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. Historia

La fluoresceína fue descubierta por el químico profesor y premio

Nobel de Química (1905) Johann Friedrich Wilhelm Adolf von Baeyer
(1835-1917).
Descripción

Fenómeno físico mediante el cual ciertas substancias absorben energía

emitiéndola en forma de luz o de otro tipo de radiación
electromagnética. A diferencia de la fosforescencia, la fluorescencia
tiene lugar únicamente mientras dura el estímulo que la provoca,
desapareciendo ambos casi simultáneamente.

este fenómeno se aprovecha para realizar métodos cuantitativos como

la espectrometría de fluoresceína que es la técnica empleada,
normalmente, cuando se quiere conocer con rapidez la composición
elemental exacta de una sustancia. Mediante esta técnica es posible
determinar todos los elementos del Sistema Periódico, desde el flúor
hasta el uranio, en muestras sólidas, en polvos y en líquidos. Asimismo
mediante la utilización de los patrones adecuados es posible realizar el
análisis cuantitativo de los elementos presentes.
La Fluorescencia de Rayos X se aplica al estudio de aleaciones,
minerales, rocas, catalizadores, recubrimientos (pinturas, barnices,
esmaltes). También se puede utilizar para la determinación de
elementos traza en productos petrolíferos, conservas alimenticias,
residuos industriales y urbanos, etc.

Hay dos tipos de instrumentos de fluorescencia, dispersivos y no

dispersivos. Un instrumento dispersivo está compuesto de una fuente de
luz, un atomizador un analizador un detector y un procesador de señal y
un dispositivo de lectura. La fuente ideal para la fluorescencia atómica
 es el láser pero la fuente más común es la lámpara de descarga sin
electrodo. Un instrumento no dispersivo es compuesto por una fuente de
luz, un atomizador y un detector. No se necesita un analizador. Cuando
una lámpara de descarga sin electrodo sirve como fuente de excitación
la radiación emitida es la de un elemento simple.

Es hidrosoluble de color amarilla que pertenece al grupo de las

xantinas, que produce un color fluorescente verde intenso en soluciones
alcalinas (pH mayor a 5). Cuando se expone a la luz, la fluorescencia
absorbe ciertas longitudes de onda y emite luz fluorescente de longitud
de onda larga.

Los factores que afectan la fluorescencia incluyen:

a) Concentración de la sustancia;
b) pH de la solución;
c) Presencia de otras sustancias;
d) Longitud de onda de la luz excitante.

A un pH de 8, la fluoresceína alcanza su máxima intensidad.

Usos
 además este fenómeno también es utilizado para realizar practicas de
microscopia(microscopia de fluorescencia) cuyo principio mas o menos
es el siguiente:
Las moléculas fluorescentes absorben la luz de una determinada
longitud de onda y emiten luz de otra longitud de onda más larga. Si un
componente de este tipo es iluminado a su longitud de onda absorbente
y visualizado a través de un filtro que sólo permita pasar la luz de
longitud de onda igual a la de la luz emitida, el componente aparece
brillante sobre un fondo oscuro. La intensidad y el color de la luz es una
propiedad característica de la molécula fluorescente utilizada.

Los colorantes fluorescentes utilizados para la tinción celular son

detectados con ayuda del microscopio de fluorescencia. Este
microscopio es similar al microscopio convencional, a excepción de que
la luz incidente que procede de una potente fuente atraviesa un primer
filtro que selecciona la longitud de onda capaz de excitar al fluorocromo,
antes de incidir sobre la muestra. La luz emitida por la muestra
(reflejada y fluorescente) atraviesa un segundo filtro que selecciona la
longitud de onda de emisión del fluorocromo.

por ultimo este fenómeno también se usa en la vida común como por
ejemplo las maquinas para detectar los billetes falsos ya que estos no
poseen una tinta especial que brilla bajo un estimulo adecuado.

Por ser un pigmento fluorescente, tiene múltiples aplicaciones en

serigrafía, microbiología, etc., dado que se utiliza como medio de
contraste.
Fluoresceína es un fluorophore comúnmente utilizados en la
microscopía, en un tipo de láser de colorantes, como la ganancia media,
en medicina forense y la serología para detectar manchas de sangre
latente, y en la localización de tinte. Fluoresceína posee una absorción
máxima en 494 nm y de emisión máxima de 521 nm (en agua). Además,
posee una isosbestic fluoresceína punto (igualdad de la absorción de
todos los valores de pH) en 460 nm. Fluoresceína también se conoce
como un color aditivo (D & C amarillo no. 7). La forma de sal di sódica de
fluoresceína es conocido como D & C amarillo no. 8.
Derivados
Hay muchos fluoresceína derivados, por ejemplo, isotiocianato de
fluoresceína, a menudo abreviado como FITC. FITC es la molécula
original de fluoresceína isotiocianato funcionalizado con un grupo (-N =
C = S), en sustitución de un átomo de hidrógeno en la parte inferior del
anillo de la estructura. Este derivado se reactiva hacia grupos amino en
las proteínas dentro de las células. Un succinimidyl-éster grupo funcional
adjunto a la fluoresceína básico, la creación de NHS-fluoresceína, otra
forma común de derivados de aminas reactivas.

