das heparinas de baixo e ultrabaixo peso molecular e elucida sua ao como anticoagulante S empre foi difcil separar os diver- sos tipos de heparina, substncia produzida pela maioria dos or- ganismos e usada como anticoa- gulante. Cada tipo, com peso molecular prprio, pode ter funes diferentes, at mesmo opostas. Comparando as caracte- rsticas estruturais de uma heparina de baixo peso molecular, usada h dcadas, com as de ultrabaixo peso molecular, produzidas h apenas alguns anos, pes- quisadores da Universidade Federal de So Paulo (Unifesp) vericaram que as propriedades anticoagulantes das hepa- rinas de ultrabaixo peso molecular po- dem variar de acordo com a composio das cadeias de acar que as compem e com o prprio peso molecular, apesar de serem estruturalmente semelhantes s de baixo peso molecular. Quanto menor o peso molecular, mais especca ser a ao da heparina sobre determinadas enzimas fundamentais pa- ra a coagulao do sangue, diz Helena Nader, professora da Unifesp e uma das principais especialistas em heparina no mundo. Nos anos de 1970, seu orienta- dor de doutorado e futuro marido, Carl Peter Dietrich, falecido em 2005, isolou a heparina de baixo peso molecular, o BIOQUMICA y Identidade esclarecida que possibilitou sua produo em am- pla escala como anticoagulante. Agora a equipe da Unifesp desenvolveu uma metodologia de identicao das estru- turas qumicas das heparinas de baixo e ultrabaixo peso molecular, mostrando como usar melhor cada grupo e abrindo novas possibilidades de uso. Podemos agora entender os meca- nismos de ao das heparinas de baixo e ultrabaixo peso molecular mais usadas atualmente, arma Marcelo Andrade de Lima, pesquisador do Departamento de Bioqumica da Unifesp e primeiro autor de um artigo publicado na Thrombosis and Haemostasis em maro de 2013 e destacado pelos editores em maro de 2014 como um dos mais importantes trabalhos publicados na prpria revista no ano anterior. Tornou-se possvel identicar as rea- es qumicas usadas para produzir cada tipo de heparina, desse modo evitando equvocos e falsicaes. A partir da, os especialistas poderiam desenvolver reaes qumicas especcas para obter heparinas de ultrabaixo peso molecular com aes novas ou mais especficas. Poderamos determinar por qual cami- nho queremos que esses novos compos- Rodrigo de Oliveira Andrade tos atuem no organismo e, assim, criar novos agentes teraputicos, diz Lima. Produzidas por clulas chamadas mas- tcitos, encontradas em diferentes teci- dos, as heparinas em geral se ligam a um inibidor natural da coagulao chamado antitrombina, aumentando em at 2 mil vezes a velocidade com que a antitrom- bina inibe as enzimas responsveis pela coagulao. Por isso so bastante usadas para evitar a formao de cogulos, que podem ser fatais. O processo de coagula- o constitui uma sequncia de reaes enzimticas. Como em uma cascata, elas se ligam uma a outra, convertendo pr- -enzimas em enzimas ativas, que por m transformam uma protena solvel, o - brinognio, em outra, insolvel, denomi- nada brina, que corresponde ao produto nal da coagulao. Todas as heparinas agem da mesma forma sobre a antitrombina, diz Helena. Quanto menor o peso molecular, porm, mais seletiva ser a ao. As heparinas convencionais, chamadas de no fracio- nadas, constitudas por molculas com pesos moleculares diferentes, depois de se ligarem antitrombina, inibem a ao de pelo menos cinco enzimas desde o in- cio do processo de coagulao do sangue. Book_219.indb 48 5/7/14 7:03 PM PESQUISA FAPESP 219 z 49 As de baixo peso molecular agem prin- cipalmente em duas enzimas chave do processo, o Fator Xa e a trombina, ou Fa- tor IIa. As de ultrabaixo peso molecular so ainda mais seletivas e agem apenas sobre a Xa, inibindo sua ao. Ao sepa- rar as heparinas de acordo com o peso molecular e caractersticas estruturais peculiares, restringimos sua ao, cada vez mais especca, arma Lima. OS RASTROS DA HEPARINA Essas reaes so conhecidas h dca- das, mas poucos pesquisadores haviam se preocupado em identicar as estruturas