . Bubur
dibuang ke dalam padatan memegang tangki 122 di mana ia berada untuk waktu yang tepat
memungkinkan kapur untuk menghapus produk samping merusak hidrolisis asam .
Tambahan asam 124 , seperti asam sulfat , dapat ditambahkan ke dalam padatan memegang
tangki 122 untuk menyesuaikan pH ke kisaran dari 5 sampai 7 . Padatan memegang tangki
122 pembuangan ke kedua tiga cara pencampuran stasiun 126 untuk lebih lanjut
pencampuran dengan solusi pra-cuci 128 yang berisi protein lignin -blocking dan / atau
polipeptida , misalnya , satu menyampaikan sebuah lignin protein memblokir 1 % sampai 5
% dan / atau polipeptida konten berat bubur . Pencampuran lebih lanjut terjadi melalui
turbulator 130 , yang dibuang ke sepertiga tiga cara pencampuran stasiun 140 .

Pada gilirannya , ketiga tiga cara pencampuran stasiun 140 memperkenalkan solusi enzimatik
142 yang berisi enzim prehydrolyzing , misalnya , selulase atau campuran selulase dan enzim
lain, termasuk glucosidase . Atau , solusi enzimatik 142 berisi inokulum dan media
pertumbuhan termasuk mikroorganisme yang mampu saccharifying bubur untuk hidrolisis
selulosa oleh in vivo produksi enzim tersebut . Bubur perjalanan ke sebuah bejana reaktor
hidrolisa dipanaskan 144 , yang mungkin menjadi salah satu dari serangkaian kapal reaktor
tersebut , untuk waktu tinggal yang tepat memungkinkan hidrolisis bubur . Sebagai contoh,
ini waktu tinggal mungkin dari satu sampai tiga hari . Serangkaian ( tidak ditampilkan ) kapal
reaktor hidrolisa 144 dapat mengizinkan proses batch kontinyu .

Bubur debit dari reaktor hidrolisa 144 dapat mengalami pencampuran tambahan di sebuah
stasiun pencampuran keempat 154 , yang menambahkan solusi enzimatik kedua 156 , seperti
solusi enzimatik mikroorganisme yang mengandung atau larutan berair dengan enzim
tambahan yang berguna untuk proses konversi , yaitu , konversi gula menjadi alkohol . Solusi
enzimatik kedua 156 bereaksi dalam reaktor converter 158 , misalnya , untuk mengubah gula
menjadi alkohol atau senyawa organik lainnya . Discharge dari reaktor converter 158 dapat
diajukan ke pemisah pusaran 160 , yang pembuangan padatan untuk pembuangan limbah di
mana padatan mungkin , misalnya , digunakan sebagai bahan bakar boiler . Cairan dari
pusaran pemisah disampaikan kepada kolom distilasi 162 , yang berkonsentrasi produk yang
berguna , misalnya , ethanol , untuk lebih lanjut hilir pengolahan 164 , seperti filter molekuler
untuk menghilangkan air . Sisa cairan dan / atau padatan dari kolom distilasi 162 diserahkan
untuk mendaur ulang pengolahan 166 , misalnya , untuk menyaring partikel halus dan
tambahkan asam untuk penggunaan cairan seperti solusi pengasaman 114 .

Ini akan dihargai bahwa peralatan umumnya diperlihatkan dalam Gambar . 1 dapat digunakan
atau diadaptasi untuk melaksanakan berbagai proses yang dikenal . Proses sebelumnya tidak
mencakup penggunaan wash ( pra-cuci ) komposisi , seperti polipeptida lignin -blocking dan /
atau pra-cuci protein solusi 128 , dan dapat diadaptasi untuk penggunaan tersebut sesuai
dengan sarana-sarana yang dijelaskan di sini . Penggunaan tersebut dari komposisi cuci ,
solusi pra-cuci 128 hasil dalam pengurangan biaya yang signifikan dalam keseluruhan proses
produksi gula atau senyawa organik difermentasi dari kadar lignin tinggi lignoselulosa
dengan mengurangi penggunaan enzim .

Sebagaimana digunakan di sini , biomassa lignoselulosa memiliki " high- lignin isi"
didefinisikan sebagai biomassa memiliki setidaknya sekitar 10 % berat lignin / selulosa .
Dengan cara contoh , biomassa tersebut adalah karakteristik tanah kayu . Modifikasi proses
yang dikenal untuk menyertakan penggunaan pra-cuci solusi 128 secara substansial
meningkatkan efisiensi konversi selulosa dalam pengolahan kandungan lignin tinggi selulosa
.

Di antara proses untuk memproduksi etanol dari substrat lignoselulosa ( misalnya , pohon,
rumput , dan limbah padat ) adalah mereka yang dikenal sebagai Direct Mikroba Konversi (
DMC ) proses dan Simultan Sakarifikasi dan Fermentasi ( SSF ) proses . Proses ini dapat
menggunakan berbagai mikroorganisme untuk mengubah bahan organik menjadi etanol .
Dalam metode DMC , sistem mikroba tunggal kedua menghasilkan enzim selulase dan
menghasilkan ethanol sebagai produk fermentasi . Metode SSF menggunakan dua unsur
biologis , yang didasarkan pada enzim selulase dan yang lainnya , yang fermentasi gula
menjadi etanol .

Sebagai alternatif untuk menambah selulase dalam larutan enzimatik 142 , selulase dapat
diproduksi menggunakan proses fermentasi biomassa , misalnya , dalam proses DMC seperti
yang dijelaskan dalam Brooks et . al . , Proc . Annu . Bahan Bakar Biomassa gejala . , 2 (
1978 ) , atau proses SSF seperti yang dijelaskan di Ghose et . al . , Biotechnol . . Bioeng , 26 (
4 ) : 377-381 ( 1984) . Proses ini dapat digunakan , sebagaimana telah diubah dengan
penggunaan pengobatan protein , seperti dengan cuci ( seperti Pra cuci ) langkah dengan
komposisi terdiri dari lignin memblokir polipeptida dan / atau protein , sesuai dengan prinsip-
prinsip yang diuraikan di sini . Salah satu contoh dari suatu organisme yang berguna dalam
mengkonversi bahan organik menjadi etanol melalui proses DMC adalah Clostridium
thermocellum . Contoh lain dari mikroorganisme yang cocok yang dapat digunakan dengan
opsi proses DMC termasuk Fusarium oxysporum dan C. cellulolyticum . Selain itu,
organisme tersebut dapat digunakan dalam co - kultur dengan C. thermosaccharolyticum atau
organisme serupa pentosa - memanfaatkan seperti C. thermohydrosulfuricum dan
Thermoanaerobacter ethanoliticus . Contoh dari mikroorganisme lain yang dapat digunakan
dalam praktek metode yang diklaim sesuai dengan proses SSF adalah Sacchararomyces
cerevisiae ( yang menghasilkan etanol ) .

