VacciMonitor 2013;22(1):35-42
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Resonancia magntica nuclear: nuevas aplicaciones en la
cuantificacin y la evaluacin de intermediarios de vacunas basadas
en polisacridos
La resonancia magntica nuclear (RMN) constituye una fuerte alternativa para estudios estructurales, evaluacin
de identidad y cuantificacin de ingredientes farmacuticos activos (IFA). En las dos ltimas dcadas la aplicacin
de la resonancia magntica nuclear cuantitativa (RMNc) tuvo un creciente impacto en la cuantificacin de
compuestos, fundamentalmente orgnicos. Varios resultados obtenidos mediante la RMNc han ido creando un
lugar para la tcnica en la industria biofarmacutica. La RMNc incluye experimentos de RMN con algunos parmetros
modificados, con el objetivo de obtener seales cuantificables. Basada en algunos de los reportes ms relevantes,
la presente revisin aborda algunas de las aplicaciones de la RMN para vacunas basadas en polisacridos o
glicoprotenas. El trabajo hace especial nfasis en detallar algunos aspectos que caracterizan la RMNc, as como
sus aplicaciones.
Palabras clave: Palabras clave: Palabras clave: Palabras clave: Palabras clave: RMN, anlisis cuantitativo, vacuna, polisacrido.
Centro de Qumica Biomolecular, Ave. 21 y 200. Atabey, Playa, La Habana, Cuba.
email: email: email: email: email: raine.garrido@cqb.cu
Breve resea histrica del desarrollo de la
resonancia magntica nuclear
La resonancia magntica nuclear (RMN) constituye una
tcnica con un amplio y reconocido espectro de aplicaciones
en el campo del anlisis estructural. Tuvo sus inicios a
principios de la dcada de 1950, cuando se comercializaron
los primeros espectrmetros para la obtencin de espectros
de protones, tras el descubrimiento en 1945 de la resonancia.
Este fenmeno plantea que los nclidos sometidos a un
campo magntico externo absorben radiacin
electromagntica en el orden de las radiofrecuencias. Como
la frecuencia exacta de esta absorcin depende del entorno
qumico de los nclidos, el espectro de seales de absorcin
de los mismos revela una valiosa informacin sobre la
estructura de la molcula.
Con el desarrollo de la RMN transformada de Fourier (RMN-
TF), desde comienzos de los aos 1970, se aument la
sensibilidad en los espectrmetros y posibilit el registro
rutinario de nclidos de poca abundancia natural como el
13
C. Un desarrollo vertiginoso tuvo lugar desde ese entonces
y hasta la actualidad (1). Una gran aplicabilidad en tcnicas
posteriores tuvo la introduccin del concepto de transferencia
de polarizacin, combinando la secuencia para el eco de
spines, propuesta por Hahn en 1954. As mismo, la aplicacin
de tcnicas bidimensionales (2D-RMN) resuelve un nmero
importante de interrogantes estructurales en el campo de
las biomolculas (2). Adicionalmente, las posibilidades
tericas de la tcnica para la cuantificacin de compuestos,
* Lic. en Qumica. Laboratorio de Anlisis Espectroscpico.
desde la dcada de 1960, crearon las bases para el desarrollo
de la resonancia magntica nuclear cuantitativa (RMNc) (3).
Con la utilizacin de gradientes de campo magntico (Pulse
Field Gradient, PFG) se alcanz una reduccin importante
en los tiempos de adquisicin de la seal de resonancia,
tambin conocida como cada de induccin libre (FID, siglas
en ingls) y permiti para el caso de las molculas en
disolucin, a travs de la tcnica DOSY (Diffusion Order
SpectroscopY), la medicin de la difusin a lo largo de los
tres ejes (X,Y y Z), as como la direccin y velocidad de
flujo (4).
Un nmero de tcnicas desarrolladas en la dcada de 1990
extendi el empleo de experimentos de 2D-RMN como el
TOCSY (TOtal Correlation SpectroscopY) y el ROESY
(Rotating frame Overhauser Enhancement SpectroscopY),
empleados para evaluar los acoplamientos escalares y sus
homlogos dipolares entre protones, respectivamente, a
experimentos hbridos mayormente conocidos como 3D-RMN
(4). Esto favoreci el avance de los estudios de los sitios de
interaccin entre biomolculas.
Con la introduccin de la triple resonancia se incrementaron
los estudios estructurales en las ciencias biolgicas. De esta
manera fue posible la obtencin de una mayor informacin
de nclidos como el
15
N y el ya mencionado
13
C (4). Lo anterior
fortaleci el diseo acelerado del conjunto de tcnicas que
constituyen la base para la RMN de protenas, incluso permiti
el desarrollo de accesorios para espectrmetros,
especializados en este tipo de estudio, como las sondas triple
Raine Garrido,* Herman Vlez, Vicente Vrez
Garrido R, et al. VacciMonitor 2013;22(1):35-42
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inversa (
1
H,
13
C y
15
N). Para el 2002, Kurt Wuttrich (Suiza)
haba recibido el premio Nobel de Qumica por sus aportes al
estudio de la estructura tridimensional de las biomolculas.
El desarrollo alcanzado por la tcnica permite su empleo en
la evaluacin cualitativa y cuantitativa de diferentes tipos de
compuestos (5).
Algunas aplicaciones de la RMN para la
evaluacin de intermedios en vacunas
Existen numerosas vacunas comerciales y candidatos
vacunales multivalentes basados en polisacridos que
protegen contra varias bacterias. Los anlisis asociados a
los procesos de produccin y control de la calidad de estas
vacunas resultan extremadamente complejos y en muchos
casos la RMN se encuentra insertada entre las tcnicas
comnmente empleadas (6).
Desde hace ms de 30 aos comenzaron a aparecer un
nmero creciente de publicaciones con asignaciones de los
nclidos de protones y carbono de muchos de los
carbohidratos que hoy conforman las vacunas licenciadas
para uso humano basadas en polisacridos (7).
La aplicacin de la RMN como mtodo de caracterizacin
para vacunas, con el ingrediente farmacutico activo (IFA)
de naturaleza glicosacardica o glicoproteica es amplia
(8, 9). La vacuna multivalente antineumoccica Pneumovax