EXAMEN CYTO-BACTRIOLOGIQUE DES URINES

PLAN
PRAMBULE : Les diffrents examens de lurine
GNRALITS sur la !t"#$atri"l"%ie des urines
PRL&'EMENT (URINE
)I*+ES TE*+NI,UES
)T - : Examen !t"l"%i.ue
)T / : Mise en ulture0 dn"m$rement $atrien
)T 1 : Milieux0 tests0 %alerie didentifiati"n
TABLEAU - : 2rientati"n 3 4artir de lis"lement sur B*P
TABLEAU / : Identifiati"n 3 4artir de la %alerie rduite
ANNE5ES
Annexe - : E.ui4ement du la$"rat"ire 4"ur la mise en 4lae de lanal!se
Annexe / : )i6e de 4rl78ement durine
3 lusa%e du 4ers"nnel mdial et des 4atients
Mise jour : Octobre 2006
Odette Terry, Sophie Le Cam, Yves Gille.
1
PREAMBULE
Les diffrents e!"ens de #$%rine
Sui8ant le "ntexte lini.ue0 diffrents examens 4eu8ent 9tre raliss sur une urine0 a44"rtant une
s"mme dinf"rmati"ns utiles au mdein:
Les diffrents examens ralisa$les ;du 4lus sim4le au 4lus "m4li.u< s"nt :
Biochimie simple des urines
;semi#.uantitati8e a8e des $andelettes "u en s4etr"46"t"mtrie<
Gl!"surie
Pr"tinurie
(ensit urinaire
Examen microscopique ltat frais :
Re6er6e de leu"!tes0 de %l"$ules r"u%es0 de ellules 4it6liales0 de !lindres %ranuleux0 dune
fl"re mir"$ienne0 d=ufs de 4arasites>
Examen microscopique dun frottis urinaire color au Gram :
(esri4ti"n de la fl"re $atrienne 8entuellement 4rsente:
Ensemencement bactriologique :
(n"m$rement des $atries0 is"lement et identifiati"n de les47e ma?"ritaire:
alisation de lantibiogramme :
Non aborde dans ce document:
2
GNRALITS
S%r #! &'t(-)!&tri(#(*ie des %rines
But !
Affirmer le dia%n"sti d@infeti"n urinaire et %uider le 6"ix d@un traitement anti$i"ti.ue:
"ignes cliniques !
*6eA la femme : $rBlures miti"nnelles et miti"ns fr.uentes ;!stite<
*6eA l@6"mme0 m9mes si%nes mais si l@"n exlut les urtrites0 les !stites s"nt rares:
L@infeti"n urinaire 4eut se "m4li.uer de 4!l"n46rite0 %nralement a8e fi78re:
"ignes biologiques !
# $rine normale !
A la mar"s"4ie une urine n"rmale est ?aune lair et lim4ide:
A l"$ser8ati"n mir"s"4i.ue entre lame et lamelle ;!t"l"%ie< "n "$ser8e :
# un n"m$re tr7s fai$le de GB "u de GR C -DEmm
1
;"u 3 -D
F
Eml<0 n"n altrs
# de rares 3 .uel.ues ellules 4it6liales ;ellules 8siales<0 4lus n"m$reuses 4endant les
menstruati"ns
# la 4rsene "u n"n de ristaux 8aria$les ;sel"n lalimentati"n<
# 4as de %ermes 3 l@examen entre lame et lamelle0 lurine n"rmale est STRILE
# $rine infecte !
P"ur "nlure 3 une infeti"n urinaire le n"m$re de GB doit %tre suprieur ou gal
&'(mm
)
*&'
+
(mL,: Si le n"m$re de GB est tr7s le80 "n 4arle de 4!urie:
Parall7lement le nombre de bactries est en gnral gal ou suprieur &'
-
(mL
"a.oir que !
# Une leucoc/turie sans bactrie 8isi$le d"it 8".uer une tu$erul"se urinaire "u une
infeti"n urinaire da4ite 4ar un 4rise danti$i"ti.ues:
# Les infeti"ns urinaires s"nt le 4lus s"u8ent mono0microbiennes0 tr7s rarement di#
mir"$iennes:
# Le pr1l1.ement doit %tre considr comme contamin si :
# 4rsene de %ermes sans GB
# 4lus de / %ermes en .uantit "m4ara$le
GDans le cas de prlvement contamin, obligation de prlever un nouvel chantillon durine:
# Sans mise en ulture0 le "u les %ermes infetieux ne 4eu8ent 9tre identifis: *e4endant0
les rsultats du Gram et la m"r46"l"%ie de l@esp1ce dominante s"nt une indiati"n 4rieuse 4"ur
le 4ratiien:
3
etenir que : HD I des infeti"ns s"nt dues 3 Escherichia coli
-D I s"nt dues 3 des Proteus ;tr7s m"$iles<
-D I restant s"nt dues 3 des Klebsiella0 entr"".ue0 sta46!l"".ues:
Les tuberculoses rnales avec limination de BK dans lurine ne sont pas envisages dans cet
expos.