Berbagai media pertumbuhan yang cocok untuk proses pencernaan mikroba yang dikenal
dalam bidang ini . Umumnya , media pertumbuhan yang cocok mampu menyediakan
komponen kimia yang diperlukan untuk mempertahankan aktivitas metabolik dan untuk
memungkinkan pertumbuhan sel . Salah satu medium pertumbuhan yang efektif mengandung
komponen per liter air berikut :
Media disebutkan di atas tertuang melalui contoh . Media tumbuh yang cocok lain dapat
digunakan juga, termasuk media industri berbasis jagung minuman keras curam .

Menurut perwujudan lain , biomassa yang telah dirawat karena hidrolisis enzimatik diproses
lebih lanjut untuk menghasilkan molekul organik , misalnya , dalam reaktor converter 158 .
Seperti ditunjukkan dalam Gambar . 1 , pH diubah oleh larutan kapur 120 , yang juga dapat
terjadi hilir posisi yang ditunjukkan dalam gambar . 1 . Salah satu selulase diketahui atau
kompleks selulase dapat digunakan dalam solusi enzimatik 142 atau 156 . Misalnya , selulase
pencernaan dapat dilakukan selama satu sampai tiga hari pada suhu yang optimal untuk
selulase digunakan . Solusi yang mengandung gula kemudian dipisahkan dari residu ,
misalnya dengan filtrasi , sedimentasi , atau sentrifugasi . Larutan gula dapat pulih seperti
gula atau mungkin fermentasi untuk menghasilkan bahan kimia organik yang diinginkan .

Menurut berbagai perwujudan dan instansi , bahan lignoselulosa 102 mungkin biomassa kayu
, biomassa herba ( misalnya hijauan rumput ) , dan bahan limbah ( misalnya , limbah padat
perkotaan ) . Berbagai ukuran dari bahan baku lignoselulosa sangat bervariasi dan tergantung
pada jenis bahan yang digunakan serta persyaratan dan kebutuhan dari suatu proses . Ukuran
partikel bahan baku lignoselulosa pemakaian dari pabrik helikopter 104 sebelum pengolahan
hilir berkisar dari kurang dari satu milimeter dengan diameter beberapa inci diameter .
Ukuran partikel dari bahan baku lignoselulosa setelah pengolahan melalui screw extruder 116
adalah di kisaran 1-4 milimeter . Bahan baku lignoselulosa disukai adalah bahan biomassa
kayu terdiri dari partikel kayu keras . Contoh kayu keras termasuk poplar , oak , maple , dan
birch .

Seperti yang digunakan disini merupakan " jumlah signifikan mengurangi " selulase atau
enzim selulosa - hidrolisis lainnya adalah jumlah enzim yang kurang dari yang dibutuhkan
untuk menghidrolisis biomassa tinggi lignin yang belum diobati dengan polipeptida lignin -
blocking dan / atau protein . Lebih khusus lagi , "jumlah signifikan mengurangi " dari
hidrolisis enzim merupakan selisih antara jumlah selulase yang dibutuhkan untuk
menghidrolisis setidaknya 50 % dari selulosa dalam high- lignin selulosa biomassa yang telah
diobati dengan protein lignin -blocking dan / atau polipeptida dan jumlah selulase atau enzim
hidrolisis selulosa lainnya yang diperlukan untuk mendapatkan jumlah yang sama hidrolisis
selulosa tinggi lignin selulosa biomassa yang tidak diobati dengan protein lignin -blocking
dan / atau polipeptida . Dalam perwujudan khusus, " jumlah signifikan mengurangi " enzim
hidrolisis selulosa adalah sekitar 20 % sampai enzim sekitar 50% kurang dari yang
dibutuhkan untuk menghidrolisis selulosa dalam biomassa lignoselulosa tidak diobati dengan
protein lignin -blocking dan / atau polipeptida . Peningkatan ini dimungkinkan dengan
menggunakan protein blocking lignin dan / atau komposisi pengobatan polipeptida , dalam
hal ini solusi pra-cuci , 128 , yang ditunjukkan dalam Gambar . 1 .

Bahan lignoselulosa sebaiknya tanah sebelum diserahkan kepada pengolahan hilir , misalnya
, seperti dengan menggunakan pabrik chopper 104 dalam reaktor . Jika sifat bahan
lignoselulosa adalah sedemikian rupa sehingga akan memecah di bawah kondisi pengolahan
hilir , maka grinding tidak diperlukan . Ukuran partikel tidak kritis tetapi hidrolisis umumnya
berlangsung lebih cepat dengan ukuran partikel yang lebih kecil , sehingga optimasi ekonomi
dapat dicapai antara biaya penggilingan bahan lignoselulosa dan keuntungan biaya yang lebih
tinggi . Ukuran partikel yang lebih kecil inheren memberikan permukaan yang lebih luas
untuk selulase untuk menyerang dan menurunkan selulosa . Di sisi lain , untuk satu set
kondisi aliran , partikel yang terlalu kecil dapat membentuk tikar padat , yang sulit untuk
cairan untuk menembus pada tingkat yang dapat diterima .

Ukuran partikel yang tepat bervariasi dengan bahan baku dan sifat fisik yang melekat , serta
kondisi aliran . Dalam kebanyakan proses , ukuran partikel sesuai untuk kayu tanah berada di
kisaran sekitar 0,1 mm sampai 30 mm lebih disukai berkisar dari 0,5 mm sampai 4 mm .
Bahan lain mungkin lebih besar atau lebih kecil tergantung pada bahan tertentu , terutama
mereka yang memiliki setidaknya satu dimensi tipis seperti kertas atau jerami . Jika seseorang
bergantung pada efek gravitasi atau pengapungan menyebabkan pergerakan bahan
lignoselulosa padat sehubungan dengan cairan , maka ukuran partikel mungkin perlu
disesuaikan tepat untuk memungkinkan gerakan padat / cair selama hidrolisis . Ukuran
optimal tergantung pada bahan lignoselulosa tertentu yang digunakan dan ukuran reaktor dan
konstruksi dan sudah ditentukan oleh studi empiris rutin untuk kondisi reaktor dan aliran
reaktor .

Bahan-bahan selulosa mungkin termasuk kayu , rumput , kayu lunak , limbah kertas dan pulp,
limbah rumah tangga , limbah pertanian seperti jerami , tongkol jagung , brangkasan ,
biomassa dari semua jenis , dll dan campurannya . Pemilihan bahan selulosa tergantung pada
ketersediaan dan biaya bahan selulosa tertentu yang sedang diproses . Keuntungan dari
sekarang lignin -blocking polipeptida dan / atau metode pengobatan protein yang paling jelas
dalam biomassa selulosa yang memiliki kadar lignin minimal 5 % , 10 % atau lebih ,
misalnya , 11 % , 12 % , 15 % , 17 % , 20 % , 24 % , 25 % , 30 % , 35 % , 40 % , 45 % , 50 %
, 60 % , 70 % , atau lebih . Metode pengobatan lignin -blocking juga dapat digunakan untuk
mengolah bahan baku selulosa baik dan sebagian diolah memiliki konten yang lebih rendah
lignin , misalnya , 7 % , 6 % , 5 % atau kurang .

