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NUTRICIN MICROBIANA
Los requerimientos nutricionales de un microorganismo estn determinados por la
composicin qumica de la clula, su constitucin gentica y por factores del medio ambiente.
Cualquier sustrato puede constituir una fuente de nutrientes para ciertos microorganismos.
Sin embargo, cada grupo de organismos vara ampliamente en sus caractersticas genticas y
en sus propiedades fisiolgicas y en su capacidad para utilizar y transformar los diferentes
compuestos qumicos. Los microorganismos se pueden clasificar de acuerdo con: a) la fuente
C, N, S, P y O que utilicen, y b) segn la fuente de energa [1].

Los macronutrientes son compuestos requeridos por las bacterias en cantidades significativas
y los micronutrientes (elementos traza) en cantidades muy pequeas. Estos penetran en las
clulas por difusin facilitada por protenas transportadoras, sin consumo de energa y
mediante reacciones de membrana con consumo energtico.

Macronutrientes bsicos
El nitrgeno forma parte de los aminocidos, cidos nucleicos y peptidoglicanos. Las bacterias
obtienen este elemento del amonio o los nitratos. El fosforo es necesario para la sntesis de los
cidos nucleicos y de los fosfolpidos. La mayor parte de este elemento se encuentra en la
naturaleza como fosfato inorgnico, siendo asimilado de esta forma. El azufre forma parte de
la composicin de los aminocidos cistena y metionina y de numerosas vitaminas, es obtenido
a partir de fuentes inorgnicas como sulfato y fosfato. El potasio es activador especfico de
varias enzimas, incluyendo las que participan para la sntesis de protenas. El hierro forma,
asimismo, parte de la composicin de enzimas implicadas en las cadenas de oxidoreduccin
del ciclo respiratorio celular y otras molculas. El agua es componente esencial del desarrollo
del ciclo bacteriano, representando el 80-90% de su peso. [2]




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Nutricin, Aislamiento, Preservacin e Identificacin
Sierra Hernndez Karen Susana
Microbiologa Turno Vespertino
Micronutrientes. Oligoelementos
El cobalto es necesario para la sntesis de vitamina B12, pudiendo sustituirse por la adicin de
pequeas cantidades de la misma a los medios de cultivo. El cobre est presente en algunas
enzimas respiratorias como fijador del O2 igual que el hierro. El manganeso acta como
activador de determinadas enzimas. El nquel, tungsteno y selenio son requeridos por grupos
muy reducidos de bacterias. [2]

Las bacterias pueden ser categorizadas segn la fuente de carbono que utilicen (es decir, si se
trata de carbono orgnico o inorgnico), y segn de donde obtengan la energa necesaria para
llevar a cabo las distintas reacciones propias del metabolismo. [3]

Segn la fuente de carbono, las bacterias son auttrofas o littrofas, mientras que otro grupo
se encuadra en las hetertrofas u organtrofas. Las primeras utilizan dixido de carbono y las
segundas requieren una fuente de carbono orgnica. [3]

De acuerdo con el origen de la energa que emplean las bacterias, son fottrofas cuando
captan la luz o la energa radiante y quimitrofas cuando son incapaces de aprovechar esta
fuente y obtienen la energa a partir de reacciones qumicas. [3]
Fotohetertrofos. Utilizan energa lumnica pero incorporan carbono en forma de
compuestos orgnicos, como alcoholes, cidos grasos, cidos orgnicos e hidratos de
carbono.
Quimioauttrofos. Obtienen la energa que necesitan de las reacciones qumicas, pero
incorporan carbono a partir del dixido de carbono.
Quimiohetertrofos. Obtienen energa por medio de reacciones qumicas, el carbono
provienen de compuestos orgnicos (glucosa, lpidos, protenas). La fuente de energa
y carbono es la misma. [3]

De acuerdo a los requerimientos de oxgeno, los microorganismos se clasifican en:
Aerobios: necesitan de la presencia de oxigeno libre.
Facultativos: prefieren un ambiente con oxgeno, pero pueden vivir sin l.
Anxicos: en ausencia de oxgeno disuelto emplean el oxgeno combinado.
Anaerobios: solo viven en ausencia de oxgeno.
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De acuerdo con la temperatura de desarrollo ptimo se clasifican en:
Sicroflicos: Viven en 0
Promedio mesoflicos: los ms comunes viven entre 15 y 40 C
Termoflicos: se desarrollan entre 50 y 70 C
Segn el pH, se pueden clasificar tambin los microorganismos en:
Basfilos: necesitan un pH elevado para poder vivir (7,5 a 11,5)
Neutrfilos: requieren un pH neutro, alrededor de 7.
Acidfilos: requieren un pH bajo (1-4).[4]
Existe otra clasificacin en cuanto a la presin osmtica:
Osmfilos: necesitan una elevada presin osmtica para poder desarrollarse. Suelen
ser microorganismos de vida libre, cercanos a las salinas, por ejemplo.[4]

