4.

10 Fe+2 y Fe+3
Introduccin
El hierro est presente en la biosfera en dos estados de oxidacin, Fe+2 y Fe+3,
los cuales son termodinmicamente estables bajo condiciones anxicas y
xicas, respectivamente El Fe+3 se encuentra en una amplia variedad de
formas !u"micas, como minerales altamente cristalinos# ma$netita %Fe3&'(,
$eotita %Fe&&)(, hematita %Fe2&3(, vivianita %Fe3%*&'(2.+)2&( o ferrihidrita
%Fe%&)(3(, y minerales con poca o nin$una estructura cristalina# oxihidrxidos
amorfos %)acher
et al, 2,,-(
.as bacterias reducen preferentemente los oxihidrxidos amorfos de Fe+3
%.ovley y *hillips, -/+0( El m1todo ms com2nmente utili3ado para medir la
concentracin de estos compuestos amorfos de Fe+3 en suelos y sedimentos es
la t1cnica de extraccin con oxalato cido de amonio
4in embar$o este m1todo puede catali3ar la disolucin de las formas cristalinas
!ue no son biodisponibles para las bacterias reductoras de Fe, y no distin$ue
entre la fraccin cristalina y la amorfa 5n m1todo ms selectivo para la
extraccin de los oxihidrxidos amorfos de Fe+3 es la t1cnica de extraccin con
hidroxilamina hidroclorada %.ovley y *hillips, -/+06 7yon$8)un et al, 2,,-(
91todo
Este m1todo es aplicable para extraer Fe+2 y Fe+3 de muestras de suelo con
una solucin cida y su cuanti:cacin por colorimetr"a
Fundamento
.a prueba se basa en la extraccin de Fe+2 y Fe+3 en muestras de suelo con
una solucin cida, y la medicin indirecta de los iones Fe+2, o8fenantrolina,
!ue absorbe a ;-, nm Fe %II( + 3 <%o8fenantrolina()+= <Fe%o8fenantrolina(3=2+
+ 3)+ *ara determinar la concentracin de Fe+3, inicialmente el Fe+3 extra"do
debe ser reducido a Fe+2 con hidroxilamina hidroclorada, !ue puede ser
cuanti:cado como Fe+2 con o8fenantrolina
El l"mite de deteccin de la t1cnica va de - a ;, ppm de Fe+2, y en caso de
tener extractos ms concentrados se recomienda hacer las diluciones
necesarias para obtener mediciones de absorbancia entre ,- y ,+
Interferencias
>alores de p)? de @, provocan una recuperacin ine:ciente de Fe+2
.a presencia de AaA&3 a concentraciones mayores de ,,-9 provoca una
recuperacin variable y a p) 0 el Fe+2 puede ser oxidado de forma abitica por
nitratos o nitritos .a presencia de sulfato provoca !ue slo sea extra"ble
aproximadamente -;B del Fe+2 total entre un p) de ' y ;
9aterial y e!uipo
*robetas de -,, ml
9atraces volum1tricos de -.
Cubos de ensayo de vidrio con tapa de rosca de 2, ml
*ipetas $raduadas de - y -, ml
>asos de precipitados de 2;, ;, y -,, ml
>rtex
Cubos de centr"fu$a de -; ml
Dentr"fu$a
Espectrofotmetro visible
Eeactivos y soluciones
-( Fcido clorh"drico %)Dl( ,; 9
2( )idroxilamina hidroclorada %A)2&).)Dl( ,2; 9 en )Dl ,2; 9
Gdicionar hidroxilamina en un matra3 volum1trico de -., disolver con -,, ml
de una solucin de )Dl ,;9 y posteriormente aforar con la misma solucin
3( Etanol -,B
'( o8fenantrolina %D-2)+A2.)2&( ,2;B *esar ,2; $ de o8fenantrolina y llevar
a -,, ml con una solucin de etanol al -,B
;( 7uHer de acetato %D2)3&2.Aa( al -,B *esar -, $ de acetato de sodio y
disolver en -,, ml de a$ua destilada Gjustar a p) ' con cido ac1tico
@( 4olucin estndar de sulfato ferroso amoniacal %Fe%A)'(2%4&'(2.@)2&( %;,
ppm de Fe( *esar ,3;-2 $ de sulfato ferroso amoniacal y transferir a un
matra3 volum1trico de -., disolver y aforar con solucin de )Dl ,; 9
*rocedimiento
A. Extraccin.
-( En un tubo de centr"fu$a de -; ml pesar ,- $ de suelo h2medo bajo
condiciones anaerobias y adicionar ; ml de solucin de )Dl ,; 9 G$itar en
forma intermitente durante una hora en vrtex
2( Dentrifu$ar por -, minutos a @ ,,, rpm
3( 5tili3ar el sobrenadante para la determinacin de Fe+2 y Fe+3
Nota# 4i es necesario, diluir la muestra para poder hacer una lectura dentro del
ran$o de ,- a ,+ de absorbancia
B. Cuantifcacin.
-( *ara la cuanti:cacin de Fe+2, tomar ,2 ml del sobrenadante de la
centrifu$acin, adicionar - ml de solucin de o8fenantrolina, - ml de solucin
buHer, completar a -, ml con a$ua destilada y a$itar vi$orosamente en vrtex
*ermitir el desarrollo del color %-; a 2, minutos( y leer la absorbancia a ;-,
nm
2( *ara la cuanti:cacin de Fe total, tomar ,2 ml de sobrenadante de la
centrifu$acin, adicionar - ml de solucin de hidroxilamina y esperar una hora
*osteriormente, adicionar - ml de solucin de o8fenantrolina, - ml de solucin
buHer, completar a -, ml con a$ua destilada y a$itar vi$orosamente en vrtex
*ermitir el desarrollo del color %-; a 2, minutos( y leer absorbancia a ;-, nm
Curva patrn. *reparar una curva patrn con la solucin estndar de sulfato
ferroso amoniacal %;, ppm de Fe( de acuerdo con la tabla '-2
5na hora *osteriormente adicionar - ml de solucin de o8fenantrolina, - ml de
solucin buHer, completar a -, ml con a$ua destilada y a$itar vi$orosamente
en vrtex *ermitir el desarrollo del color %-; a 2, minutos( y leer la
absorbancia a ;-, nm
Dlculos
Dalcular la concentracin de Fe+2 y Fe total en el extracto, con la ecuacin
lineal de la curva estndar