Dalam beberapa perwujudan , pembuluh reaktor 144 dan 158 secara umum mungkin
memiliki kandungan padatan sekitar 5 % sampai 50 %, lebih disukai 8 % sampai 50 % ,
ketika padatan yang hadir dengan cairan pada akhir hidrolisis . Semakin tinggi kandungan
padatan umumnya lebih diinginkan tetapi konsentrasi mungkin dibatasi oleh desain reaktor
dan kebutuhan cairan untuk memanaskan makanan padat . Pada awal hidrolisis , kandungan
padatan dapat berkisar dari 0 % sampai 100 % berat , seperti reaktor pada awalnya hanya
berisi padatan lignoselulosa atau cairan .

Dalam perwujudan lain masih , enzimatik solusi 142 termasuk selulase ditambahkan ke pH
bubur disesuaikan . Selulase mencerna selulosa menjadi gula sesuai dengan instruksi pabrik
untuk pencernaan selulosa . Salah satu selulase diketahui, kompleks selulase , enzim atau
hidrolisis selulosa lainnya , dapat digunakan . Pencernaan terjadi , misalnya , selama satu
hingga tiga hari pada suhu optimal untuk selulase untuk menghasilkan solusi yang
mengandung gula . Gula yang mengandung larutan dipisahkan dari residu , misalnya dengan
filtrasi , sedimentasi atau sentrifugasi . Solusi yang mengandung gula dapat diproses untuk
memulihkan gula atau lebih bereaksi atau difermentasi untuk menghasilkan bahan kimia
organik yang diinginkan , seperti alkohol .

Dalam proses fermentasi , misalnya, mikroorganisme fermentasi dalam larutan enzimatik
kedua 156 mungkin sama seperti yang digunakan dalam larutan enzimatik 142 , tapi mungkin
ada perubahan kondisi proses , seperti konversi dari aerobik untuk kondisi proses anaerobik
dalam reaktor converter 158 . Selulosa pencernaan terutama menghasilkan glukosa dalam
tangki padatan 122 . berbagai lebih luas mikroorganisme dapat digunakan untuk
menghasilkan berbagai macam bahkan lebih luas dari senyawa organik dalam reaktor
converter 158 . residu digest dapat difermentasi dengan cara apapun yang diketahui per se
untuk memanfaatkan glukosa . Jika diinginkan , debit dari screw extruder 116 dapat
dipisahkan menjadi komponen-komponen cair dan padat untuk aliran proses yang terpisah
dan digabungkan pada posisi hilir .

Sebagai alternatif untuk pencernaan selulase terpisah dan fermentasi , kedua reaksi dapat
terjadi bersamaan dalam sakarifikasi dan fermentasi proses simultan , misalnya , dalam
reaktor hidrolisa 144 . Setiap fermentasi yang beroperasi dalam kondisi yang cocok untuk
selulase dapat diterima . Kondisi dan konsentrasi dalam sakarifikasi dan fermentasi simultan (
pH , suhu , dll ) dapat diukur dan disesuaikan untuk dioptimalkan baik untuk sakarifikasi atau
fermentasi atau untuk optimasi keseluruhan . Kondisi dapat diubah sebagai proses
berlangsung .

Uraian berikut dari perwujudan spesifik mengungkapkan sifat umum dari penemuan ini
sehingga orang lain dapat , dengan menerapkan pengetahuan saat ini , mudah memodifikasi
dan / atau beradaptasi untuk berbagai aplikasi perwujudan tertentu seperti tanpa menyimpang
dari konsep generik , dan oleh karena itu , adaptasi tersebut dan modifikasi harus dan
dimaksudkan untuk dipahami dalam arti dan rentang setara dari perwujudan yang
diungkapkan . Hal ini harus dipahami bahwa ungkapan atau istilah yang digunakan dalam
dokumen ini untuk tujuan deskripsi dan bukan dari keterbatasan .

Semua referensi yang disebutkan dalam aplikasi ini digabungkan dengan mengacu pada
tingkat yang sama seolah-olah sepenuhnya direplikasi di sini . Dalam contoh berikut ,
Laminex selulase dibeli sebagai Cytolase ( merek dagang dari Genencor terletak di San
Francisco , California ) . Aktivitas spesifik enzim selulase adalah sekitar 28 unit kertas saring
internasional ( IFPU ) / ml , sebagaimana ditentukan oleh National Renewable Energy
Laboratory Laboratorium Analisis prosedur PAP - 006 ( NREL , 2001) . - glucosidase
dibeli sebagai Novozyme 188 Sigma ( merek dagang dari Novozyme berlokasi di Franklin
, NC ) , dan digunakan dalam persiapan hadir pada rasio 1:1.75 ( FBUase : CBUase ) .
Namun, komposisi enzim hidrolisis yang memiliki rasio 1:1 sampai 1:10, atau 1:01-01:02 .
Sisanya ditentukan oleh nama kimia dibeli dalam kemurnian penelitian kelas pada urutan
komersial dari rumah pasokan laboratorium nasional . Bubuk selulosa ( - selulosa ) , yang
digunakan sebagai substrat kontrol , diperoleh dari Sigma Chemical Co of St Louis , Mo

Rasio tertentu dari enzim dapat disesuaikan pada kasus - per kasus , misalnya , untuk
mengoptimalkan jumlah yang dibutuhkan dengan mikroorganisme tertentu yang sedang
digunakan . Dalam beberapa kasus , tidak ada - glucosidase dapat digunakan karena
mikroorganisme yang digunakan .

Ragi yang digunakan dalam sakarifikasi dan fermentasi simultan ( SSF ) Contoh adalah
Saccharomyces cerevisiae D5A , seperti yang dijelaskan dalam Spindler et al , Bioteknologi
Letters , 14 : 403-407 ( 1992) .

Komposisi pengobatan protein dapat dibuat seperti mencuci , seperti dalam larutan ,
disiapkan dalam air suling . Sebagai contoh , salah satu solusi mencuci tersebut dibuat dengan
melarutkan 10 gram ( bg. ) albumin serum sapi dalam satu ( 1 ) liter (1000 ml ) air suling .
Sebagai contoh, di mana biomassa dicuci memiliki berat sekitar 100 gram , komposisi protein
cuci di atas akan disiapkan dan biomassa akan dicuci dengan dua liter larutan BSA 1 %
dijelaskan .

Contoh 1 Tinggi Lignin - lignoselulosa Biomassa Pengobatan dengan Protein Lignin
mengikat
Contoh ini menunjukkan kegunaan menggunakan pengobatan protein , seperti protein /
polipeptida cuci langkah, untuk meningkatkan efisiensi aktivitas selulase dalam biomassa
lignoselulosa konten high- lignin . Dibandingkan dengan metode sebelumnya , bahwa upaya
untuk menurunkan dan menghapus konten lignin , saat ini metode blok lignin dengan protein
yang mengikat yang mencegah lignin dari pemulungan enzim pencernaan . Contoh ini
membandingkan metodologi mencuci protein dalam bentuk pretreatment mencuci
pengolahan penemuan sebelumnya dengan hidrolisis asam dan / atau ledakan uap . Hasil
penelitian menunjukkan bahwa efisiensi yang sama dapat diperoleh dengan menggunakan
enzim selulase substansial kurang ketika biomassa prewashed dengan larutan protein yang
mengandung protein lignin mengikat.

