DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

DE LA AMILASA SALIVAL


CURSO: ALIMENTACION HUMANA Y ANIMAL



DOCENTE: CALDERON PEA, ABHEL ARTHUR



ALUMNOS:

MARTINEZ GAMBOA, MERY.
MEDINA ZAVALETA, YONEL
MAURICIO NARVAEZ, ANNIE
OLIVARES ROJAS, RONY
GARCIA ROSAS, ARTURO.


AO:
VI. B


TRUJILLO - PER
2013

ACTIVIDAD ENZIMTICA DE LA AMILASA SALIVAL ALIMENTACIN HUMANA Y ANIMAL

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DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA DE LA
AMILASA SALIVAL

I. INTRODUCCIN.

Las enzimas son biocatalizadores que actan de manera especfica en los diversos
procesos qumicos del metabolismo, disminuyendo la energa de activacin do tos
mismos en condiciones celulares (temperatura, pH, etc.). Bajo estas condiciones la
actividad enzimtica es ptima, pero si se varan las condiciones del medio de reaccin
(pH, temperatura, agentes desnaturalizantes...), la actividad enzimtica tiende a verse
modificada. En caso de condiciones extremas, se puede llegar a la desnaturalizacin de la
enzima (Barrio Alonso , 1992).

El proceso de digestin que ocurre en nuestro organismo es llevado a cabo por una serie
de enzimas que, en su gran mayora, de acuerdo con la clasificacin internacional de las
enzimas, se clasifican como bidrolasas, o sea, son enzimas que rompen enlaces por medio
de la adicin de agua (Quesada Mora, 2007)

La amilasa es la enzima responsable de la degradacin del almidn y del glucgeno
presentes en los alimentos; esta enzima acta sobre los enlaces (1-4) que unen las
glucosas {enlaces glicosdicos). La amilasa se encuentra en la saliva (amilasa salival),
donde su accin es limitada por el tiempo tan cono que los alimentos pasan en la boca;
esta enzima tambin se sintetiza en el pncreas (-amilasa pancretica), pero su accin la
tiene en el duodeno, donde llega por medio de la secrecin pancretica. Los productos de
su accin son: maltosas, maltotriosas, isomaltosas y dextrinas (Quesada Mora, 2007).
La presente prctica tiene como objetivo demostrar la actividad cataltica de la
amilasa salival, determinando: la presencia de almidn no transformado (sustrato
residual) y de carbohidratos reductores (productos de la reaccin).


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MATERIALES Y METODOLOGA.
2.1. MATERIALES.
Pipetas
Cocina elctrica
Solucin de almidn PH 6,0 al 1%
Cloruro de sodio 0,1 M
Amilasa salival 1%
cido clorhdrico 0,05N
Solucin yodada
Reactivo de Benedict

2.2. METODOLOGA
2.2.1 Se arm el siguiente esquema:

Cuadro1. Primer esquema

Componentes
Tubo (mL)
I II
Solucin de almidn 1% pH 6,0 5 5
Solucin de cloruro de sodio 0,1 M 1 1
Agua destilada 4 3

1. Se coloc los tubos en bao de agua a 37c por 5 minutos
2. Se agreg 1ml de enzima al tubo II
3. Se volvi a colocar los tubos a bao de agua a 37C durante 10
minutos




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2.2.2. Control de la actividad enzimtica por el sustrato residual:

4. De cada uno de los tubos de incubacin, transferimos 0.5ml a sus
correspondientes tubos (Ib y IIb) del cuadro siguiente, inmediatamente
de cumplidos los 10 minutos, sin retirar los tubos de bao de agua se
hizo lo siguiente:

Cuadro 2. Esquema para el control de la actividad enzimtica por el
sustrato residual.
Componentes
Tubo (mL)
I A II A
cido clorhdrico 0,05N 5,0 5,0
De los tubos I y II 0,5 0,5
Solucin yodada 0,5 0,5

5. Se mezcl, se observ y se anot los resultados de cada tubo de
acuerdo a la intensidad de color resultante.

2.2.3. Control de la actividad enzimtica por los productos formados
(Benedict):

Cuadro 3. Esquema para el control de actividad enzimtica por los
productos formados.