AISLAMIENTO MICROBIANO
Cuando se examina en el microscopio una gota de agua de lluvia, se observa gran variedad de
microorganismos; algunos de ellos podran ser tiles al hombre, mientras que otros podran
ser patgenos. La separacin de cada una de estas variedades es lo que se conoce como el
aislamiento de microorganismos. [5]

Un medio de cultivo es un sustrato o solucin de nutrientes en los que crecen y se multiplican
los microorganismos en el laboratorio, con el objeto de aislar diferentes especies bacterianas,
proceder a su identificacin y llevar a cabo una serie de estudios complementarios. Los
sustratos energticos y la materia orgnica sinttica, pueden suministrarse por sustancias
nutritivas contenidas en la maceracin de carne y vsceras. Los aminocidos y pptidos los
aportan las peptonas, que contienen todos los productos de degradacin de las protenas, sin
vitaminas y su composicin exacta vara segn el tipo de sustrato y enzima utilizados, como
pepsina, tripsina, papana, entre otras. Los factores de crecimiento se suministran por
maceracin y adicin de sangre, suero, extracto de levaduras, liquido asctico, etc. [6]
Los medios de cultivo pueden clasificarse segn su consistencia, origen, composicin y
utilizacin.


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Consistencia
Lquidos. Contienen los nutrientes antes citados, a los cuales se les adiciona una
sustancia capaz de mantener un pH adecuado. Ejemplos: caldo nutritivo y caldo
peptona.
Slidos. Se obtienen agregando agar (sustancia polisacrida e inerte obtenida de algas
marinas del gnero Gellidium) a un medio lquido determinado. Ya esterilizado se
vierte en una caja de Petri o un tubo de ensayo. Estos medios ofrecen la posibilidad de
obtener colonias aisladas unas de otras.
Semislidos. Son semejantes a los medios slidos, con la diferencia que a estos de les
disminuye la concentracin del agar. Se utilizan para la conservacin de cepas
bacterianas y observacin y registro de bacterias mviles.[6]
Origen
Medios sintticos. Compuestos por productos qumicos conocidos y se usan para
estudios metablicos. Ejemplos: agar nutritivo, agar blando, caldo nutritivo, etc.
Medios naturales. Son aquellos preparados a partir de sustancias naturales animales o
vegetales de composicin no rigurosamente constante. Ejemplo: el suero, leche, papa,
etc.[6]
Composicin y utilizacin
Medios simples. Poseen los requisitos nutricionales mnimos para permitir el
desarrollo bacteriano en general. Ejemplo: agar nutritivo, caldo nutritivo, etc.
Medios enriquecidos. Son medios simples a los que se aaden ciertos componentes
como sangre, suero, huevo, glucosa, entre otros, que permiten el aporte de factores
de crecimiento o sustancias que neutralizan agentes inhibidores del crecimiento en
bacterias exigentes nutricionalmente. Ejemplo: agar sangre, enriquecido con sangre.
Medios selectivos. Se consiguen aadiendo al agar nutritivo, compuestos qumicos
nocivos para las bacterias cuyo crecimiento no interesa o tambin alterando las
condiciones fsicas del medio. Por ejemplo el cristal violeta, impide el crecimiento de
bacterias Gram positivas sin afectar las Gram negativas.
Medios diferenciales. A estos se les adicionan sustancias para que solo crezcan
determinadas bacterias y as se puedan diferencias de otras especies diferentes.
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Medios de enriquecimiento. Lquidos que favorecen la multiplicacin de bacterias
cuando la muestra obtenida es muy pobre. Ejemplo: el caldo de Thioglicolato favorece
el crecimiento de bacterias anaerobias.
Medios de recuento. Sirven para determinar el contenido bacteriano de sustancias
como leche, agua, carnes. Ejemplo: el agar cuenta grmenes sirve para determinar el
nmero total de bacterias que existen en una muestra.
Medios de transporte. Se utilizan para asegurar la viabilidad de las bacterias y evitar
que se reproduzcan alterando el nmero de bacterias iniciales, desde el momento de
la toma de la muestra hasta su posterior siembra en el laboratorio. No presentan
nitrgeno que es un elemento indispensable para la divisin celular. Ejemplo: medio
de Stuart.[6]
Cultivos puros y mixtos
En ciertos procesos bioqumicos es imprescindible que se encuentre un solo tipo de
microorganismo, mientras que en otros, es necesaria la presencia de un conglomerado de ellos
para alcanzar los objetivos esperados. Por lo tanto, las caractersticas especficas de cada
proceso van a definir la conveniencia de utilizar un cultivo puro o uno mixto. [5]