Dua contoh biomassa diperiksa . Ini adalah biomassa yang terbuat dari brangkasan jagung (
CS ) dan biomassa terbuat dari cemara Douglas . Untuk setiap sampel , analisis kimia
dilakukan untuk menentukan konsentrasi awal selulosa , lignin dan hemiselulosa pada akhir
pretreatment asam , sebelum mencuci protein , dan sebelum hidrolisis selulase . Kadar
selulosa , kadar lignin , hemiselulosa dan konten yang ditentukan oleh National Renewable
Energy Laboratory Laboratorium Analitik Prosedur PAP - 002 & 003 ( NREL , 2001) .

Pretreatment CS dengan 0,1 % H2SO4 pada 180 C selama 40 menit , atau 0,1 % H2SO4
pada 160 C selama 80 menit , seperti yang ditunjukkan pada Tabel 3 . Residu padat dicuci
dengan air ( 15 kali berat ) untuk menghapus kelompok asam sebelum hidrolisis enzimatik .

The Douglas fir ( Pseudotsuga menziesii ) gubal dan kayu batang yang terkelupas dan
disaring untuk ukuran chip yang relatif homogen dari 4 4 1 cm . Chip uap meledak di
batch berat kering 50 g menggunakan kondisi ledakan uap dari 195 C, 4.5 min . , Dan 4,5 %
( b / b ) SO2 seperti yang dijelaskan sebelumnya di Boussaid et al , Optimasi hemiselulosa
pemulihan gula dari kayu lunak uap meledak , Prosiding Konferensi Biomassa of the
Americas , 3, Montreal , 24-29 Agustus , 1997) . Kondisi ledakan uap ini dipilih dari 13 set
eksperimental yang mencakup variasi pada lima tingkat suhu , kadar SO2 dan waktu . Mereka
menyediakan pemulihan terbaik dari keseluruhan gula yang berasal dari hemiselulosa dan
selulosa . Residu padat dicuci dengan air ( 15 kali berat ) untuk menghapus kelompok asam
sebelum hidrolisis enzimatik .

Protein mencuci sampel yang dipilih sedemikian rupa sehingga terjadi efisiensi konversi
dalam sampel yang pra - dicuci dengan 1 % bovine serum albumin bisa dibandingkan dengan
efisiensi sampel yang tidak prewashed dengan albumin serum sapi .

Protein Pra cuci termasuk mencuci masing-masing sampel dengan 1 % ( b / b ) larutan
protein dengan menyaring solusi melalui filter glass menengah 3 kali pada suhu kamar .
Residu padat yang tersisa , yang dilakukan pada konsentrasi padatan 2 % ( g weight/100
kering mL ) dalam 50 mM buffer asetat , pH 4,8 yang mengandung 40 mg / ml tetrasiklin dan
30 mg / mL cycloheximide . Labu yang pra - diinkubasi pada 45 C. pada rotary shaker pada
150 rpm selama 10 menit . Enzim yang ditambahkan untuk memulai hidrolisis setelah
aklimatisasi . Aliquots 0,5 mL diambil pada waktu yang berbeda ( 0 , 0.2 , 1 , 4 , 8 , 12 , 24 ,
48 , 72 jam ) , segera dingin di atas es , dan disentrifugasi pada 5.000 g selama 10 menit .
Analisis total gula dilakukan pada supernatan yang dihasilkan .

Preparat enzim yang digunakan untuk semua studi hidrolisis diperoleh dari Genencor .
Pengobatan dilakukan dengan selulase lengkap ditambah dengan - glucosidase , (
Novozyme 188 ) pada rasio 1:1.75 m ( FPUase : CBUase ) . Perawatan enzimatik
dilakukan pada berbagai FPUase / g selulosa . Jumlah FPU dihitung dengan menambahkan
kegiatan baik Celluclast dan Novozyme 188 . Persiapan selulase memiliki 28 unit
kertas saring ( FPU ) / mL , sedangkan Novozyme 188 memiliki 8 FPU / mL , dan 480 -
glucosidase IU / mL , dan dilengkapi untuk menghindari inhibisi produk akhir akibat
akumulasi selobiosa .

Jumlah protein diukur dengan menggunakan Protein Assay Bio - Rad menggunakan BSA
sebagai standar , sesuai dengan produsen arah yang ditentukan . Jumlah protein diserap dalam
supernatan dilaporkan sebagai persentase dari jumlah protein hadir dalam substrat kosong .

Kandungan gula padatan dan asam lignin larut ditentukan dengan menggunakan prosedur
lignin Klason diterbitkan oleh Renewal Energy Laboratorium National Laboratory Analytical
Prosedur PAP - 002 & 003 ( NREL , 2001) . Sekitar 300 mg dari sampel tanah untuk
melewati layar 40 - mesh dari seri saringan standar AS , tersedia dari Central Ilmiah Ohio ,
ditimbang dengan ketelitian 0,1 mg , dan ditempatkan di 10 mL tabung reaksi , yang
kemudian ditempatkan dalam mandi air , yaitu mandi air Shaker 3540 dari Apogen
Teknologi Melrose Park, Illinois tabung dipertahankan pada 30 1 C selama 1 jam dengan
sering diaduk. Tabung yang dikosongkan dalam 250 ml labu Erlenmeyer yang berisi 84 ml .
air deionisasi , menghasilkan larutan asam 4 % . Termos tersebut ditutup dengan aluminium
foil dan ditimbang sebelum autoklaf pada 120 C selama 1 jam . Setelah autoklaf ,
penurunan berat badan ditentukan dan disesuaikan kembali dengan menambahkan jumlah
yang tepat air deionisasi sebelum vakum penyaringan campuran melalui wadah media .
Residu padat dicuci dengan 225 ml . air panas untuk menghilangkan asam yang tersisa .
Wadah dan total asam residu larut ( tidak termasuk ash ) yang dipanggang dalam oven pada
105 C selama 12 jam . Berat padatan yang tersisa dibagi dengan berat awal bahan awal
memberikan fraksi residu tidak larut asam , yang biasanya ditunjuk sebagai kadar lignin
Klason .

Analisis gula komposisi dari semua biomassa sampel padat dan cair dilakukan oleh prosedur
analitis Prosedur standar yang ditetapkan oleh National Renewal Energy Laboratory
Laboratorium , LAP -001002003005 & 012 ( NREL , 2001) . Filtrat dari asam uji residu larut
dijelaskan di atas adalah pada sistem kinerja tinggi kromatografi cair , yaitu Waters 2695
dari Waters of Milford , Mass , dilengkapi dengan detektor indeks bias berdenyut ( Waters
2410 bias diferensial ) untuk mendapatkan komposisi gula . Sampel cair disaring dari
hidrolisis juga dijalankan oleh metode ini . Sebuah larutan gula campuran komposisi
diketahui arabinosa , galaktosa , glukosa , mannose , xylose dan dirawat secara paralel
dengan persis urutan yang sama seperti yang dijelaskan dalam prosedur residu asam larut
untuk memperkirakan kerugian gula faktor koreksi untuk hidrolisis asam dan autoklaf .
Sampel filtrat disaring melalui 0,2 m NM filter yang diperoleh dari Fisher of Pittsburgh , Pa ,
dan volume 20 uL dibebankan pada botol sampel yang kemudian dimuat ke dalam sistem
kromatografi cair kinerja tinggi dilengkapi dengan detektor indeks bias berdenyut untuk
mendapatkan kadar gula . Kolom ini diseimbangkan dengan de - terionisasi air pada laju alir
0,6 mL / menit . Kolom Aminex HPX - 87P dari Bio - Rad dari Sunnyvale , California
digunakan untuk penentuan kadar gula .

