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OBSERVACIN DEL MUNDO

MICROSCPICO Y TINCIN DE GRAM



Xochilt Yiset Garca Garca, Teresa Broca Crdova, Yesenia Kristell Lpez Velzquez,
Mara Ignacia Palma Velzquez y Justo Ernesto Canch Hoil

UNIVERSIDAD POPULAR DE LA CHONTALPA. Laboratorio de Microbiologa Bsica

RESUMEN

La microbiologa es una rama de la biologa que estudia a los microorganismos en su
medio en el cual estos son muy importantes en la vida der ser humano aunque a veces
igual son portadores de algunas enfermedades que hacen que causen daos al ser humano
y a otros organismos que los contenga, ms que nada analizaremos la importancia que
nos brindan los microorganismos as como tambin su forma de reproduccin en
diferentes medios de cultivo haciendo nfasis en los resultados de las practicas elaboradas
durante la investigacin.

Palabras claves: Microorganismos, clula, bacterias, medios de cultivo, agar nutritivo

INTRODUCCION

La microbiologa es el estudio de los
microorganismos y sus actividades, su
forma, estructura, reproduccin,
fisiologa, metabolismo e identificacin,
como estn distribuidos en la naturaleza,
sus relaciones con otros seres, los
benficos o perjudiciales que ejercen
sobre los humanos, y las alteraciones
fsicas y qumicas que provocan en el
medio .[1]
Independientemente de la
complejidad de un organismo, la clula es
la verdadera unidad bsica de la vida.
Todos los seres vivos tienen faculta de
responder al medio que los rodea y con
frecuencia a alterarlo.
Las caractersticas principales de
los microorganismos son:
a) la capacidad de reproduccin.
b) la faculta de ingerir y asimilar
sustancias nutritivas y metabolizarlas
para producir energa y desarrollarse.
c) la capacidad de excretar
productos de desecho.
d) la facultad de reaccionar a
cambios en su medio ambiente, llamada
en ocasiones irritabilidad. [1]
Los microorganismos tienen un
mbito mas amplio de potencialidades
fisiolgicas y bioqumicas que todos los
dems organismos en total. Por ejemplo,
algunas algas y bacterias son capaces de
fijar nitrgeno atmosfrico para sintetizar
protenas y otros compuestos orgnicos
nitrogenados complejos. Otras especies
requieren compuestos de nitrgeno
inorgnico u orgnico como materia
prima para elaborar sus constituyentes.
Algunos microorganismos sintetizan
todas sus vitaminas, en cambio otros
necesarios que les sean suministradas. [1]
Para aislar e identificar una especie
bacteriana y diferenciarla de aquellas
otras con que pudiera confundirse
morfolgicamente, es preciso obtener
cultivos que por caractersticas macro y
microscpicas ,y debido al estudio de las
propiedades biolgicas del
microorganismo nos permiten establecer
su identidad. Estos cultivos se lleva a
cabo sobre sustratos ptimos para el
desarrollo bacteriano. Un medio de
cultivo esta constituido por sustancias
generalmente complejas que posibilitan
el crecimiento de las bacterias. El
desarrollo de un microorganismo en un
medio de cultivo depende de diversos
factores entre los cuales los ms
importantes son: disponibilidad de los
elementos nutritivos necesarios,
existencia del oxigeno requerido,
temperatura de incubacin precisa (35.5
-37) y el grado de humedad apropiada.
[2]
Los microorganismos beneficiosos
para el ser humano son aquellos que en el
organismo de una persona previenen que
los otros microorganismos patgenos
crezcan, o algunas producen toxinas
qumicas para prevenir la competicin
del crecimiento microbiano.
algunos microorganismos
beneficiosos para el ser humano son los
pro biticos, que son microbios vivos que
pueden incluirse en la preparacin de una
amplia gama de productos, incluyendo
alimentos, medicamentos, y suplementos
dietticos. [3]
Sin embargo, otros son
perjudiciales ,todos los virus ,asicomo
algunas bacterias, protozoarios y hongos
microscpicos son parasitos,se nutren a
expensas de otros seres vivos causndoles
perjuicios mas o menos graves. Algunos
demestos microorganismos parasitan al
hombre, a su gando o a sus cultivos
causndoles enfermedades que se
denominan infectocontagiosas por que se
producen por invasin del
organismo(infeccin) y se transmiten por
contagio de unos individuos a otros . los
microorganismos que causan estas
enfermedades se denomina germenes o
microbios patgenos. [4]
El objetivo principal de esta
prctica es que el alumno observe en el
microscopio, las diferentes formas de
vida de los microorganismos, haciendo
nfasis en las bacterias, algas verdes,
protozoarios y hongos tipo moho.

MATERIALES Y MTODOS

Para la colecta de microorganismos
se tomaran en cuenta 3 tipos:



1.-Algas verdes y Protozoarios

a) Para la obtencin de algas verdes
se debern tomar muestras de cualquier
lago o laguna, as como de cualquier
cuerpo de agua estancada donde se
observe crecimiento de estos organismos.
b) Para todos los casos se tendrn
tres muestras de tres das diferentes de
colecta. En el caso de un lago o laguna se
tomar un frasco de cristal con una
cuerda amarrada en la boca del frasco y
se lanzar a la parte ms profunda que el
alumno pueda alcanzar.
c) Cuando haya tocado fondo se
retira del lago, se le coloca su
correspondiente tapa, se etiqueta y se
guarda en el refrigerador.
d) Al siguiente da se repite el
procedimiento hasta tener la tercera
muestra.