Un cultivo puro es aquella poblacin de microorganismos de un mismo tipo que,
generalmente, se producen a partir de una sola clula. Una cepa de Saccharomyces cerevisiae
para producir cerveza es un ejemplo tpico de un cultivo puro. En contraste, un cultivo mixto
est compuesto por varios microorganismos, cuya presencia en conjunto cumple una
determinada funcin. Las poblaciones de microorganismos utilizados para el tratamiento de
desechos lquidos (aguas residuales) representan un caso comn de la utilizacin de cultivos
mixtos. [5]
PRESERVACION MICROBIANA
La preservacin de los microorganismos consiste en la conservacin de ellos y de sus
caractersticas por largos periodos. A travs de los aos, se han desarrollado varios mtodos de
conservacin de microorganismos, que se basan en la reduccin de su actividad metablica
[7]. La seleccin del mtodo de conservacin depende de varios factores, entre los que se
pueden mencionar:

La susceptibilidad del microorganismo al proceso de conservacin.
La facilidad con la que puedan ocurrir cambios genticos en la cepa.
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El nmero de muestras por conservar
El costo del proceso de conservacin
El periodo durante el cual se desea conservar el microorganismo
El tipo de equipo disponible
La probabilidad de contaminacin que exista en el medio. [7]

En muchos pases, hay entidades que tienen colecciones de cultivos y se dedican al
mantenimiento de los microorganismos, los cuales brindan garanta de sus caractersticas.
Muchas de estas colecciones son reconocidas internacionalmente; por medio de ellas, se
puede adquirir la mayora de los microorganismos existentes. En la figura 1, se indican algunas
de estas instituciones. Cuando se adquiere un microorganismo de una coleccin, viene
identificado con las abreviaturas de la coleccin de la que proviene; por ejemplo, el
microorganismo Phanerochaete chrysosporium CDBB H-298 pertenece a la coleccin de
cultivos del Departamento de Biotecnologa y Bioingeniera del Centro de Investigacin y de
Estudios Avanzados (CINVESTAV) del Instituto Politcnico Nacional, adems, est identificado
dentro de la coleccin como la cepa H-298. [7]

ALGUNAS COLECCIONES MICROBIANAS EN EL MUNDO
NOMBRE PAIS MICROORGANISMO
American Type Culture
Collection (ATCC)
USA Bacterias, actinomicetos,
hongos, algas, protozoarios
Coleccin de Cultivos del
Departamento de
Biotecnologa y Bioingeniera
del CINVESTAV (CDBB)
Mxico Hongos, bacterias
National Collection of
Industrial Bacteria (NCIB)
Escocia Bacterias
Instituto Pasteur Francia Bacterias
Fig. 1. Algunas colecciones microbianas en el mundo. [7]

Existen varios mtodos para la conservacin de los microorganismos; todos buscan que las
clulas sufran el dao mnimo y se preserven por el mximo periodo posible. [7]
1. Liofilizacin. Es una forma de secado en frio que sirve para conservar sin dao los
diversos materiales biolgicos. El producto deshidratado se conserva a temperatura
tambin, manteniendo todas sus propiedades al rehidratarse. Algunos
microorganismos son muy sensibles a esta tcnica por que los niveles de supervivencia
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disminuyen significativamente despus de ser sometidos a este proceso, e incluso su
mantenimiento prolongado hace que la viabilidad celular disminuya an ms. Se
conoce que algunos factores pueden afectar la viabilidad de los microorganismos
liofilizados, entre los que se citan la naturaleza de la cepa, las condiciones de cultivo, la
fase de crecimiento, la concentracin celular, la formulacin de los medios protectores
contra la liofilizacin, los parmetros de la liofilizacin y el modo de rehidratacin.[8]