Componentes
Tubo (mL)
I B II B
De los tubos I y II 1,0 1,0
Reactivo Benedict 1,0 1,0
Hervir 10 minutos

6. Se hirvi por 10 minutos, se mezcl, observ y anot los colores
de acuerdo a la intensidad del color resultante.
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III. RESULTADOS Y DISCUSIONES.

Cuadro 4. Resultado de la determinacin de la actividad enzimtica por el mtodo
colorimtrico

La siguiente figura muestra el tubo I de la etapa B despus de agregar la
solucin yodada, en cual se observa un color azul esto nos indica que no hubo
hidrlisis, debido a que no hay presencia de la enzima amilasa, el color lo toma
en base al lugol, existe el sustrato (almidn), el pH adecuado (6.8), y el activador
(HCl). Adems muestra al tubo II de la etapa B despus de agregar la solucin
yodada, el cual tiene un color amarillo debido debido a que se dieron las
condiciones ptimas, para que ocurra la reaccin, por lo tanto la hidrlisis es
total. En este caso s se aadi la amilasa.






COLOR DE SOLUCIN EN TUBOS DE ENSAYO
I
(SIN AMILASA)
II
(CON AMILASA)
Control de la
actividad enzimtica
por el sustrato
residual.
AZUL
AMARILLO
(la amilasa desdobl el
almidn)
Control de actividad
enzimtica por los
productos formados.
CELESTE
VERDE + PRESICPITADO
DE COLOR NARANJA
(Azcares reductores)
Figura 1. Coloraciones
presentadas despus de
la etapa B, tanto en el
tubo I y II.
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La Figura 2 nos muestra al tubo I de la etapa C el cual presenta un color celeste,
demostrando que no hubo reaccin con la solucin de Benedict, ya que este solo
reacciona con azcares reductores, y tomamos muestra del tubo nmero uno en
el cual no hubo hidrlisis; en dicha muestra solo hubo almidn, el cual no es un
azcar reductor. Mientras que el tubo II de la etapa C tambin mostrado en la
Figura 2 presenta un color celeste verdoso con precipitado rojo ladrillo, con lo
cual demostramos hidrlisis, debido a que el producto no fueron en su totalidad
azcares reductores. An se aprecia el color base de la solucin (azul), pero
disminuido.

Por ltimo la figura siguiente mostramos los resultados obtenidos en todas las
etapas de la prctica.

Figura 2. Coloraciones
presentadas despus de
la etapa C en el tubo I y
II.
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Figura 3. Coloraciones presentadas de la actividad
enzimtica de la amilasa


Segn Souza, et al. (2005), el almidn en presencia de yodo adquiere una coloracin
azulada caracterstica. Esto tiene una explicacin fsica: el iodo se coloca en el interior
de la hlice que forma la amilosa (en las regiones hidrofbicas), formando un
complejo de color azul. Pero cuando la -amilasa acta, degrada la amilosa, se
desintegra la hlice y por tanto en presencia de I2/IK ya no dar una coloracin azul.

Del Cuadro 4 podemos observar que en el caso del control de la actividad enzimtica
por el sustrato residual, para el tubo I (sin amilasa) se obtuvo una coloracin azul
mientras que para el tubo II (con amilasa) una coloracin amarilla, lo cual nos indica
que hay una alta actividad enzimtica, ya que al degradarse la enzima se pierde la
coloracin azul, sto se reafirma con lo anteriormente mencionado por (Souza, et al.,
2005).














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IV. CONCLUSIONES.



V. REFRENCIAS BIBLIOGRAFICAS.
Barrio Alonso , C., 1992. El ordenador en el laboratorio. s.l.:Ministerio de educacion.
Quesada Mora, S., 2007. Manual de experimentos de laboratorio para bioqumica.
Primera Edicion ed. San Jose: Universidad Estatal a Distancia.
Souza, A., Schrank, A., Henning, M. & Mitidieri, S., 2005. Enzymatic detergent
formulation containing amylase from Aspergillus niger: A comparative study with
commercial detergent formulations. Bioresource technology.















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