1

Controlo gentico do
desenvolvimento das folhas
Processos de Desenvolvimento no SAM
Controlo gentico da identidade e complexidade foliar
Controlo gentico da polaridade das folhas
Controlo gentico do tamanho e forma das folhas
www.plantcell.org/cgi/doi/10.1105/tpc.109.tt1209
Controlo gentico do tamanho e forma das folhas
Controlo gentico da diferenciao:
Tecidos vasculares
Estomas
Tricomas
Controlo gentico do desenvolvimento
das folhas
Formao das folhas
A f lh f i li As folhas formam-se no pice caulinar
com diversos padres filotcticos
Formao precedida por uma acumulao
localizada de auxina
Os genes KNOX1 actuamemparte
estimulando a sntese de citocinina
A sobre-expresso de genes KNOX1
aumenta estado indeterminado e a
complexidade foliar
Perda das funes dos genes ARP
(ASYMMETRIC LEAF, ROUGH SHEATH2, PHANTASTICA)
assemelha-se sobre-expresso de
KNOX1
2
Controlo gentico da complexidade
foliar
Simples
Ervilheira tomateiro
Composta
RedrawnfromChampagne, C., andSinha, N. (2004). Compoundleaves: equal tothesumof their parts?Development 131:4401-4412
Ervilheira, tomateiro
e Cardamine hirsuta
so modelos
genticos no estudo
de folhas compostas
Expresso de factores de transcrio KNOX1
correlaciona-se com a complexidade foliar
- KNOX1 + KNOX1
Sobre-expresso supresso
ReprintedbypermissionfromMacmillanPublishers, Ltd: NATURE GENETICS 38: 942-947. Hay, A., andTsiantis, M.The
geneticbasisfor differencesinleaf formbetweenArabidopsis thaliana anditswildrelativeCardamine hirsuta. Copyright (2006).
Cardamine hirsuta
silvestre
KNOX significa Knotted-like homeobox
A sobre-expresso de genes KNOX1 aumenta
estado indeterminado e a complexidade foliar
3
Folha simples
Em plantas com folhas
simples a expresso
de KNOX1 permanece
desactivada nos
i di f li
KNOX1 desactivado
nos primrdios
primrdios foliares
FromBharathan, G., Goliber, T.E., Moore, C., Kessler, S., PhamT., andSinha, N.R. (2002) Homologiesinleaf forminferred
fromKNOXI geneexpressionduringdevelopment. Science296: 1858-1860. ReprintedwithpermissionfromAAAS.
Folha simples Folha complexa
Em plantas com folhas
complexas, a
expresso de KNOX1
activada nos
i di
KNOX1 desactivado
nos primrdios
KNOX1 activado nos
primrdios
FromBharathan, G., Goliber, T.E., Moore, C., Kessler, S., PhamT., andSinha, N.R. (2002) Homologiesinleaf forminferred
fromKNOXI geneexpressionduringdevelopment. Science296: 1858-1860. ReprintedwithpermissionfromAAAS.
primrdios
4
Os genes KNOX1 tm um papel
recorrente no desenvolvimento foliar
Folhas simples (por ex.
Arabidopsis) os genes
KNOX1 permanecem
desligados
Folhas compostas (por ex.
tomateiro) os genes
KNOX1 so reactivados
KNOX1
KNOX1
Os genes KNOX1 so
reprimidos no local de
iniciao dos primrdios
KNOX1 so reactivados
nos primrdios em
desenvolvimento,
conferindo actividade
organognica prolongada
nas margens das folhas.