Otros derivados de fluoresceína incluir Oregón Verde, Tokio Verde,

SNAFL, y carboxynaphthofluorescein. Estos derivados, junto con nuevas
fluors como 488 y Alexa DyLight 488, han sido adaptados para
diferentes aplicaciones químicas y biológicas que fotoestabilidad
superior, las características espectrales diferentes, o diferentes grupos
de apego son necesarios.

Síntesis
Fluoresceína fue sintetizado por Adolf von Baeyer en 1871. Puede ser
preparado a partir de anhídrido ftálico y resorcinol en presencia de
cloruro de zinc a través de la reacción de Friedel-Crafts.
Un segundo método para preparar fluoresceína methanesulfonic utiliza
ácido Brønsted como catalizador ácido. Esta ruta tiene un alto
rendimiento bajo condiciones leves. [1] [2]

Aplicaciones
Utilización de los sistemas fluviales
Uno de sus más reconocibles se utiliza en el Río Chicago, donde
fluoresceína fue la primera sustancia utilizada para teñir el río verde el
Día de San Patricio en 1962. En 1966 los ambientalistas obligó a un
cambio basado en un tinte vegetal para proteger a los miles de peces de
colores que pueblan el río.

Otros usos incluyen la utilización de fluoresceína como colorante soluble

en agua, añadido al agua de lluvia en las pruebas de simulación del
medio ambiente a la ayuda en la localización y análisis de filtraciones de
agua, y en Australia y Nueva Zelanda como un tinte espíritu metilado.

Bioquímica de la investigación
En biología celular, el isotiocianato de fluoresceína derivado a menudo
se utiliza para etiquetar y realizar un seguimiento de las células en la
microscopía de fluorescencia de las aplicaciones (por ejemplo, la
citometría de flujo). Otras moléculas biológicamente activas (como los
anticuerpos) puede ser también adjunta a la fluoresceína, lo que permite
a los biólogos fluorophore el objetivo específico de proteínas o
estructuras dentro de las células. Esta aplicación es común en levaduras
pantalla.

Fluoresceína también pueden ser conjugado con nucleósidos trifosfatos

y se incorporaron a una sonda de hibridación in situ. Fluoresceína
etiqueta sondas se pueden utilizar imágenes de peces, o el blanco de
inmunohistoquímica utilizando anticuerpos. Esta última es una
alternativa común a digoxigenina, y los dos se usan juntos para el
etiquetado de dos genes en una muestra [3].

La atención de la salud aplicaciones

Fluoresceína sódica se utiliza ampliamente como una herramienta de
diagnóstico en el campo de la oftalmología y la optometría, donde
fluoresceína actualidad se utiliza en el diagnóstico de abrasiones
corneales, úlceras corneales corneal herpética y las infecciones.
También se utiliza en rígidas de gas permeable lentes de contacto
adecuado para evaluar la capa de lágrima bajo la lente.
Fluoresceína por vía intravenosa u oral se utiliza en la angiografía
fluoresceínica en la investigación y para diagnosticar y clasificar los
trastornos vasculares, por ejemplo, en piernas, incluyendo la
degeneración macular asociada a enfermedad de la retina, la retinopatía
diabética, inflamación intraocular, condiciones, y los tumores
intraoculares, y cada vez más durante la cirugía de tumores cerebrales.

Seguridad
Tópica, oral, intravenosa y el uso de fluoresceína pueden causar
reacciones adversas incluyendo náuseas, vómitos, urticaria, hipotensión
aguda, anafilaxis y reacciones anafilactoides, paro cardíaco, y la muerte
súbita., el uso intravenoso ha informado de la mayoría de las reacciones
adversas, incluida la muerte súbita, pero esto puede reflejar un mayor
uso en lugar de mayor riesgo. Ambos usos orales y tópicos se han
reportado a causa de anafilaxia, incluyendo un caso de anafilaxia con
paro cardíaco (resucitado), después de uso tópico en un colirio. Los tipos
de reacciones adversas varían del 1% al 6% Las tasas más altas pueden
reflejar la población de estudio que incluyen un mayor porcentaje de
personas con reacciones adversas previas. El riesgo de una reacción
adversa es 25 veces mayor si la persona ha tenido antes una reacción
adversa. El riesgo puede reducirse con anterioridad (profilaxis) el uso de
antihistamínicos y rápida la gestión de las emergencias de cualquier
subsiguiente anafilaxia. Una simple prueba puede ayudar a identificar a
las personas con mayor riesgo de reacciones adversas

La reacción adversa más común es las náuseas, debido a una diferencia

en el pH del cuerpo y el pH de la tintura de fluoresceína sódica. Las
náuseas generalmente es transitorio y disminuye rápidamente.
Colmenas puede variar desde una molestia menor o grave. Una dosis
única de antihistamínicos pueden dar alivio completo. Shock anafiláctico
y posterior paro cardíaco y muerte súbita son muy raros, sino porque se
producen en cuestión de minutos, un proveedor de servicios de salud
que utiliza fluoresceína debe estar preparado para realizar la
reanimación de emergencia

Fluoresceína (C.I. 45350) PA

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