2.-Hongos tipo Mohos

a) Para tal caso debern colectarse
Basiodiomecetes o Deuteromicetes en
algn potrero, ya que estas especies
crecen bien en el estircol del ganado
vacuno.
b) Pueden ser Zygomicetes como
Rizophus nigricans, o cualquier otro tipo
de hongo filamentosos.

3.-Bacterias

a) Para esto debern prepararse
medios de cultivo.
Esta prctica se llevo a cabo en el
laboratorio de microbiologa Los
materiales necesarios fueron una probeta
graduada de 1000 mL; Vaso de
precipitado de 500 mL; Matraz
Erlenmeyer de 500 mL; 5 Cajas de Petri
de plstico ya esterilizadas; Agar
nutritivo; Plumn indeleble; Asa de
inoculacin; Algodn; Papel Aluminio;
Cinta Maskin tape; Parrilla Elctrica; 2
Agitadores Magnticos largos; Bata de
laboratorio ,Balanza analtica o
semianaltica; Agua destilada; Guantes de
asbesto; Gasas; Mechero de Bunsen;
Microscopio estereoscpico; Microscopio
de Luz; Portaobjetos; Pipeta volumtrica
de 1 mL; Navajas en forma de hojas o
Bistur.

Preparacin del medio

a) Se preparar una caja de
petri por cada alumno participante el da
de la prctica.
b) Debern leerse las
instrucciones y conocer cuntos g se
requieren para preparar 1 L de medio de
cultivo a base de agar nutritivo.
c) Por cada caja de Petri se
requieren aproximadamente 15 mL, as
que si por cada L se requieren X gramos,
por Y cajas de Petri se prepararn Z
gramos.
d) Una vez calculados los mL
se prepararn 100 mL extra. Esto quiere
decir que si al final se necesitan 150 mL
para 10 cajas Petri los mL totales sern
250 mL, lo cual es una compensacin por
prdidas por evaporacin o derrames
involuntarios.
e) Tomar la cantidad pesada
de agar nutritivo y disolverla en el matraz
con la cantidad de agua necesaria,
colocarla sobre la parrilla elctrica y
calentarla hasta disolverla. Hay que
observarla hasta que hierva y justo en el
momento que alcance su punto de
ebullicin retirarla de la parrilla para que
no se derrame puesto que en caso que
suceda hay que prepararlo de nuevo.
f) Mientras hierve el medio
se le agrega el agitador magntico para
mejorar su disolucin.
g) Colocar un tapn de
algodn sobre el matraz que contiene el
medio ya disuelto y cubrirlo con
aluminio.
h) Durante este transcurso se
habrn lavado las cajas de Petri y
escurrido durante ese tiempo.
i) Tomar cada caja de Petri y
envolverla con papel aluminio y junto con
el matraz colocarlo dentro del Autoclave
para esterilizarlo a 15 lb de presin a 121
C por 15 minutos.
j) Esterilizados cajas y medio
debern llevarse a la Campana de Flujo
Laminar y antes de que alcance su punto
de solidificacin vaciar en las cajas y
rotularlas con el nombre del estudiante.

Siembra de bacterias

a) De las muestras de agua
colectadas tomar una porcin con el asa
de inoculacin y hacer la siembra en
estras.
b) En otras cajas de Petri, segn el
alumno, soplar sobre el medio de cultivo.
c) Tomar una muestra con el asa de
inoculacin de mucosa bucal y nasal y
hacer la siembra en estras.
d) Tocar el medio de cultivo con la
yema de los dedos en repetidas ocasiones.

Incubacin del medio

a) Dejar los medios en una estufa
para su incubacin a 37 C por 10 das y
observar el crecimiento posteriormente.
b) Observacin de las algas verdes y
protozoarios
c) Tomar una muestra del agua
colectada y colocarla en una caja de petri.
Observar al microscopio estereoscpico.
d) Tomar una muestra del agua
colectada y colocarla en un portaobjetos y
Observar al microscopio de luz.
e) Tomar una muestra de los
hongos estilo moho (zygomicetes
principalmente) y observar al
microscopio estereoscpico.
f) Hacer cortes trasversales y
longitudinales del las Setas y observar al
microscopio.
g) Dibujar lo visto en la lente de
aumento.