Tabel 3 memberikan perbandingan berbagai digestions yang dilakukan pada bahan biomassa
tertentu . Dalam beberapa kasus, digestions dilakukan tanpa pra-cuci protein .
Sebagaimana ditunjukkan pada Tabel 3, pengobatan protein disediakan efisiensi enzim
ditingkatkan untuk semua substrat diuji. Secara khusus, pretreatment protein diikuti dengan
hidrolisis menggunakan konsentrasi selulase yang lebih rendah (mg / ml) mampu mencapai
efisiensi konversi yang sama seperti yang dilakukan konsentrasi selulase yang lebih tinggi
dalam kasus di mana tidak ada pretreatment protein. Jumlah yang relatif lebih besar dari
enzim diselamatkan dengan meningkatnya jumlah kandungan lignin substrat. Hasil dari
penelitian ini menunjukkan bahwa perlakuan protein meningkatkan tingkat hidrolisis enzim
selulase dari selulosa bahkan di paling bandel dari bahan biomassa lignoselulosa. Hal ini
ditunjukkan di sini bahwa pengobatan protein menghemat aktivitas FPU 10-25%. Misalnya,
dalam reaktor flowthrough dengan 0,1% asam sulfat, 20 FPU / g selulosa konsentrasi selulase
menghasilkan efisiensi konversi dari 81% tanpa BSA pra-cuci. Hal ini dibandingkan dengan
pada dasarnya efisiensi konversi yang sama sebesar 80,4% yang disediakan oleh konsentrasi
selulase dari 15 FPU / g selulosa sebagai diaktifkan oleh BSA pra-cuci 1%. Demikian pula,
hasil hidrolisis selulase per unit selulase ditingkatkan dari 5% menjadi 20%. Sehubungan
dengan konversi brangkasan jagung, sekitar 50% konversi dicapai dengan menggunakan 20
FPU / g selulosa selulase ketika biomassa tidak diperlakukan dengan 1% mencuci protein,
sementara hanya 12 FPU / g selulosa selulase yang dihasilkan pada dasarnya jumlah yang
sama konversi ketika biomassa dirawat dengan protein 1% (BSA) mencuci. Ini adalah
tentang pengurangan 50% dalam jumlah enzim yang dibutuhkan. Jadi, dengan menggunakan
proses disini diungkapkan pengobatan protein, selulase menurun 5% menjadi 50%, atau 20%
sampai 30%, atau 20% sampai 40%, untuk memberikan hasil yang sama pada dasarnya
diukur sebagai persentase konversi selulosa untuk karbohidrat.

Contoh 2 Protein Pengobatan Tinggi Lignin mengandung Biomassa
Contoh ini menunjukkan utilitas dari proses penemuan untuk meningkatkan degradasi
selulosa dan efisiensi selulase, atau enzim selulosa merendahkan lainnya, dengan
menghambat kapasitas pengikatan protein dari lignin dengan protein / peptida memiliki lignin
mengikat afinitas non-spesifik.

Dua jenis sumber selulosa dipelajari. Salah satu jenis yang -selulase-selulase murni tanpa
lignin yang cukup. Jenis biomassa lainnya diperiksa adalah brangkasan jagung (CS). Empat
sampel yang diteliti termasuk -selulosa tanpa pra-cuci protein, -selulosa dengan pra-cuci
protein, CS dengan pra-cuci dan CS tanpa pra-cuci.

Setiap sampel dicuci pada suhu kamar dengan 1% (b / b) BSA (aq) dari solusi protein bovine
serum albumin berair dengan menyaring larutan protein melalui tiga bagian sementara tetap
mempertahankan padatan pada filter kaca menengah pada suhu kamar (rasio solid untuk
solusi protein adalah 1 g: 20 ml, kisaran kapasitas protein-menyerap lignin sekitar 0,4-0,96
mg BSA / lignin mg). Residu padat kemudian diproses lebih lanjut pada konsentrasi padatan
2% (g weight/100 kering mL) dalam 50 mM buffer asetat, pH 4,8 yang mengandung 40 mg /
mL tetrasiklin dan 30-mg/mL cycloheximide. Labu yang pra-diinkubasi pada 45 C. pada
rotary shaker pada 150 rpm selama 10 menit, dan enzim yang ditambahkan untuk memulai
hidrolisis setelah aklimatisasi. Aliquots 0,5 mL diambil pada waktu yang berbeda (0, 0.2, 1,
4, 8, 12, 24, 48, 72 jam), segera dingin pada es dan disentrifugasi pada 5000 g selama 10
menit. Jumlah analisis gula dilakukan pada supernatan yang dihasilkan.

Preparat enzim yang digunakan untuk semua studi hidrolisis diperoleh dari Genencor.
Pengobatan dilakukan dengan selulase lengkap ditambah dengan Novozyme 188 -
glucosidase, dengan rasio 1:1.75 (FPUase: CBUase). Perawatan enzimatik dilakukan pada 20
FPU / g selulosa. Jumlah FPU dihitung dengan menambahkan kegiatan baik Celluclast
dan Novozyme 188. Persiapan selulase memiliki 28 unit saringan kertas (FPU) / mL,
sedangkan Novozyme 188 memiliki 8 FPU / mL, dan 480 -glucosidase IU / mL, dan
dilengkapi untuk menghindari inhibisi produk akhir akibat akumulasi selobiosa.

Gambar. 2 menunjukkan hasil. Sampel biomassa -selulosa menunjukkan sedikit penurunan
dalam efisiensi konversi yang dihasilkan dari BSA cuci. Meskipun tidak berniat untuk
dibatasi pada mekanisme tertentu tindakan atau teori operasi dari penemuan ini, penurunan
mungkin di kisaran kesalahan eksperimental. Atau, pengurangan mungkin dihasilkan dari
BSA memiliki afinitas sedikit untuk selulase, atau BSA mengganggu aktivitas selulase, atau
mungkin keduanya. Seperti perbedaan ini kurang dari efisiensi konversi 3% sampai 5%, BSA
dianggap tidak memiliki afinitas yang cukup untuk selulase. Sampel brangkasan jagung,
yaitu, sampel memiliki kandungan lignin yang lebih tinggi, menunjukkan perbedaan efisiensi
konversi sekitar 15% setelah sekitar 25 jam. Meskipun tidak berniat untuk terbatas pada teori
tertentu, mungkin bahwa perbedaan ini ada karena lignin yang mengikat BSA, dan dengan
demikian meningkatkan selulase yang tersedia.

Contoh 3 Lignin-binding Protein / Peptida
Contoh ini disediakan untuk menunjukkan kegunaan menggunakan berbeda polipeptida
lignin-blocking dan / atau protein dalam konversi biomassa lignoselulosa.

