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ACCIN CATALTICA DE LA LIPASA PANCREATICA

Por:

SERGIO A. MUOZ GOMEZ C.C. 1039451173
CAMILO CALDERN C.C 1128275321
DAVID VSQUEZ C.C 1017169701
NAYIBE CALA C.C 1128425137
VALERIA CARMONA C. C 1039452220


Informe de laboratorio de Bioqumica Biolgica


Profesor:
Edwin Patio



UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES
BIOLOGA
MEDELLN
12 de Marzo de 2009
CALCULOS Y RESULTADOS
Tabla 1.
Tubo Aceita
(gotas)
Sln. CaCl
2

(mL)
H
2
O (mL) Fenolftaleina
(gotas)
NaOH
(gotas)
V
NaOH
(mL)
Blanco 5 - 10 - 6 0.30
1 5 - 10 3 16 0.80
2 5 - 10 3 17 0.85
3 5 - 10 3 19 0.95
4 5 0.5 9.5 3 20 1.00
5 5 0.5 9.5 3 51 2.55
6 5 0.5 9.5 3 68 3.40

()

()

Tabla 2.
Tubo Eq-g
NaOH
Tiempo (min)
1 0.20 15
2 0.22 30
3 0.26 45
4 0.28 15
5 0.90 30
6 1.24 45

)








Grfica 1. Eq-g NaOH vs tiempo tubos 1, 2, 3.

Grfica 2. Eq-g NaOH vs tiempo tubos 4, 5, 6.


Actividad enzimtica sin Ca
2+


Actividad enzimtica con Ca
2+






15, 0.2
30, 0.22
45, 0.26
y = 0.002x + 0.1667
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0 10 20 30 40 50
E
q
-
g
N
a
O
H

Tiempo (min)
Eq-g
NaOH
vs Tiempo
15, 0.28
30, 0.9
45, 1.24
y = 0.032x - 0.1533
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
0 10 20 30 40 50
E
q
-
g
N
a
O
H

Tiempo (min)
Eq-g
NaOH
vs Tiempo
ANALISIS Y DISCUSIONES DE RESULTADOS

Los resultados corresponden a los esperados pues la cantidad de producto (cantidad de cidos grasos
neutralizados) aumenta a medida que aumenta el tiempo tanto con activador (Ca
2+
) como sin activador.
Los tubos 4, 5 y 6 (Grfica 2) presentan una mayor actividad enzimtica que los tubos 1, 2 y 3. Sabiendo
que la nica diferencia entre estos dos conjuntos de tubos, es la presencia de CaCl
2
en los primeros, se
puede decir que el catin Ca
2+
o el anin Cl
-
aumentan la actividad de la lipasa proveniente de la
pancreatina. Esto es consistente con varios artculos de investigacin cientfica, donde se muestra una
significativa activacin de diversas lipasas por la adicin de cloruro de calcio. Se dice que el catin Ca
2+

acta como un activador de la lipasa, aumentando su actividad porque es un estabilizador trmico,
adems de que produce sales de calcio, las cuales precipitan e impulsan la reaccin en sentido directo.
La actividad enzimtica puede ser evidenciada mediante el valor de la pendiente de las grficas Eq-g
NaOH vs tiempo ya que relaciona el numero de moles que la enzima convierte en producto por minuto.
Someter los tubos a calentamiento a 37C permite recrear las condiciones ptimas de temperatura para
alcanzar una mxima eficiencia en su actividad enzimtica.
Calentar los tubos en agua hirviendo durante un minuto, tras transcurrido su tiempo correspondiente,
permite detener la reaccin, desnaturalizando la enzima por la alta temperatura (~100C) y por tanto
cuantificar el numero exacto de moles de cidos grasos hidrolizados en ese tiempo por la enzima lipasa
mediante titulacin.
La hidrlisis de los cidos grasos por la enzima lipasa puede producir diacilglicridos, monoacilglicridos,
glicerol y cidos grasos libres. Es esta hidrlisis la causante de que el medio se acidifique por la misma
liberacin de los cidos grasos que son cidos carboxlicos con una cadena hidrocarbonada de longitud
considerable y que pueden ser titulados con una base fuerte como NaOH permitiendo su cuantificacin.
Se concluye, de acuerdo a los resultados, que la pancreatina es un medicamento que contiene lipasas
que pueden cortar triacilglicridos provenientes del aceite de mesa comn, produciendo cidos grasos
libres y acilglicridos o glicerol, por tanto efectivamente puede servir para suplir esta reaccin en
personas con deficiencias en la digestin de lpidos causados por la falta o mal funcionamiento de esta
clase de enzimas. Esto es relevante porque los triacilglicridos son significativamente importantes, pues
representan la fuente primaria de energa de rganos indispensables como lo son: el corazn, el hgado,
el msculo esqueltico. De lo anterior se deriva cuan importantes son las lipasas en el correcto
funcionamiento de organismos como los mamferos y cun importante es la pancreatina como
medicamento en humanos e incluso en animales domsticos.
Otros estudios que se podran llevar a cabo es estudiar la actividad de la lipasa con y sin colipasa, una
protena/coenzima requerida para la actividad ptima de la lipasa pancretica y es secretada por el
pncreas en una forma inactiva, procolipasa, que es activada en el lumen del intestino por la tripsina.
Sera interesante hacer el experimento adems mirando el efecto que tiene la colipasa y las sales biliares
por separado y juntas, pues la funcin de la primera es prevenir la inhibicin que causan las segundas
sobre la hidrlisis de triacilglicridos.
Bibliografa
Purification of a lipase from the hepatopancreas of oil sardine (Sardinella longiceps linnaeus) and its
characteristics and properties
M. K. Mukundan, K. Gopakumar, M. R. NairDivision of Biochemistry and Nutrition, Central Institute of
Fisheries Technology, Cochin-682029, India
On papain lipase.
By marta s9sdberg and erwin brand.
(From the Division of Luboratories, MonteJore IIospitaZ, New York.)
(Received for publication, March IS, 1925.)
The Protein Nature of Enzymes. An Investigation of Pancreatic Lipase
David Glick, C. G. King
J. Am. Chem. Soc., 1933, 55 (6), pp 24452449
DOI: 10.1021/ja01333a036
Publication Date: June 1933

Activation of Human Pancreatic Lipase Activity by Calcium and Bile Salts
Hiroshi KIMURA
*
, Yoshitaka FUTAMI
*,1
, Sei-ichiro TARUI
**
and Takaaki SHINOMIYA
*