LE2B$ en rsum !
Prlvement
Examen cytologique
Leucocytes
Semi
Germes (qualitatif)
sur gram
Si > 10/mm
3
Si moins de trois germes
4
Examen bactriologiquE
Compte de germes
Observation et diffrenciation des
colonies, identification des espces
majoritaires
Ensemencement loese calibre
PRL+,EMENT DES URINES
La qualit des rsultats de toute analyse est lie la qualit de la ralisation de chacune
des tapes. Une chane nest !amais plus solide que son maillon le plus "aible #
Le 4rl78ement tant la 4remi7re ta4e0 la .ualit de sa ralisati"n "nditi"nne la fia$ilit de
lensem$le des rsultats de lanal!se:
Un mauvais prlvement conduit des rsultats errons
ecueillir dans un flacon strile #3 les urines !
# du matin0 de 4rfrene ;3 dfaut sans a8"ir urin de4uis 1 6eures<
# a8ant t"ut traitement anti$i"ti.ue
# a4r7s nett"!a%e0 rinJa%e et s6a%e 4ar tam4"nnement du mat urinaire:
4ode de recueil mi05et : C'est le point absolument essentiel
La patiente arte les l78res 8ul8aires d@une main 4uis "mmene 3 uriner en maintenant les
l78res artes: A4r7s K 3 H se"ndes de miti"n0 elle rem4lit e fla"n et0 sans cesser
d6uriner0 le retire0 ferme le fla"n0 se la8e les mains0 rine l@extrieur du ri4ient et le s76e:
Le patient dal"tte le %land d@une main et en le maintenant dal"tt0 "mmene 3 uriner:
A4r7s -D 3 -L se"ndes de miti"n il a44r"6e le fla"n du ?et0 rem4lit e fla"n et0 sans
cesser d6uriner0 le retire0 ferme le fla"n0 se la8e les mains0 rine l@extrieur du ri4ient et le
s76e:
Le fla"n d"it 9tre transmis au la$"rat"ire le 4lus ra4idement 4"ssi$le0 si im4"ssi$ilit0 le
"nser8er au rfri%rateur 4"ur em496er la multi4liati"n des %ermes:
$ % d"aut de "lacon strile! on peut rutiliser un "lacon soigneusement lav! tremp au
moins #$ mn dans de leau de %avel & #'(chlore dilue &'' "ois cest((dire au &)&'' )pour
*tre sur de son e""icacit anti+bactrienne possibilit d utiliser leau de %avel dilue au #,-$.!
rinc abondamment! puis sch au moins plusieurs heures au soleil! ouvert sous un linge "in
et propre:
5
-IC.ES TEC.NIQUES
-i&/e te&/ni0%e 1 2 E!"en &'t(#(*i0%e
Il se ralise0 au mir"s"4e0 sur lurine fraM6ement 4rle8e:
&0 alisation de la prparation et obser.ation microscopique lob5ectif x+'
# alisation de la prparation :
# 6"m"%niser s"i%neusement lurine 4ar ret"urnement du fla"n durine "rretement
$"u6
# d4"ser sur une lame0 3 laide dune 4i4ette 4r"4re ;pas obligatoirement strile<0 une %"utte
durine )sa taille doit *tre su""isante pour occuper la totalit du volume sous la lamelle mais pas trop
grosse de "a/on & ce 0ue lurine ne dborde pas de la lamelle.
# re"u8rir dune lamelle:
# obser.ation au microscope *ob5ectif x+',
Ex4l"rer s"i%neusement la t"talit de la lamelle 4"ur re4rer et .uantifier
# les lments ellulaires : leu"!tes0 6maties0 ellules 4it6liales0 rnales0 "u autres
# la fl"re mir"$ienne : $ailles "u ".ues0 lments m!liens "u le8ures
8entuellement si leur n"m$re est im4"rtant :
# les ristaux0 les !lindres %ranuleux ;mieux re4ra$le 3 l"$? x-D<
# les 4arasites tels =ufs de s6ist"s"mes0 1richomonas vaginalis ;diffiiles 3 re4rer0 surt"ut
s@ils s"nt imm"$iles<
Les crit1res dune infection sont !