2. Congelado. Con frecuencia se usan temperaturas bajo el punto de congelacin para
almacenamientos por periodos largos. Sin embargo, hay que tomar en cuenta que a
temperaturas muy bajas se pueden formar cristales de hielo que pueden provocar la
destruccin de los microorganismos. Cuando se lleva a cabo una congelacin rpida,
entre un 60 y 80% de los microorganismos son destruidos. La respuesta de los
microorganismos a la congelacin son variables, unos resisten, pero son susceptibles a
sufrir lesiones durante el almacenamiento a congelacin, o durante la descongelacin.
Otros son sensibles y finalmente otros se ven inactivados por la congelacin. La
desnaturalizacin de las protenas es la principal causa de dao en los
microorganismos. Los rangos de temperatura que son usados para el congelamiento a
largo tiempo varan desde los -20C hasta las -70C.[8]

3. Temperatura ambiente. Algunos virus son capaces de sobrevivir por horas, das o
incluso meses bajo condiciones ambientales, mientras que otros se inactivan en pocos
minutos bajo las mismas condiciones. Periodos de almacenamiento a altas
temperaturas pueden provocar disminucin en el periodo de incubacin de los
granulovirus. El conocimiento de la interaccin entre los efectos de la temperatura con
relacin a la actividad biolgica y replicacin de los virus en su hospedero permiten
establecer parmetros de temperatura para la produccin masal de los mismos.[8]

IDENTIFICACION DE LOS MICROORGANISMOS
Un esquema de clasificacin proporciona una lista de caractersticas y un mtodo de
comparacin para ayudar a la identificacin de un organismo. Una vez identificado el
organismo puede ubicarse en un esquema de clasificacin concebido con anterioridad. Los
microorganismos se identifican con fines prcticos, por ejemplo, para determinar un
tratamiento adecuado para una infeccin. No siempre se los identifica con las mismas tcnicas
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con las que se los clasifica. Casi todos los procedimientos de identificacin se realizan con
facilidad en un laboratorio y utilizan la menor cantidad posible de procedimientos o pruebas.
Por lo general los protozoos, los gusanos y los hongos pueden identificarse por microscopia.
El Manual de Bacteriologa Sistemtica de Bergey, las bacterias no se clasifican segn su
relacin evolutiva, sino que se proporcionan esquemas de identificacin basados en criterios
como la composicin de la pared celular, morfologa, tincin diferencia., requerimientos de
oxgeno y pruebas bioqumicas.
Caractersticas morfolgicas
Durante 200 aos, las caractersticas morfolgicas han ayudado a los taxonomistas a clasificar
a los organismos. Sin embargo muchos organismos son demasiado semejantes para ser
clasificados segn sus estructuras. [9]
Para toda identificacin bacteriana es importante destacar las caractersticas claves de una
colonia bacteriana. Los criterios utilizados con frecuencia para caracterizar el crecimiento
bacteriano son:
Tamao de la colonia (calculado en milmetros o descrito en trminos relativos como
cabeza de alfiler, pequeo, medio, grande)
Pigmentacin de la colonia
Forma de la colonia (incluye forma, elevacin y bordes de la colonia)
Aspecto de la superficie de la colonia (por ejemplo, brillante, opaca, mate,
transparente)
Cambios en los medios con agar como resultado del crecimiento bacteriano
Olor. Ciertas bacterias producen olores caractersticos que ayudan a su identificacin.
[9]
El aislamiento de colonias individuales durante los cultivos no solo es importante para
examinar la morfologa y las caractersticas sino que tambin es necesario para la realizacin
oportuna de la tincin Gram y los subcultivos. [10]
Para evitar confusiones se tien los microorganismos provenientes de cada colonia. En muchos
casos debe teirse cada colonia que presenta una morfologa diferente en la placa primaria.
[10]
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La identificacin de un aislamiento bacteriano requiere el anlisis de la informacin obtenida
por las pruebas de laboratorio que describen los perfiles caractersticos de las bacterias. Las
pruebas y el orden en el que se las utiliza para la identificacin del microorganismo a menudo
se denominan esquemas de identificacin. Estos se basan en 1) caractersticas genotpicas de
las bacterias y 2) caractersticas fenotpicas. [10]
Pruebas bioqumicas
Las actividades enzimticas son ampliamente utilizadas para diferenciar a las bacterias. Incluso
las bacterias estrechamente relacionadas pueden ser separadas con especies diferentes
mediante el empleo de pruebas bioqumicas, por ejemplo para determinar su capacidad de
fermentar un conjunto de hidratos de carbono seleccionados. Adems las pruebas bioqumicas
pueden proporcionar datos. [9]
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
[1] Olivas Evangelina; Luis Roberto
Alarcn. Manual de prcticas de
microbiologa bsica y microbiologa
de alimentos. Pg. 23
http://books.google.com.mx/books?id=Oy-
kG04ClBUC&lpg=PA23&dq=nutricion%20microbian
a&hl=es&pg=PP1#v=onepage&q&f=false


