CULTIVO IN VITRO

Introduccin:
En el siglo XIX la nica manera de conseguir una orqudea, era extrayndola de su hbitat
natural.

Pero el hombre a lo largo de la historia y en su afn de conocer temas inexplorados, ha realizado
valiosos aportes cientfico-culturales, y las orqudeas no han estado exentas de la curiosidad
humana. Y lo prueba la idea de lograrlas, en condiciones artificiales por medio de la tcnica del
cultivo in vitro.
El cultivo in vitro, trmino que literalmente significa en vidrio, incluye tcnicas de cultivo, por las
cuales es posible obtener plantas libres de microbios, en un medio nutritivo asptico (estril), en
condiciones ambientales controladas.
Las primeras experiencias relacionadas al cultivo in vitro, de tejidos vegetales, se remontan a
1902, pero recin en 1922 se logr el primer experimento exitoso: germinacin in vitro de
semillas de orqudeas.
La multiplicacin in vitro no solo sirve para fines comerciales, sino tambin para preservar las
especies, ya que debido a la depredacin de los bosques, se encuentran en peligro de extincin.
Cultivo in Vitro en el mbito domstico:
El cultivo in Vitro tambin podemos realizarlo en casa. Se hace en frascos cerrados y en
condiciones controladas y estriles. El sustrato de cultivo, conocido normalmente como
medio de cultivo, ha de contener los elementos necesarios para que las plantas puedan crecer lo
suficiente, para despus ser trasplantadas al sustrato definitivo.
Materiales nos hacen falta para llevar a cabo el cultivo in Vitro domestico:
mechero
alcohol al 70 %
embudo
rollo de film de 5 cm
pinzas metlicas
cajas de petri
jeringas
frascos con tala plstica
olla a presin
guantes azules
Cmara de esterilidad: Construccin
En cultivo in Vitro hablamos de esterilidad cuando no hay bacterias ni otros microorganismos:
slo est vivo el material vegetal que queremos hacer crecer.
Se hace una caja de vidrio o cartn forrado en papel metalizado, para toda la estructura menos
la parte de adelante, de unos 40 cm de altura por 60 de ancho y 40 de profundidad, sin fondo,
que ser la superficie de la mesa.
En la parte frontal se hacen unos orificios adecuados para introducir las manos a los que se les
acoplan unos guantes largos. Por este sistema podremos trabajar sin tocar los materiales que
estarn estriles.