Protein lignin-blocking menunjukkan sini untuk menghasilkan pengurangan enzim selulase
yang diperlukan untuk mengkonversi biomassa adalah BSA. BSA memiliki berat molekul
yang relatif tinggi dari 66.000 Dalton. Hal ini dimaksudkan bahwa polipeptida lain dan / atau
protein yang memiliki kemampuan untuk memblokir lignin mengikat juga akan berguna
dalam praktek penemuan ini. Jadi, sementara protein dan / atau polipeptida yang memiliki
berat molekul rata-rata dari 2.000 Dalton menjadi 300.000 Dalton umumnya berguna, protein
atau polipeptida memiliki kapasitas untuk memblokir lignin mengikat, dan memiliki berat
molekul dalam kisaran sekitar 55.000 Dalton sampai sekitar 80.000 Dalton diharapkan akan
sangat berguna dalam praktek penemuan ini. Banyak protein dan polipeptida memiliki
afinitas mengikat non-spesifik untuk lignin juga dapat digunakan untuk memberikan
keuntungan yang sama. Sebagai contoh, protein seperti protein kedelai (tepung kedelai,
bungkil kedelai) dapat digunakan untuk memblokir lignin dengan mempersiapkan polipeptida
atau komposisi protein dalam air, dan menggunakan komposisi tersebut sebagai pra-cuci
biomassa.

Lignin-blocking/binding polipeptida dan protein, seperti yang didefinisikan untuk tujuan di
sini, adalah molekul yang mengganggu kemampuan lignin untuk mengikat selulase atau
enzim selulosa-hidrolisis lainnya, dan yang memiliki afinitas tinggi untuk mengikat lignin
dan aktivitas mengikat relatif tidak signifikan (seperti 1% sampai 3% b / b) untuk selulosa
atau untuk enzim hidrolisis selulosa, selulase. Protein ini lignin-blocking/binding dan
polipeptida selanjutnya dapat digambarkan memiliki ukuran 55.000 Dalton 80.000 Dalton.
Namun, fragmen peptida yang lebih kecil atau lebih besar dari BSA memiliki berat molekul
rendah tetapi mempertahankan aktivitas lignin mengikat cukup juga dapat digunakan dalam
komposisi pengobatan Pra cuci.

Lignin-blocking polipeptida dan protein yang dapat digunakan dalam hubungannya dengan
penemuan ini tidak dimaksudkan untuk meningkatkan efisiensi hidrolisis selulosa biomassa
yang tidak terdiri dari setidaknya 5% lignin. Prinsip ini ditunjukkan dalam gambar. 2. -
selulosa tidak termasuk komponen lignin yang cukup. Konversi selulosa dari -selulosa pra-
diobati dengan 0,1% H2SO4, 180 C, 40 min. diperiksa. Konversi persen (%) dan tingkat
konversi (waktu, jam) dari biomassa -selulosa dengan protein-pengobatan dan tanpa
pengobatan protein relatif sama. -selulosa + BSA mencapai konversi 60% pada 12 jam, dan
77% pada 25 jam. -selulosa tanpa BSA mencapai konversi 62-63% pada 12 jam, dan 78%
pada 25 jam.

Sebaliknya, biomassa memiliki kandungan yang lebih tinggi dari lignin, seperti brangkasan
jagung (sekitar 10 sampai 17% lignin), menunjukkan perbedaan yang jauh lebih signifikan
dalam konversi persen. Sebuah jumlah yang jauh lebih besar dari selulosa biomassa
dikonversi dalam lignin-blocking polipeptida dan / atau protein diobati, lignin mengandung
biomassa dibandingkan dengan biomassa tidak diobati dengan polipeptida lignin-blocking
dan / atau protein. Menggunakan jumlah yang sama enzim selulase (20 FPU / g selulosa
enzim pemuatan), peningkatan diamati dalam konversi selulosa setelah sekitar 12 jam
ditunjukkan. Peningkatan konversi selulosa terus dari waktu ke waktu. CS + BSA mencapai
konversi 41% pada 12 jam, dan 60% pada 25 jam. CS tanpa BSA mencapai 38% konversi
pada 12 jam dan 46% pada 25 jam. Di sini, perbedaan dalam konversi selulosa dari protein-
diperlakukan com-brangkasan biomassa sekitar 15% ditunjukkan setelah 25 jam. Perbedaan
dalam jumlah konversi selulosa antara protein-dirawat dan diperlakukan biomassa non-
protein dipertahankan selama periode 70 jam dipantau.

Contoh 4 Biokonversi Uap terhidrolisa kayu lunak dengan Protein Treatment
Contoh ini menunjukkan efisiensi lebih lanjut dari biokonversi substrat lignoselulosa kayu
lunak yang pra-perawatan dengan asam dikatalisis langkah hidrolisis awal uap. Contoh yang
diberikan di sini dari biomassa lignoselulosa kayu lunak dibuat dari pohon cemara Douglas.

Sebuah sampel pohon cemara disiapkan seperti yang dijelaskan di Boussaid et al, Optimasi
hemiselulosa pemulihan gula dari kayu lunak uap meledak (Douglas fir). Membuat Bisnis
dari Biomass Energi, Lingkungan, Kimia, Serat dan Bahan, Prosiding Konferensi Biomassa
of the Americas, 3, Montreal, 24-29 Agustus 1997. Biomassa tersebut kemudian diproses
melalui perawatan pra-hidrolisis steam ledakan. (195 C, 4,5% SO2 selama 4,5 menit). Uap-
ledakan, biomassa prehydrolyzed kemudian diobati dengan loading 10 FPU / g selulosa. The
persen konversi dengan hidrolisis enzimatik adalah 64% setelah 72 jam. Sebaliknya, ketika
uap meledak uap biomassa dihidrolisis diperlakukan dengan 1% bovine serum albumin
persiapan, dan kemudian diobati dengan jumlah yang jauh lebih rendah dari selulase 7,5 FPU
/ g selulosa, konversi dari 66% diperoleh (Lihat Tabel 1) . Hasil penelitian menunjukkan
penurunan enzim 25% untuk menghasilkan produk konversi sedikit lebih dari biomassa uap
meledak dari Douglass cemara.

Contoh 5 Enzim Pemanfaatan / Pengawetan sebagai Dinilai oleh Filter Paper Activity (FPU)
dengan dan tanpa Protein Pengobatan Biomassa
Contoh ini menunjukkan bahwa dengan perlakuan awal biomassa lignoselulosa dengan
lignin-blocking polipeptida dan / atau protein, aktivitas enzim selulase akan dipertahankan
dalam aktif, keadaan terikat. Aktivitas relatif enzim (selulase) diukur sebagai aktivitas kertas
filter (kegiatan FPA%).

Jagung brangkasan (CS1), adalah pra-dihidrolisis dengan H2SO4 0,76%, pada 160 C,
selama 10 menit. Kedua protein diobati dan non-protein diobati sampel brangkasan jagung
diperiksa dimulai dengan 20 FPU / g enzim selulosa pemuatan. Jumlah filter perubahan
aktivitas kertas kemudian dimonitor untuk jagung brangkasan sampel yang telah
diperlakukan dengan larutan BSA 1%, serta sampel brangkasan jagung yang belum diobati
dengan larutan BSA 1%. Hasil ini akan ditampilkan sebagai gambar. 3.