qumicas responsveis por sua ao an- ticoagulante. Em colaborao com pes- quisadores do Paran, Estados Unidos e Frana, Lima e Helena desenvolveram uma metodologia para determinar as dife- renas entre dois frmacos do grupo das heparinas de ultrabaixo peso molecular: a semuloparina, com peso molecular de 2,9 mil daltons (a unidade de medida da massa molecular), produzida na Frana; e a bemiparina, com 3,8 mil daltons, fa- bricada na Espanha. As duas foram com- paradas com a enoxaparina, a heparina de baixo peso molecular mais usada no mundo, tambm produzida na Frana, com peso molecular de 4,1 mil daltons. Todas foram produzidas a partir da he- parina no fracionada de mucosa intesti- nal de porcos, uma das principais fontes da heparina usada como medicamento. Por meio de espectroscopia de resso- nncia magntica nuclear (RMN) e outras tcnicas, o grupo da Unifesp avaliou as caractersticas estruturais de cada subs- tncia e as relacionou com seu peso mo- lecular. Desenvolvemos um mtodo que combina diferentes tcnicas e anlises matemticas para avaliar essas estrutu- ras, diz Helena. Em seguida tentamos entender como poderamos usar esses dados para a concepo de novas drogas. Denidas as estruturas qumicas dessas heparinas no Laboratrio Institucional de RMN da Universidade Estadual de Campinas (Unicamp) e outros centros de anlise, os pesquisadores identicaram a reao qumica usada para obter as hepa- rinas de baixo e ultrabaixo peso molecu- lar. Cada heparina, de baixo e ultrabaixo peso, foi obtida por meio de um processo especco. A reao qumica usada para despolimerizar a heparina deixa rastros. Nosso mtodo identica esses rastros e a reao usada na produo de cada subs- tncia, arma Lima. Um dos rastros a composio das cadeias de acares da heparina, que au- mentam a anidade pela antitrombina. No caso da semuloparina, uma reao qumica especca usada pela empresa Sano, da Frana, capaz de despoli- merizar a heparina preservando uma sequncia de cinco acares, que se li- gam fortemente antitrombina. Assim, a semuloparina foi obtida por uma rea- o qumica especca em que os pen- tassacardeos so preservados na maioria das molculas, levando a um composto com atividade anticoagulante dirigida contra o Fator Xa e sem ao contra a trombina, diz Helena. Essas informa- es ajudaram a explicar resultados cl- nicos recentes. H trs anos, a empresa francesa relatou que a administrao de semuloparina teria reduzido em 64% o risco de trombose venosa profunda, em- bolia pulmonar e mortes relacionadas a tromboembolismo venoso em pessoas com cncer no incio da quimioterapia. O Brasil produz apenas a heparina no fracionada, retirada da mucosa de bois e porcos. Em 2012, o pas exportou o equi- valente a R$ 24 milhes de heparina no fracionada e importou as formas mais puricadas, de maior valor agregado. n S C I E N C E
P H O T O
L I B R A R Y Projetos 1. Espectrometria de massas e de ressonncia magntica nuclear na caracterizao estrutural de glicosaminogli- canos e polissacardeos complexos de invertebrados e algas (n 2010/52426-3); Modalidade Auxlio Pesquisa Regular; Pesquisadora responsvel Helena Bonciani Nader (Unifesp); Investimento R$ 819.080,01 (FAPESP). 2. Compostos bioativos obtidos a partir de resduos de carcini- cultura e modicaes qumicas de heparina (n 2012/00850- 1); Modalidade Bolsa no pas Regular Ps-doutorado; Pesquisadora responsvel Helena Bonciani Nader (Unifesp); Bolsista Marcelo Andrade de Lima (Unifesp); Investimento R$ 152.469,11 (FAPESP). Artigos cientcos LIMA, M. A. et al. Ultra-low-molecular-weight heparins: precise structural features impacting specic anticoa- gulant activities. Thrombosis and Haemostasis. v. 109, n. 3, p. 471-8. mar. 2013. CHRISTIAN W. e GREGORY Y. H. L.. Editors Choice pa- pers in Thrombosis and Haemostasis. Thrombosis and Haemostasis. v. 111, n. 1, p. 185-8. jan. 2014. Alerta vermelho: o ncleo oval de mastcito preenchido e cercado por grnulos (em vermelho) que contm heparina, liberada em resposta a bactrias e vrus Book_219.indb 49 5/7/14 7:03 PM