Universidad Católica de la Santísima Concepción

Facultad de Medicina, Escuela de Medicina

Depto. De Ciencias Básicas y Morfología
Laboratorio de Bioquímica

Practico n°7:

“Metabolismo Lipídico”

Integrantes : Karen Butikofer

Francisca Cabrera
Gladys Campos
Camila Salinas
Fecha de realización : Miércoles 10 de Junio, 2009
Fecha de entrega Miércoles 24 de Junio, 2009
informe :
Docentes BQ Mirna Muñoz M.Sc.
encargados : BQ Javier Grandón P.
Dr. Reginald Del Pozo
Introducción
QA Germán Rotter M.
Llevar una dieta que contenga demasiado colesterol y grasa (carne, queso, crema,
huevos y mariscos), o cuando el organismo por antecedentes genéticos produce un
exceso de colesterol y/o grasa, se puede producir un desnivel de las cantidades normales
de lípidos en la sangre.
Estos lípidos se transportan a través de la sangre, acoplados a proteínas que permiten la
solubilización de ellos para su transporte. Las llamadas lipoproteínas son de baja
intensidad (LDL), de alta intensidad (HDL) y triglicéridos.
Las dislipidemias son un conjunto de patologías caracterizadas por alteraciones en la
concentración de lípidos sanguíneos en niveles que involucran un riesgo para la salud.

Lípido en la sangre Objetivo

Colesterol Total Menos de 200 mg/dl

Hombres: más de 55 mg/dl

Colesterol HDL
Mujeres: más de 65 mg/dl

Colesterol LDL Menos de 70 mg/dl

Triglicéridos Menos de 150 mg/dl

El perfil lipidico esta constituido por las determinaciones más frecuentes: Colesterol total,
colesterol-HDL y Triglicéridos. Cuando los niveles de estos lípidos son anormales, existe
un mayor riesgo cardiovascular en el paciente en cuestión. Los niveles de colesterol
sanguíneo están determinados tanto por las características genéticas del individuo, como
por factores adquiridos (dieta, balance calórico, actividad física). El colesterol
transportado en lipoproteínas de baja densidad (C-LDL) está directamente correlacionado
con el riesgo de enfermedad coronaria, así el colesterol de lipoproteínas de alta densidad
(C-HDL) está inversamente correlacionado con el mismo. La hipercolesterolemia es la
causa principal de aterosclerosis que, al progresar la placa aterosclerótica, puede llevar a
la oclusión del lumen arterial. Numerosos estudios han demostrado que con la reducción
de los niveles de C- LDL se producen beneficios tanto en morbilidad como en mortalidad
cardiovascular.
Sobre dicha base, el tratamiento principal es la reducción de LDL. Esto se puede lograr
con cambios en el estilo de vida, tales como modificar las opciones de alimentos, lograr y
mantener un peso corporal saludable y aumentar la actividad física (tratamientos no
farmacológicos), o mediante administración de medicamentos, dependiendo de los
niveles específicos de grasa en la sangre y de si la persona sufre de enfermedades
cardiacas, diabetes u otros factores que la ponen a riesgo cardiovascular.
Materiales
 • Tubos Eppendorf • Reactivo enzimático de
• 21 Cubetas para medición en colesterol
espectrofotómetro • Reactivo enzimático para
• Gradilla para tubos de ensayo triglicéridos
y para cubetas • Estándar de triglicéridos
• Micropipetas (10-100μL, 100- (200mg/dL)
2000 μL) • Estándar de HDL (20mg/dL)
• Baño termorregulado • Agua destilada
• Espectrofotómetro • Muestra de plasma sanguíneo
• Vórtex de alumno
• Estándar de colesterol • Muestra problema C : “MPc”
(200mg/dL)

Método

Toma de muestra

El alumno realiza En el laboratorio La sangre del alumno

El plasma se
ayuno de 12 horas se le extrae es centrifugada, para
encuentra listo
antes del examen sangre separar los elementos
para realizar
puncionando la figurados del plasma
las pruebas.
vena correcta

1.Este procedimiento es realizado por

un profesional y en las condiciones
higiénicas apropiadas
2. Las muestras fueron agregadas a
tubos al vacío sin ninguna sustancia
en ellos.

