Clonagem Molecular

1- criao de uma molcula recombinante

2- Insero do vetor recombinante em
uma clula hospedeira

3- Seleo das clulas recombinantes

Pontos a serem estudados
1-gene alvo
2- vetores
3- hospedeiros
4- transformao ou transfeco
5- algumas tcnicas
6- aplicaes
Detectando um gene alvo
Insero de vetores recombinantes em
uma clula hospedeira
Transformao: a clula hospedeira tornada
competente para o vetor de clonagem a ser
introduzido.
Transfeco: quando o vetor de clonagem tem
caractersticas de vrus.


Microprojteis: partculas cobertas com DNA so projetadas contra uma
clula e penetram em sua membrana.
Eletroporao: a clula submetida a um campo eltrico que faz com que
pequenos poros sejam abertos temporariamente em sua membrana por
onde o DNA pode ser inserido
Tipos de clulas hospedeiras usadas para engenharia gentica
Grupo Procaritica /
Eucaritica
Tipo exemplos
Bactria Procaritica Gram -
Gram +
Escherichia coli
Baccilus subtilis
Streptomyces spp
Fungos Eucaritica Unicelulares
Multicelular
Saccharomyces
cerevisiae
Aspergillus
nidulans
Plantas Eucaritica Plastos
Clulas inteiras
Todo o organismo
Vrios tipos
Vrios tipos
Vrios tipos
Animais Eucariticas Clulas inteiras
Clulas de
mamferos
Oocitos
Todo o organismo
Drosophila
melanogaster
Vrios tipos
Vrios tipos
Vrios tipos
Hospedeiros procariticos
Uma clula hospedeira ideal deve ser fcil de
manipular e propagar, deve estar disponvel , com
uma grande quantidade de cadeias geneticamente
definidas.
A bactria Gram- : Escherichia coli
No h maturao do RNAm como acontece nas
clulas eucariticas.
Espcies de Bacillus, Pseudomonas e Streptomices.
(mas h algumas desvantagens)
Hospedeiros eucariticos

A levedura Saccharomyces cerevisae o ser
unicelular eucaritico favorito para a engenharia
gentica e algumas estirpes possuem um tipo de
plasmdeo conhecido como 2m .
Outros fungos: Aspergillus nidulans e Neurospora
crassa.
Algas unicelulares: Clamidomonas reinhardtir
Clulas animais e vegetais
1- clivar o gene alvo
2- clivar o vetor
3- ligao
4- expresso
5- seleo
ALGUMAS TCNICAS
SOUTHERN BLOTTING
NORTHERN BLOTTING
WESTERN BLOTTING
Western
(protena)
APLICAES da biologia molecular
TRANSGENICOS
Pesquisa
ASSAY IMAGE
DECODING IMAGE
Microarray Tecnologia Chip
Aquisio da imagem automtica
Forense
Estudo de identificao
individual
sequncias altamente variveis
VNTR (Variable Number of Tandem Repeats)
F M P

Investigando regies
de Variable Number
Tandem Repeats
(VNTR)

Tcnica: PCR
Propsito: identificao individual
Regio investigada: seqncias repetitivas
(VNTR) - Microssatlite
Aplicaes do Uso da PCR em estudo de
caso de estupro
Clnica
108
305
230
BCR
ABL
Cromossomo 9
Cromossomo 22
Ph
1

P1 P2
108
230
305
- C + C + C
PCR para bcr/abl
LEUCEMIA MIELIDE CRNICA
Diagnstico molecular t(9;22)(q34;q11)
Trissomia do 21