0 un nombre de leucoc/tes suprieur &'
+
( mL * &' ( mm
)
, e .ui "rres4"nd en8ir"n 3 -
leu"!te t"us les -D 3 /D 6am4s mir"s"4i.ues
0 un nombre de bactries suprieur &'
-
mL e .ui "rres4"nd 3 en8ir"n - $atrie 4ar
6am4
L"rs de lexamen de la lame au mir"s"4e 6a.ue lment est N"tN0 est#3#dire a44ri semi#
.uantitati8ement:
*"tati"n dans le as des leu"!tes :
2otation 7uantification E.aluation approximati.e 8bser.ation lob5 x +'
D Tr7s rare "u a$sene
de>
D GBEmm
1
D 3 - dans 1D 3 FD 6am4s
O ,uel.ues -D GBEmm
1
- 4"ur -D 3 /D 6am4s
OO AsseA n"m$reux -DD GBEmm
1
- 4"ur - 3 / 6am4s
OOO N"m$reux -DD 3 LDD GBEmm
1
- 3 L E 6am4s
OOOO Tr7s n"m$reux PLDD GBEmm
1
Plus de -D GB 4ar 6am40
is"ls "u en amas
*etenir quune urine non in"ecte ne prsente 0ue ' & 2 leucoc3tes apr4s examen dun bon nombre
de champs microscopi0ues.
6
)0 8bser.ation microscopique apr1s coloration de Gram3 ob5ectif x&''
La coloration de 5ram ne se ralise 0ue si & lexamen entre lame , lamelle on t observs 0uel0ues
leucoc3tes et des bactries.
Prati.uer ainsi :
# Retirer dliatement la lamelle0 si 4"ssi$le a8e une 4ine 4"ur ne 4as se s"uiller les d"i%ts "u en
la 4"ussant a8e un 4etit m"reau de $"is ;$"ut d@allumette<
# S6er le d4Qt urinaire et le fixer 3 la 6aleur 4ar .uel.ues 4assa%es dans la flamme du $e 3
%aA
# Raliser une "l"rati"n de Gram
# 2$ser8er le fr"ttis se au mir"s"4e : "$? x-DD0 3 immersi"n:
La leture de la lame "l"re rensei%ne sur la fl"re :
#la$sene "u la 4rsene de %ermes
# les diffrentes m"r46"l"%ies si 4lusieurs t!4es de %ermes diffrents ;".ues0 $ailles0
le8ures< a8e les 4r"4"rti"ns relati8es de 6a.ue t!4es
# la "uleur au Gram : GO ;8i"let<0 G# ;r"se<
# le m"de de %r"u4ement ;amas0 6aMnettes0><
-i&/e te&/ni0%e 3 2
Mise en &%#t%re4 dn(")re"ent )!&trien
La mise en culture nest pas s/stmatique3 elle ne se 4rati.ue .ue sur des urines :
# 4rsentant des si%nes dinfeti"n : GBP-DEmm
1
;"u 4lus de - GB E -D 3 /D 6am4s0 urine
enti7re0 "$? 5FD<
# n"n "ntamines : 4as 4lus de deux %ermes diffrents au Gram
&0 9solement et dnombrement des germes
# Ensemener0 le 4lus ra4idement 4"ssi$le a4r7s le 4rl78ement 0 une %l"se B*P a8e une "ese
ali$re de -D mir"L 3 dfaut a8e une "ese n"n ali$re "u en"re a8e une 4i4ette Pasteur en
d4"sant une tr7s 4etite %"utte de 4i4ette sel"n la te6ni.ue sui8ante :
Extrait de fiche technique avec laimable autorisation de bioMrieux
Proprit de bioMrieux S.A.

A4r7s /F 6eures dinu$ati"n0 effectuer le dnombrement des germes en "m4arant le n"m$re
de "l"nies "$tenues sur la $"Mte 3 elui dun a$a.ue de leture:
7
-: Trem4er l"ese ali$re 8ertialement dans lurine
6"m"%nise
/: )aire une strie sur un ra!"n de la $"Mte 4"ur d6ar%er l"ese
4uis0 sans re6ar%er l"ese0 faire des stries 4er4endiulaires
serres sur t"ute la surfae de la $"Mte
1: Inu$er /F 6 3 ltu8e 3 1K R*:
Le rsultat est ex4rim en n"m$re de bactries par mL durine "u U)*EmL ;Unit )"rmant
*"l"nie<:
As4ets des ultures 4"ur des n"m$res de %ermes entre -DDD ;-D
1
< et - DDD DDD ;-D
S
< 4ar ml:
Proprit de bioMrieux S.A. Photographie : Nol Bouchut.
6ttention & ne pas sous+estimer le nombre des petites colonies 0ui ont tou7ours tendance &
"aire minorer lvaluation du nombre des bactries:
8appel 9 lobservation denviron & bactrie par champ microscopique +ob!ecti" , -', urine
non centri"uge,. correspond appro,imativement &'
/
bact)ml
9nterprtation des rsultats!