Kegiatan FPA relatif dipelihara untuk tingkat yang lebih besar dan untuk jangka waktu yang
lebih lama dengan biomassa yang telah diobati dengan protein, dibandingkan dengan
biomassa yang belum diobati dengan protein. Kegiatan FPA relatif% turun dari 100%
menjadi 42% setelah hanya sekitar 4 jam, dan kemudian jatuh lagi menjadi sekitar 30%
setelah 25 jam. Sebaliknya, kegiatan FPA relatif hanya turun menjadi sekitar 80% setelah
sekitar 4 jam dengan protein lignin-blocking biomassa diobati, dan hanya turun sampai 50%
aktivitas FPA relatif setelah 25 jam (Lihat Gambar. 3).

Data ini menunjukkan bahwa pengobatan secara efektif mengikat protein lignin dalam
biomassa brangkasan jagung, dan dengan demikian menghalangi lignin dari mengikat
tersedia selulase. Untuk alasan ini, aktivitas FPU selulase dipertahankan untuk jangka waktu
yang lama. Faktor ini menyajikan keuntungan ekonomi substansial dalam menggunakan
lignin-blocking pretreatment protein lignin mengandung biomassa dalam biokonversi
menjadi etanol.

Contoh 6 Protein dalam Solusi dan Efisiensi Biokonversi di Lignin vs Non-lignin
Mengandung Biomassa
Contoh ini diberikan untuk menunjukkan bahwa polipeptida lignin-blocking dan / atau
protein, seperti BSA, dan enzim selulase, diserap secara berbeda oleh biomassa yang
mencakup komponen lignin, dibandingkan dengan biomassa yang tidak termasuk lignin yang
signifikan komponen. Prinsip ini ditunjukkan dalam contoh ini menggunakan -selulosa,
biomassa dengan sedikit lignin, dan CS, yang tidak mencakup setidaknya 10% lignin.

Gambar. 4 menunjukkan analisis total protein dalam larutan dari waktu ke waktu selama
hidrolisis biomassa dari -selulosa (tidak ada lignin). The FIG. 4 Penelitian dilakukan dengan
menggunakan enzim selulase muatan awal enzim selulosa 20 FPU / g. Gambar. 4
menunjukkan bahwa dengan tidak adanya lignin dalam biomassa ( selulosa), setiap protein
yang ditambahkan ke dalam larutan tersebut tidak akan terserap, dan karena itu tetap menjadi
komponen terukur dalam larutan. Pada 0 jam, sampel -selulosa ditambah BSA menunjukkan
jumlah terdeteksi 1,2 protein dalam larutan (mg / ml), yang meningkat menjadi 1,4 mg / ml
pada penambahan selulase pada 10 jam (Gambar 4). Jumlah protein dalam larutan kemudian
turun menjadi 1,2 mg / ml sekitar 1 jam. Tentang protein yang sama nilai solusi diperoleh
dengan selulosa diobati dengan BSA tapi yang selulase belum ditambahkan. Seiring waktu,
ada sekitar 0,1-0,15 mg / ml meningkatkan jumlah protein terukur dalam larutan dalam
sampel -selulosa yang baik selulase dan protein (BSA) pengobatan telah diberikan. Tidak
ada peningkatan jumlah terukur total protein dalam larutan dari waktu ke waktu ditunjukkan
dengan -selulosa diobati dengan BSA, tapi tidak selulase.

Gambar. 4 juga menunjukkan bahwa selulosa yang selulase telah ditambahkan
menghasilkan protein yang relatif statis dalam tingkat terdeteksi solusi atas seluruh jangka
waktu diperiksa. Seperti ditunjukkan, sekitar 0,2 mg / ml total protein dalam larutan itu
dibuktikan dengan sampel ini pada 0 jam, dan jumlah ini relatif sama pada 50 jam (Lihat
Gambar. 4). Selain itu, gambar. 4. Menunjukkan bahwa protein hampir tidak berpengaruh
pada tingkat hidrolisis -selulosa. Namun, tingkat hidrolisis CS1 ditingkatkan dengan pra-
dicuci pengobatan BSA. Hasil ini menunjukkan bahwa protein memiliki pengaruh yang kecil
pada mekanisme katalitik enzim selulolitik. Oleh karena itu, ada kemungkinan bahwa
protein-blocking situs adsorpsi non-spesifik pada lignin bisa menjadi peran kunci pengobatan
protein dalam menjelaskan efek positif dari protein pada hidrolisis enzimatik lignoselulosa.

Gambar. 5 menunjukkan analisis total protein dalam larutan dari waktu ke waktu selama
hidrolisis biomassa brangkasan jagung (ditampilkan sebagai CS1). The FIG. 5 Penelitian
dilakukan dengan menggunakan enzim selulase muatan awal enzim selulosa 20 FPU / g.
Gambar. 5 menunjukkan bahwa dengan adanya biomassa lignoselulosa (CS), protein
ditambahkan dalam bentuk enzim (selulase) atau mencuci protein (BSA), diserap dari solusi.
Penurunan total protein dalam larutan berpendapat untuk mencerminkan adsorpsi BSA,
selulase, atau keduanya, untuk komponen lignin dari biomassa. Gambar. 5 menunjukkan
kerugian yang signifikan dari protein (termasuk selulosa dan / atau BSA) dalam larutan
menggunakan biomassa yang mencakup komponen lignin. Sebuah protein yang diobati
(BSA) biomassa brangkasan jagung menunjukkan protein awal dalam larutan ukuran 1,2 mg /
ml. Langkah ini turun awalnya menjadi 0,9 mg / ml sekitar 1 jam, dan kemudian naik lagi
menjadi 1,2 mg / ml pada penambahan selulase sekitar 3 jam dalam reaksi. Protein di tingkat
larutan menurun secara dramatis di sekitar 8 jam untuk sekitar 0,2 mg / ml., Dan tetap pada
tingkat ini selama seluruh periode penelitian, 50 jam.

Jagung brangkasan sampel juga diperiksa tanpa telah diobati dengan protein (BSA). Selulase
ditambahkan pada sampel ini juga. Protein awal nilai solusi jauh lebih rendah, sebesar 0,2 mg
/ ml., Pada titik waktu 0 jam. Jumlah ini berkurang menjadi sekitar 0,1 mg / ml setelah sekitar
satu jam, dan tetap pada tingkat rendah ini untuk masa studi diamati studi (50 jam).