1) Precipitación de proteínas para determinación del colesterol – HDL

( Se realiza este procedimiento primero con el fin de optimizar el
tiempo)

Se toman 2 tubos En en el tubo 1 se agregan

eppendorf, 1 para la 125 µL de la muestra
muestra problema y 1 problema MPc y 125 µL de la Los 2 tubos se vorterean
para el plasma del solución precipitante vigorosamente durante
alumno 30seg. seg.
En el tubo 2 se agregan 250
µL del plasma del alumno y Dejar reposar
250µL de la solución
precipitante

Procedimiento Centrifugar 15 min. a

realizado por 3.500 rpm
un docente.
 2) Determinación del Colesterol Total

Se poseían 7 tubos, cada uno contenía:

Se
preparó
un
blanco
- 10ul Muestra - 10ul suero del - 10ul estándar con
problema MPc alumno 200 mg/dl 1000ul
de
reactivo
1000ul de reactivo enzimático de colesterol
Se agitó en el vórtex
----------

Se incubó por 5 min.a 37ºC

en baño termorregulado

Se leyó la absorbancia de cada

Se vaciaron en cubetas
muestra a una longitud de onda
de espectrofotómetro
de 500 nm.

3) Determinación de triglicéridos totales

Se poseían 7 tubos nuevamente

Blanco
10ul 10ul de 10ul de
suero suero del estándar
MPc alumno c/u glicerol xmg%
c/u

1000 µl Reactivo enzimático triglicéridos

Se agitó en el vórtex Se vació el contenido de cada
-------
tubo en su respectiva cubeta y
se procedió a leer absorbancia
en espectrofototómetro a 505
Se dejó incubar 10 minutos a nm
3) Continuación procedimiento para determinar colesterol – HDL

Se extraen 2 muestras de 100 ul A ambos tubos agregar

del sobrenadante agregando 1000 µL de reactivo
cada una en tubos distintos enzimático de colesterol

Tener el cuidado de aspirar

por el lado contrario en
donde se encuentre el
precipitado, para no Tras hacer cada Se incuba 10
contaminar la muestra a mezcla se minutos a 37 °C en
estudiar vorterea por baño
30seg. termorregulado

Se preparan los tubos de blanco y los 2 tubos de

estándar, agregando:
Vaciar el contenido de
• Blanco: 100 µL de agua destilada y 1000
los tubos en cubetas de
µL de reactivo enzimático de colesterol
espectrofotómetro
• Estándar: 100 µL del estándar HDL 20
mg/dl y 1000 µL de reactivo enzimático
de colesterol

Se lee la
absorbancia de
cada muestra a 500
nm.
Cálculos y Resultados
I. Determinación del colesterol total

Del procedimiento antes expuesto se obtuvieron los siguientes resultados (ver

tabla 1)
Tabla 1: colesterol (mg/dL) en sangre

Muestra Absorbancia Promedio Colesterol

500 nm mg/dL
Estándar 1 0,348 -----------
Estándar 2 Promedio=(Muestra
0,316 1+ Muestra
0,332 2) / 200
MPc 1 2 0,258 -----------
MPc 2 0,280 0,269 162
Muestra alumno 0,237 ------------
Muestra alumno 0,248 0,243 146
• Se debe calcular el promedio de las muestras por duplicado, para luego
de estas obtener la concentración. Para esto se debe:

Ejemplo: (Estandar 1+Estandar 2) / 2 = (0,348+0,316)/2= 0,332

• Para obtener la concentración de lamuestra según su absorbancia se

debe aplicar una regla de tres simple

Absorbancia Estándar200mg/dL Ejemplo: 0,332 200mg/dL

Absorbancia muestraX 0,269X

X =( Abs. Muestra * 200 mg/dL ) X=(0,269* 200mg/dL) / 0,332=

/Abs.Estandar 162mg/dL

II. Determinación Triglicéridos

Del procedimiento se obtuvieron los siguientes resultados (ver tabla 2)

Tabla 2: Trigliceridos (mg/dL) en

sangre
Muestra Absorbancia Promedio Triglicéridos
mg/dL
Estándar 1 0,242 ------------- --------------
Estándar 2 0,235 0,239 200
MPc 1 0,320 ------------- -------------
MPc 2 0,323 0,322 269
Muestra alumno 0,059 ------------- ------------
Muestra alumno 0,050 0.055 46
• Se debe calcular el promedio de las muestras por duplicado, para luego
de estas obtener la concentración. Para esto se debe:
Promedio=(Muestra 1+ Muestra 2) /
2
 Ejemplo: (Estandar 1+Estandar 2) / 2 = (0,242+0,235)/2= 0,239