Le dn"m$rement $atrien est UN (ES ELEMENTS .ui 4ermet de faire la distinti"n entre s"uillure
et infeti"n 8raie :
: 3 -DDD *)U EmL "u m"ins l@infeti"n est tr7s 4eu 4r"$a$le T
: 3 4lus de -D DDD *)UEmL0 E: si la ulture est m"n" mir"$ienne0 l@infeti"n est tr7s 4r"$a$le:
En pratique linterprtation du dnombrement des germes urinaires se ralise en corrlation
a.ec le taux de leucoc/tes
0 "i ;

&'
+
2<$(mL ;a8e un taux de GB infrieur 3 -D
F
E mL < : ne 4as 4"ursui8re lanal!se0
rendre ! pas dinfection urinaire =
emarque tr1s importante ! Si C

-D
F
*)UEmL a8e un taux de leu"!tes le8 4enser 3
une tu$erul"se rnale ;sauf si le 4atient a reJu remment des anti$i"ti.ues U<
0 "i &'
+
2<$(mL 4"ur une urine m"n" mir"$ienne
#: a8e un n"m$re de GB su4rieur 3 -D
F
4ar mL0 4"ursui8re lidentifiati"n:
: 4"ur un n"m$re de GB est infrieur 3 -D
F
4ar mL0 rendre > urines contamines3
prl1.ement renou.eler=
0 "i ? ou @ &'
-
2<$(mL a8e un taux de GB su4rieur 3 -D
F
mL0 "$ser8er le n"m$re de t!4e
de "l"nies:
8
V Si un t!4e de "l"nie : 4"ursui8re lanal!se
V Si 4lusieurs t!4es de "l"nies
# / t!4es de "l"nies : 4"ursui8re lanal!se0 faire une identifiati"n de
les47e ma?"ritaire "u des deux es47es si elles s"nt en .uantit .ui8alente
# 1 "u O : rendre > urines contamines3 renou.eler le
prl1.ement =
A0 9dentification du ou des A germes isols
+ voir le protocole dtude dans la "iche technique 0.
# Re4rer sur la %l"se B*P des "l"nies is"les de m9me t!4e
Si na44e de $atries0 refaire un is"lement 3 4artir de la 4remi7re $"Mte:
# Sur 6a.ue t!4e de "l"nies is"les0 effetuer une "l"rati"n de Gram
Si $ailles Gram# : raliser l"x!dase
Si ".ues Gram O : raliser la atalase
Le rsultat du Gram d"nne une 4remi7re 4iste d"rientati"n :
:e r"rer au tableau ; <rientation de lidenti"ication & partir des rsultats sur BCP 1
# Puis0 si "n est en 4rsene d@un $aille Gram n%atif0 ensemener une mini#%alerie en tu$es :
Wli%ler0 Mannit"l#m"$ilit0 Ure#ind"le
# A4r7s inu$ati"n de /F 6eures 3 1KR* 0 identifier le %enre "u les47e en se rfrant au ta$leau :
2 3denti"ication partir de la mini galerie didenti"ication 1
)0 2ompte0rendu des rsultats
Le rendu du rsultat d"it "m4rendre :
# le rsultat de lanal!se !t"l"%i.ue : 4rsene semi#.uantifie des GB et autres lments
# le rsultat du Gram effetu sur le ul"t : desri4ti"n de la fl"re
# le dn"m$rement des %ermes
# le rsultat de lidentifiati"n $atrienne0 si elle a t effetue:
-i&/e te&/ni0%e 5 2
Mi#ie%4 tests4 *!#erie %ti#es 6 #$identifi&!ti(n
&0 49L9E$ B2P
# Principe de fonctionnement du milieu
# *est un milieu .ui sert 3 isoler diffrents produits biologiques : urines0 selles0 4us0 4rl78ements
8a%inaux0 L*R>
# Sa "m4"siti"n en lments nutritifs ne 4ermet .ue la culture des bactries non exigeantes 4armi
les.uelles :
des $ailles Gram # : entr"$atries0 Pseudomonas et autres $ailles "x!dase X
des ".ues GramO : sta46!l"".ues0 entr"".ues
A4r7s /F 6eures dinu$ati"n 3 1KR* las4et des "l"nies est le sui8ant :
BA*ILLES GRAM # n"n exi%eants : "l"nies de - 3 / mm de diam7tre
*2,UES GRAM O n"n exi%eants : "l"nies den8ir"n D0L mm de diam7tre
9
Peu8ent %alement ulti8er sur le milieu0 en d"nnant de t"utes 4etites "l"nies ;diam7tre infrieur 3
D0L mm< : des stre4t"".ues0 des "r!n$atries0 des le8ures "u des "l"nies minusules :
lat"$ailles:
# Il "ntient0 en 4lus des lments nutritifs0 un sure : le lactose et un indiateur "l"r de 4+ : le
bromocrsol pourpre e .ui 4ermet de diffrenier / t!4es de $atries
Les $atries fermentant le lat"se : colonies 5aunes dites Lactose B
Les $atries ne fermentant 4as le lat"se : colonies bleu .iolet dites Lactose C
0 Il ne "ntient pas de chlorure de sodium e .ui ex4li.ue .ue les Proteus ;$atries tr7s
en8a6issantes< f"rment 6a$ituellement des "l"nies identi.ues 3 elles des autres $ailles Gram #:
# 2onduite de ltude du B2P apr1s ensemencement et incubation
# eprer les colonies
Sil ! a 4lusieurs t!4es de "l"nies0 3 laide dun mar.ueur0 re4rer de faJ"n diffrente 6a.ue t!4e de
"l"nie sur le f"nd de la $"Mte:
# Etudier indpendamment chaque t/pe de colonie :
: As4et mar"s"4i.ue : taille0 "uleur0 "nsistane ;%rasse0 s76e<0 allure ;4late0 $"m$e<0
"nt"ur ;net "u r%ulier<0 trans4arene "u "4ait
: As4et mir"s"4i.ue a4r7s "l"rati"n de Gram ralise 3 4artir dune seule "l"nie
: Re6er6e enA!mati.ue sui8ant le rsultat de la "l"rati"n de Gram :
Test de l"x!dase si $atries Gram X
Test de la atalase si $atries Gram O
) voir ci+apr4s 9 la techni0ue de ralisation des tests.