KNOX1
Contribuem para o estado indeterminado
DR5pro YFP YFP
PIN1pro
PIN1:GFP
Um mximo de auxina gerado por PIN1
precede a formao do fololo
PIN1 orienta-se de modo a
encaminhar a auxina para o
local de iniciao foliar
Acumulao de auxima precede a
formao dos fololos
DR5: promotor sinttico indutvel pela auxina
ReprintedbypermissionfromMacmillanPublishersLtd: Barkoulas, M., Hay, A., Kougioumoutzi, E., andTsiantis, M. A developmental framework for dissected
leaf formationintheArabidopsisrelativeCardamine hirsuta. Nat. Genet. 40: 1136-1141. copyright (2008)
5
A formao de folhas compostas depende
do transporte polar de auxina
silvestre
mutante
pin1
silvestre
mutante pin1
Silvestre tratado
com NPA
A formao de fololos suprimida no mutante, com perda de funo,
pin1 de Cardamine hirsuta, ou emfolhas tratadas com um inibidor do
transporte polar de auxina (NPA) N-1-naphthylphthalamic acid
ReprintedbypermissionfromMacmillanPublishersLtd: Barkoulas, M., Hay, A., Kougioumoutzi, E., andTsiantis, M. A developmental framework for dissected
leaf formationintheArabidopsisrelativeCardamine hirsuta. Nat. Genet. 40: 1136-1141. copyright (2008)
Citocininas contribuem para o
desenvolvimento de folhas compostas
KNOX1
Bio-sntese
Citocininas
Proliferao
silvestre
Aumento Sntese de
citocinina
Degradao de
citocinina
Shani, E., Ben-Gera, H., Shleizer-Burko, S., Burko, Y., Weiss, D., andOri, N. (2010). Cytokininregulatescompoundleaf development intomato. Plant Cell 22: 32063217.
Proliferao
de fololos
6
Algumas folhas so serradas devido a
crescimento diferencial nas margens
Amargem
Dente ou
lobo
Sinus
A margem
serrada resulta
de crescimento
acelerado no
lobo ou
crescimento
reprimido nas
depresses
(sinuses)?
CUC2 e pressa se
Nikovics, K., Blein, T., Peaucelle, A., Isida, T., Morin, H., Aida, M., andLaufs, P. (2006) Thebalancebetweenthe
MIR164AandCUC2 genescontrolsleaf marginserrationinArabidopsis. Plant Cell 18: 2929-2945.
(sinuses)?
CUC2 expressa-se
nas depresses e
pode reprimir o
crescimento
Um mximo localizado de auxina especifica as
protuberncias na margem foliar
Interferindo com o
transporte de auxina
( t t i 1
Silvestre pin1 Controlo tratada c/ NPA
(mutante pin1 ou
tratamento c/ NPA)
formam-se folhas c/
margens lisas
Aorientao de PIN1
Reproducedwithpermission Hay, A., Barkoulas, M., andTsiantis, M. (2006) ASYMMETRIC LEAVES1andauxinactivities
convergetorepressBREVIPEDICELLUS expressionandpromoteleaf development inArabidopsis. Development 133, 3955-3961.
DR5pro:GFP PIN-GFP
A orientao de PIN1
contribui para um
mximo de auxina na
extremidade do lobo
7
A auxina tem um papel recorrente no
desenvolvimento foliar
Um mximo de auxina
precede a iniciao de: precede a iniciao de:
folhas (seta amarela),
fololos (branca) e de
lobos (vermelha)
Koenig, D., Bayer, E., Kang, J ., Kuhlemeier, C., andSinha, N. (2009) AuxinpatternsSolanumlycopersicum
leaf morphogenesis. Development 136: 2997-3006. Reproducedwithpermission.
A maioria das folhas tem
polaridade tempginas
Face Adaxial
recepo luz
Controlo gentico da polaridade das folhas
O
2
CO
2
polaridade tem pginas
superior e inferior, funcional e
anatmicamente distintas
F Ab i l t i
J uarez, M. T., Twigg, R.W., andTimmermans, M.C.P. (2004) Specificationof adaxial cell fate
duringmaizeleaf development. Development 131: 4533-4544. Reproducedwithpermission.
Face Abaxial transpirao,
trocas gasosas
8
Estabelecimento da polaridade das folhas
Folha
Folha
Os primrdios foliares tmpolaridade natural porque um lado
est mais prximo do meristema e outro est mais afastado
Estabelecimento da polaridade das folhas
Folha
Adaxial
Abaxial
A face do meristema adaxial e a face afastada abaxial
Como que a folha especifica estes domnios?