• Para obtener la concentración de la muestra según su absorbancia se

debe aplicar una regla de tres simple

Absorbancia Estándar200mg/dL Ejemplo: 0,239 200mg/dL

Absorbancia muestraX 0,322X

X =( Abs. Muestra * 200 mg/dL ) X=(0,322* 200mg/dL) / 0,239=

/Abs.Estandar 162mg/dL
III.Determinación HDL en sangre

Del procedimiento se obtuvieron los siguientes resultados (ver tabla 3)

Tabla 3: HDL (mg/dL) en sangre
Muestra Absorbancia Promedio HDL mg/dL
Estándar 1 0,300 ------------- ------------
Estándar 2 0,330 0,315 20
MPc 1 0,111 ------------ -----------
MPc 2 0,106 0,108 7
Muestra alumno 0,481 ------------ -----------
Muestra alumno 0,472 0,477 30

• Se debe calcular el promedio de las muestras por duplicado, para luego

de estas obtener la concentración. Para esto se debe:

Promedio=(Muestra 1+ Muestra 2) /
Ejemplo:2(Estandar 1+Estandar 2) / 2 = (0,300+ 0,330)/2= 0,315

• Para obtener la concentración de la muestra según su absorbancia se

debe aplicar una regla de tres simple
Absorbancia Estándar20mg/dL Ejemplo: 0,315 20mg/dL

Absorbancia muestraX 0,108X

X =( Abs. Muestra * 200 mg/dL ) X=(0,108* 200mg/dL) / 0,315=

/Abs.Estandar 7mg/dL

IV.Determinación LDL

A partir de los resultados de colesterol, triglicéridos y HDL obtenidos según las

Colesterol-LDL=
tablas 1, 2 y 3 aplicamos la fórmula CT-(TG/5)-C-
:
HDL
Ejemplo si usamos los resultados que se obtuvieron de la muestra sanguínea
de la alumna se obtiene:
Colesterol-LDL= 146mg/dL-(46mg/dl/5)-30mg/dl= 107
mg/dL
Cuando utilizamos los resultados obtenidos de la MPc, nos resulta lo siguiente:

Colesterol-LDL=162mg/dl-(269mg/dl/5)-7=101mg/dl

Conclusión y discusión:

La importancia de la medición de los niveles de lípidos séricos, radica en que

permite evaluar un posible riesgo cardiovascular, debido a que varios de estos
componentes son capaces de desencadenar la formación de ateromas y
provocar complicaciones.
Respecto de los niveles obtenidos en la medición del colesterol total,
obtuvimos valores dentro de lo normal, ya que para la muestra del paciente C
(MPC) resulto ser de 162 mg/dl y para la muestra del alumno 146 mg/dl, siendo
los valores normales menores a 200 mg/dl.
Cuando determinamos el colesterol HDL presente en nuestros pacientes
obtuvimos valores que nos llamaron la atención, ya que para la MPC resulto ser
de 7 mg/dl y para la muestra del alumno de 30 mg/dl, siendo ambos valores
muy bajos respecto de lo normal. Los valores de colesterol HDL para un
pronostico favorable en hombres es mayor a 55 mg/dl y en mujeres mayor a 65
mg /dl, por lo que llama la atención los valores que obtuvimos con la MPC el
cual resulto ser extremadamente bajo.
Los valores que resultaron de la medición de los triglicéridos totales fueron
muy disparen entre ambos pacientes. La MPC presentó un elevado nivel de
estos, siendo de 269 mg/dl, teniendo en cuenta que se considera riesgo
sospechoso con valores mayores a 150 mg/dl y elevado cuando supera los 200
mg/dl. Distinto fue el caso ocurrido con la muestra obtenida del alumno que
resulto ser de 46 mg/dl, lo cual es bastante bajo pero positivo, ya que lo aleja
del riesgo cardiovascular.
Finalmente realizamos la medición del colesterol LDL a través de la fórmula de
Friedewald y resulto ser normal para ambos pacientes. De la MPC obtuvimos
un valor de 101 mg/dl y de la muestra del alumno un valor de 107 mg/dl,
ambos dentro de un rango normal considerando que debe ser menor a 155
mg/dl.
Para que la obtención de resultados fidedignos en el laboratorio fuera óptima,
tuvimos que trabajar de forma prolija y ordenada, procurando exactitud en las
mediciones y respetando los tiempos de incubación de las muestras. En
general todo resulto bastante bien, lo cual fue muy positivo, considerando que
el experimento fue muy interesante y de utilidad para las actividades que
realizaremos mas adelante en nuestra práctica profesional.

Bibliografía:

Lehninger A, Nelson DL, Cox M, “Principios de Bioquimica”, 3º edición, Omega,

2001