# Ensemencement dune galerie didentification sur les bacilles Gram 0
*ette mini %alerie didentifiati"n "m4"rtera 1 tu$es :
Une %l"se de Wli%ler
Une %l"se Mannit"l#M"$ilit
Un milieu li.uide : Ure#Ind"le
A4r7s ensemenement 0 inu$er les tu$es /F 6eures 3 1KR*:
) voir ci+apr4s 9 la techni0ue dutilisation de la mini galerie
le tableau didenti"ication & partir de la mini galerie. .
A0 :E":" DE l8EFDA"E E: DE LA 2A:ALA"E
# :E": DE L8EFDA"E pour les bacilles Gram C
Prparation du ractif !
A laide dune s4atule ;"u dun "uteau< 4r"4re mettre0 dans en8ir"n - mL deau distille0 une 4etite
.uantit ;.ui8alente 3 un %rain de riA<0 de ratif ;N dimt6!l ;"u ttramt6!l< 4ara 46n!l7ne
diamine<:Un fla"n 4eut ser8ir de n"m$reuses annes sil est "rretement $"u6 a4r7s 6a.ue
utilisati"n:
611EN1=<N 9
#+ apr4s dilution! le racti" nest stable>0ue ' heures! conserv & l'abri de la lumi4re.
1
'+ le racti" en poudre est toxi0ue! il ne "aut pas le toucher avec les doigts! ni le respirer.
Bien re"ermer le "lacon apr4s usage
.
alisation du test sur une lame de .erre
# (4"ser sur une lame un 4etit arr de 4a4ier filtre 4uis lim$i$er de ratif 3 laide dune 3 deux
%"uttes de ratif
611EN1=<N il ne "aut pas 0ue le racti" dborde et 0ue le papier "lotte cela peut induire un "aux
rsultat ngati":
# Prle8er 3 laide dune effilure de 4i4ette Pasteur une "l"nie 3 tudier et la d4"ser sur le 4a4ier
im4r%n de ratif
TEINTE r"se "u 8i"lae en m"ins de - min : 25Y(ASE O
PAS (E *+ANGEMENT de "uleur : 25Y(ASE X
# :E": DE LA 2A:ALA"E pour les bactries Gram B
actif ! eau ox/gne &' .olumes ; n"n 4rime< additi"nne de L %"uttes de sa8"n
li.uide ;4r"duit 3 8aisselle0 4ar exem4le< 4"ur un fla"n de /LD ml:
*emarque 4 ce racti", de prparation "acile, a intr5t 5tre prpar en petites quantits . Conserv
au "rais il reste stable environ # an..
?ans tous les cas contr@ler sa validit en le testant! une "ois par semaine! avec une bactrie connue
pour *tre catalase positive ):taph3lococcus par exemple..
alisation du test sur une lame de .erre !