9
Trabalhos experimentais sobre
polaridade das folhas
Primrdios
incipientes foram
P3
p
isolados
cirurgicamente do
resto do meristema
por uma pequena
inciso
P3
P2
P1
I1
I2
I3
Trabalhos experimentais sobre
polaridade das folhas
O primrdio isolado
perdeu a polaridade
P3
P3
perdeu a polaridade
(ficou inteiramente
abaxializado) e ficou
com simetria radial
P3
P2
P1
I1
I2
I3
P3
P2
P1
I1
I2
I3
P2 I2
10
Trabalhos experimentais sobre
polaridade das folhas
Experincia recente mostrou que a ablao laser
unicamente da camada epidrmica suficiente para
o primrdio perder a sua polaridade adaxial
Reinhardt, D., Frenz, M., Mandel, T., andKuhlemeier, C. (2005) Microsurgical andlaser ablationanalysisof leaf
positioninganddorsoventral patterningintomato. Development 132: 15-26. Reproducedwithpermission.
Estabelecimento da polaridade das folhas
Um sinal do
meristema desloca-se
atravs da epiderme
para o primrdio
incipiente
O sinal transporta
informao posicional
adaxial adaxial
Desconhece-se a
natureza do sinal
11
Este sinal discreto denomina-se
sinal Sussex
Ian Sussex nos anos1950s
Reprinted, withpermission, fromtheAnnual Reviewof Plant Physiology andPlant Molecular Biology,
Volume49(c) 1998byAnnual Reviews www.annualreviews.org
Ian Sussex, nos anos1950s,
props que necessrio um
sinal do meristema para
correcta polaridade da folha
O mutante por perda de
funo phantastica de
Estudos genticos da polaridade das
folhas
p
Antirrhinum (bocas-de-lobo)
fornece importantes pistas
sobre as bases da
polaridade das folhas
silvestre
phan
Waites, R., andHudson, A. (1995) phantastica: agenerequiredfor dorsoventralityof leavesin
Antirrhinum majus. Development 121: 2143 2154. Reproducedwithpermission.
12
A expresso de factor de transcrio especfico
de um domnio controla a polaridade
KAN
Destino adaxial
Destino
abaxial
PHAN ou PHB/PHV/REV
H represso mtua dos genes
que especificamo destino abaxial
e adaxial
(PHB) PHABULOSA, (PHV) PHAVOLUTA, (REV) REVOLUTA
ARP
KNOX1
A represso mtua um mecanismo
eficiente adoptado por clulas adjacentes
para manteremdestinos diferentes
Controlo gentico da polaridade das
folhas
Folha mutante phan Folha silvestre
O mutante phantastica tem folhas com simetria radial.
PHAN codifica um factor de transcrio
Waites, R., andHudson, A. (1995) phantastica: agenerequiredfor dorsoventralityof leavesin
Antirrhinum majus. Development 121: 2143 2154. Reproducedwithpermission.
13
Controlo gentico da polaridade das
folhas
Folha mutante phan Folha silvestre
As folhas mutantes phan so abaxializadas, indicamque
PHAN necessrio para o destino celular adaxial
Waites, R., andHudson, A. (1995) phantastica: agenerequiredfor dorsoventralityof leavesin
Antirrhinum majus. Development 121: 2143 2154. Reproducedwithpermission.
As folhas mutantes phan assemelham-se aos
primrdios foliares isolados cirurgicamente
P3
P1
I1
I3
Folha mutante phan
P2 I2
Cirurgicamente isolados
EmArabidopsis, trs genes redundantes, PHABULOSA (PHB), REVOLUTA
(REV) e PHAVOLUTA (PHV), tmfuncionamento semelhante a PHAN
14
Mutantes kanadi por perda de funo tm
folhas radiais, adaxializadas
O trplo mutante kanadi 1, 2 e 3
t f lh di i d i li d tem folhas radiais, adaxializadas,
mostrando que os genes KANADI
promovemdestino celular abaxial.
Uma funo oposta de PHAN
Os genes KANADI codificam
EshedY et al., Izhaki, A., Baum, S.F., Floyd, S.K., andBowman, J .L. (2004) Asymmetric leaf development andbladeexpansionin
ArabidopsisaremediatedbyKANADI andYABBY activities. Development 131: 2997-3006. Reproducedwithpermission.