RESULTADOS Y DISCUSIN

Para la elaboracin de la prctica de
observacin de mundo microscpico y
tincin de gram, en el laboratorio se
realizo el siguiente procedimiento:
Cada alumno llevo una caja de petri
de plstico esterilizada, las cuales se
marcaron con sus respectivos nombres,
grupo y carrera.
Al realizar la prctica se tomo en
cuenta que se necesitan 23 gr de agar
para prepararse en un litro de agua y
como tambin saber que para cada caja
petri se necesitan aproximadamente 15
ml de agar nutritivo. Asi que para 30
cajas petri se prepararan 450 ml de agar
nutritivo, y tomando en cuenta que se
agregaran 100 ml mas de agua por
perdidas de evaporacin o por algn
derrame de agar nutritivo al depositarse
en alguna caja petri. Tomando en cuenta
los 450 y 100 ml de agua, en total se
prepararan 550 ml de agar nutritivo, el
cual necesito 12.66 gr de agar.
Se prosigui a pesar un pedazo de
aluminio el cual peso 0.8 gr para poder
pesar los 12.66 gr de agar, una vez pesado
este se deposito en un matraz de 1000 ml,
para despus colocarla sobre la parrilla
elctrica la cual al llegar a su disolucin
total, alcanzo un color amarillo claro.
Mientras se calentaba se le agrego
un agitador magntico el cual sirvi para
mejorar su disolucin, por tanto se
espero a que el liquido alcanzara su punto
de ebullicin e inmediatamente se
retirara de la parrilla elctrica para que
no se derramara.
Mientras el agar nutritivo alcanzaba
su punto de ebullicin se dejo a cargo a
un compaero para que el agar nutritivo
no se derramara, por lo que se aprovecho
para la observacin de las algas verdes y
protozoarios, el cual se tomaron muestras
de aguas colectadas de diferentes lugares
y se pusieron en cajas petri para su
observacin al microscopio
estereoscpico. Despus siguiendo con
las muestras de aguas colectadas tambin
se colocaron en porta objetos y se
observaron al microscopio de luz. Por
ltimo se tomo muestras de hongos estilo
moho(zygomicetes) de un pedazo de pan
y de tortilla, as como los cortes
transversales y longitudinales de las setas
de los hongos filamentosos, los cuales
fueron observados al microscopio
estereoscpico.
Una vez bajado de la parrilla se
coloco un tapn de algodn sobre el
matraz y se dejo transcurrir el tiempo
adecuado para que el agar nutritivo
tuviese la temperatura adecuada (antes
de que se solidificara) para vaciar en las
30 cajas petri.
Despus de haber alcanzado la
temperatura adecuada, se coloco el
matraz con agar nutritivo cerca de un
mechero para que al momento de que
cada alumno al vaciar los 15 ml
aproximados de agar nutritivo a cada caja
petri, este no se contaminara con
bacterias del medio.
Despus de vaciar el agar a las cajas
se espero a que el agar nutritivo de cada
caja petri se solidificara y en seguida se
tomo el asa de inoculacin para hacer
estras de agua colectada, mucosa bucal y
nasal. Algunos sembraron con la yema de
los dedos, pero cada siembra fue a
consideracin de cada alumno.
Una vez terminada la siembra se
juntaron todas las cajas petri, para ser
envueltas en papel aluminio y se
guardaron en una estufa para su
incubacin a 37 C por 8 das para el
crecimiento de bacterias y hongos.
Pasados los 8 das se prosigui con
la Tincin de Gram, en la cual se
recogieron las muestras y solo sirvieron
las que se llevo correctamente el
crecimiento de hongos fue aceptable. En
equipos se tomo una muestra de la
siembra y se coloco en un porta objeto
con extendido en espiral, dejando secar a
temperatura ambiente, despus se fijo la
muestra con metanol durante 1 minuto;
enseguida se agrego azul violeta, se
espero un minuto y se enjuago con agua.
Despus se agrego Lugol el cual se espero
3 minutos. Pasado el tiempo indicado se
decoloro con etanol y acetona hasta que
no escurriera mas liquido azul, se dejo
pasar entre 15 y 20 segundos para
despus enjuagar con agua.
Una vez enjuagado se hizo la
tincin de contraste enjuagando
safranina, la cual se dejo 2 minutos y el
color del tinte fue de color rosado-rojizo
el cual indico las bacterias Gram
negativas, se enjuago nuevamente con
agua.
Por ltimo se observo al
microscopio ptico a 4x, 1ox y 100x, en
donde se pudieron observar diferentes
tipos de bacterias.
Con la realizacin de esta prctica
aprendimos la forma de vida como son
las bacterias, algas verdes ,protozoarios y
hongos tipo moho.
La utilidad de los medios de cultivo
para la microbiologa es individualizar los
distintos tipos de microorganismos
presentes en una muestra. [5]

BIBLIOGRAFA

1 .-Microbiologa pelczar/reid/chan
cuarta edicin Ed. mc grawhill capitulo
38 pg. 703).
2.-Microbiologia clnica practica
P.Garcia, M.T Fernndez del barrio y
F.Paredes salido 2 edicin.
3.-
http://biologiamedica.blogspot.mx/2010/09/
microorganismos-beneficiosos-para-el.html
4.-FP de Grado Superior Biologa Juan
Antonio Jaramillo Snchez.
5.- Microbiologa estomatologa,
fundamentos y gua practica,2 edicin
editorial panamericana.


EJEMPLO.

Garca, G. M., R. Quintero R. y A. Lpez
M. 2004. Biotecnologa alimentaria.
Editorial LIMUSA. 168 pg.