# (4"ser sur une lame 4arfaitement 4r"4re une 4etite %"utte deau "x!%ne
# Prle8er 3 laide de l"ese strile et fr"ide une "l"nie 3 tudier et la d4"ser dans la %"utte de +
/
2
/
# Attendre .uel.ues se"ndes:
SI BULLES dans la $"ule : *ATALASE O
SI ABSEN*E (E BULLES : *ATALASE #
)0 $:9L9"A:98N D$NE 49N90GALE9E D9DEN:9<92A:98N
Tr"is tu$es suffisent 4"ur identifier s"mmairement les 4rini4ales $atries res4"nsa$les dinfeti"n
urinaire:
T6"ri.uement es 1 tu$es d"i8ent sensemener a8e une m9me "l"nie ;si im4"ssi$ilit utiliser 1
"l"nies ri%"ureusement identi.ues<
A4r7s ensemenement mettre 3 inu$er les /F 6eures 3 1KR*
# Le tube d$GE09ND8LE : milieu li0uide 7aune orang! prsent en ampoule! &
rpartir en petit tube
Il "ntient de lure0 du tr!4t"46ane ;aide amin< et du r"u%e de 46n"l "mme indiateur "l"r de
4+
1
# Ensemencement : il d"it 9tre a$"ndant0 - "l"nie dans - mL de milieu
EnsemenceA tou7ours le tube de Bre+indole en premier
# Apr1s incubation lecture de ) caract1res !
Nessit de / ratifs Erlich0Ho.acs ;"u Iames< et perchlorure de fer
-# La 4rsene dune urase
urase O : milieu r"se 8i"la
urase # : 4as de 8ira%e0 milieu ?aune "u ?aune "ran%
/# La re6er6e de lindole : 4"ur ela di8iser le milieu en / 4arties
Sur une m"iti a?"uter / 3 1 %"uttes dErli6 Z"8as "u [ames et a%iter
ind"le O si anneau r"u%e en surfae
ind"le X anneau ?aune
/# La re6er6e de la tryptophane dsaminase +6D%.
A lautre m"iti du tu$e a?"uter / 3 1 %"uttes de ratif T(A ;4er6l"rure de fer<
T(A O : "l"rati"n $rune 4lus "u m"ins aentue
T(A# : "l"rati"n ?aune
# Le tube de 4ANN9:8L048B9L9:G : milieu rouge en culot )- g,L de glose.
Il "ntient un sure0 le mannit"l et un indiateur "l"r de 4+ le r"u%e de 46n"l ;ainsi .ue du nitrate
de 4"tassium<:
# Ensemencement du ul"t 4ar 4i.Bre entrale0 3 laide dun fil dr"it0 ?us.uau f"nd du tu$e
# Apr1s incubation lecture directe de A caract1res
-# La "ermentation du mannitol
Mannit"l O : ul"t ?aune
Mannit"l # : ul"t r"u%e
/# La mobilit 4ar "$ser8ati"n de la diffusi"n de la 4"usse des %ermes aut"ur de la strie
M"$ilit O : les %ermes "nt 4lus "u m"ins diffus 4"u8ant m9me entraMner un tr"u$le
du milieu:
M"$ilit X "u Imm"$ile : les %ermes n"nt 4"uss .uau ni8eau de la 4i.Bre:
# Le tube de HL9GLE ! milieu solide rouge comportant un culot et une pente
Il "ntient deux sures0 %lu"se et lat"se0 du r"u%e de 46n"l "mme indiateur "l"r de 4+0 un
s!st7me r8lateur d+
/
S:
0 Ensemencement : de la 4ente en stries serres 3 laide de l"ese "u de la 4i4ette Pasteur
du ul"t 4ar 4i.Bre 3 laide du fil dr"it "u d@une 4i4ette Pasteur dr"ite
EnsemenceA tou7ours le tude de Kligler en dernier
0 9ncubation : 8is de fermeture du tu$e d$l".ue
0 Apr1s incubation lecture directe de + caract1res :
: la "ermentation du glucose a8e "u sans production de ga7 au ni8eau du ul"t :
Glu"se O : ul"t ?aune %aA O : $ulles "u d"llement du ul"t
%aA X a$sene de $ulle
1
Glu"se X ul"t r"u%e ;?amais de 4r"duti"n de %aA dans e as<
: la "ermentation du lactose au ni8eau de la 4ente
Lat"se O : 4ente ?aune
)si la pente est 7aune et le culot rouge! vri"ier 0ue le culot a t correctement
ensemenc.