[2]Garca- Rodrguez; Picazo.
Compendio de microbiologa
mdica. Pgs. 31 y 32.
http://books.google.com.mx/books?id=OaSu2eow
g_wC&lpg=PA31&dq=macronutrientes%20y%20mi
cronutrientes%20microbiologia&hl=es&pg=PA32#v
=onepage&q=macronutrientes%20y%20micronutri
entes%20microbiologia&f=false

[3]Negroni. Microbiologa
estomatolgica. Fundamentos y gua
prctica. 2 edicin. Pg. 46
http://books.google.com.mx/books?id=Gxmui-
vjZBgC&lpg=PA46&dq=fuente%20de%20carbono%
20microorganismos&hl=es&pg=PP1#v=onepage&q
=fuente%20de%20carbono%20microorganismos&f
=false

[4]Manual del tcnico superior de
laboratorio de anlisis clnicos. Pgs.
51 y 52.
http://books.google.com.mx/books?id=WB3lngLAY
jAC&lpg=PA52&dq=fuente%20de%20ph%20microo
rganismos%20clasificacion&hl=es&pg=PA52#v=one
page&q=fuente%20de%20ph%20microorganismos
%20clasificacion&f=false

[5] Hernndez Alicia. Microbiologa
Industrial Pg. 16
http://books.google.com.mx/books?id=KFq4oEQQj
dEC&lpg=PA16&dq=aislamiento%20de%20microor
ganismos&hl=es&pg=PA16#v=onepage&q=aislami
ento%20de%20microorganismos&f=false

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Nutricin, Aislamiento, Preservacin e Identificacin
Sierra Hernndez Karen Susana
Microbiologa Turno Vespertino
[6]Montoya Villafae Hugo
Humberto. Microbiologa bsica
para el rea de la salud y afines.
Pgs. 73, 74 y 75
http://books.google.com.mx/books?id=5RjS6B0X5
RgC&lpg=PA73&dq=clasificacion%20de%20medios
%20de%20cultivo&hl=es&pg=PA73#v=onepage&q
=clasificacion%20de%20medios%20de%20cultivo&
f=false

[7] Hernndez Alicia. Microbiologa
Industrial. Pgs. 18 y 19
http://books.google.com.mx/books?id=KFq4oEQQj
dEC&lpg=PA18&dq=preservacion%20microbiana&
hl=es&pg=PA18#v=onepage&q=preservacion%20m
icrobiana&f=false
[8]Herrera Andino M. E. (2007)
Evaluacin de mtodos de
multiplicacin, obtencin y
almacenamiento de dos cepas de
virus entomopatgenos de Tecia
solanivora. Tesis presentada como
requisito parcial para obtener el
ttulo de Ingeniero Agrnomo.
Facultad de Recursos Naturales.
Escuela Superior Politcnica de
Chimborazo. Riobamba, Ecuador.
Pgs. 13 y 14
http://books.google.com.mx/books?id=2YQzAQAA
MAAJ&lpg=PA13&dq=preservacion%20de%20cepa
s&hl=es&pg=PA13#v=onepage&q=preservacion%2
0de%20cepas&f=false
[9]Tortora; Funke; Case.
Introduccin a la Microbiologa. 9
Edicin. Pgs. 293, 294 y 295
http://books.google.com.mx/books?id=Nxb3iETuw
pIC&lpg=PA292&dq=identificacion%20de%20micro
organismos&hl=es&pg=PA292#v=onepage&q=iden
tificacion%20de%20microorganismos&f=false

[10]Forbes; Sahm; Weissfeld.
Diagnostico Microbiolgico. 12
Edicin. Pgs. 103-108
http://books.google.com.mx/books?id=239cauKqS
t0C&pg=PA106&dq=identificacion+de+microorgani
smos&hl=es&sa=X&ei=JmQQUeq6N-
LWyQH124Ew&ved=0CDwQ6AEwAg