Os genes KANADI codificam
factores de transcrio
necessrio um dominio mdio
distinto para a expanso da lmina
Genes WUSCHEL-RELATED
HOMEOBOX (WOX)
expressam-se no domnio Modelo de regulao
mdio da folha
g
incorporando os genes WOX
Nakata, M., Matsumoto, N., Tsugeki, R., Rikirsch, E., Laux, T. andOkada, K. (2012) Rolesof themiddledomain-specificWUSCHEL-RELATED HOMEOBOX genesinearlydevelopment of leavesinArabidopsis. PlantCell 24: 519535.
necessria a expresso de WOX
no domnio mdio (rosa) para a
expansoda lmina foliar
15
A perda da funo WOX origina folhas
estreitas em vrias espcies
Medicago
Mutante
Arabidopsis
Milho
Petunia
Mutante
narrowsheath1
stenifolia
(wox1)
Duplo mutante
wox1 wox3
Mutante maw
(wox1)
narrowsheath2
(wox3)
Nardmann, J ., J i, J ., Werr, W. andScanlon, M.J . (2004) Themaizeduplicategenesnarrow sheath1 and narrow sheath2 encodeaconservedhomeoboxgenefunctioninalateral domainof shoot apical meristems.
Development 131: 2827-2839; Tadege, M., Lin, H., Bedair, M., Berbel, A., Wen, J ., Rojas, C.M., Niu, L., Tang, Y., Sumner, L., Ratet, P., McHale, N.A., Madueo, F., Mysore, K.S. (2011) STENOFOLIA regulates
bladeoutgrowthandleaf vascular patterninginMedicago truncatula andNicotiana sylvestris. Plant Cell 23: 21252142; Vandenbussche, M., Horstman, A., Zethof, J ., Koes, R., Rijpkema, A.S. andGerats, T. (2009)
Differential recruitmentof WOX transcriptionfactorsfor lateral development andorganfusioninPetuniaandArabidopsis. Plant Cell 21: 22692283.
AAAAAAA
x
A expresso especfica de um domnio
pode ser regulada por miRNAs
AAAAAAA
Nas plantas phb-1d, alteraes
phb-1d mRNA
AAAAAAA
Nas plantas silvestres
miR166 PHB mRNA
p p
nas bases do mRNA PHB
impedemque o miR166 se ligue,
possibilitando que se acumule
atravs do primrdio foliar
ReprintedbypermissionfromMacmillanPublishers, Ltd: NATURE. Kidner, C.A. andMartienssen, R.A. Nature428: 81-84, copyright 2004.; McConnell, J .R.,
Emery, J ., Eshed, Y., Bao, N., Bowman, J ., andBarton, M.K. Nature411: 709-713, copyright 2001.
Nas plantas silvestres,
miR166 liga-se ao mRNA PHB
e degrada-o no lado abaxial
do primrdio foliar
16
Suporte adicional para o papel do
miRNA na polaridade da folhas advm
d f d 1 f lh
miRNA controla a polaridade das folhas
do facto de o mutante ago1 ter folhas
radiais; AGO necessria para a
funo miR166
AAAAAAA
ReprintedbypermissionfromMacmillanPublishers, Ltd: NATURE. Kidner, C.A. andMartienssen,
R.A. Nature428: 81-84, copyright2004; McConnell, J .R., Emery, J ., Eshed, Y., Bao, N., Bowman, J .,
andBarton, M.K. Nature411: 709-713, copyright 2001.
Resumo Estabelecimento da polaridade
nas folhas
O domnio adaxial
especificado por um
i l i t d
Emalguns casos a
expresso especfica de
Sinal
i t
sinal proveniente do
meristema
Factores de transcrio
distintos especificamos
domnios adaxial e abaxial
um domnio mantida
por miRNAs
proveniente
do meristema
ReprintedfromMoon, J . andHake, S. (2011) Howaleaf getsitsshape. Curr. Opin. Plant Biol. 14: 2430withpermissionfromElsevier.