Lat"se # : 4ente r"u%e
: la production d8
9
: : n"irissement 4lus "u m"ins im4"rtant du milieu
+
/
S O : n"irissement
+
/
S # : a$sene de n"irissement
APRES UTILISATI2N 4asser les tu$es de Hliger et 4annitol 4obilit FD minutes 3 la ""tte#
minute0 4uis les 8ider 4endant .ue la %l"se est en"re f"ndue0 les la8er 4"ur 4"u8"ir les rutiliser:
P"ur sassurer de leur 4arfaite dsinfeti"n les faire 6auffer / 6 3 -HDR*:
Les tu$es a!ant "ntenu le milieu ure indole ensemen ser"nt immer%s dans de leau de [a8el - 3 /
6eures0 4uis la8s et 8entuellement dsinfets 4ar 6auffa%e:
'"ir ta$leau / \=denti"ication & partir de la galerie rduite]:
1
ANNEXES
ANNEXE 1 2
E0%i7e"ent d% #!)(r!t(ire 7(%r #! "ise en 7#!&e de #$!n!#'se
La mise en 4lae de ette anal!se nessite un la$"rat"ire de $atri"l"%ie "rretement .ui4

V E,UIPEMENT (E BASE :
0 un autocla.e 4"ur la 4r4arati"n 8entuelle des milieux de ulture et 4"ur la
d"ntaminati"n des milieux utiliss
8emar0ue 9 & d"aut dautoclave une ; cocotte+minute C peut & la rigueur! *tre utilise
0 un four Pasteur ;"u P"u4inel< 4"ur striliser la 8errerie nessaire 3 la "nfeti"n des
milieux de ulture
8emar0ue 9 & d"aut de "our Pasteur un "our de cuisine permettant dobtenir '$$(C convient
par"aitement
# une balance ;au -E-D
7me
de %ramme< 4"ur la "nfeti"n des milieux de ulture
V (ES MILIEU5 (E *ULTURE
Au minimum .uatre milieux s"nt nessaires:
# un milieu dis"lement le B*P
# tr"is milieux didentifiati"n : Wli%ler0 Mannit"l#M"$ilit0 Ure#Ind"le
Sui8ant les as es milieux 4"urr"nt s"it 9tre a6ets 4r9ts 3 lem4l"i0 s"it de8r"nt 9tre "nfeti"nns0
striliss 4uis "nditi"nns:
P"ur la fa$riati"n des milieux s"nt nessaires :
# des $6ers et 4r"u8ettes de LDD mL "u - L
# des ri4ients en 8erre 4"ur 9tre rutilisa$les et strilisa$les : fla"ns de -LD "u/LD mL0
tu$es 3 essai a8e 8is si 4"ssi$le0 $"Mtes de Ptri en 8erre
V (ES RA*TI)S
# *"l"rants de Gram : 'i"let de %entiane ;"u 'i"let ristal< 0 )u6sine de Gram ; "u
Safranine<0 Al""l#at"ne ;"u al""l 3 ^D R*<
# (i8ers ratifs :
eau "x!%ne 4"ur rati"n de la atalase
ratif 4"ur "x!dase "nfeti"nna$le 3 4artir de 4"udre ; N dimt6!l 4ara 46n!l7ne
diamine<
ratifs 4"ur %alerie didentifiati"n : 4er6l"rure de fer et ratif de lind"le
V UN P2STE (E MANIPULATI2N "m4"rtant
# un $e Bunsen a8e s"ure d e %aA
# des 4ines mtalli.ues
# des 4i4ettes Pasteur striles et n"n striles0 "eses mtalli.ues ;et0 si 4"ssi$le0 des "eses
ali$res de -D mir" L 3 usa%e uni.ue<
# tu$es 3 6m"l!ses striles $"u6s au "t"n ard
# du 4a4ier filtre0 "u 4a4ier a$s"r$ant 8"ire tissu 4r"4re im4r%n de [a8el et 6an% 6a.ue
?"ur
# des mar.ueurs 4"ur identifier les 4rl78ements0 $"Mtes et tu$es
1
ANNEXE 3 2
-i&/e de PRELE,EMENT D8URINE 6 #$%s!*e d% 7ers(nne# "di&!#
et d% 7!tient
P"ur re6er6er les mir"$es dans lurine0 il faut im4rati8ement un 4rl78ement de $"nne .ualit:
&0 assembler le matriel ncessaire au prl1.ement
# un fla"n 3 4rl78ement si 4"ssi$le strile : fla"n 3 lar%e "u8erture fermant 6ermti.uement
# du sa8"n et de leau 4r"4re
# .uel.ues "m4resses striles ;minimum 1< "u des lin%es 4r"4res
A0 Lire attenti.ement les instructions sui.antes a.ant deffectuer le recueil des urines
4adame3
&0 Se la8er les mains 4uis dune main d%a%er l@"rifie urinaire en artant les l78res0
A0 A8e l@autre main0 la8er l@"rifie urinaire en 4assant0 d6a.ant en arri1re0 suessi8ement :
a< une "m4resse im$i$e d@un 4eu de sa8"n ;nett"!a%e<0
$< 4uis une "m4resse im$i$e d@eau ;rinJa%e<0
< et enfin a44li.uer fermement et une seule f"is0 une "m4resse s76e ;s6a%e<
)0 Uriner en maintenant t"u?"urs les l78res artes:
A4r7s 1 3 S se"ndes ;4remier ?et durine<0 et sans cesser d6uriner mettre le fla"n de 4rl78ement
s"us le ?et:
(7s .u@il est 3 demi "u au tr"is .uarts 4lein0 retirer le fla"n0 sans cesser d6uriner:
+0 Re$"u6er le fla"n en 8itant de mettre les d"i%ts sur s"n %"ul"t "u 3 l@intrieur du $"u6"n
-0 Riner l@extrieur du fla"n0 le s6er et le remettre 3 l@infirmi7re "u au la$"rat"ire:
4erci
4onsieur3
&0 Se la8er les mains 4uis dune main0 dal"tteA "m4l7tement le %land0
A0 A8e l@autre main0 la8er l@"rifie urinaire en 4assant suessi8ement :
a< une "m4resse im$i$e d@un 4eu de sa8"n ;nett"!a%e<0
$< 4uis une "m4resse im$i$e d@eau ;rinJa%e<0
< et enfin a44li.uer fermement et une seule f"is0 une "m4resse s76e ;s6a%e<
)0 UrineA en maintenant t"u?"urs le %land $ien d%a%:
A4r7s H 3 -/ se"ndes ;4remier ?et durine<0 et sans cesser d6uriner mettre le fla"n de 4rl78ement
s"us le ?et:
(7s .u@il est 3 demi "u au tr"is .uarts 4lein0 retirer le fla"n0 sans cesser d6uriner
+0 Re$"u6er le fla"n en 8itant de mettre les d"i%ts sur s"n %"ul"t "u 3 l@intrieur du $"u6"n
-0 Riner l@extrieur du fla"n0 le s6er et le remettre 3 l@infirmi7re "u au la$"rat"ire:
4erci
1
TABLEAU 1 : ORIENTATION DE LIDENTIFICATION A PARTIR DES RSULTATS SUR BCP
MACROSCOPIE DE LA COLONIE :
TAILLE
couleur du milieu : LACTOSE
ASPECT DE LA
COLONIE GRAM ENZYME ORIENTATION
Petite taille : infrieure 1 mm
Milieu bleu ou lger virage au jaune
Ronde, bombe,
opaque, couleur en
plus de 24 H
Coques Gram +,
bien ronds Catalase +
Staphylocoque
Possibilit de staphylocoques dors si
colonie bien jaune (en 48 H)
Ronde, un peu
bombe,
transparente
Coques Gram +
pouvant tre
ovalaires
Catalase -
Entrocoque
Remarque : si trs petite colonies chez une
femme enceinte penser des streptocoques
Moyenne grande taille (1 mm 2 mm)
Jaune donc LACTOSE +
Ronde plus ou moins
rgulire,
Souvent peu bombe
Bacilles Gram -
de taille
moyenne Oxydase -
Entrobactrie voquant
ESCHERICHIA COLI
Ronde, trs bombe,
grasse
Bacilles Gram -
courts et trapus
Entrobactrie voquant
KLEBSIELLA
Moyenne grande (1 mm 2 mm)
Bleu donc LACTOSE -
Ronde plus ou moins
rgulire, peu
bombe,
transparente
Bacilles gram
de longueur
variable
Oxydase - Entrobactrie : Proteus , Providencia,
Morganella, Enterobacter
Ncessit dune galerie didentification
Contour irrgulier,
irise ou mtallique,
odeur de seringat ou
de miel
Bacilles Gram
de longueur
variable
Oxydase + Possibilit de Pseudomonas
(aeruginosa ?)
Trs petites colonies bleues
( 0,1 0,3 mm de diamtre)
A la limite de la
visibilit
Fondamental pour
lorientation
Non
ralisable
Bacilles Gram + : courts en massue
(corynbactries), longs (Lactobacillus)
Levures : genre Candida ou autre genre.
Dautres aspects moins frquents ne figurent pas dans ce tableau
1
TABLEAU 2 : IDENTIFICATION A PARTIR DE LA MINI GALERIE DIDENTIFICATION
NOM DE LA
BACTRIE
KLIGLER MANNITOL MOBILIT URE INDOLE
OX Glucose Lactose Gaz H2S Mannitol Mobilit Urase Indole TDA
Escherichia coli - + + +
(-)
- + + - + -
Klebsiella
pneumoniae
- + + + - + - + - -
Klebsiella oxytoca - + + + - + - + + -
Enterobacter - + -
quelquefois
+
+ - + + - - -
Proteus mirabilis - + - + + - + + - +
Proteus vulgaris - + - + + - + + + +
Proteus rettgeri - + - v - - (+) + + + +
Providencia
stuartii
- + - - - - + -(+) + +
Morganella
morganii
- + - v - - + - + +
Pseudomonas ou
bacilles Gram -
non-fermentants
+
Milieu tout rouge
Pas de pousse dans le culot
Pousse sur la pente uniquement
Pousse quen surface Milieu sans intrt
Pseudomonas
aeruginosa
+ Pousse abondante dans tout
le tube avec production de
gaz
V = variable
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