Secara keseluruhan, sampel biomassa dengan lignin menunjukkan tingkat yang jauh lebih
rendah dari protein dalam larutan selama periode pengujian seluruh dibandingkan dengan
biomassa yang tidak mengandung komponen lignin. Dengan demikian, protein, dalam bentuk
BSA, selulase, atau keduanya, yang diserap oleh komponen lignin dari biomassa, dan karena
protein tidak terdeteksi dalam larutan. Protein yang diserap dengan komponen lignin dari
biomassa. Kesimpulan ini didukung oleh pengamatan protein terdeteksi dalam larutan ketika
memeriksa biomassa yang tidak termasuk komponen lignin. Protein dalam larutan tertinggi di
biomassa -selulosa yang telah diobati dengan protein BSA dan selulase. The -selulosa
ditambah BSA pengobatan menunjukkan total protein lebih rendah dalam larutan dari sampel
yang selulase dan BSA telah ditambahkan. Biomassa -selulosa yang hanya selulase telah
ditambahkan menunjukkan jumlah konsisten lebih rendah dari total protein yang dapat dibaca
dari 0,2 mg / ml dalam larutan selama periode uji keseluruhan. Di sini, selulase bertindak
untuk menghidrolisis selulosa tersedia dari -selulosa, tanpa hambatan komponen lignin.

Deskripsi dari perwujudan spesifik mengungkapkan konsep-konsep umum bahwa orang lain
dapat memodifikasi dan / atau beradaptasi untuk berbagai aplikasi atau penggunaan yang
tidak berangkat dari konsep-konsep umum. Oleh karena itu, adaptasi dan modifikasi tersebut
harus dan dimaksudkan untuk dipahami dalam arti dan rentang setara dari perwujudan yang
diungkapkan. Hal ini harus dipahami bahwa ungkapan atau istilah yang digunakan dalam
dokumen ini untuk tujuan deskripsi dan bukan pembatasan.
Klaim ( 20 )
1 Sebuah metode untuk meningkatkan hasil hidrolisis dari biomassa yang memiliki kadar
lignin tinggi mencakup langkah-langkah . :
mengobati biomassa dengan komposisi termasuk sarana untuk memblokir komponen lignin
biomassa untuk memberikan biomassa memiliki komponen lignin diobati ,
dimana berarti untuk memblokir komponen lignin mengikat ke situs pengikatan non - spesifik
pada lignin dan memiliki berat molekul antara 55.000 dan 80.000 Dalton dan
menambahkan sejumlah efektif hidrolisis enzim untuk biomassa untuk menghidrolisis
komponen selulosa biomassa ,
dimana berarti untuk memblokir komponen lignin adalah protein yang dipilih dari kelompok
yang terdiri dari albumin , protein kedelai , dan kombinasinya.
2 Metode klaim 1 lebih lanjut meliputi langkah-langkah tambahan . :
mengekstraksi karbohidrat dari selulosa ;
fermentasi karbohidrat dalam kehadiran ethanol mengkonversi mikroorganisme untuk jangka
waktu dan dalam kondisi yang sesuai dalam campuran reaksi untuk memproduksi etanol ;
dan
mengekstraksi etanol dari campuran reaksi .
3 Sebuah metode untuk meningkatkan hasil hidrolisis dari biomassa yang memiliki kadar
lignin tinggi mencakup langkah-langkah . :
mengobati biomassa dengan komposisi termasuk polipeptida lignin -blocking dipilih dari
kelompok yang terdiri dari albumin , protein kedelai dan kombinasinya untuk memberikan
biomassa memiliki komponen lignin polipeptida diobati ; dan
menambahkan sejumlah efektif hidrolisis enzim untuk biomassa untuk menghidrolisis
komponen selulosa biomassa .
4 . Metode klaim 3 , dimana langkah penambahan suatu jumlah yang efektif termasuk
penggunaan hidrolisis enzim dalam jumlah yang setidaknya 20 % kurang dari akan
diperlukan jika langkah mengobati dihilangkan .
Metode 5 . Klaim 3 , dimana biomassa terdiri dari sedikitnya 10% lignin berat .
6 . Metode klaim 3 , dimana komposisi polipeptida lignin -blocking selanjutnya didefinisikan
sebagai terdiri dari 0,1 % sampai 10 % berat lignin -blocking polipeptida .
7 . Metode klaim 3 , dimana hasil hidrolisis dari selulosa biomassa dengan polipeptida
diperlakukan komponen lignin ditingkatkan 5 % sampai 20 % dibandingkan dengan hasil
hidrolisis dari selulosa biomassa jika langkah mengobati dihilangkan .
8 . Metode klaim 3 , dimana biomassa selanjutnya didefinisikan sebagai terdiri dari 10 %
sampai 50% lignin berat .
9 Metode klaim 3 lebih lanjut meliputi langkah-langkah tambahan . :
mengekstraksi karbohidrat dari selulosa ;
fermentasi karbohidrat dalam kehadiran ethanol mengkonversi mikroorganisme untuk jangka
waktu dan dalam kondisi yang sesuai dalam campuran reaksi untuk memproduksi etanol ;
dan
mengekstraksi etanol dari campuran reaksi .
10 Sebuah proses untuk meningkatkan produksi senyawa organik dari biomassa lignoselulosa
terdiri . :
hidrolisis biomassa lignoselulosa dengan uap , dan asam atau alkali untuk memberikan
biomassa diperlakukan yang terdiri selulosa dan lignin padat ;
mencuci padatan biomassa diobati dengan polipeptida lignin -blocking dipilih dari kelompok
yang terdiri dari albumin , protein kedelai dan kombinasinya ; dan
menambahkan sejumlah efektif enzim selulosa - hidrolisis terhadap biomassa diolah dalam
kondisi yang cocok untuk hidrolisis untuk menghasilkan karbohidrat ,
dimana kata sejumlah efektif enzim hidrolisis setidaknya 25 % kurang dari yang dibutuhkan
untuk menghasilkan karbohidrat jika langkah cuci dihilangkan .
11 Proses klaim 10 lebih lanjut terdiri dari langkah-langkah tambahan . :
fermentasi karbohidrat dalam kehadiran ethanol mengkonversi mikroorganisme untuk jangka
waktu dan dalam kondisi yang sesuai dalam campuran reaksi untuk memproduksi etanol ;
dan
mengekstraksi etanol dari campuran reaksi .
12 . Proses klaim 10 dimana enzim selulosa - hidrolisis terdiri dari selulase .
13 . Metode klaim 3 dimana enzim selulosa - hidrolisis terdiri dari selulase .
Metode 14 . Dari klaim 1, dimana biomassa terdiri dari sedikitnya 10% lignin berat .
15 . Metode klaim 1 , dimana langkah penambahan suatu jumlah yang efektif termasuk
penggunaan hidrolisis enzim dalam jumlah yang setidaknya 20 % kurang dari akan
diperlukan jika langkah mengobati dihilangkan .
16 . Metode klaim 1 dimana biomassa terdiri dari kayu , residu pertanian atau kehutanan ,
rumput atau kombinasi keduanya .
17 . Metode klaim 1 dimana komposisi selanjutnya didefinisikan sebagai terdiri dari 0,1 %
sampai 10 % berat dari sarana untuk memblokir komponen lignin .
18 . Metode klaim 1 dimana hasil hidrolisis dari selulosa biomassa dengan komponen lignin
diperlakukan ditingkatkan 5 % sampai 20 % dibandingkan dengan hasil hidrolisis dari
selulosa biomassa jika langkah mengobati dihilangkan .
19 . Metode klaim 1 dimana enzim selulosa - hidrolisis terdiri dari selulase .
20 . Metode klaim 1 dimana biomassa selanjutnya didefinisikan sebagai terdiri dari 10 %
sampai 50% lignin berat .