Medio de cultivo: componentes y preparacin:
8 gr. de agar agar
0,05 mlg. complejo vitamnico B 1
1/2 banana mixeada
2 cucharadas de agua de coco (es importante que cuando compren el coco lo agiten y
oigan el sonido del liquido dentro)
1 litro de agua destilada
10 gr. de sacarosa o azcar orgnica
2 gr. carbn activado
2 gotas de agua oxigenada
1 gr. cineb (fungicida)
Cmo mezclamos todo esto?
Simplemente se disuelve todo en una parte del agua excepto el agar agar. La banana debe
hacerse papilla muy fina con una fraccin de agua y despus mezclarlo todo. Finalmente aadir
el agar agar.
Esto se lleva al microondas y como el agar tarda en disolverse, sern necesarios varios golpes
de calor hasta que se disuelva. Entre golpe y golpe se saca del microondas y se agita con una
esptula o una cuchara.
Una vez disuelto el agar agar se espera a que enfre un poco sin que llegue a volverse slido y
se vierte en los frascos de cultivo la cantidad necesaria. Finalmente se meten en la olla a presin
para ser esterilizados.
Esperar tres das para verificar que el medio de cultivo no se contamina, momento que est apto
para la siembra.
Capsulas - Esterilizacin
De capsulas verdes :
capsulas verdes (cerradas)
alcohol
mechero
pinza de metal
Las semillas de orqudeas pueden germinar en medios de cultivo, aun cuando no han madurado
totalmente (capsula verde o cerrada). Las semillas que se encuentran dentro de las capsulas
cerradas se mantienen estriles, por lo tanto solo es necesario realizar la desinfeccin superficial
externa de la capsula y luego abrir.
Dentro de la cmara de esterilidad , mojar la capsula en alcohol y pasarla por el mechero. Al
apagarse se abre con un bistur esterilizado previamente y se vuelcan las semillas en la caja de
petri con alcohol al 70%. Con ayuda del bistur estril se corta la capsula y se retiran las
semillas.
De capsulas maduras:
Con una jeringa se absorbe el contenido y se agita durante un minuto, realizando esta operacin
tres veces. Otra opcin en lugar del alcohol es: agua dos cm., una gota de detergente y una de
lavandina. Para eliminar el liquido de la jeringa se expulsa sobre un filtro para caf de papel. El
ultimo enjuague ser solo de agua destilada y no lo desecharemos . En estas operaciones
perderemos una buena cantidad de semillas. Sembrar.
Sembrado de semillas :
Recordemos que las semillas de las orqudeas son muy pequeas, teniendo millones y millones
de ellas en cada capsula de la planta.
Dentro del flujo laminar o cmara de esterilidad, previamente esterilizado con un pulverizador
con alcohol al 70 %, procederemos al sembrado de las semillas.
Tomamos la jeringa que contiene las semillas, destapamos el frasco e insertamos una pequea
porcin en cada uno, se cierra y se sella con el film. No olvidemos usar en todo momento
guantes .
Repicado:
Normalmente se realiza el repicado si vemos que el medio de cultivo de los frascos sembrados
se degrado y se ha consumido casi todo el nutriente , o porque vemos que algn hongo se est
desarrollando.
Cuando tienen aproximadamente medio cm, se cambian al mismo medio fresco tambin en
esterilidad, dejando aproximadamente 10 a 30 plantitas por frasco. Sacar ya a la luz, no sol
directo, puede ser cerca de una ventana o en el invernadero.
Rusificacin: Plantado en sustrato
Como norma general, cuando las plantas tienen unos 3-4 cm de alto o sea que estn
suficientemente desarrolladas, ya se pueden adaptar al sustrato. Para estas latitudes se prefiere
esperar un poco mas de desarrollo de las plntulas y de ser posible en los meses mas clidos.
Se sacan las plntulas del frasco, si las races estn muy pegadas se agrega un poco de agua y
con un palito se trata de aflojarlas.
Lavar bien, con agua destilada cada platita hasta que no tenga ms medio de cultivo. Con
mucho cuidado, y sin romper las races que son importantsimas.
Preparar un fungicida sistmico y se remojar durante 20 minutos. Sacarlas y dejarlas secar
sobre papel de cocina.
Cuando estn bien secas, envolverlas en musgo sphagnum remojado en agua destilada, con un
fertilizante al 20 % de su concentracin y antishock (Fertifox), bien exprimido. La dosificacin
del antishock, es 1 gota en 4 litros de agua.
En una macetita nueva, o una botellita cortada al medio, en el fondo colocar pedacitos de arcilla
expandida o tergopor, y sobre esto comenzar a sembrar las plntulas, cuidando siempre las
races.
Durante 15 das solo nebulizar (hay que mantenerlas en humedad con ventilacin). Luego
comenzar a fertilizarlas en cada riego profundo (regar primero y luego fertilizar)
Colocar la macetita en un lugar iluminado sin sol directo y con temperatura entre 20/25 grados.
Polinizacin:
La reproduccin de las orqudeas se realiza:
1. a travs de diversos polinizadores: polinizacin natural
2. con la ayuda del hombre: polinizacin artificial
La reproduccin natural es realizada por insectos, ya que el polen no es dispersado por el
viento, se necesita de alguien qu lo transporte hacia otra orqudea.
La reproduccin artificial es realizada por el ser humano, se utiliza para mejoramiento o para
crear nuevos hbridos.
Se utiliza el polen que se encuentra en los polineos de las antenas, fciles de reconocer por su
color amarillo. El polen debe ser transferido, con ayuda de algn elemento estril como una
pinza o un palillo, al ovario que se encentra en el estigma de la flor, asegurndose que el polen
quede en el ovario.